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HPLC法测定三七伤药片、胶囊和颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量

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HPLC法测定三七伤药片、胶囊和颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量

樊红军;谷杰;周丽丽

【摘 要】目的 建立HPLC法测定三七伤药片、 三七伤药胶囊、 三七伤药颗粒中三七的含量测定方法 .方法色谱柱:Agilent HC C18(250×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈:水,采用梯度洗脱程序;检测波长:203 nm.结果 人参皂苷Rg1在0.276~2.346μg范围内,线性关系良好,r=0.9999;平均回收率为99.01%(n=6),RSD=2.5%;人参皂苷Rb1在0.2432~2.0672μg范围内,线性关系良好,r=0.9999;平均回收率为98.38%(n=6),RSD=1.5%.结论 该法简便,准确,重现性好,可作为评价三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒的质控方法.

【期刊名称】《中国卫生产业》

【年(卷),期】2017(014)013

【总页数】5页(P77-80,83)

【关键词】三七;人参皂苷Rg1;人参皂苷Rb1;含量测定;高效液相色谱

【作 者】樊红军;谷杰;周丽丽

【作者单位】长春市食品药品检验中心,吉林长春 130021;长春市食品药品检验中心,吉林长春 130021;长春市食品药品检验中心,吉林长春 130021

【正文语种】中 文

【中图分类】R286.0 三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒为骨科用药，只要功效为舒筋活血，散瘀止痛，用于跌打损伤，风湿瘀阻；急慢性扭挫伤，神经痛[1-2]。该系列品种均由三七、制草乌、雪上一枝蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木和赤芍八味药材组成的复方制剂，三七为君药，具有散瘀止血，消肿止痛之功效[3]。控制其质量十分必要，参照中国药典三七项下分析方法进行了含量测定研究[4]。实验结果表明由于制剂中干扰因素较多，三七皂苷R1无法检测，因此对人参皂苷Rg1、Rb1的含量进行了测定，具有合理性，且方法易于操作，阴性无干扰，结果准确，重现性良好，可作为评价三七伤药系列品种的质控标准。

Agilent1100 series高效液相色谱仪；试剂均为色谱纯或分析纯；对照品人参皂苷Rg1（110754-200421）、Rb1（110734-200726）,均购自中国药品生物制品检定所。三七伤药片为上海上联药业提供，批号：100301。

Agilent HC C18分析柱(250×4.6mm,5 μm)，柱温40℃，流速0.8 mL/min，检测波长203 nm，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱。

3.1 对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥12 h的人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。

3.2 供试品溶液的制备

取该品2 g，研细，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，超声处理(功率350 W，频率50 kHz) 40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，水浴蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，20 mL/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得，见图1、图2、图3。

3.3 标准曲线制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1对照品0.138 mg、人参皂苷Rb1对照品0.1212 mg的混合溶液，分别精密吸取2、5、8、11、14、17 μL注入液相色谱仪，依法测定，以对照品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。见表2、表3。

结果表明，人参皂苷Rg1在0.276～2.346 μg、人参皂苷Re在0.243 2～2.067

2 μg范围内，呈良好线性关系，符合外标法定量测定的要求。

3.4 精密度试验

精密吸取供试品溶液5 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，测定其色谱峰面积值。见表4、表5。

结果表明，所用仪器具良好的精密性。

3.5 稳定性试验

取供试品溶液5 μL，按正文色谱条件，于不同的时间进行测定，结果见表6、表7。

结果表明6 h内供试品溶液中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量基本稳定。

3.6 重复性试验

取同一批号样品（广西玉林制药有限公司310052），依正文方法独立操作，测定6次，结果见表8、表9。

结果表明本法具有良好的重复性。

3.7 回收率试验

取已知含量的供试品：人参皂苷Rg13.789 4 mg/g、人参皂苷Rb12.857 8

mg/g各6份，每份约1.0 g，精密称定，分别精密加入配成含对照品溶液人参皂苷Rg1（0.044 62 mg/mL）、人参皂苷Rb1（0.0350 64 mg/mL）的对照品溶液50 mL，依含量测定项下方法测定。计算回收率，结果见表10、表11。

如上表所示，人参皂苷Rg1的平均回收率为99.01%, RSD=2.52%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98.38%, RSD=1.51%；证明方法具有一定的准确性，方法可行。

3.8 检出限与定量限。

检出限为信噪比的3倍高，精密量取人参皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人参皂苷Rb1（121.6 μg/mL）对照品溶液,照正文方法检测，进样量为0.5μL。检出限分别为0.069 μg和0.061 μg。

定量限为信噪比的10倍高，精密量取人参皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人参皂苷Rb1（121.6 μg/mL）对照品溶液依照正文方法检测，进样量为1.5 μL，定量限分别为0.207 μg和0.183 μg。连续测定6次，平均值分别为84.71（RSD=1.27%）和52.67（RSD=2.32%）。符合定量分析的要求。

3.9 样品测定

依法测定三七伤药片、胶囊和颗粒样品。见表12、表13、表14。

不同厂家色谱柱耐用性考察：取同一供试品溶液分别采用Agilent HC C18（4.6×250 mm,5 μm）的色谱柱、Diamonsil C18（250×4.6mm,5 μm）的色谱柱、Agilent Extent C18（4.6×250 mm,5 μm）的色谱柱按正文拟订的方法测定。

实验结果显示，所选用的三种色谱柱均达到方法系统适用性的要求。但是Agilent

HC C18(250×4.6 mm,5 μ)柱和Agilent Extent C18(250×4.6 mm,5 μ)柱可在60 min内将人参皂苷Rg1、Rb1混合对照品溶液完全分离，Diamansil

C18(4.6×250 mm，5 μm)柱超过100 min，说明其对色谱柱有一定的选择性。故本法采用Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ)柱。

【相关文献】 [1]魏莉本.三七伤药片的质量分析与质量标准探讨[J].中国药师,2011,14(7):1060-1061.

[2]贾春芝,高波.玉林三七伤药胶囊活血止痛作用的临床观察[J].山西中医学院学报,2003,4(4):27.

[3]李家实.中药鉴定学[M].上海:上海科学技术出版社,1998: 1321.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:11.

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HPLC法测定颈康胶囊三七中人参皂苷Rg1和Rb1的含量

HPLC法测定颈康胶囊三七中人参皂苷Rg1和Rb1的含量

-1- HPLC法测定颈康胶囊三七中人参皂苷

Rg

1和Rb

1的含量

李准，俞佳，刘友平

成都中医药大学，四川成都（611137）

E-mail：lizhun0722@

摘 要：目的:建立HPLC梯度洗脱法测定颈康胶囊中人参皂苷Rg

1和Rb

1的含量。方法：

采用Hypersil- ODS C

18柱(250mm×4.6mm, 5µm)，乙腈-水线性梯度洗脱，检测波长203nm；

流速1.0ml.min-1

。结果：人参皂苷Rg

1和Rb

1的线性范围分别为0.434～8.68µg和0.409～

8.18µg。该方法回收率Rg

1为98.87%（RSD=0.82%），Rb

1为101.96%，（RSD=0.86%）。结论：

HPLC梯度洗脱法能将两种皂苷很好的分离检测，结果表明该方法准确可靠，重现性好，可

用于该制剂的质量控制。

关键词：颈康胶囊；RP-HPLC梯度洗脱法；人参皂苷Rg

1；人参皂苷Rb

1

颈康胶囊原剂型为颈康片，原剂型标准收载于《国家中成药标准汇编》骨伤科分册243

页，处方主要由三七、熟地黄、何首乌、杜仲、骨碎补等九味药组成。本品制法是三七（1/2

处方量）粉碎成细粉，其余熟地等8味药材与三七（1/2处方量）按一定提取工艺制成浸膏

粉，加入三七细粉和适量的辅料制成的胶囊剂。具有补肾，活血，止痛之功，用于肾虚血瘀

所致的颈椎病，症见颈项胀痛麻木，活动不利，头晕耳鸣等。本品处方中三七是贵重药材也

与颈康胶囊的功能主治密切相关；皂苷类物质是三七所含的一类重要活性成分，其中人参皂

苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量比较高，故选择人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1作为颈康胶囊

指标成分来控制产品的质量。本实验研究了HPLC法同时测定样品中人参皂苷Rg

1和Rb

1

的含量，所建方法简便、可靠、准确，重现性好，可用于颈康胶囊的质量控制。

1. 仪器、试药与样品

1.1 仪器

岛津LC-10A高效液相色谱仪，岛津工作站（日本岛津公司）；BP211D（十万分

HPLC法测定三七降脂胶囊中三种皂苷的含量

HPLC法测定三七降脂胶囊中三种皂苷的含量

ＨＰＬＣ法测定三七降脂胶囊中三种皂苷的含量

三七降脂胶囊是由三七、决明子、制何首乌、山楂等多味中药组成的复方制剂。具有清热活血、降浊通便之功效。主要用于高血脂症，亦可作为冠心病和高血压的辅助治疗。其中三七为主药，三七中的主要药效成分为三七总皂苷，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1等。2005版《中华人民共和国药典》已采用这三种成分作为三七原药材的质量控制指标。为控制该产品质量，保证疗效，我们参考相关文献[1~3]，用HPLC法对其中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1进行含量测定。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪，G1314B紫外检测器，G1354A 四元泵，G2170BA二维液相色谱软件包(美国Agilent 科技公司)； BRANSONSB3200超声波清洗器；Satorius CP225D电子天平。

三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

三七降脂胶囊样品（批号为070611、070618、070803、070816、070903、070917）与阴性样品均由江苏江大源生态生物科技有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：Kromasil C-18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱；流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃；检测波长：203 nm；进样20 μl。流动相梯度洗脱程序见表1。

2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备：精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，加乙睛-0.05%磷酸水溶液(20:80)制成每1 mL含三七皂苷R1 0.1 mg、人参皂苷Rg1 0.2 mg、人参皂苷Rb1 0.15 mg的混合溶液，即得。取装量差异项下内容物，研细，混匀，精密称取样品0.3 g，

HPLC—ELSD法同时测定三七药渣中的4种皂苷含量

HPLC—ELSD法同时测定三七药渣中的4种皂苷含量

HPLC—ELSD法同时测定三七药渣中的4种皂苷含量

目的 用HPLC-ELSD测定三七药渣中的三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1、Rd的含量。方法 色谱柱为Zorbax Extend C18（250mm×4.6mm，5um），流动相为乙腈-水梯度洗脱，柱温35℃，流速为1ml.min-1，ELSD漂移管温度为80℃，雾化气体压力为40psi，喷雾器温度30℃。结果 三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1、Rd分别在0.2052～4.104ug、0.2052～4.104ug、0.2228～4.456ug、0.2152～4.304ug呈良好线性关系；药渣中4种皂苷的平均回收率分别为97.02%，98.26%，97.09%，96.35%；该方法简便、准确，分离效果好，可用于三七药材的质量评价以及三七药渣有效成分的资源化利用。

标签：三七药渣；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；人参皂苷Rd；HPLC-ELSD法

三七（ Panax notoginseng（ Burk） F. H. Chen） 为五加科（ Araliaceae）

人参属植物，味甘、微苦，性温，归肝、心、胃、小肠经，具有止血、止痛、散瘀、消肿、补虚、强壮等功效，皂苷类成分是三七主要的生理活性成分[1]。其中以三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rd含量较高，常作为其质量控制指标，笔者在本实验中采用HPLC-ELSD法检测并建立了三七药渣中 4种皂苷类成分的测定方法， 并对8个批次三七药渣4种皂苷类成分进行含量分析， 为三七药渣资源化利用提供了可靠的依据。

1仪器与试药

1.1仪器 Waters 2695 高效液相色谱仪，Waters2998 二极管阵列检测器，Waters 2424 蒸发光散射检测器，Empower2色谱工作站；电子天平；HH-4型恒温水浴锅；EPED 超纯水系统（南京易普达易科技发展有限公司）。

HPLC测定田七痛经胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1含量

HPLC测定田七痛经胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1含量

HPLC测定田七痛经胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1含量

目的 建立田七痛经胶囊的含量测定方法。方法 采用安捷伦ZORBAX

SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流动相A为乙腈，流动相B为水，梯度洗脱（0～20 min，19%→21%A；20～50 min，21%A→36%A），检测波长203 nm，流速1.0 mg/mL，柱温25 ℃，测定田七痛经胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量。结果 人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的线性范围分别为0.442 4～3.981 6 μg（r2=1.000 0）、0.524 8～3.673 6 μg（r2=0.999 4）和0.203

2～1.016 μg （r2=0.999 2），平均回收率分别为99.49%（RSD=2.44%）、99.02%（RSD=2.45%）和99.98%（RSD=2.14%）。结论 本研究所建立的方法分离效果好、简便、快捷，重复性好，可有效控制田七痛经胶囊的质量。

Abstract：Objective To establish an HPLC method for content determination of

Ginsengnoside Rg1， Ginsengnoside Rb1 and Notoginsenoside R1 in Tianqi Tongjing

Capsule. Methods An Agilent ZORBAX SB-C18 column （4.6 mm × 250 mm， 5

μm） was used. The mobile phase was composed of acetonitrile （A） and water （B）

with gradient elution （0-20 min， 19%→21%A；20-50min， 21%→36%A） at a