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附件3化妆品中2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐等15种染发剂的检测方法（征求意见稿）第一法高效液相色谱法1范围32，6-二羟乙基氨甲苯 2.5×10-3107.0×10-328 43-硝基对羟乙氨基酚 4.0×10-316 1.0×10-240 52-甲基-5-羟乙氨基苯酚7.0×10-328 2.0×10-280 6羟乙基-3，4-亚甲二氧基苯胺盐酸盐 2.0×10-280 5.0×10-2200 74-羟丙氨基-3-硝基苯酚 5.0×10-320 1.3×10-252 8HC黄4号 1.0×10-240 2.5×10-2100 95-氨基-6-氯-邻甲酚8.0×10-332 2.0×10-280序号组分名称检出限（µg）检出浓度（µg/g）定量下限（µg）最低定量浓度（µg/g）10HC黄2号 3.0×10-312 1.0×10-240 115-氨基-4-氯-邻甲酚 5.0×10-320 1.5×10-260 12羟乙基-2-硝基对甲苯胺 2.5×10-3107.5×10-330 13分散紫1号 4.0×10-316 1.0×10-240 14HC橙1号 5.0×10-320 1.5×10-260-3-2差，可分别采取如下措施：2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐直接用2g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容；分散紫1号、HC黄4号、HC黄2号和HC红1号需将称样量减少，再用无水乙醇溶解定容，配成浓度约为2g/L的各染料标准储备溶液。
储备溶液保存于0℃—4℃冰箱中，应于2日内使用。
4仪器和设备4.1高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。
T logy科技食品科技1 高效液相色谱法理论概述和工作原理高效液相色谱法（HPLC）属于色谱分析法重要的组成部分。
高效液相色谱法的优点包括检测时间短、灵敏效果好、分离效能高等等。
主要包括柱色谱、纸色谱和薄层色谱。
高效液相色谱分离是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程，借助溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
以液体为流动相，在高压输液系统的作用下，对混合溶剂或者单一溶剂进行成分分离，之后再对其展开检测，这样便可以完成试样分析，其具体原理如图1所示。
贮液瓶高压泵进样器记录仪检测器废液信号分离柱图1 HPLC的工作原理2 高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱仪的构造比较复杂，其部件包括检测器、高压输液泵等。
2.1 高压输液泵高压输液泵要耐高压和耐化学腐蚀，恒流泵以及恒压泵决定了高压输液泵具有耐化学腐蚀以及耐高压的特性。
一般泵体材料为耐酸不锈钢材料，其材料质量相对较好。
高压输液泵可以在40～50 MPa/cm2压力下工作，且连续工作时间通常不会低于9 h，与此同时高压输液泵还可以保证输出流量稳定。
2.2 色谱柱色谱柱的主要部件为柱管与固定相。
柱壁材料一般选择不锈钢、铜等材料，分离效果和色谱柱的长度有直接关系，色谱柱长度通常在5～30 cm范围内，其内径通常为5 μm～5 mm。
2.3 检测器检测器的作用是可以对完成色谱柱分离后的组分随洗脱液流出的浓度变化进行检测，并由相关设备绘制出色谱图。
由此可见检测器需要具备灵敏性高、使用范围广的特性。
目前可供选择的检测器有很多，但是不同检测器所检测的物质也是不同的，这些检测器都是具有针对性的，因此检测不同物质要挑选不同的检测器。
3 高效液相色谱在食品检测中的应用3.1 营养成分的检测对于糖类来说其检测不能根据一般检测来操作，因为糖类的还原性较强。
维生素是人体必需的营养物质，先提取再展开检测的操作存在一定的弊端，会造成维生素结构的变化，从而影响检测结果。
附件15：化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36（CI 13065）、颜料橙5（CI 12075）、颜料红53:1（CI 15585:1）、苏丹红Ⅱ（CI 12140）和苏丹红Ⅳ（CI 26105）的高效液相色谱测定方法。
本方法适用于唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的测定。
2 方法提要样品经溶剂提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外-可见光谱图定性，峰面积外标法定量。
必要时，采用液相色谱-质谱联用法进行确证。
本方法对酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度见表1。
表1 5种着色剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 乙腈，色谱纯。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 四氢呋喃，色谱纯。
3.4 二甲基亚砜。
3.5 乙醇，色谱纯。
3.6 四丁基氢氧化铵，浓度为55%。
3.7 柠檬酸。
3.8 氨水，浓度为25～28%。
3.9 酸性黄36，纯度≥99%。
3.10 苏丹红Ⅳ，纯度≥94%。
3.11 苏丹红Ⅱ，纯度≥90%。
3.12 颜料橙5，纯度≥97%。
3.13 颜料红53:1，纯度≥95%。
3.14 酸性黄36标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取酸性黄36（3.9）对照品50 mg（精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
3.15 苏丹红Ⅳ标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取苏丹红Ⅳ（3.10）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（体积比1:9）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
山东农业科学 2010,1:90～93Shandong Agricultural Sciences收稿日期:2009-10-30作者简介:胡 梅(1968-),女,高级工程师,理学学士,主要从事食品安全检测与研究。
E -mail:sdzjyhm@1631com 3通讯作者:王 骏(1972-),男,高级工程师,主要从事食品中化学污染物的检测技术研究。
E -mail:sdzjy wj@1631com超高效液相色谱-质谱/质谱测定禽蛋制品中三聚氰胺胡 梅,王 骏3,张 卉,张喜琦,祝建华(山东省产品质量监督检验研究院/国家加工食品质量监督检验中心,山东济南 250100) 摘 要:建立了超高效液相色谱-质谱/质谱测定禽蛋制品中三聚氰胺的方法。
用2%乙酸溶液提取试样中的三聚氰胺,提取液经乙腈稀释后,以超高效液相色谱-质谱/质谱法测定。
三聚氰胺的最低检测限为0105mg/kg,加标回收率为8914%～9813%,相对标准偏差为3135%～6137%。
关键词:超高效液相色谱-质谱/质谱;禽蛋制品;三聚氰胺中图分类号:O65717+2 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2010)01-0090-04D eterm i n a tion of M elam i n e i n Poultry Egg Products by UPLC -M S /M SHU Mei,WANG Jun 3,ZHANG Hui,Z HANG Xi -qi,Z HU J ian -hua(Shandong Supervision &Inspection Institute for Product Q uality /N ational Centre for Q uality Supervision and Testing of Processed Food,J inan 250100,China )Abstract A method for deter m inati on of mela m ine in poultry egg p r oducts by UP LC -MS/MS was es 2tablished .The sa mp le was extracted with 2%acetic acid s oluti on,diluted with acet onitrile,and then detected by UP LC -MS/MS .The detectable li m it of mela m ine was 0.05mg/kg .The recovery of mela m ine was89.4%～98.3%with the RS D of 3.35%～6.37%.Key words UP LC -MS/MS;Poultry egg p r oducts;Mela m ine 禽蛋制品包括咸鸭蛋、松花蛋等,作为我国传统食品,由于味道鲜美、营养丰富,长期以来受到广大群众的喜爱。
饲料中三聚氰胺的检测方法三聚氰胺(melamine)简称三胺，学名三氨三嗪，是一种重要的氮杂环有机化工原料，在饲料工业中作为粘合剂使用。
目前国际上通常采用凯氏定氮法测定饲料中粗蛋白质的含量。
即求出氮的含量，再乘以一定的换算系数(通常用6．25系数计算)得出蛋白质含量。
由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，每个三聚氰胺分子中都含有6个氮原子，而在原料的粗蛋白检测过程中，用浓硫酸消化过程可以将三聚氰胺分解掉．但在最后的计算中，三聚氰胺中的氮原子即可提高粗蛋白的比率，造成蛋白含量虚假增高。
因此只要在饲料中添加一些含氮量高的化学物质，就可在检测中造成蛋白质含量达标的假象。
饲料中非法添加化工原料．可以提高蛋白质检测数值，而用全氮测定法测饲料和食品中的蛋白质含量时根本不能区分这种伪蛋白氮。
在饲料中少量添加三聚氰胺即可大大提高蛋白含量。
l三聚氰胺的性质1．1物理性质分子式C3N6H6或C3N3(NH2)3，分子量126．12,为纯白色单斜棱晶体，无味，低毒，密度1．573 g ／cm3〔16℃〕。
常压熔点354℃(分解)；快速加热升华，升华温度300℃。
溶于热水，微溶于冷水，极易溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。
在一般情况下较稳定，但在高温下可能会分解放出氰化物。
1．2化学性质三聚氰胺的水溶液呈弱碱性(pKb=8)，与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。
在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性环境中(pH值5．5-6．5)与羟甲基的衍生物进展缩聚反响而生成树脂产物。
在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。
三聚氰胺与醛类反响生成加成化合物，其中三聚氰胺与甲醛水溶液的反响是最重要的反响。
2饲料中三聚氰胺的检测方法2．1试剂盒检测法fELISAl利用萃取液通过均质与震荡的方式提取样品中的三聚氰胺进展免疫测定。
奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV 和HPLC-MS/MS 法）北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。
双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY 或DCD 。
虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
本文采用 Cleanert ® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil ® HILIC 液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS 快速前处理方法和LC-UV 以及LC-MS/MS 检测方法。
1 实验部分1.1 仪器、试剂与材料高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。
双氰胺标准品（CAS ： 461-58-5；FW=84.08），Cleanert ® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil ® HILIC 液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。
图1双氰胺分子式1.2 实验步骤提取、净化：称取1g 试样于50mL 具塞离心管中，加入2mL 水溶解后，加乙腈定容至10mL ，超声10min ，8000r/min 离心5min ，取2mL 上清液加入Cleanert ® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料，涡旋0.5min ，8000r/min 离心5min ，取上清液过0.22µm 滤膜，待测。
1.3 实验条件1.3.1高效液相色谱法（HPLC 法）：色谱柱：Venusil ® HILIC （5μm ，100Å，4.6*250mm ）； 流动相： 10mmol/L 乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10: 90；波长：220nm ；进样量：10µl ；柱温：30℃；流速：1mL/min 。
1.3.2 LC-MS/MS 法： （1）色谱条件：色谱柱：Venusil ® HILIC （ 5μm ，100Å，2.1*150mm ）；流动相： 0.5mmol/L 乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；进样量：10µL ；柱温：30℃；流速：0.2 mL/min 。
附件10化妆品中乙醇胺等5种有机胺的检测方法1 适用范围本方法规定了测定化妆品中乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲胺、二乙胺的离子色谱法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲胺、二乙胺的含量测定。
2 方法提要化妆品中乙醇胺等5种有机胺用流动相提取后，经含羧酸功能基的阳离子交换柱分离，电导检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。
对于阳性结果，可用气相色谱-质谱进行进一步确证。
本方法中乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲胺、二乙胺的检出限、定量下限及取0.5g样品时的检出浓度和最低定量浓度见表1。
表1 5种有机胺的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度物质名称乙醇胺二乙醇胺三乙醇胺二甲胺二乙胺检出限（ng） 4.5 4.5 9 4.5 4.5定量下限（ng）15 15 30 15 15检出浓度（μg/g）18 18 36 18 18最低定量浓度（μg/g）60 60 120 60 603 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1 甲烷磺酸，优级纯。
3.2 正已烷。
3.3 乙腈，优级纯。
3.4 无水乙醇，优级纯。
3.5 无水硫酸钠。
3.6 乙醇胺，优级纯，纯度≥99%。
3.7 二乙醇胺，优级纯，纯度≥99%。
3.8 三乙胺，优级纯，纯度≥99%。
3.9 二甲胺水溶液，纯度33%。
3.10 二乙胺，优级纯，纯度≥99%。
3.11 流动相：取0.16mL甲烷磺酸、50mL乙腈，加水稀释至1L，过滤后备用。
3.12 混合标准溶液：分别称取0.1g（精确到0.0001g）乙醇胺、二乙醇胺、二乙胺，及0.2g（精确到0.0001g）三乙醇胺、0.3g（精确到0.0001g）二甲胺水溶液于100mL容量瓶中，用乙腈定容，配成如表2所示浓度的混合标准储备溶液。
吸取5.00mL储备溶液于100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，得到50mg/L乙醇胺、二乙醇胺、二甲胺、二乙胺和100mg/L三乙醇胺混合标准使用溶液，再用流动相稀释混合标准使用溶液配成系列浓度混合标准工作溶液。
