下载文档原格式
分光光度技术：是利用物质对光的吸收作用对物质进行定样或定量分析的技术。
,,电位分析法：是利用电极电位和浓度之间的关系来确定物质含量的分析方法离子选择电极：是一类用特殊敏感膜制成对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电传感器。
电泳：溶液中带电粒子在电场中向所带电荷相反方向移动的现象称为电泳。
干化学：是指将液态样品例如血浆、血清、尿液等置于含有试剂的固相载体上发生反应，依照反应结果定量测定样品中特定成分的浓度或活度的一项技术。
PCR：是指利用耐热聚合酶的反复作用通过变性、退火、延伸的循环操作在体外迅速将DNA模板扩增百万倍的一种技术。
自动生化分析技术：是指自动化的仪器设备模仿代替手工操作，即将生化分析过程的加样加试剂、混合保温反应、检测、结果计算，显示打印及清洗等步骤自动化。
试剂盒：用于检测项目测定的合有使用说明的所有配套试剂组合称为试剂盒定时法：又称终点法，两点法是早期测定酶活性浓度的方法，指底物与酶作用一段时间后加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的生长量，计算酶促反应的平均速度。
工具酶：通常把酶学分析技术中作为试剂用于测定代谢物浓度或酶活性的酶称为工具酶。
同工酶：催化相同的化学反应但酶蛋白的分子组成理化性质免疫学特性，不同一组酶称为同工酶。
血浆特异酶：主要指血浆蛋白的固有成分，在血浆中发挥特定催化作用的酶也称血浆凝固酶。
回收实验：是指在已知浓度的样本中加入不同浓度的已知被测物资，然后用被评价方法或被评价的的检验系统测定被测物质的浓度，最后计算实测浓度与加入浓度之比，以回收率评价检验方法检测系统的比例系统误差。
干扰实验：是通过定量检测样本中的物质所引起试验方法的系统误差，以评价方法的准确度。
急性实相反应蛋白：在急性炎症、组织损伤、心肌梗死，烧伤等疾病时，血浆中有些蛋白质浓度升高，有些蛋白质浓度降低，浓度发生变化的蛋白质。
C肽：胰岛素形成过程中释放的肽类物质无胰岛素活性可作为反应胰岛素BCELL生成和分泌胰岛素能力的指标。
实验一分光光度技术一．概念分光光度法（Spectrophotography），又称为比色法，它是利用物质特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。
有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长的光的吸收能力不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。
比色法只限于可见光区，分光光度法可扩展到紫外光区和红外光区。
使用的光谱范围200－1000nm紫外光区：200－400nm可见光区：400－760nm红外光区：760－1000nm二．基本原理物质的吸收光谱与它们的本身的分子结构有关，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同。
每种物质都具有特定的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，因此可利用各种物质不同的吸收光谱及其强度，对不同物质进行定性和定量分析。
分光光度法根据的原理是Lambert－Beer定律，该定律阐明了溶液对单色光吸收程度与溶液浓度及溶液厚度之间的关系。
1. 朗伯（Lambert）定律：当单色光通过一吸收光的介质时，其光强度随吸收光介质的厚度增加而成指数减少，即I / I0 = e－K1LI0：入射光强度，I：出射光强度，L：介质的厚度e: 自然对数的底，即2.718 K1: 溶液的吸光率ln（I0/I）= K1l换算成常用对数式，即log（I0/I）= 0.4343·K1l令K = 0.4343·K1则log（I0/I）= Kl此处以K为吸光率也就是说：在溶液浓度不变时，溶液对光的吸收随溶液厚度的增大而增大。
2. 比尔（Beer）定律：单色光通过一光吸收介质时，光强度随介质浓度增长而成指数减少，即I / I0 = e－K2LC：溶液浓度log（I0/I）= KC也就是说：溶液厚度不变时，溶液对光的吸收随溶液浓度的增大而增大。
3. Lambert－Beer定律如果同时考虑吸收溶液的浓度和厚度对光吸收的影响，将以上两式结合，则得出log（I0/I）= KCl令T =（I/I0） A = log（I0/I）则A = KClA为吸光度，T为透光度K（L·mol－1·cm－1）是一常数，即削光系数，也叫摩尔吸光度；三．计算1.标准管法（标准比较法）用一已知浓度的测定物按测定管同样处理显色，读出吸光度，在根据公式计算。
分光光度法的原理及应用1. 原理介绍分光光度法是一种常见的分析化学技术，用于测量溶液中化合物的浓度和吸收光谱。
分光光度法基于分子在特定波长下对光的吸收现象，通过测量被溶液吸收的光强度来确定溶液中化合物的浓度。
1.1 光吸收现象分子在特定波长的光照射下，能够吸收光的能量，使得分子内部电子发生激发跃迁，从基态到激发态。
这种吸收是根据化合物的分子结构和电子能级之间的能量差异来决定的。
1.2 分光光度计分光光度计是用于测量溶液吸收光强度的仪器。
它包含一个光源、一个选择特定波长的单色仪、一个样品室和一个光电探测器。
分光光度计能够通过测量样品吸收光的强度来确定溶液中的化合物浓度。
2. 应用分光光度法在许多领域中得到广泛的应用，包括环境监测、食品安全、药物分析等。
以下是一些常见的应用：2.1 环境监测分光光度法常被用于环境中有害物质的检测和监测。
例如，通过测量水样中某种化学物质的吸光度，可以确定水体中的污染程度。
这种方法在水质监测和环境保护中起着重要的作用。
2.2 食品安全分光光度法可以用于检测食品中的添加剂、农药残留物和重金属等有害物质。
常见的应用包括测量食品中的某种营养成分的含量以及检测污染物的浓度。
2.3 药物分析在药物研究和制造过程中，分光光度法用于测量药物的浓度和纯度，以及监测反应的进程。
这种方法是药物研究和制造中常用的一种分析手段。
2.4 生物化学分光光度法在生物化学研究中也具有重要的应用。
例如，通过测量生物样品中特定化合物的吸光度，可以确定样品中的含量，进而研究生物反应的机制和动力学。
3. 测量步骤以下是使用分光光度法测量溶液中化合物浓度的一般步骤：1.设置分光光度计的工作波长和仪器条件，根据所测化合物的特性选择合适的波长。
2.校准仪器，使用标准样品测量光强度。
根据标准样品的光强度和浓度的线性关系，建立校正曲线。
3.取待测样品，使用适当的溶剂将其稀释至合适的浓度范围。
4.在分光光度计中将样品放入样品室，调节波长和仪器条件。
分光光度的基本原理1：吸光度与透光度：当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透过溶液。
设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度T，即：T=I/I0 T*100为T%，称为百分透光度。
透光度的负对数称为吸光度(A)，即 A=-lgT=-lgI/I0=lgI0/I 2：Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。
其表达式为：A=KLC式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液层厚度，称为光经；C为溶液浓度。
Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光、和均匀非散射的液体。
根据Lambert-Beer定律，当液层深度为cm，浓度单位为mol/L时吸光系数K称为摩尔吸光系数(ε)。
ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。
ε是物质的特征性常数。
在固定条件(入射光波长、温度等)下，特定物质的ε不变，这是分光光度法对物质进行定性的基础。
通过对已知浓度的溶液测定其吸光度，可求得某物质的ε。
3：偏离Lambert-Beer定律的因素按Lambert-Beer定律，某一种物质在相同条件下，其浓度和吸光度成正比，应用Lambert-Beer定律产生误差主要来源于光学和化学两方面因素。
①：光学因素 Lambert-Beer定律要求入射光是单色光，在目前的分光条件下，所分出的单色光并不是严格的单色光，而是包括一定波长范围宽度的谱带，其它波长的杂色光是引起误差的主要原因。
入射光的谱带越宽，其误差越大。
②：化学因素浓度、PH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡，是被测物质的浓度因离解、缔合和形成新的化合物而发生变化，从而使吸光度和浓度不呈线性关系。
摩尔吸光系数摩尔吸光系数定义：物质对某波长的光的吸收能力的量度。
指一定波长时，溶液的浓度为1 mol/L，1cm的吸光度，用ε或EM表示。
分光光度原理分光光度法是一种广泛应用于化学分析和生化分析中的定量分析方法。
它利用溶液对特定波长的光的吸收来测定物质的浓度，是一种非常重要的分析技术。
首先，我们来了解一下分光光度法的基本原理。
分光光度法是利用物质对特定波长的光的吸收特性来测定物质的浓度的方法。
当一束光通过溶液时，溶液中的物质会吸收特定波长的光，而其余波长的光则会透过溶液。
通过测量透过溶液的光的强度，就可以确定溶液中物质的浓度。
这就是分光光度法的基本原理。
分光光度法的原理可以用比喻来解释。
我们可以把光看作是一群小粒子，当这群小粒子穿过溶液时，溶液中的物质就像是一群小怪物，它们会吞噬掉特定波长的光粒子，而放行其他波长的光粒子。
通过测量通过溶液后的光粒子的数量，我们就可以知道溶液中的小怪物的数量，从而确定溶液中物质的浓度。
分光光度法的原理虽然简单，但是在实际应用中有很多需要注意的地方。
首先，选择合适的波长是非常重要的。
不同的物质对光的吸收特性是不同的，因此需要选择适合被测物质的吸收波长。
其次，需要保证光的强度是稳定的，这样才能保证测量的准确性。
另外，溶液的浓度和光的路径长度也会影响测量结果，因此需要对这些因素进行校正。
在实际应用中，分光光度法有着广泛的应用。
在化学分析中，可以用分光光度法来测定金属离子的浓度、有机物的含量等。
在生化分析中，分光光度法也被广泛应用于酶活性的测定、蛋白质的浓度测定等方面。
分光光度法不仅可以用于溶液的浓度测定，还可以用于固体和气体的浓度测定，因此在各个领域都有着重要的应用价值。
总之，分光光度法是一种非常重要的分析方法，它利用物质对特定波长的光的吸收特性来测定物质的浓度，具有简单、快速、准确的特点，在化学分析和生化分析中有着广泛的应用前景。
希望通过本文的介绍，读者对分光光度法有了更深入的了解，能够更好地应用于实际工作中。
