第八章荧光免疫技术第一节概述荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。
一、荧光的基本知识1.荧光：荧光就是某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。
2.发射光谱：发射光谱是指固定激发光波长，在不同波长下所记录到的样品所发射的荧光强度谱图。
激发态电子回到的能级不同，发出的荧光波长就不同。
荧光物质在吸收光能后，即刻发射荧光，一旦停止供能，荧光随即消失。
3.激发光谱：激发光谱是指固定检测发射光荧光波长，用不同波长的激发光照射样品所记录到的相应的荧光发射强度谱图。
4.荧光效率；在一定范围内，荧光强度与激发光强度呈正相关，即激发光越强，荧光越强，但过强的激发光会使荧光很快褪去。
5.荧光寿命：荧光物质被激发后产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间称为荧光寿命。
6.荧光淬灭：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、酚、1-、硝基苯等）作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。
7.荧光偏振。
二、荧光物质（一）荧光色素1.异硫氰酸荧光素（FITC）:为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或乙醇等溶剂。
分子量为389.4kD, 最大吸收光波长为490〜495nm，最大发射光波长为520〜530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。
其主要优点是:①人眼对黄绿色较为敏感；②通常切片标本中的绿色荧光少于红色荧光。
2.四乙基罗丹明（RB200）：不溶于水，易溶于乙醇和丙酮。
性质稳定，可长期保存。
最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595〜600nm，呈橘红色荧光。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：最大吸引光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。
4.藻红蛋白（R-RE）：最大吸引光波长为565nm，最大发射光波长为578nm,呈明亮的橙色荧光。
（二）其他荧光物质1.镧系螯合物：其中以致3+应用最广。
EU3+螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
