高纯度质粒小提中量试剂盒说明书天根

高纯质粒小量提取试剂盒（柱离心型）(Plasmid Minispin HP Kit Ver.2)产品说明：本试剂盒在常规柱离心质粒提取技术的基础上，改进了硅基质膜材料和试剂配方，使质粒DNA获得高效、专一吸附。

经过两步洗涤，可清除蛋白质、基因组DNA、RNA和其他杂质。

新增基质平衡液处理步骤，可进一步提高硅胶膜的DNA吸附能力，获得稳定的质粒产量。

适合于从1~3 ml培养液中提取质粒DNA。

高拷贝菌液可获得质粒DNA约5~30 μg，可应用于各种常规实验如酶切、PCR、测序、连接、转化和体外转录等操作，并可用于细胞转染工作。

产品内容与储存方法：名称数量保存条件Buffer P1（重悬液）20 ml RTBuffer P2（裂解液）20 ml RTBuffer P3（结合液）30 ml RTBuffer PE（平衡液）30 ml RTBuffer PWT （洗涤液T）* 30 ml RTBuffer PW （洗涤液）** 20 ml RTElution Buffer（洗脱液）10 ml RT离心柱及套管100套RTRNase A 20 mg/ml 0.1 ml -20℃试剂盒可作100次质粒小量提取。

常温运输，室温保存。

RNase A于-20℃保存，首次使用时加入Buffer P1中混匀，置4℃保存。

*Buffer PWT（洗涤液T）在首次使用时加入异丙醇30 ml混匀。

**Buffer PW（洗涤液）在首次使用时加入无水乙醇80 ml混匀。

有效期1年。

所需其它试剂：使用者需准备加入洗涤液的无水乙醇和异丙醇。

操作方法：1)收菌：取过夜培养菌1~3 ml菌液，装入1.5ml 或2ml离心管中，12,000 x g于室温离心2 min沉淀菌体，完全弃除上清。

2)重悬：加入200 µl Buffer P1，充分混悬震荡菌体沉淀10~15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。

3)裂解：加入200 µl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3~5次，室温放置2~3 min，使细菌完全裂解，溶液透明。

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://HighPure Plasmid Maxi Kit高纯度质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL12试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1201)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml去蛋白液PE 室温63 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。

如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。

有效防止了质粒被核酸酶降解。

3.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。

若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。

加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。

产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。

菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。

通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。

所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。

产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。

2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。

高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

（请使用当天处理过的柱子）2.取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸除上清。

注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。

3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

质粒4.向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。

注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。

此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。

如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

5.向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。

注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。

如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm（~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。

7.12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。

l primers (5 μM, each) FDM competent cells
KM101 （20 rxn）
30 μl 200 μl 20 μl 40 μl 80 μl 20×50 μl
储存条件
收到本产品后， 请立即将FDM competent cells置于-70℃条件下保存，试剂盒其他组分 置于-20℃条件下保存。感受态细胞可在-70℃条件下保存3个月，试剂盒其他组分可在-20℃ 条件下保存1年。
50 μl 体系 2 μl 4 μl 10 μl 1.5 μl
至50 μl
终浓度 0.2 ng/μl 400 nM
1× 0.075 U/μl
－
4、将实验组及对照组按照如下PCR反应程序进行PCR反应。
PCR反应程序： 注：下表中PCR程序按照对照组实验条件设置，客户可根据自身实验进行相应调整。
阶段 预变性
■ PCR、RT-PCR系列 ■ 核酸DNA、RNA分离纯化系列 ■ DNA分子量标准 ■ 克隆载体、感受态细胞 ■ 细胞生物学产品 ■ 蛋白分子量标准 ■ 蛋白质染色、检测及定量相关产品
版本号: KM131204
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
PCR反应
补充延伸
循环 1×
18×
1×
温度 95℃ 94℃ 55℃ 68℃ 68℃
时间 2 min 20 sec 10 sec 2.5 min 5 min
二、质粒模板的消化
1、按照下表所述配制酶切体系： 组成成分
PCR产物 Dpn I restriction enzyme （20 U/μl） Total Volume 2、充分混匀后，将上述酶切体系于37℃条件下消化1 h。

质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。

（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。

水或 Elution Buffer，室温静置 1 分钟。 注）将灭菌蒸馏水或 Elution Buffer 加热至 60℃使用时有利于提高洗脱效率。 14. 12,000 rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA。
● 使用例
使用本试剂盒纯化1.5 ml 的 TB 培养基的菌液（菌体 JM109），得到约16 μg 的质粒 DNA（OD260/OD280 ≥1.8），此质粒为 pUC119，用 Hind Ⅲ酶切1 小时（电泳结果见图2）。
会影响吸光度值的测定，此时建议使用琼脂糖凝胶电泳法进行定量。 ② 质粒 DNA 纯度不好。请严格遵守实验操作要求，使用新鲜菌体培养液提取质粒。 ③ 进行 DNA 洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。 ④ DNA 插入片段本身立体结构复杂。有些 DNA 立体结构复杂（如 GC rich、重复序列等）时难以测
序，应改进测序方法。 Q6. 质粒 DNA 的最小洗脱体积是多少？ A6. 我们建议的洗脱体积为 30-100 μl，此种洗脱体积下收率最佳（但要注意洗脱液需直接加至膜中心），
● 制品说明
本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA 小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的 SDS 碱裂解法，结合硅 胶膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需 1 小时便可完成。使用本试剂盒可从 1～4 ml LB 培养基过夜培养的菌液中纯化得到 1～20 μg 的高纯度质粒 DNA（OD260/OD280 = 1.8～2.0），制备过 程无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，所得质粒 DNA 溶解于 Tris Buffer 或水中，纯度较高，可直接用于 转化、DNA 序列分析、体外转录、限制酶切以及其他各种酶促反应。
2. 加入 Solution Ⅱ和 Solution Ⅲ后，不要剧烈混合（Vortex 等），剧烈混合会导致基因组 DNA 的污染。 3. 加入 Solution Ⅲ后，应充分混合使蛋白质、基因组 DNA 等形成白色沉淀，离心后沉降于离心管底部。

大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。

2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。

2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。

2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。

2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。

2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。

3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。

2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。

3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。

学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。

3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。

3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。

4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。

同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。

在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。

质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备II.注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。

质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。

切勿直接取冻存的菌种进行培养。

DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100%乙醇加入DNA Wash Buffer。

Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。

在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。

III.操作步骤1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。

室温下10,000 xg离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。

注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。

注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。

若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。

2.加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。

注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。

试剂盒组成Components GK2002-100GK2002-200Plasmid Recovery Column100个200个2-mL Collection Tube100个200个Buffer CBS25mL50mlSolution I30mL60mlSolution II30mL60mlSolution III42mL90mlW1solution60mL125mlWash Solution*24mL24ml+60mlElution Buffer20mL25mlRNase A(10mg/mL)240µl500µl注：1、Buffer CBS用于质粒提取前柱子的平衡处理，可以活化硅胶膜，有利于提高质粒的产量。

2、*Wash Solution在使用前应按要求加入乙醇：使用后及时盖紧瓶盖，防止乙醇挥发。

3、Wash solution分两瓶，大瓶用于配制工作液（已预装24ml母液），小瓶为母液，当大瓶工作液用完时，可从小瓶中取24ml用于配制工作液。

4、独立包装的RNase A收货后请于-20℃保存；初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入Solution I中，均匀混合后，4℃保存，表明日期，如长时间不用，请于-20度冻存。

5、Solution II：SolutionⅢ：室温保存。

6、试剂盒其余组分于室温（15℃~25℃）可以稳定存放1.5年而使用活性无明显衰减。

室温过高或需要更长期保存，请放置于2~8℃。

◆产品特点：●本试剂盒所提取的质粒DNA可用于多种常规实验，包括酶切、测序、转化等。

●本试剂盒采用常规碱裂解法分离质粒DNA，并结合膜吸附技术特异性吸附质粒DNA，具有高效、快速、方便的特点。

◆实验前准备：●第一次使用产品前，请仔细阅读该说明书。

●确认Solution I中已经加入RNase A，并做好标记。

●检查Washing Solution是否按照要求加入乙醇。

高纯度质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书高纯度质粒小提中量试剂盒目录号：PL1801适用范围：适用于5-15ml 中等规模质粒制备（mind preparations）试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次平衡液室温5mlRNase A（10mg/ml）－20℃250μl溶液P1 4℃25 ml溶液P2 室温25 ml溶液P3 室温35 ml去蛋白液PE 室温16ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10ml吸附柱AC 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。

如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。

有效防止了质粒被核酸酶降解。

3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

一、质粒提取（天根小提质粒试剂盒）使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 柱平衡：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

（请使用当天处理过的柱子）2. 取4ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

3. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。

注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

4. 向离心管中加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。

此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。

注意：如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

5. 向离心管中加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。

12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。

注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。

如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

6. 将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。

12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。

7. 可选步骤：向吸附柱CP3中加入500 μl去蛋白液PD，12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。

实验操作步骤1.将过夜培养内含高拷贝质粒的细菌25-50ml，或内含低拷贝质粒50-100ml细菌, 5000转/分, 离心10分钟，彻底去除上清。

2.加入1.5 ml Solution I，用枪头或振荡器充分悬浮细菌。

3.加入3 ml Solution II，立即上下颠倒5－10次，使细菌裂解，室温放置至溶液呈透明状。

注意：不能用振荡器混，也不能用力混，否则会出现Genomic DNA污染。

4.加入6 ml Solution III，立即上下颠倒5－10次，使之充分中和, 室温放置5分钟。

注意：步骤2和3在冰上操作效果更佳。

注意：不能用振荡器混，也不能用力混，否则会出现Genomic DNA污染。

5.12,000 x g高速离心10分钟（速度高些更好，取决于离心机和离心管的类型）。

6.将3SM柱放入50ml收集管，将步骤5中的部分上清转移到3SM柱中；如离心后溶液表面没有漂浮物，上清可以直接倒入3SM柱。

室温放置5分钟；12000x g离心2分钟。

注意：转移上清时不要吸取沉淀，否则会出现Genomic DNA和蛋白质污染。

7.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash SolutionI 到3SM柱，12000x g离心2分钟。

8.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution II 到3SM柱，12000x g离心2分钟。

9.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution 到3SM柱，12000x g离心2分钟。

(Wash Solution中需要加入50ml乙醇)。

10.重复步骤9一次。

11.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，12000转/分室温离心2分钟。

12.将3SM柱放入干净的50ml的离心管中，加1000-1500ml TE室温下放置2分钟，12000x g 离心2分钟。

天根质粒小提试剂盒说明书（DP103）注意事项1.请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项2.溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8°C保存。

3.使用前请先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37°C水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

4.注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。

5.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000rpm(~13，400g)。

6.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

7.实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。

8.用平衡液BL处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。

9.去蛋白液PD可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为endA+（TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量较高的菌株时，强烈推荐使用去蛋白液PD。

操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1.柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μI的平衡液BL，12,000rpm(~13,400g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

（请使用当天处理过的柱子）2.取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm(~13,400g)离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

3.向留有菌体沉淀的离心管中加入250μI溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀注意如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

4.向离心管中加入250μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。

质粒小量提取纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。

无需过柱，不用酚氯仿抽提，直接获得高质量的质粒DNA。

我们独特的试剂系统能确保所提质粒DNA高产量，高质量。

本试剂纯度高，采用人性化设计，可按用户需求灵活制定容量大小。

产品特色●简单:添加GBpure Plasmid使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。

●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。

●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯，无盐酸胍。

●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，从培养细菌到提取质粒DNA只需30分钟。

●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。

●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：miniprep, midiprep,或maxiprep;无需购买额外的试剂盒。

●高产量: 您可以从1 (mini), 10 (midi), 100 (maxi) ml的过夜培养基中获得大约5μg, 50 μg, 500 μg的DNA质粒。

●实惠：一盒GBpure Plasmid 售价 RMB 500/ 50 minipreps，即 RMB10/miniprep ，质优价廉。

产品内容与储存条件室温保存。

有效期12个月。

操作方法1.取1 ml过夜培养菌液，装入1.5 ml离心管中，室温12,000 × g离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。

2.加入300 μl Buffer P1，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。

3.加入300 μl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。

质粒DNA小量制备1、实验准备：1）、仪器：台式微量高速离心机、水浴锅2）、试剂：天根离心柱型质粒小提试剂盒、菌液（过夜）3）、器材：1000ul、200ul移液枪及枪头（枪头高压处理）、1.5mlEP 管、双面板、计时器、记号笔2、试验流程1）、含质粒菌液制备第一天菌种复苏A、准备：甘油菌、LB（kana+）平板、酒精灯、打火机、接种环、标记笔B、操作：取-800C 保存的甘油菌种，用灭菌的接种环刮拭冻结的培养物表面，立即将粘附在接种环上的细菌划在LB 平板平面，将冻结的培养物放回-800C 保存，平板于370C 培养过夜（12~16h）第二天增菌A、准备：含有单克隆菌落的LB 平板、5ml LB 菌液、酒精灯、打火机、接种环、标记笔B、操作：a）、5ml LB 菌液+ 5ul kana(50mg/ml)；b）、挑取单克隆接种于LB 液中；c）、180rpm, 370C, 12~16h 振荡培养注意：细菌复苏非常重要，如果细菌生长不好，可再次将5ul 菌液接种于3-5ml 培养基中，震荡培养过夜。

第三天质粒提取（参考试剂盒说明书）1、柱平衡操作：向吸附柱CP3中（吸附柱置于收集管中），加入500ul 平衡液BL，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

2、取1~5ml过夜菌液，加入离心管中，12000rpm离心1min，到掉上清液。

（菌液较多时，可通过多次离心将菌体沉淀全部收集到一个离心管中）3、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul的溶液P1，（请检查是否已加入RNaseA），使用漩涡振荡器或移液枪彻底混匀细菌沉淀。

4、向离心管中加入250ul的溶液P2，温和地上下翻转6~8次，使菌体裂解。

5、向离心管中加入350ul的溶液P3，立即温和的上下翻转6~8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12000rpm离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。

6、将上一步收集的上清液用移液枪转移至吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意不要吸出沉淀，12000rpm离心30~60S（一般取45S），倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放入收集管中。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.1 v.A GENMED小量质粒抽提试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、净化、沉淀、萃取来达到脱盐、去蛋白、去杂质小分子的纯化质粒DNA的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备，OD260/280在1.8-2.0之间。

产物可用于各种后续。

产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，提取效率和纯化程度高。

技术背景GENMED小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、净化等液体法优势元素充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活，清除非DNA分子，其产量较之离心柱法高达数倍。

产品内容GENMED混匀液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED平衡液（Reagent C）毫升GENMED净化液（Reagent D）微升GENMED沉淀液（Reagent E）毫升GENMED清理液（Reagent F）毫升GENMED保存液（Reagent G）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液（Reagent A）和GENMED净化液（Reagent D）在℃冰箱里，其余的保存在℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物实验步骤1．加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管（注意：确保细菌量OD600＝ ;如果细菌量不足，影响质粒提取）2．放进微型台式离心机离心秒，速度为g（RPM，例如eppendorf 5415D）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED混匀液（Reagent A），涡旋震荡少许，使细菌颗粒充分混匀5．加入微升GENMED裂解液（Reagent B），轻轻混匀6．加入微升GENMED平衡液（Reagent C），强力涡旋震荡秒7．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（RPM，例如eppendorf 5415D）8．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免絮状物（注意：如果操作不慎，可以重复实验步骤和，确保避免絮状物）9．加入微升GENMED净化液（Reagent D）10．室温下静置分钟11．加入微升GENMED沉淀液（Reagent E）12．放进微型台式离心机离心钟，速度为g（RPM，例如eppendorf 5415D）13．小心抽去上清液14．加入微升GENMED清理液（Reagent F）15．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（RPM，例如eppendorf 5415D）16．小心抽去上清液17．空气中晾干18．加入微升GENMED保存液（Reagent G）19．放进℃冰箱里备用注意事项1．本产品为100次操作2．GENMED液体法采用特殊酶解和净化技术3．细菌量是个重要因素：通常1毫升细菌可获得3－10微克质粒4．如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒，可订购中量和大量规格5．如果强化去除残留的RNA，建议使用本公司提供GENMED-RNA清除试剂盒（GMS20059）6．如果需要去除细菌内毒素，建议使用GENMED去内毒素试剂盒（GMS20067）7．本公司提供特级优质质粒提取试剂盒：GENMED质粒DNA氯化铯纯化试剂盒（GMS20025）、GENMED 低内毒素小量质粒抽提试剂盒（GMS60007.2）和GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒（GMS60007.3）质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定提取效率和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。