蛋白标签技术简介及常用蛋白标签

蛋白纯化标签选择蛋白纯化标签选择蛋白质纯化是蛋白质研究中的关键环节，选择合适的蛋白纯化标签是关键的一步。

因此，对于蛋白纯化标签的选择，需要对其特点进行深入了解，才能选择最合适的标签。

一、His标签His标签是最常用的蛋白纯化标签之一，其主要优点是方便易用、高度特异性、纯化效果好。

该标签基于亲和层析技术，由6个连续的组氨酸组成，能够结合多价的Ni2+离子，并与His标签上的组氨酸残基形成配合物，使之非常容易地与识别Ni-NTA离子交换树脂上的离子交换树脂结合。

使用His标签时需要注意保持N末端无电荷环境。

二、GST标签GST标签（谷胱甘肽S-转移酶）是一种大分子量的蛋白，转移酶家族成员之一，由220氨基酸组成，与GSH（谷胱甘肽）具有高度特异性。

GST标签与谷胱甘肽结合处于酶反应的活性位点处，而使GST-蛋白作为一个整体结合到GSH的AGAROSE树脂上。

GST标签的优点是可用于非天然蛋白质的表达和纯化，同时易于向GST-蛋白加入各种模体。

三、FLAG标签FLAG标签是一种小标签，由8个氨基酸组成，是常用的蛋白表达和纯化标签之一。

该标签序列为Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，其标记位点中没有任何理化性质。

FLAG标签与经过特殊改造的丁氨酸树脂组成配对可以使FLAG标签在左手糖酐醇和右手糖酐醇之间转换，呈现不同的活性特性。

FLAG标签的优点是结构小，易于表达，不会影响蛋白的结构和功能。

四、MBP标签MBP标签（麦芽糖结合蛋白）是一种大分子量的蛋白，分子量约为42kDa，可以用来表达和纯化融合蛋白，MBP标签能够容易地与氨基酸链的C端结合在一起。

MBP标签的优点是能够有效地维持蛋白的稳定性，并且提供了易于处理的纯化标记。

结论以上介绍的四种蛋白纯化标签均具有比较明显的优缺点。

在实际研究中选择何种标签需要根据研究目标、蛋白质性质、表达系统等多方面因素进行综合评估和决定。

卵白标签之阿布丰王创作卵白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术,与目的卵白一起融合表达的一种多肽或者卵白,以便于目的卵白的表达、检测、示踪和纯化等.随着技术的不竭发展,研究人员相继开发出了具有各种分歧功能的卵白标签.目前,这些卵白标签已在基础研究和商业化产物生产等方面获得了广泛的应用.美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种卵白标签,可以满足客户的分歧需求,包括各种最新型的标签,如：SNAP-Tag™、Halo Tag™、AviTag™、Sumo等；也提供齐全的各种经常使用标签,如eGFP、His、Flag等等标签.以下是部份卵白标签的特性介绍,更加详细的介绍可在查询克隆产物的结果列内外面看到各种推荐的卵白标签和载体.TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签,可拔出在目的卵白的C 末端或N末端.当某一个标签的使用,一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成共同的结构特征（结合配体）利于纯化.组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组卵白进行分离纯化. 使用His-tag有下面优点：•标签的分子量小,只有~0.84KD,而GST和卵白A分别为~26KD 和~30KD,一般不影响目标卵白的功能；•His标签融合卵白可以在非离子型概况活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的卵白获得应用,后者在纯化包容体卵白时特别有用,用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂卵白,使复性不受其它卵白的干扰,或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合卵白也被用于卵白质-卵白质、卵白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低,可将纯化的卵白直接注射植物进行免疫并制备抗体.•可应用于多种表达系统,纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签.Flag标签卵白Flag标签卵白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK）,同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. FLAG作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：•FLAG作为融合表达标签,其通常不会与目的卵白相互作用而且通常不会影响目的卵白的功能、性质,这样就有利用研究人员对融合卵白进行下游研究.•融合FLAG的目的卵白,可以直接通过FLAG进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的融合卵白,而且纯化效率高.•FLAG作为标签卵白,其可以被抗FLAG的抗体识别,这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合卵白进行检测、鉴定.•融合在N真个FLAG,其可以被肠激酶切除（DDDK）,从而获得特异的目的卵白.因此现FLAG标签已广泛的应用于卵白表达、纯化、鉴定、功能研究及其卵白相互作用等相关领域. MBP（麦芽糖结合卵白）MBP（麦芽糖结合卵白）标签卵白年夜小为40kDa,由年夜肠杆菌K12的malE基因编码.MBP可增加在细菌中过量表达的融合卵白的溶解性,尤其是真核卵白.MBP标签可通过免疫分析很方便地检测.有需要用位点专一的卵白酶切割标签.如果卵白在细菌中表达,MBP 可以融合在卵白的N端或C端. 纯化：融合卵白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化.结合的融合卵白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱.结合亲和力在微摩尔范围.一些融合卵白在0.2%Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合,而其他融合卵白则不受影响. 缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂.如果要去除MBP融合部份,可用位点特异性卵白酶切除.检测：可用MBP抗体或表达的目的卵白特异性抗体检测.GST(谷胱甘肽巯基转移酶)GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签卵白自己是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然年夜小为26KD.将它应用在原核表达的原因年夜致有两个,一个是因为它是一个高度可溶的卵白,希望可以利用它增加外源卵白的可溶性；另一个是它可以在年夜肠杆菌中年夜量表达,起到提高表达量的作用.GST融合表达系统广泛应用于各种融合卵白的表达,可以在年夜肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达.结合的融合卵白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱.在年夜大都情况下,融合卵白在水溶液中是可溶的,并形成二体.GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测.标签有助于呵护重组卵白免受胞外卵白酶的降解并提高其稳定性. 在年夜大都情况下GST融合卵白是完全或部份可溶的.纯化：该表达系统表达的GST标签卵白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化.GST标签卵白可在温和、非变性条件下洗脱,因此保管了卵白的抗原性和生物活性.GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力,因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等.如果要去除GST融合部份,可用位点特异性卵白酶切除.检测：可用GST抗体或表达的目的卵白特异性抗体检测.HAHA标签卵白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素概况抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶卵白的空间结构影响小, 容易构建成标签卵白融合到N端或者C端.易于用Anti－HA抗体检测和ELISA检测.c-MycC-Myc 标签卵白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile- Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在分歧的卵白质框架中仍可识别其相应抗体.C-Myc tag已胜利应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组卵白质在靶细胞中的表达.eGFPeGFP标签卵白,是增强型绿色荧光卵白eGFP,激发波长为488nm,发射波长为507nm,其是由野生型绿色荧光卵白GFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的.相对GFP,eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. eGFP作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针.•其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况.•同时细胞内的其它产物不会干扰标签卵白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.•其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选.因此现eGFP 表达标签被广泛地应用于基团表达调控、转基因功能研究、卵白在细胞中的功能定位、迁移变动及药物筛选等方面.另外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eGFP,用于目的基因的体内卵白示踪研究.eYFPeYFP标签卵白为增强型黄绿色荧光卵白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为527nm,其是由野生型黄绿色荧光卵白YFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的.相对YFP,eYFP荧光强度更强、荧光性质更稳定.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eYFP的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. eYFP作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针.•其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况.•同时细胞内的其它产物不会干扰标签卵白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.•其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选.因此现eYFP 表达标签被广泛的应用与基团表达调控、转基因功能研究、卵白在细胞中的功能定位、迁移变动及药物筛选等方面.另外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eYFP,用于目的基因的体内卵白示踪研究.eCFPeCFP标签卵白为增强型青色荧光卵白eCFP,激发波长为433nm或453nm,发射波长为475nm或501nm,其是由野生型青色荧光卵白CFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的.相对CFP,eCFP荧光强度更强、荧光性质更稳定.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eCFP的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. eCFP作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针.•其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况.•同时细胞内的其它产物不会干扰标签卵白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.•其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选.因此现eCFP 表达标签被广泛的应用与基团表达调控、转基因功能研究、卵白在细胞中的功能定位、迁移变动及药物筛选等方面. Avi TagAviTag标签卵白是一个15 个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知天然可生物素化序列完全分歧,可以加在目标卵白的N端和C端.融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组卵白选用低亲和性的单体抗生物素卵白或抗生物素卵白衍生物,除用于卵白质分离纯化,还用于卵白质相互作用研究.Avi Tag标签系统具有以下几年夜优点:•无论在体外或者体内,几乎所有的卵白都可以在一个共同的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化；•生物素化是通过酶和底物的反应来实现,反应条件相当温和而且标识表记标帜的专一性极高；•生物素Avi Tag只有15个氨基酸,对卵白空间结构的影响非常小.SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的卵白标签技术,不单专一性极高而且稳定,最年夜的优点是适用于多种环境下的卵白质检测与纯化,如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGE gels)等.SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移（O6-alkylguanine-DNA- alkyltransferase）获得.无论体内还是体外,SNAP-Tag都能与底物高特异性地共价结合,使卵白标识表记标帜上生物素或荧光基团（如荧光素和若丹明）.SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤.这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的卵白携带上了苯甲基基团所带的标识表记标帜物.苯甲基鸟嘌呤在生化条件下稳定,而且没有其他卵白会和这类物质作用,所以SNAP标签反应是高特异的. 检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞,方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag融合卵白的标识表记标帜与检测.它们也可特异性地标识表记标帜年夜肠杆菌,酵母和哺乳植物等细胞抽提液或已经纯化的卵白液中的SNAP-tag融合卵白.将纯化的或未纯化的SNAP-Tag融合卵白与概况固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合,卵白即可特异与底物作用,形成共价键,融合卵白间接被固定在了基质概况上,可以到达更方便快捷地研究卵白功能或纯化卵白的目的.Halo TagHaloTag™标签卵白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,可与多种合成的HaloTag™配基有效地共价结合.这个分子量为33KDa的单体卵白能融合在重组卵白的N端或C 端,并在原核和真核系统中表达.HaloTag™配基是小分子化学物,能够在体外或体内与HaloTag™卵白共价结合.这些配基由两个关键组分组成：(1)一个通用的HaloTag™反应联结子,结合HaloTag™卵白；(2)一个功能基团,例如荧光染料或亲和媒介.能够共价和特异性结合多种合成的陈说基团和亲和配基的特性,使得HaloTag™卵白能够用于检测和亲和结合或固相化固定目的卵白. SUMOSUMO标签卵白是一种小分子泛素样修饰卵白（Small ubiquitin-like modifier）,是泛素(ubiquitin)类多肽链超家族的重要成员之一.在一级结构上,SUMO与泛素只有18%的同源性,然而两者的三级结构及其生物学功能却十分相似.研究发现SUMO可以作为重组卵白表达的融合标签和分子伴侣,不单可以进一步提高融合卵白的表达量,且具有抗卵白酶水解以及增进靶卵白正确折叠,提高重组卵白可溶性等功能.另外SUMO还有一项重要的应用,就是可用于完整地切除标签卵白,时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日。

各种蛋白标签汇总标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。

随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。

目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。

标签纯化促进溶解度抗体效价细胞标记His6++/-+/-Flag++/-+GST+++MBP++++His-MBP++++HA+eGFP/CFP/YFP+++Myc+His-Myc++His-AviTag++++++Sumo++++His-Sumo+++++SNAP-Tag++++++Halo Tag++++++TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。

当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。

组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。

使用His-tag有下面优点：标签的分子量小，只有~，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。

可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

基因克隆载体上的各种常用蛋白标签蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。

随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。

目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。

美国GeneCopoeia(复能基因)为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag?、Halo Tag?、AviTag?、Sumo等;也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。

以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。

TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。

当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。

组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。

使用His-tag有下面优点：标签的量小，只有~，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能;His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性;His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究;His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。

可应用于多种表达系统，纯化的条件温和;可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK)，同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

蛋白标签-基因克隆载体上的蛋白标签-齐全的各种常用标签蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。

蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体。

除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：His6：His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。

当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。

组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。

使用His-tag有下面优点：1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

Flag:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。

各种蛋白标签汇总 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。

随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。

目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。

•标签的分子量小，只有~，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；•His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。

•可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：•FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。

•融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。

•FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。

各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签(ｐroｔeinｔag)就是指利用DＮＡ体外重组技术,与目得蛋白一起融合表达得一种多肽或者蛋白,以便于目得蛋白得表达、检测、示踪与纯化等。

随着技术得不断发展,研究人员相继开发出了具有各种不同功能得蛋白标签。

目前,这些蛋白标签已在基础研究与商业化产品生产等方面得到了广泛得应用。

•标签得分子量小,只有~０、84KD,而GSＴ与蛋白Ａ分别为～26KＤ与~3０KD,一般不影响目标蛋白得功能;•Ｈis标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在得条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强得蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度得变性剂溶解后通过金属螯与亲与层析去除杂蛋白,使复性不受其它蛋白得干扰,或进行金属螯与亲与层析复性;•Ｈis标签融合蛋白也被用于蛋白质—蛋白质、蛋白质－DＮA相互作用研究;•His标签免疫原性相对较低,可将纯化得蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。

•可应用于多种表达系统,纯化得条件温与;•可以与其它得亲与标签一起构建双亲与标签、Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸得亲水性多肽(DＹKDＤDDK),同时载体中构建得Ｋoｚak序列使得带有FL ＡG得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

ＦLAG作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点:•FLＡG作为融合表达标签,其通常不会与目得蛋白相互作用并且通常不会影响目得蛋白得功能、性质,这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。

•融合FLAG得目得蛋白,可以直接通过FＬAG进行亲与层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性得融合蛋白,并且纯化效率高、•FLAG作为标签蛋白,其可以被抗FＬＡG得抗体识别,这样就方便通过WｅｓterｎBｌot、ELＩSA等方法对含有FLAＧ得融合蛋白进行检测、鉴定。

•融合在N端得FLAG,其可以被肠激酶切除(DＤＤＫ),从而得到特异得目得蛋白。

因此现ＦＬAG 标签已广泛得应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。

各种蛋白标签汇总Last revision on 21 December 2020各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。

随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。

目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。

•标签的分子量小，只有~，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；•His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。

•可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：•FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。

•融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。

•FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。

•融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。

蛋白标签的主要类型蛋白标签是利用特定的化学反应将一种特殊的抗体或保留性化合物结合到细胞膜上特定位点的分子标签，以便进行特异性细胞或组织中的蛋白质检测。

目前常用的蛋白标签包括：FITC、Alexa Fluor、Qdot Nano、Cy3、Cy5、Texacel、ATTO、TMR、LC Red640、iFluor660、Cascade Blue等。

1、FITC标签：FITC，即荧光素处理了的免疫球蛋白，是一种常用的标记抗体的分子标签，其结合后能够使抗体具有绿色的荧光。

它是一种水溶性标签，易于实现和有效的低成本，并且还可以通过二级共振能量转移（FRET）等特殊工艺实现荧光检测和高度特异性的细胞内活性检测。

2、Alexa Fluor标签：Alexa Fluor是荧光素-抗体类标签，它与抗体结合后能够使其拥有不同波长的荧光，可以实现多颜色的检测。

另外，它还具有很高的抗氧化性能和低的杂质污染，可以有效地抑制荧光衰减，因此可以实现更长时间的荧光信号检测。

3、Qdot Nano标签：Qdot Nano标签是一种纳米级别的荧光抗体类标签，其特性包括高荧光亮度、宽度和宽色域发射等，无论是检测还是定位，都可以灵活多变使用。

另外，它还具有高度稳定性和抗外界条件影响的能力，因此可以在极端条件下实现长时间稳定的荧光表达。

4、Cy3/Cy5标签：Cy3/Cy5标签是一种含有磷酰亚胺酸的荧光抗体类标签，它可以有效地识别细胞内表达的特定蛋白质，而且具有稳定性好、荧光强度高、交叉反应性低等优点。

因此，它可以作为生物成像技术的理想标签，用于实现高精确度和高通量的靶向性检测。

5、Texacel标签：Texacel标签是一种以多种蛋白质抗原为基础的抗体类标签，其结合后能够产生石墨烯结构，从而可以有效提高抗体的稳定性和结合能力，并且具有低毒性和低异质性的检测优势。

6、ATTO标签：ATTO标签是一种荧光素-抗体类标签，专为荧光检测而设计，具有荧光素特异性位点和抗体结合性能，可以有效识别细胞内特定蛋白质，并灵活多变地进行检测。

蛋白质标记技术引言：蛋白质标记技术是生物化学和分子生物学领域中一种常用的实验技术，它能够帮助研究人员追踪和定位特定蛋白质在细胞或生物体中的表达和功能。

本文将介绍蛋白质标记技术的原理、应用和发展趋势。

一、原理蛋白质标记技术主要是通过在目标蛋白质上连接一种特定的标记分子，例如荧光染料、酶或金属离子等，使其在实验中能够被准确地检测和定位。

常用的蛋白质标记方法包括免疫标记、亲和标记和生物素标记等。

1. 免疫标记法免疫标记法是利用抗体与目标蛋白质的特异性结合来实现标记的方法。

通过将抗体与特定的标记物结合，可以在细胞或组织中检测目标蛋白质的定位和表达水平。

常用的免疫标记方法包括免疫荧光染色、免疫酶标记和免疫磁珠法等。

2. 亲和标记法亲和标记法是利用亲和力较强的结合对来实现标记的方法。

常见的亲和对包括生物素和亲和素、金属离子和亲和树脂等。

通过将这些亲和对与目标蛋白质结合，可以实现对目标蛋白质的特异性检测和定位。

3. 生物素标记法生物素标记法是利用生物素与亲和素结合来实现标记的方法。

生物素标记的优势在于其结合亲和素的亲和力很强，能够实现高灵敏度的检测。

生物素标记通常通过生物素-亲和素体系来实现，例如生物素-链霉亲和素体系。

二、应用蛋白质标记技术在生物医学研究中有着广泛的应用。

以下是蛋白质标记技术在不同研究领域的应用举例：1. 细胞定位通过将荧光染料或其他标记物与目标蛋白质结合，可以实现对细胞内蛋白质的定位。

这对于研究细胞内蛋白质的分布、转运和功能具有重要意义。

例如，通过将荧光标记的抗体与细胞膜蛋白结合，可以观察细胞膜上蛋白质的定位和动态变化。

2. 蛋白质相互作用蛋白质标记技术可以用于研究蛋白质与其它分子之间的相互作用。

通过将不同的标记物分别连接到两个相互作用的蛋白质上，可以通过检测标记物的相互作用来研究蛋白质间的相互作用。

这对于揭示蛋白质相互作用网络和信号传导途径具有重要意义。

3. 蛋白质表达水平蛋白质标记技术可以用于检测和定量目标蛋白质的表达水平。