酵母RNA的提取及组份鉴定与核酸的定量测定

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。

二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。

RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。

其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。

2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。

其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。

3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。

三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。

然后将菌液离心收获，去除上清液。

2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。

再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。

3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。

四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。

实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。

五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。

结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。

这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。

实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。

因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。

由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。

工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。

稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。

稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。

浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。

用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。

利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。

若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。

离心收集。

本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。

加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。

2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。

3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。

待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。

随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。

调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。

简述酵母RNA定量测定的原理酵母RNA定量测定是一种用于测定酵母细胞中RNA含量的技术。

RNA是一种核酸分子，参与了生物体内的基因转录和蛋白质合成等重要过程。

酵母细胞是一种经典的模式生物，在生物学研究中广泛应用。

酵母RNA定量测定可以帮助科研人员了解酵母细胞中RNA的表达水平，从而揭示细胞功能和生理过程的调控机制。

酵母RNA定量测定的原理主要涉及到RNA抽提、纯化和定量三个步骤。

首先是RNA的抽提。

在酵母细胞中，RNA主要存在于细胞质和细胞核中。

为了获得总的RNA样品，需要将细胞破碎并释放RNA。

常用的酵母细胞破碎方法包括机械破碎、酶解和化学方法等。

破碎后的细胞溶液中含有RNA、DNA和蛋白质等多种成分。

接下来的步骤就是纯化RNA并除去其他杂质。

其次是RNA的纯化。

纯化RNA的目的是使其从其他杂质中分离出来，以便进行后续的测定和分析。

最常见的RNA纯化方法是使用硅胶或磁珠结合RNA分子的特异性亲和性。

这种方法的原理是利用RNA和硅胶或磁珠表面间的氢键和疏水作用使RNA特异性地吸附在固相材料上，而其他杂质则可以通过洗涤步骤去除。

一般情况下，纯化后的RNA可以被溶解在适当的缓冲液中，以便后续测定和分析。

最后是RNA的定量。

RNA的定量是衡量RNA含量并计算RNA浓度的过程。

目前常用的RNA定量方法有比色法、吸光法和荧光法等。

其中，最常用的方法是吸光法。

吸光法是通过测量溶液在紫外或可见光区域的吸光度来定量RNA。

RNA在260 nm处吸光度较高，而在280 nm处蛋白质的吸光度较高。

因此，通过比较260 nm和280 nm处的吸光度可以估计RNA和蛋白质的相对含量。

通常情况下，酵母RNA定量测定还会结合核酸电泳分析来进一步验证RNA的完整性和纯度。

总体而言，酵母RNA定量测定的原理是通过将酵母细胞破碎并释放RNA，然后纯化RNA并除去其他杂质，最后通过吸光法来定量RNA。

这项技术能够准确测定酵母细胞中RNA的含量，帮助科研人员深入研究细胞的生命活动机制。

实验项目名称酵母RNA的提取与测定一、实验目的1.了解并掌握稀碱法提取 RNA。

2.学习地衣酚显色法测定RNA含量的基本原理和具体方法。

二、实验原理1. 细胞内大部分RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。

因此，分离制备RNA时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。

2. 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异。

一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。

其中苯酚法又是实验室最常用的。

组织匀桨用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加人乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。

上述方法提取的RNA具有生物活性。

工业上常用碱法和浓盐法提取RNA，用这2种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核酸的原料，其工艺比较简单。

浓盐法是用有10%左右氯化纳溶液，90℃提取3~4 h , 迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀 RNA。

稀碱法使用稀碱（本实验用0.2% NaOH 溶液）使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀 RNA 或调pH 2.5 利用等电点沉淀。

酵母含 RNA 达2.67~10.0%，而 DNA 含量仅为0.03 - 0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。

DNA和RNA都有吸收紫外线的性质，最大吸收峰在260 nm波长处。

紫外吸收是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质，所有含嘌呤和嘧啶的物质，都具有吸收紫外线的特性。

因此，RNA含量测定，可用紫外吸收法。

紫外吸收法具有操作简便、快速、灵敏度高、对被测样品无损、用量少等优点，适合于核酸分离纯化过程的检测。

该法对纯品核酸准确度高，但由于有紫外吸收的物质对测定有干扰，对不纯核酸样品误差较大。

若样品内混杂大量的蛋白质和核苷酸等吸收紫外线的物质，应设法事先除去。

3.细胞破碎方法-机械物理法：可以用研磨和组织捣碎法。

酵母RNA的提取及组份鉴定与核酸的定量测定————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：实验酵母RNA的提取及组份鉴定与核酸的定量测定【课前预习】1. 为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？2．如何从酵母中提取到较纯的RNA?3．干扰RNA的提取的物质有哪些并设计排除这些干扰的实验。

4．干扰紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度实验的物质有哪些？【目的要求】1. 了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。

2. 了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。

3. 学习紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。

【基本原理】由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。

一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。

其中苯酚法又是实验是最常用的。

组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。

向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。

上述方法提取的RNA具有生物活性。

工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。

浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。

稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。

酵母含RNA达2. 67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。

RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。

加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。

核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。

核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。

【精品】酵母RNA的提取与鉴定
酵母是广泛应用于生物学研究的模式生物之一，因为它们具有较小的基因组，短的生命周期和适应性强。

在酵母研究中，提取RNA是常见的操作，因为RNA是在基因表达调控中起重要作用的分子之一。

本文将介绍酵母RNA的提取方法和鉴定实验。

1. 准备样品：将酵母转移到含有5 mL YPD培养基的试管中，在30°C下培养过夜。

2. 收集细胞：将培养的酵母细胞移至1.5 mL离心管中，离心2分钟，2000rpm。

将上清液倒掉。

3. 细胞破碎：加入300 ul裂解缓冲液含有β-丙硫氨酸（β-mercaptoethanol），使每个细胞含有至少0.5 mM β-丙硫氨酸。

用盐或玻璃珠打碎细胞，破碎细胞的进程中需要冷却架。

破碎细胞，离心2分钟，13000rpm。

4. 取RNA：将上清液转移到一个新的1.5 mL离心管中，加入等体积的酚/氯仿，混合搅拌，离心10分钟，13000rpm。

RNA会出现在水相中，将水相转移到一个新的离心管中。

6. 干燥：将离心管在室温下风干10-15分钟，或将RNA转移到新的离心管或板中，在室温下干燥。

1. 电泳：将提取的RNA在2%琼脂糖凝胶中电泳，根据RNA的分子量判断RNA提取过程中是否有降解。

2. 比色法：用比色法测定RNA的浓度，通常比色法可以快速精确地测定核酸浓度。

3. 分光光度法：分光光度法可以通过测量RNA的260 nm和280 nm吸收值，计算出RNA 纯度。

总之，提取酵母RNA是简单易行的，对于酵母基因表达研究是至关重要的，可以应用多种方法进行RNA鉴定。