哺乳动物红细胞膜的通透性检测

实验二细胞膜的通透性观察一、实验目的1. 了解溶血现象及其发生机制，了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度；2. 了解并掌握细胞渗透实验的原理；3. 熟悉其操作方法。

二、实验原理将红细胞分别与各种等渗溶液混合，由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同，使得不同溶质透入细胞的速度相差甚大，有些溶质甚至不能透入细胞。

当溶质分子进入红细胞后使其分子浓度增加，即引起胞内渗透压升高，水分子则从渗透压低的胞外侧向渗透压高的胞内侧透入，使细胞膨胀，当膨胀达到一定程度时，红细胞膜破裂，血红蛋白逸出，发生细胞溶血现象。

此时，光线较易通过溶液，原来不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液。

由于不同溶质进入细胞的速度不同，故它们诱过红细胞发生溶血的时间也不相同，因此，可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。

三、实验用品1.试剂:1) 0.9%生理盐水；2) 2种低渗溶液：0.017mol/L 氯化钠和0.032mol/L 葡萄糖；10 种等渗溶液：0.17mol/L 氯化钠、0.32mol/L 葡萄糖、0.17mol/L 氯化铵、0.17mol/L 醋酸铵、0.17mol/L 硝酸钠、0.12mol/L 草酸铵、0.12mol/L 硫酸钠、0.32mol/L 甘油、0.32mol/L 乙醇、0.32mol/L 丙酮。

2.材料: 鸡血3.仪器设备：50ml 烧杯、10ml 移液管、小试管、橡皮吸耳球、试管架等。

四、方法与步骤1.鸡红细胞悬液的制备：取50ml 小烧杯一只，加1 份鸡血和10 份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释鸡血；2.溶血现象的观察：取试管1支，加入10ml 蒸馏水，再加入1ml 制备好的鸡红细胞悬液，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色悬液变成透明的血红蛋白溶液（红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液）；3.红细胞的渗透性取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml 制备好的鸡红细胞悬液，轻轻摇动，混匀后静置于温室中，观察试管中发生溶血的时间及其变化。

鸡红细胞通透性实验报告【实验目的】1. 了解溶血现象及其发生机制。

2. 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

【实验原理】细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障，是一种半透膜，可选择性地控制物质进出细胞。

将红细胞放在低渗溶液中，水分子大量渗透到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，溶液由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。

由于溶质渗透入细胞的速度不同，溶血时间也不同，因此，发生溶血现象所需的时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。

本实验选用红细胞作为细胞膜渗透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。

溶血（Hemolysis）红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。

可由多种理化因素和毒素引起。

在体外，如低渗溶液、机械性强力振荡、突然低温冷冻（-20℃～—25℃）或突然化冻、过酸或过碱，以及酒精、乙醚、皂碱、胆碱盐等均可引起溶血。

哺乳动物血浆的等渗溶液为0.9%NaCl溶液，红细胞在低于0.45%NaCl溶液中，因水渗入，红细胞膨胀而破裂，血红蛋白逸出。

在体内，溶血可为溶血性细菌或某些蛇毒侵入、抗原-抗体反应（如输入配血不合的血液）、各种机械性损伤、红细胞内在（膜、酶）缺陷、某些药物等引起。

溶血性细菌，如某些溶血性链球菌和产气荚膜杆菌可导致败血症。

疟原虫破坏红细胞和某些溶血性蛇毒含卵磷脂酶，使血浆或红细胞的卵磷脂转变为溶血卵磷脂，使红细胞膜分解。

【实验用品】1. 材料鸡血红细胞。

2. 试剂0.85%NaCl溶液、0.085%NaCl溶液、0.8mol/L甲醇溶液、0.8mol/L丙三醇溶液、6%葡萄糖溶液、2%TritonX-1003. 器材试管、试管架、滴管、显微镜、离心机。

【操作步骤】1. 取鸡血6ml，加0.85%NaCl溶液4ml，在1000r/min条件下离心5分钟；（RBC压积量不少于0.6mol）2. 将上述离心后的红细胞按沉淀量配成50%浓度；（总体积应不少于1.2ml）3. 每组取6支试管，分别加入如下溶液各3ml：（1）0.85%NaCl溶液（2）0.085%NaCl溶液（3）0.8mol/L（0.3mol/L 等渗）甲醇溶液（4）0.8mol/L（0.3mol/L等渗）丙三醇溶液（5）6%（5%等渗）葡萄糖溶液（6）2%（1.5%等渗）TritonX-1004. 向上述6支试管中分别加入50%红细胞悬液1滴，轻摇混匀，观察试管中是否有溶血现象发生（观察时间1小时），记录溶血时间，并于显微镜下观察各溶液的细胞。

活体细胞线粒体膜通道孔（mptp）红色荧光（tmrm）检测...活体细胞线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途活体细胞线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，一旦释放到细胞浆，即刻发生荧光淬灭，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种活体细胞线粒体(动物、人体、昆虫等)膜通道孔活性(开放状态)的检测。

产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景线粒体膜通道孔(mitochondrial permeability transition pore;MPTP)是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。

在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。

线粒体膜电位的去极化(depolarization)，导致膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性，使之线粒体膨胀(swelling)，内容物释放。

其中钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。

四甲基罗丹明甲酯(tetramethylrhodamine methyl ester;TMRM)，为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定(potentiometric)荧光探针:第一，具有亲脂性的; 第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集;第三，容易进入细胞及其线粒体。

四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。

四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，呈现强烈荧光。

一旦线粒体膜通道孔开放，四甲基罗丹明释放出来而在胞浆重新分布，其荧光性显著降低。

线粒体内荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。

产品内容清理液(Reagent A) 毫升染色液(Reagent B) 微升稀释液(Reagent C) 毫升产品说明书 1份保存方式保存染色液(Reagent B)在,20?冰箱里，避免光照;其余的保存在4?冰箱里;有效保证6月用户自备24孔细胞培养板:用于贴壁细胞染色的容器1.5毫升离心管:用于染色工作液配制和细胞染色的容器微型台式离心机:用于沉淀细胞培养箱:用于染色孵育(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞荧光分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于细胞荧光定量分析细胞流式仪:用于细胞荧光分析1实验步骤实验开始前，将,20?冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化，稀释液(Reagent C)放进37?恒温水槽里预热。

红细胞膜通透性实验及分析一、本文概述Overview of this article本文旨在探讨红细胞膜通透性的实验方法及其分析。

红细胞作为血液中数量最多的细胞类型，其膜通透性的研究对于理解红细胞的功能、生理过程以及疾病机制具有重要意义。

通过深入研究红细胞膜的通透性，我们可以对血液疾病如溶血性贫血、红细胞增多症等有更深入的理解，从而为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

This article aims to explore the experimental methods and analysis of red blood cell membrane permeability. As the most abundant cell type in the blood, the study of red blood cell membrane permeability is of great significance for understanding the function, physiological processes, and disease mechanisms of red blood cells. By conducting in-depth research on the permeability of red blood cell membranes, we can gain a deeper understanding of blood diseases such as hemolytic anemia and polycythemia, providing new ideas and methods for disease prevention and treatment.在本文中，我们将首先介绍红细胞膜的基本结构和功能，然后详细描述红细胞膜通透性实验的设计和实施过程，包括实验原理、实验材料、实验步骤以及实验结果的分析方法。

红细胞膜通透性的实验及分析一、准备材料：1.新鲜的全血样本2.生理盐水3.透析袋4.恒温水浴5.离心机6.吸光度计二、实验步骤：1.取适量全血样本，加入相等体积的生理盐水，轻轻混匀，得到稀释后的全血样本。

2.取一只透析袋，将稀释后的全血样本倒入袋中，确保袋子内不含气泡，并将袋口扎紧。

3.取一定量的生理盐水，使透析袋完全浸没在生理盐水中。

4.将装有透析袋和生理盐水的容器放入恒温水浴中，保持温度为37℃，并进行一段时间的孵育（一般为20分钟以上）。

5.取出透析袋，尽量沥干袋外的生理盐水，并将袋内的红细胞溶解，使溶液均匀。

6.将溶液转移到离心管中，进行离心，以除去残留的红细胞膜碎片并得到透析液。

7.取出透析液，利用吸光度计检测样本的光密度，记录吸光度值。

三、实验结果分析：通过测定透析液的吸光度，我们可以对红细胞膜的通透性进行分析。

吸光度值反映了透析袋中红细胞内部成分的渗透性。

在实验中，溶剂（生理盐水）中的水分子可以自由通过红细胞膜进入透析袋中的红细胞。

如果红细胞膜具有较好的渗透性，那么红细胞内的溶液成分也可以通过膜自由渗透至透析袋中，导致透析液的吸光度较高。

相反，如果红细胞膜渗透性差，那么溶液成分则不易透过膜，透析液的吸光度较低。

实验结果的具体分析可以根据吸光度值进行比较。

一般来说，吸光度值高的样本表明红细胞膜通透性较好，而吸光度值低的样本表明红细胞膜通透性较差。

除了比较吸光度值，还可以通过控制组进行进一步分析。

例如，可以将不同处理后的红细胞样本分为实验组和对照组，实验组为处理后的样本，对照组为未处理的样本。

通过比较两组样本的吸光度值，可以进一步确定红细胞膜通透性的变化。

此外，实验结果还可以与相关指标进行关联分析，如血液中溶质的浓度、渗透压等指标。

通过对相关指标的测量与实验结果进行对比分析，可以更加全面地了解红细胞膜通透性的情况。

总之，红细胞膜通透性实验是一种简单且常见的实验方法，通过测定透析液的吸光度可以初步判断红细胞膜的通透性，并可以与其他指标进行关联分析，更加全面地了解红细胞膜通透性的情况。