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MDA实验步骤

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微量丙二醛（MDA）测定

1， 按照试剂盒说明书配制试剂

MDA含量测定与T-SOD活力测定用的血清是同一份。

2， 仪器的选择

1) 根据以下加样表加样

分光光度计

毫升 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管

标准品 0.1

无水乙醇 0．1

测试样品 0.1 0.1

试剂一 0.1 0.1 0.1 0.1

混匀

试剂二 3 3 3 3

试剂三 1 1 1

50%冰醋酸 1

吸光度 0.077 0 0.062 0

MDA含量 8.052

旋涡混匀器混匀，管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴40min，取出后流水冷却，532nm处测定吸光值

先用4mlEP管作为容器，反应完全后，移入比色皿中测量OD值

酶标仪

微升 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管

标准品 5

无水乙醇 5

测试样品 5 5

试剂一 5 5 5 5

混匀

试剂二 150 150 150 150

试剂三 50 50 50

50%冰醋酸 50

吸光度 0.08543-A 0.07193-A 0.13776-A 0.12625-A

MDA含量 10.962

旋涡混匀器混匀，管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴40min，取出后流水冷

却，532nm处测定吸光值(A蒸馏水=A)

先用0.5mlEP管作为容器，反应完全后，移取200μl至96T板中测量OD值

*实验部分结数据见表中红色数据

2）结果分析；1，与T-SOD活力检测结果类似，酶标仪所测得的MDA含量的值要稍微大一些， 但都相差不大，所以可以选择酶标仪

2,20μl血清量过大，需要进一步摸索取样的量。

3，最佳取样量第二次预试

1) 根据以下加样表加样

2) 结果分析：加5μl的血清量得出的MDA含量合适，稀释倍数过大，MDA含量过少，不利于比较

3) 总结：统一选择5μl的原血样做为加样量

3， 血样按照以上方法处理后分装，取出一份待测，其余的先放入4℃后放入-80℃冷冻。再按以下加样表加样。

标准管

标准空白管 测定管—测定空白管

原血清 血清稀释一倍 血清稀释两倍 血清稀释三倍

标准品 5

无水乙醇 5

测试样品 5 5 5 5 5 5 5 5

试剂一 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

混匀

试剂二 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150

试剂三 50 50 50 50 50 50

50%冰醋酸 50 50 50 50

95°C水浴40min 冷却后测532nm处的吸光值

吸光度

MDA含量 8.985985 4.40885 201.0084 -68.5724 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管

微升

编号 1 2 n… 1 2 n…

标准品 5

无水乙醇 5

测试样品 5 5

试剂一 5 5 5 5

混匀

试剂二 150 150 150 150

试剂三 50 50 50

50%冰醋酸 50

吸光度

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实验步骤

实验步骤

实验步骤：

1.接合转移：

①将50uL过夜培养的大肠杆菌转移至含有Apr的5mLLB中；

②37℃培养3h后，12000rpm离心1min（取1.5mL）；取孢子50uL离心12000rpm,1min.

③大肠杆菌用1mL LB洗两次；孢子用1mL 的TSB洗两次；

④大肠杆菌用100uL的LB悬浮；孢子用100uL的TSB悬浮，50℃热激10min(如果为ZXI ,预萌发3-5h,37℃)

⑤取大肠杆菌和孢子各100uL混匀后，涂于MISP4的培养基上，30℃过夜（10h）；

2.覆盖：

昨天接合的平板加入1mL水+25uL Apr+25uL NaI ，覆盖均匀后将平板吹干

3.转化：

①取感受态于冰上溶解，分别加入质粒混匀后冰上放置30min；

②37℃热激2min；

③加入900uL的LB37℃温育50min

④5000rpm离心5min，涂LA（Apr）平板

4.感受态制作：

把3mL S17-1加入到三角瓶中,37度培养至OD550=0.75,将菌体放入冰盒冷却，用预冷的离心管收集菌体后，用TFB1洗涤1次，TFBII 2mL悬浮，悬浮后进行分装，保存于-80℃中。

5.提质粒：

3000rpm离心1min 后去上清

加入300uL SI,打散菌体

加入600uL SII混匀

加入460uLSIII混匀

加入0.5μLRNA酶，37度30分钟

加入200μL三混溶液，混匀

12000rpm离心10 min移上清至新管中

加入160uL氯仿温育1min

12000rpm离心10min移上清至新管中

加入1600uL异丙醇混匀

-20℃，10min

12000rpm离心10min,弃上清

用75%乙醇洗两次后干燥溶于30uL水。

6.大提质粒

5000rpm离心10min；

加入3mLS1，打散菌体；

加入6mLS2，轻轻晃动；

化学实验考试步骤

化学实验考试步骤

试题三：氧气的制取与检验

1、器材：

高锰酸钾、铁架台（附铁夹）、试管架、试管（大）、带导管的橡胶塞、塑料水槽或玻璃水槽、酒精灯、胶皮管、玻璃导管、药匙、集气瓶（125mL、附玻璃片）、棉花、细木条、火柴（或打火机）、废物缸、试管刷、抹布。

2、操作步骤：1、检查装置气密性（①连接好仪器②取小烧杯装些水③将导管放入烧杯中④用双手紧握试管、有气泡产生气密性良好）

2、装药品（①先装高锰酸钾、用纸槽送入②在试管口放一小团棉花③固定试管，略向下倾斜）

3、点燃酒精灯（注意：先预热，再用外焰加热）

4、收集气体（①集气瓶装满水，倒放在水槽中②等气泡连续产生时再收集气体）

5、将导管从水中移出后再移开酒精灯，并将其用灯帽盖灭。

6、检验（①将氧气从水槽中取出正放在桌面②用带火星的小木条伸入到集气瓶内，木条复燃证明是氧气）

7、整理桌面（清洗各种仪器）

3、装置图

试题五：二氧化碳的制取与检验

1、器材：

铁架台（附铁夹）、试管（大）、带导管的橡胶塞、试管（小）、试管架、烧杯、镊子、药匙、集气瓶（125mL、附玻璃片）、细木条、火柴（打火机）、石灰石（或大理石）、稀盐酸、澄清的石灰水、废液缸、回收缸、试管刷、抹布。

2、操作步骤：1、检查装置气密性（①连接好仪器②取小烧杯装些水③将导管放入烧杯中④用双手紧握试管、有气泡产生气密性良好）

2、装药品（①先加大理石②再固定试管③再直接倒稀盐酸④连接好导管）

3、收集气体（①取一集气瓶正放桌面，盖好玻璃片②将导管插入集气瓶）

4、验满（用燃着的木条靠近集气瓶口，若木条熄灭证明已满）

mda含量测定实验报告

mda含量测定实验报告

mda含量测定实验报告

MDA 含量测定实验报告

一、实验目的

丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的重要产物之一，其含量的高低可以反映生物体脂质过氧化的程度和细胞损伤的程度。本实验旨在通过测定样品中的 MDA 含量，了解样品的氧化损伤情况。

二、实验原理

MDA 与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红色的产物，该产物在

532nm 处有最大吸收峰。通过测定该产物的吸光度值，可以计算出

MDA 的含量。但样品中的其他物质可能会对测定产生干扰，因此需要通过加样和对照实验来消除干扰。

三、实验材料与仪器

1、 实验材料

新鲜组织样品（如肝脏、心脏等）

磷酸缓冲液（PBS）

三氯乙酸（TCA）

硫代巴比妥酸（TBA）

2、 实验仪器 离心机

恒温水浴锅

分光光度计

移液器

容量瓶

试管

四、实验步骤

1、 样品制备

称取适量的新鲜组织样品，加入预冷的 PBS 缓冲液，在冰浴条件下匀浆。

将匀浆液转移至离心管中，在 4℃下以 10000rpm 离心 10 分钟。

吸取上清液，即为样品提取液。

2、 反应体系的制备

取两支试管，分别标记为测定管和对照管。

向测定管中加入 2ml 样品提取液和 2ml 06% TBA 溶液。

向对照管中加入 2ml 蒸馏水和 2ml 06% TBA 溶液。

3、 反应条件 将测定管和对照管放入沸水浴中加热 15 分钟，然后迅速取出并冷却至室温。

4、 离心

将冷却后的测定管和对照管以 3000rpm 离心 10 分钟，以去除沉淀。

5、 吸光度测定

以蒸馏水为空白对照，在 532nm 波长处分别测定测定管和对照管的吸光度值，分别记为 A1 和 A2。

五、计算方法

MDA 含量（nmol/ml）＝ 645×（A1 A2） 056×A0

其中，A0 为空白对照管的吸光度值。

六、实验结果

将测定得到的吸光度值代入上述公式，计算出样品中的 MDA 含量。

实验步骤 2

实验步骤 2

14第三章實驗方法3-1實驗藥品與儀器3-1-1實驗藥品藥品純度製造廠商

SodiumchlorideTedia(Ohio,U.S.A)

SodiumhydroxideShwoa(Tokyo,Japan)

SodiumacetateShowa(Tokyo,Japan)

PotassiumchloridTedia(Ohio,U.S.A)

Methanol99.9%Tedia(Ohio,U.S.A)

HydrochloricacidScharlau(Barcelona,Spain)

Ethanol95%Tedia(Ohio,U.S.A)

CibacronBlue3GA55%Sigma-Aldrich(Milwaukee,WI,USA)

CibacronBrilliantRed3BA50%Sigma-Aldrich(Milwaukee,WI,USA)

PotassiumthiocyanateTedia(Ohio,U.S.A)

AceticacidTedia(Ohio,U.S.A)

153-1-2陰離子交換薄膜與反應性染料本研究使用強陰離子交換薄膜為SB6407產品(購自Pall公司,EastHills,NY,USA)：其材質為polyethersulfone/coplymer，官能基為quaternaryammoniumgroups，其對立離子為Cl-，孔徑大小0.45 μm，厚度140μm，直徑為47mm，離子交換容量40μeq/disk(換算為2.3μeq/cm2)，耐溫150℃；弱陰離子交換薄膜為DE81產品(購自Whatman公司,Brentford,Middlesex,UK)：其材質為cellulose，官能基為diethylaminoethylgroups(DEAE)，其對立離子為OH-，薄膜大小為46cm×57cm，使用時將其剪裁為直徑47mm之圓片，厚度200μm，離子交換容量1.7μeq/cm2。反應性染料為CibacronBlue3GA(55%,M.W.774.16,withthreesufonicacidgroups)和CibacronRed3BA(50%,M.W.1000.25,withfoursulfonicacidgroups)，皆購自Sigma-Aldrich(Milwaukee,WI,USA)，其結構式列於圖一.