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生物活性测定法的原理
生物活性测定法是一种通过观察或测量生物体对化学物质或其他环境因素的反应来评估其活性的方法。
常用的生物活性测定法包括细胞增殖或生长抑制实验、细胞毒性实验、酶活性实验、抗菌活性实验等。
生物活性测定法的原理主要基于以下几个方面：
1. 细胞反应原理：生物活性测定法常通过观察或测量细胞对化学物质的反应来评估其活性。
例如，通过在培养基中加入待测物质，观察细胞的增殖情况或生物学特征的改变，从而评估其对细胞的生长抑制或促进作用。
2. 酶反应原理：酶在生物体内发挥着极为重要的生物催化作用。
生物活性测定法中常通过测量酶的活性来评估待测物质的生物活性。
例如，通过添加待测物质到含有酶底物的体系中，观察酶反应的速率或生成产物的量来评估待测物质对酶的影响。
3. 细菌抗菌原理：生物活性测定法中常通过测量待测物质对细菌的抑制作用来评估其抗菌活性。
例如，利用平板扩散法或微量稀释法，将待测物质与细菌共同培养，观察细菌的生长情况或测量细菌的最小抑菌浓度，从而评估其抗菌活性。
4. 动物体内反应原理：一些药物或化学物质的生物活性往往需要通过动物体内实验来评估。
常见的方法包括动物行为观察、组织活检、毒性评估等。
通过观察
动物对待测物质的生理、行为或组织结构的变化，来评估其生物活性。
综上所述，生物活性测定法的原理主要是通过观察或测量生物体对待测物质的反应来评估其活性。
具体的原理可以根据不同实验方法和待测物质的性质来确定。
具有细胞伤害性的生物活性测定法一、生物学检测法生物学检测又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。
由于各种细胞因子具有不同的活性，例如IL-2促进淋巴细胞增殖，TNF杀伤肿瘤细胞，CSFci激造血细胞集落形成，IFN保护细胞免受病毒攻击，因此选择某一细胞因子独特的生物活性，即可对其进行检测。
生物活性检测法又可分为以下几类：1、细胞增殖法许多细胞因子具有细胞生zhang因子活性，特别是白细胞介素，如IL-2 ci激t细胞生zhang、IL-3 ci激肥大细胞生zhang、IL-6 ci 激浆细胞生zhang等。
利用这一特性，现已筛选出一些对特定细胞因子起反应的细胞，并建立了只依赖于某种因子的细胞系，即依赖细胞株(简称依赖株)。
这些依赖株在通常情况下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖。
例如IL-2依赖株ctll-2在不含IL-2的培养基中很快死亡，而加入IL-2后则可右体外zhang期培养。
在一定浓度范围内，细胞增殖与IL-2量呈正比，因此通过测定细胞增殖情况(如使用3h-tdr掺入法、MTT法等)鉴定IL-2的含量。
除依赖株外，还有一些短期培养的细胞，如胸腺细胞、骨髓细胞、促有丝分裂原ci 激后的淋巴母细胞等，均可作为靶细胞来测定某种细胞因子活性。
2、靶细胞杀伤法是根据某些细胞因子(如TNF)能在体外杀伤靶细胞而设计的检测方法。
通常靶细胞多选择体外zhang期传代的肿瘤细胞株，利用同位素释放法或染料染色等方法判定细胞的杀伤率。
3、细胞因子诱导的产物分析法某些细胞因子可ci激特定细胞产生生物活性物质，如IL-2、IL-3诱导骨髓细胞合成胺、IL-6诱导肝细胞合成α1-抗糜蛋白酶等。
通过测定所诱生的相应产物，可反映细胞因子的活性。
4、细胞病变抑制法病毒可造成靶细胞的损伤，干扰素等则可抑制病毒所导致的细胞病变，因此可利用细胞病变抑制法检测这类因子。
二、免疫学检测法细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性。
细胞活力检测方法细胞活力是指细胞内外环境稳定，细胞结构完整，代谢活跃，功能正常的状态。
细胞活力的高低直接影响着生物体的生长、发育、免疫功能等多个方面。
因此，准确、快速地检测细胞活力对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
下面将介绍几种常见的细胞活力检测方法。
一、MTT法。
MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
其原理是将MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物）加入培养基中，MTT会被细胞内的还原酶还原为可溶性的紫色产物，然后用溶剂将产物溶解，最后用酶标仪测定其吸光值。
吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
二、CCK-8法。
CCK-8法是一种新型的细胞活力检测方法，其原理是将CCK-8（Cell Counting Kit-8）溶液加入培养基中，CCK-8会被细胞内的还原酶还原为橙黄色的产物。
然后用酶标仪测定其吸光值，吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
相比MTT法，CCK-8法更为灵敏和稳定。
三、荧光染料法。
荧光染料法是一种常用的细胞活力检测方法，其原理是利用荧光染料（如FDA、PI等）染色活细胞和死细胞，然后观察染色情况来判断细胞的活力。
活细胞呈绿色荧光，而死细胞呈红色荧光。
通过计数活细胞和死细胞的比例，可以间接反映细胞的活力情况。
四、细胞代谢物测定法。
细胞代谢物测定法是一种直接反映细胞活力的方法。
通过测定细胞产生的代谢产物（如乳酸、ATP等）的含量，可以客观地评价细胞的活力情况。
这种方法不仅可以用于细胞培养液的检测，也可以用于组织样本的检测。
综上所述，细胞活力的检测方法有多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的方法来检测细胞活力，以便更好地开展生物学研究和临床诊断工作。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
蛋白的生物活性测定方法（结晶紫法和MTT法）结晶紫法活性测定1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。
进行细胞计数，使细胞数为2~2.5×105个/ml。
接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。
接种细胞时须不断摇动细胞悬液，以保证各孔细胞数的均匀一致。
96孔板放置于37℃、5%CO2培养箱中培养22h，观察到孔中细胞长满70~80%。
2、在上述RPMI-1640完全培养基中加入放线菌素D，使终浓度为1.5µg/ ml，配成样品稀释液。
取此稀释液900µl至Eppendorf管中，另在9个5m l管中加入700µl稀释液。
3、用完全培养基将基因工程人肿瘤凋亡素样品（上海恰尔生物技术有限公司研制，批号：0304，冻干粉剂，蛋白浓度：2mg/支）复溶至100 0µl（液体样品测定蛋白浓度后，直接进行下一步操作），取出100µl 至已装有900µl稀释液的Eppendorf管中，充分混匀，尽量不起泡沫。
再从此管中吸出100µl至下一管中，如此反复 n次（即测定前10倍稀释若干次，直到与估计活性相接近时）。
4、从最后稀释的Eppendorf管中吸出700µl样品至已装有700µl稀释液的5ml管中，充分混匀。
再从此管中吸出700µl至下一管同样装有700µl 稀释液的5ml管中，如此反复9次（即测定时倍比稀释样品）。
5、弃去96孔板中旧的培养基，从第一个5ml管中吸取已稀释的样品100µl至第2排细胞孔中，每个稀释度作6复孔(n=6)；从第二个5ml管中吸取的样品加入第3排细胞中，依此类推，直至第10排孔结束。
生物技术药物的生物学活性测定生物技术药物1、生物技术：基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程2、生物技术药物：细胞因子、抗体、疫苗、寡核苷酸药物、基因治疗药物等3、临床应用：预防、治疗、诊断肿瘤、心血管疾病、遗传病、神经系统疾病、传染病、哮喘、伤口愈合等生物技术药物的特点1生物技术药物与化学药物性质不同——化学本质为蛋白质、多肽、核酸等蛋白质四级结构示意图生物技术药物的特点2活性由产品的高级结构决定——质量数不能反映产品的药效学和生物学活性3影响活性因素：表达体系——大肠杆菌、酵母、哺乳动物，是否糖基化纯化方案——尤其是包含体变性、复性过程冻干工艺——生物技术药物质量标准的要求1保证药物的安全性、有效性和质量可控；2活性（效力）的测定是保障产品有效性的最重要指标之一，是考察产品全面特征的重要步骤：重组细胞因子—生物学活性(效价)测定3在原液和成品检定中，生物学活性测定都是重要指标；生物学活性测定——体内和体外均可以进行；——获得的结果在一定程度上依赖于采用的方法；——几乎所有的生物活性测定都是比较分析实验，需要标准品或参考品；——不一定直接反映产品的临床适应症，但要能够准确测定产品效价、评价产品稳定性与批间一致性生物学活性测定的几种主要方法1体内测定法----整体测定，利用动物体内某些指标的变化；2离体动物器官测定法----3生化酶促反应测定法----不依赖于活的生物系统，主要基于产品与某种物质的结合或产品本身的化学反应生物学活性测定的几种主要方法4免疫学活性测定法——利用蛋白对异种动物有相应的免疫原性，制备抗体，然后通过E L I S A测定含量。
5体外细胞培养测定法——促进细胞生长、抑制细胞生长、间接保护细胞作用体外细胞培养测定法1、促进细胞增殖——a)促进某种细胞的生长，但不依赖：3T3细胞/E G F、b F G Fb)是某种细胞生长的依赖因子：T F-1/G M-C S F、N F S-60/G-C S F、C T L L-2/I L-22、抑制细胞增殖——L929/T N F3、间接保护细胞作用——I F N/W I S H-V S V测定方法的选择1传代细胞（因子依赖细胞>非因子依赖细胞）>原代细胞>离体器官>体内测定法2定量方法>半定量方法>定性方法生物学活性和比活性●生物学活性——每m l或每支待测样品中含有的生物学活性单位，U或I U或A U/m l(支)●比活性——主要针对原液或原料药每单位质量(m g)蛋白质中含有的特定生物学活性单位，U/m g或I U/m g或A U/m g●比活性(U o r I U/m g)=生物学活性(U o r I U/m l)/蛋白质浓度(m g/m l)生物学活性测定标准范围的确定不同测定方法的规定标准不同：1、80-150%——如I F N、G M-C S F、G-C S F等细胞因子依赖、抑制细胞生长或直接杀死细胞2、70-200%——如E G F、b F G F等剂量-反应曲线不特别陡峭标准品（参考品）的作用1、所用试剂或培养基的配制、纯度、灵敏度不同；2、细胞系代次或来源不同；3、试验动物的品系和健康状况；4、不同实验室、不同试验人员、不同试验时间统一尺度、最大限度地消除误差，从而获得一致的结果；生物学活性测定需要的条件（以细胞为基础的活性测定）1、细胞培养所需要的全部条件2、活性测定用标准品或参考品3、酶标仪及软件分析系统细胞培养的基本概念1、细胞系和细胞株2、传代细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。
