血清肌酸激酶(CK) DGKC推荐方法测定

血清肌酸激酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清肌酸激酶(缩写CK)测定，各种体液肌酸激酶测定；组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。

临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管。

检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4h，普通冰箱中（2～8℃）稳定12h。

-20℃保存稳定30天。

为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。

2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h 不饮酒和12h 以上禁食空腹状态。

2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。

2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。

3 方法原理通过下面的3个反应式表示反应，在两个工具酶的参与下，将CK 的活性与NADPH 生成的量或速率相联系，在340nm 波长处连续监测NADPH 吸光度的增加速率，推算出CK 的活性。

ATP ADP CK +−→−+肌酸磷酸肌酸ADP 6ATP HK +--−→−+磷酸葡萄糖葡萄糖NADPH 6NADP 6PDH 6G +-−−−→−+--磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖4 试剂及其他用品4.1 试剂：肌酸激酶测定试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。

肌酸激酶的测定方法
肌酸激酶（CK）是一种酶类，在测定方法上可依其来源分为三种：肌肉型（CK-MM）、心脏型（CK-MB）和脑型（CK-BB）。

常用的测定方法有以下几种：
1. 酶促动力学法（Enzyme Kinetic Method）：利用反应速率随底物浓度变化的特性，建立底物与产物的浓度与时间的关系，从而测定出酶的活性。

2. 免疫学法（Immunoassay）：利用抗体与抗原的专一性结合，以抗体为检测物，在酶标仪上测定检测物对底物的反应水平。

3. 电化学法（Electrochemistry）：根据电离化原理，将底物及其反应产物经过化学反应后，系统的离子浓度发生变化，测定其电位或电流的变化以推算出酶的活性。

4. 光学法（Optical method）：利用光学原理，进而通过化学反应产生的发光等信号，测定酶对底物的反应峰值和面积。

目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理试剂中加入抑制CK-M的抗体，它能完全抑制CK-M亚基的活性而不影响CK-B亚基的活性，所得结果乘以2即得CK-MB的活性。

CK肌酸磷酸+ ADP ----------- 肌酸+ ATPHKATP + 葡萄糖--------- 葡萄糖-6-磷酸+ ADPG6PDH葡萄糖-6-磷酸+ NADP+------------ 6-磷酸葡萄糖酸+ H+ + NADPH2．本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况。

孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。

此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。

2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司CK-MB试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的CKMB校准血清。

校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。

血清肌酸激酶MB同工酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。

其反应原理如下：⑴CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体→ CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体→ 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制；⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶CK同工酶⑶磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP己糖激酶(HK)ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH)葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。

在上述反应中，NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性成正比。

通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性。

肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB）的活性。

3 标本：3.1 病人准备：无特殊。

3.2 类型：血清或肝素血浆。

3.3 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。

活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。

3.4 标本运输：常温条件下保存运输。

血标本应尽快送往化验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h.血清必须吸出,转移至有盖的试管中.3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。

4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：D-葡萄糖27mmol/L 咪唑缓冲液60mmol/L乙酸镁14mmol/L NADP 2.7mmol/LN-乙酰半胱氨酸27mmol/L AMP 7mmol/L试剂2（R2）：磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶≥20KU/LADP 11mmol/L 糖激酶≥20KU/LCK-M 抗体4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

血清肌酸激酶MB 同工酶DGKC 推荐方法测定1. 实验原理使用多克隆抗体抑制CK 的CK-M 同工酶活性后，按照德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。

CK-MB 由CK-M 和CK-B 亚单位组成。

抗CK-M 抗体完全抑制了CK-MM （肌酸激酶的主要活性部分）和CK-MB 中的CK-M 亚单位的活性。

再检测CK 的活力为余下的CK-B 的活力，相当于一半CK-MB 活力。

所以将结果乘以2，为CK-MB 的活力。

ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATPATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸+ 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H +2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。

3. 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。

活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂 利德曼CK 测定试剂盒（试剂1 6×64ml 试剂2 6×16ml ）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）+ 试剂2（R2）：咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L磷酸肌酸 30mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC ） 20mmol/L乙酸镁 10mmol/LEDTA-Na2 2mmol/LADP 2mmol/LNADP 2mmol/LAMP 5mmol/L CK 己糖激酶(HK) (G6P-DH)二腺苷-5'-磷酸10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH）≥1500U/L已糖激酶（HK）≥2500U/L抑制人CK-MM的人抗体≥2000U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

肌酸激酶测定的标准规程【目的】体外检测血清中肌酸激酶（CK ）含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。

2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用基于经Rosalki 和Szasz 改进的 Oliver 方法，反应原理如下：磷酸肌酸 + ADP−→−CK 肌酸 + ATP D-葡萄糖 + ATP−→−HK ADP + 葡萄糖-6-磷酸 葡萄糖-6-磷酸+NADP +−−−→−--PDH G 66-磷酸葡糖酸+NADPH +H +式中： CK = 肌酸激酶HK = 己糖激酶G-6-PDH = 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在上述反应中，NADPH+H+的生成速率与样本中肌酸激酶的含量成正比。

通过在340 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中肌酸激酶的活力。

二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司CK试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）：D-葡萄糖27 mmol/L乙酸镁 14 mmol/LN-乙酰半胱氨酸27mmol/LNADP+ 2 .7mmol/L咪唑缓冲液100 mmol/LAMP 7 mmol/L试剂2（R2）：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶≧20KU/L磷酸肌酸160mmol/LADP 11mmol/L己糖激酶≧20KU/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。

肌酸激酶测定方法
肌酸激酶测定方法是一种常见的生化分析技术，用于评估细胞内肌酸激酶(CK)酶活性的水平。

肌酸激酶是一种酶，存在于多种组织和细胞内，包括肌肉、心脏和脑部组织。

肌酸激酶的水平通常被用作一种生物标志物，以帮助诊断心肌梗死、肌无力症、红细胞破裂等疾病。

常用的肌酸激酶测定方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫荧
光法(IF)、放射性免疫沉淀法(RIA)等。

其中，ELISA法是最常用的
方法之一，它利用特异性抗体与肌酸激酶结合，再通过酶标记技术进行检测和定量。

肌酸激酶测定方法的操作步骤一般包括样品的制备、试剂的配制、反应的进行和结果的读取。

在样品制备中，通常需要将含有肌酸激酶的样品(如血液、尿液等)离心、稀释等处理，以获得适宜的测量浓度。

在试剂配制方面，需要根据具体的检测方法选择合适的试剂，并按照指导书的要求进行配制。

反应的进行通常需要在特定的温度、时间、pH等条件下进行，以保证反应的稳定和准确性。

结果的读取可以通
过光度计、荧光计等仪器进行，也可以通过目视判断等方法进行初步分析。

总的来说，肌酸激酶测定方法是一种简单、快速、可靠的生化分析技术，广泛应用于医学、生物学等领域。

在实际应用中，需要根据具体的研究目的和需求选择合适的检测方法，并注意操作规范和安全。

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肌酸激酶（CK ）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：肌酸激酶（CK ）测定试剂盒（IFCC 法）使用说明书【预期用途】该试剂盒采用IFCC 法，用于体外定量测定人 血清或血浆中肌酸激酶的活力o 【检验原理】+NADH+H+【主要组成成份】Ri ：咪哇缓冲液20 mmol/LADP + CK肌酸+ATPATP+葡萄洽=>己糖激酶ADP+葡萄糖-6-磷葡萄糖-6-痴酸涂AD+G-6-PDH6-磷酸葡萄糖酸100 mmol/L葡萄糖N-乙酰半胱氨酸（NAC ）0.2 mmol/L 乙酸镁10 mmol/L EDTA 2 mmol/L NADP 2 mmol/L AMP5 mmol/L 己糖激酶>4 U/mL R2：磷酸肌酸30 mmol/L2 mmol/LADPG-6-PDH >2.8U/mL*不同批号试剂盒各组分请勿混用。

【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2〜8°C保存有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2°C~8°C可稳定30天。

试剂不可冰冻。

【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680 型全自动生化分析仪。

假设需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。

建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。

【样本要求】新鲜血清或血浆，样本收集后尽快测定，防止污染。

样品在2°C~8°C保存7天内或25°C保存24小时活性损失2%。

【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件* A A/min=A A/min 样本管一AA/min 空白管*试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。

校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。

血清 -羟丁酸脱氢酶DGKC推荐方法测定1. 实验原理α-羟丁酸脱氢酶催化α-酮丁酸（2-氧丁酸）还原成α-羟丁酸，同时使NADH氧化成NAD+：α-酮丁酸+ NADH HBD→α-羟丁酸+ NAD+在340nm处监测吸光度下降速率，计算HBD的活性。

2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：欧泰克HBDH测定试剂盒6.1.1 试剂组成磷酸盐缓冲液（pH7.8）50mmol/L α-酮丁酸3mmol/L NADH0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以罗氏复合校准品a-HBDH校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

肌酸激酶（CK ）测定标准操作规程1.检验原理：（酶学速率法）采用酶偶联反应测定肌酸激酶的活性浓度。

磷酸计算和腺苷-5-二磷酸二钠（ADP ）在肌酸激酶作用下，生成肌酸和腺苷-5-三磷酸二钠（ATP ）。

ATP 和葡萄糖在己糖激酶（HK ）催化下，生成6-磷酸葡萄糖（G6P ）.G6P 在葡萄糖-6－磷酸脱氢酶（G6PDH ）作用下脱氢，同时使氧化型辅酶Ⅰ（+NAD ）还原成还原型辅酶Ⅰ（NADH ），后者引起340nm 吸光度的增高。

在340nm 检测NADH 的生成量，即可计算出肌酸激酶的活性浓度。

磷酸肌酸+ADP −−−→−肌酸激酶肌酸+ATP ATP+葡萄糖−−−→−己糖激酶ADP+6-磷酸葡萄糖 6-磷酸葡萄糖++NAD −−−→−PDH G 66-磷酸葡萄糖+NADH+-H3.样本要求：静脉采血。

新鲜无溶血血清。

在22～25℃可保存4小时，2～8℃保8—12小时，-20℃可保存3～4天。

样本应避免反复冻融。

4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。

10-6.2.单位换算：ukat/L=U/L×16.67×36.3当样本浓度较大时提高稀释倍数，建议最大稀释不超过10倍。

7.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊，或以水空白在340nm处吸光度大于0.05时不能使用。

7.3检验结果仅供参考，不作为临床诊断唯一依据。

8.产品性能指标8.1空白吸光度：在37℃、340nm波长，光径1cm时，空白吸光度A≤0.05。

8.2试剂空白吸光度变化率：在37℃、340nm波长，光径1cm时，用生理盐水作为样品加入试剂测试时△A/min≤0.002.8.3分析灵敏度：在340nm处，光径1cm时，测定1U/L的肌酸激酶时，吸10-光度变化△AU/L/min≥1.25×48.4线性区间：试剂的线性区间为[25-1000]U/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[25-100]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±10U/L。