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高效液相色谱仪使用说明书序言高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离技术，广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境检测等领域。
本说明书旨在提供关于高效液相色谱仪的基本操作原理、使用方法和注意事项等信息，以帮助用户正确、高效地使用该仪器。
一、仪器概述高效液相色谱仪主要包括进样系统、色谱柱、泵液系统、检测器和数据处理系统等基本组成部分。
1. 进样系统进样系统用于将待测样品引入色谱柱中进行分离。
常见的进样方式包括自动进样器、手动进样器和微量注射器等。
2. 色谱柱色谱柱是分离相和固定相组成的圆柱体，是进行样品分离的关键组件。
用户应根据待测样品的特性选择适当的色谱柱型号和填充物。
3. 泵液系统泵液系统通过输送流动相将样品送入色谱柱中，并提供足够的压力以保持流速和流动相性质的稳定。
泵液系统可根据实际需求配置恒压、梯度或等压梯度等控制方式。
4. 检测器检测器用于监测和记录样品的化学信号，并将其转化为可读的信号输出。
常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
5. 数据处理系统数据处理系统用于采集、处理和分析检测到的信号，通常配备有专业的软件。
用户可根据需要选择合适的数据处理系统，并进行适当的参数设置。
二、操作方法1. 仪器准备（1）保证仪器通电正常并处于稳定工作状态。
（2）检查流动相储液瓶中是否有足够的流动相，并确保其配制符合要求。
（3）检查色谱柱的连接情况，确保柱座和柱连接部位严密无泄漏。
（4）开启数据处理系统，确保与色谱仪的连接正常。
2. 样品准备根据实验要求选择合适的样品，并进行必要的前处理工作，如过滤、稀释等。
3. 进样操作（1）将样品溶液通过合适的进样方式加入进样器中。
（2）设置进样体积和进样方式等参数，并进行进样操作。
4. 流动相系统设置（1）根据实验要求选择合适的流动相，注入流动相储液瓶中。
（2）设置流速、梯度等参数，并进行流动相系统的初始化。
高效液相色谱仪（3台）高效液相色谱仪（3台）详细配置：1. 高效液相色谱主机（包含四元低压梯度泵，自动进样器，柱温箱）1套2. 二极管阵列检测器1台3. 样品瓶微量进样瓶300个4. 色谱柱2根5. 色谱工作站软件1套6. 电脑（带刻录机）打印机1套7、不间断电源（3KW/1H）重要参数及指标：1.液相色谱部分：泵系统：四元泵系统1.1每台流量范围：0.001-10.000 mL/min1.2最大压力≥40 Mpa1.3脉动：±0.1MPa(水,1.0ml/min输液时)1.4流量精度：≤0.06%RSD1.5梯度精密度：≤0.15%RSD，流速为0.2和1.0ml时1.6 溶剂数：4种1.7在线脱气：二极管阵列检测器1.1波长范围：190－800nm；1.2波长精密度：±0.1nm；1.2灯：氘灯、钨灯；1.3波长准确度：＜1nm；1.4噪声：<±1.0×10-5Au(254nm)；1.5基线漂移：<±8.0×10-4Au/h(254nm)；自动进样器：1.1交叉污染：0.004%1.2进样体积：0.01~100 μl1.2进样准确度：±1％1.3进样量精密度：0.2％RSD以下1.4试样处理数：1.5ml瓶≥96个。
1.5样速度：10μL进样量≤20秒柱温箱：1.1温控范围：室温~80℃1.3温控精度：±0.5℃1.4 柱容量：≥3根(300mm色谱柱)色谱软件：1.1中文，可容Windows XP或Vista或Win7系统；1.2具有3D扫描功能，能做纯度分析，光谱匹配度分析1.3可自动进行数据采集和后处理，具有系统适应性软件，计算分离度、理论塔板数、拖尾因子、容量因子、信噪比等。
1.4可提供适时分析条件参数和分析结果，在线监测和采集泵压力变化数据。
1.5可使用PDF、EXCEL等格式输出实验结果。
高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。
本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。
一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。
其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。
最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。
2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。
开机前，需要检查电源和其他外部连接。
按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。
关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。
3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。
样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。
进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。
4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。
仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。
5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。
根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。
在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。
6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。
首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。
然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。
定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。
二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪主要组成高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种在化学分析中广泛使用的分离技术，主要用于分离和测定样品中的化合物。
HPLC是液相色谱的一种进化形式，相比传统的液相色谱，其分离效率更高，分离速度更快。
下面将介绍HPLC的主要组成部分。
1.液相输送系统：液相输送系统由溶剂供应、进样、混合和泵送过程组成。
其中，溶剂供应单元负责提供所需的溶剂，通常由一个贮液瓶和一组输送管道组成。
进样器用于将待分析样品注入到流动相中，常见的进样方式有汽缸进样和自动进样器。
混合器用于混合不同的溶剂以得到所需的流动相。
泵送单元负责将混合好的流动相通过色谱柱进行分离。
2.色谱柱：色谱柱是HPLC中最为重要的部分，用于分离样品中的化合物。
色谱柱是由特定的填充材料填充而成，填充材料可以根据待分离样品的性质选择不同的类型，如反相色谱柱、离子交换色谱柱等。
色谱柱通常由不锈钢、玻璃或硅胶等材料制成。
在色谱柱两端，通常会安装一些连接件，如高压接头和柱连器，以确保柱与其他部件的连接牢固。
3.检测器：检测器用于检测色谱柱流出的化合物，并将其转化为可以被记录和分析的电信号。
常见的HPLC检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
不同的检测器可以对不同类型的化合物进行特异性检测。
4.数据处理系统：数据处理系统用于记录、处理和分析HPLC实验得到的数据。
数据处理系统通常由计算机和相关的软件组成。
计算机负责与HPLC仪器的其他部件进行通信，并将检测到的信号转化为数字数据。
软件则用于对数据进行处理和分析，如峰识别、峰面积积分和定量分析等。
5.控制系统：控制系统用于控制整个HPLC仪器的运行。
控制系统通常由一个控制面板和相应的控制器组成，用于设置和调节液相输送系统、检测器和数据处理系统的参数。
通过控制面板，用户可以设置流速、柱温、检测器波长等参数，以满足不同的分析要求。
高效液相仪器维护
冲洗思路：1.先用50~60摄氏度热水冲洗整个系统（不接色谱柱），冲洗30分钟后；2.再用甲醇：乙腈：异丙醇：水=1：1：1：1，冲洗整个系统30分钟；3.再用50~60℃热水冲洗整个系统30分钟；4.最后使用100%甲醇冲洗整个系统30分钟。
（如果仪器停用时间较长，建议最后使用10%异丙醇（不易挥发且黏度大，可带走黏附在仪器里的杂质）封存。
实际操作：
○1将4个管道的玻璃滤头均放在50~60
5mL/min
○2
=1：1：1：1，
50~60℃热水，拧紧泵，冲洗整个系统30分钟；
100%甲醇，拧紧泵，冲洗整个系统30分钟。
○6最后将各个管道用回相当的流动相，将各个管道排5min. *注意：1、更换流动相瓶时，需要考虑，是否会造成溶液污染。
2、仪器维护过程均不接色谱柱。
3、冲洗时选用的溶剂是根据相似相溶原理，因此冲洗溶剂选用还可以多种多样。
检验站液相室2017.01.12。
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
1、超高效液相色谱-四极杆超高分辨质谱联用仪1.设备用途食品安全检测和未知添加物的定性定量检测2. 工作条件2.1．电源：230V±10%，AC(交流)，50/60Hz2.2．环境温度：18-25℃；2.3. 相对湿度：40-60%2.4. 仪器可连续正常运行。
2.5．工作条件及安全性要求符合中国及国际有关标准或规定。
3. 质谱部分技术参数*3.1 配备独立的可加热电喷雾离子源ESI，大气压化学电离源APCI，要求离子源具有真空锁定装置，ESI 与APCI 切换快速方便。
3.1.1 可加热电喷雾离子源ESI 流速：1-2000ul/min3.1.2 独立的大气压化学电离源APCI 流速50-2000ul/min*3.2 质量分析器：采用四极杆与静电场轨道阱串联组合质谱。
若采用四极杆-飞行时间组合质谱,需采用各厂家最高端型号(提供官方网站证明)。
3.2.1 质量范围：50-6000 m/z。
3.2.2 四极杆：要求金属钼双曲面四极杆，其选择性达到小于0.4Da。
*3.2.3 分辨率：要求所提供设备的分辨率不小于140,000（在m/z200），可扩展到200,000。
若达不到140000FWHM（在m/z200）需加配离子淌度和纳升液相色谱各一套(需提供技术彩页证明)3.2.4 分辨率与灵敏度:在提高仪器分辨率时，设备的灵敏度保持不降低；也即100fg 利血平标准品进样，ESI+模式下，分辨率分别为35000 和70000 时，其它仪器参数一致的前提下，其609 信号的响应值(峰面积)相差不超过10%。
（该项指标将作为验收指标）。
3.2.5 质量准确度（MS 和MS/MS）：内标：小于1 ppm，外标：小于3 ppm*3.2.6 质量轴稳定度：设备一次校正后不再校正且不使用内标情况下，连续48 个小时内重复进样100fg 利血平，609 质量精确度≤3ppm；（此项指标将作为设备验收指标）。
高效液相色谱仪开机流程English Answer:1. Preparation.Turn on the pump and the degasser.Turn on the autosampler and the column oven.Set the flow rate and the temperature of the column oven.Inject a sample into the autosampler.2. Start-up.Start the HPLC system.Wait for the system to equilibrate.Inject a sample into the HPLC system.3. Shutdown.Stop the HPLC system.Turn off the pump and the degasser.Turn off the autosampler and the column oven.Troubleshooting.If the HPLC system does not start up, check the power supply and the fuses.If the HPLC system does not equilibrate, check the flow rate and the temperature of the column oven.If the HPLC system does not inject a sample, check the autosampler.中文回答：1. 准备工作。
打开泵浦和脱气瓶。
打开自动进样器和柱温箱。
设置流速和柱温箱温度。
将样品注入自动进样器。
2. 启动。
启动 HPLC 系统。
等待系统达到平衡。
将样品注入 HPLC 系统。
3. 关闭。
停止 HPLC 系统。
关闭泵浦和脱气瓶。
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
1 高效液相色谱仪系统
液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法
高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（
3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；
(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
2.1.1 压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。
当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。
处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
2.2．漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。
2.2.1基线漂移一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下（220nm）平衡时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：
1、柱温波动。
解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
2、流通池被污染或有气体。
解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。
如有需要，可以用1N的硝酸（不要用盐酸）。
3、紫外灯能量不足。
解决方法：更换新的紫外灯
4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。
解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。
在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
6、检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决方法：将波长调整至最大吸收波长处
7、流动相的PH值没有调节好。
解决方法：加适量的酸或碱调至最佳PH值
2.2.2保留时间漂移保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性，你要考虑以下原因：
1、温控不当。
解决方法：调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
2、流动相比例变化。
解决方法：检查四元泵的比例阀是否有故障
3、色谱柱没有平衡。
解决方法：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
4、流速变化。
解决方法：重新设定流速
5、泵中有气泡。
解决方法：、从泵中除去气泡
2.3 峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。
1、色谱图中未出峰。
解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3、所有峰均为负峰。
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。
解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
、
5、所出峰比预想的小。
解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。
解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。
解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
8、拖尾峰。
解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。
解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。
解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge 阀，加大流速排除。
3 结语
以上内容只是对液相色谱中出现的常见的问题进行了分析，在故障排除时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，确定假定因素与问题之间的联系；如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，避免浪费；这是成功进行故障排除的关键。
总之，在使用高效液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养。
