中药柴胡抗细菌内毒素的实验研究

细菌内毒素检查法在中药注射液中的应用与研究进展目的：介绍中药注射液细菌内毒素检查法的应用和研究进展。

方法：查阅相关文献，对细菌内毒素检查法以及中药注射液应用细菌内毒素检查药品质量的研究情况进行综合分析和归纳总结。

结果：细菌内毒素检查法在中药注射液中的研究范围很广，成果很多，但是同一品种未形成统一的标准。

结论：须加强中药注射液细菌内毒素检查法研究，形成统一的国家标准。

标签：细菌内毒素鲎试验法中药注射液细菌内毒素检查法又称鲎试验法（BET），是利用鲎血细胞的溶解物与微量细菌（主要是革兰氏阴性菌G—）的内毒素反应，从而检出被检测物质中内毒素的一种生物体外检测技术。

该法操作简便与快捷、经济性好、灵敏度高、特异性强、重现性好，在化学药品的检测标准中普遍取代了传统的热原检查法。

在现行的《中国药典》2010年版二部中收载了细菌内毒素检查的品种424个[1]。

1 细菌内毒素检查法的国内发展简述1956年，美国人Bang发现美洲鲎血液遇革兰氏阴性菌时会产生凝胶。

其后，Levin和Bang研究发现微量革兰氏阴性菌产生的内毒素也可以引起凝胶反应，从而在1968年正式建立以鲎血液的提取物为检测试剂的鲎试验法[2]。

1973年，美国食品药品管理局认可了鲎试剂，并在1980年首次正式收载于美国药典，作为法定的药品检查方法。

随后，英国、德国、意大利和日本等国相继收载了此法。

与国外相比，我国的细菌内毒素检查法起步晚，在这方面的研究相对落后一些。

从发展的过程来看，大概可以分为三个阶段。

第一阶段，萌芽期：1983年，我国卫生部首次授权中国药品生物制品检定所组织全国范围的大输液及放射性药品的鲎试验检查方法[3]。

随后，药学工作者加强了对细菌内毒素的研究，主要涉及细菌内毒素检查法的介绍以及方法的研究。

直到1995年，《中国药典》正式收载鲎试验法。

第二阶段，发展期：成为法定的检查方法后，很多药品建立了细菌内毒素检查法，但是基本上都是凝胶法，而动态浊度法等定量的检查方法很少。

柴胡的研究现状标签：柴胡；研究现状柴胡属（bupleurum L.）植物是伞形科（umbelliferae）植物中的大属之一，据报道全世界有柴胡属植物约200种，我国已报道有42种，17种变种及7种变型[1]。

我国药典规定柴胡（bupleurum chinese DC.）或狭叶柴胡（b.scorzonerifolium willd.）为正品供药用，二者一般习称为“北柴胡”及“南柴胡”。

我国柴胡资源丰富，北柴胡主产于辽宁、甘肃、河北、山东等地，南柴胡主要产于湖北、四川、江苏、安徽等地。

柴胡性味苦，微寒，归肝胆实经，有躯散退热、疏肝解郁、升阳举气之功效，用于治疗寒热往来，胸满肋痛，口苦耳聋，头痛目眩，疟疾脱肛，月经不调，子宫下垂等[2]。

柴胡的化学成分较复杂，其主要有效成分为柴胡皂苷和挥发油，此外还含有黄酮、多元醇、脂肪酸、多糖等成分。

20世纪80年代以来国内外许多学者对柴胡的提取物或主要化学部位进行了较为深入的研究，尤其以柴胡皂苷为主。

近代药理研究表明柴胡不仅具有镇痛、解热、镇咳、抗炎、抗病原体、抗溃疡等作用，还具有保肝、调节免疫的功能，尤其是对心血管系统也有显著作用。

随着现代分离、分析手段的广泛使用，对柴胡化学成分及其药理作用的研究取得了极大的进展。

现将近期对柴胡的化学成分、药理作用等研究概况做一综述。

1 柴胡的化学成分研究柴胡根中主要成分为柴胡皂苷，其次含有植物甾醇，侧金盏花醇，以及少量挥发油、多糖；地上部分主要含黄酮类、少量皂苷类、木脂素类、香豆素类等成分。

1.1 黄酮类柴胡属植物的黄酮类成分主要为黄酮醇类，又分为山奈酚(kaempferol)、槲皮素(quercetin)、异鼠李素(isorhamnetin)3个主要苷元。

1.2 皂苷类迄今为止，对柴胡皂苷的研究较为深入，从柴胡属植物已分离出90多种皂苷类成分，共研究了该属植物20多种柴胡。

这些柴胡成分有a、c、d、b1、b2、b3、b4等，其中皂苷a、d的生物活性最强。

中国药典细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法中，按以下步骤进行实验。

首先，制备试样溶液。

将待测样品溶解在合适的溶剂中，并通过过滤将溶液过滤至少两次以去除杂质。

然后，制备标准溶液。

将内毒素标准品按照指定浓度配制成溶液。

接下来，准备试管。

将标准溶液和试样溶液分别装入两个试管中，并加入适量的无菌生理盐水作为空白对照。

然后，进行混合。

轻轻旋转试管混合样品，确保溶液均匀混合。

接着，培养细菌。

将特定的细菌株接种在培养基中，分别加入试管中的样品溶液，并在适当条件下进行培养。

培养结束后，观察结果。

通过观察培养基的变化，比较试管中的样品溶液和空白对照的差异，判断样品中是否存在细菌内毒素。

最后，记录结果。

根据观察结果，记录样品的检验结果，并进行数据分析。

中药柴胡体外抑菌作用研究进展【摘要】中药材柴胡为多年生草本植物，入药部位为根，具有和解表里、疏肝、升阳的功效，为中医解表泄热、疏肝解郁和升举阳气之要药。

常用于感冒发热、胸胁胀痛、月经不调、子宫脱垂、脱肛等症的治疗，为我国传统的中药材。

柴胡具有多种活性成分及较强的药理作用，本文将近年来对柴胡的抑菌作用研究进展加以阐述，以期更好的应用于临床实践。

【关键词】柴胡；抑菌作用；效果柴胡始载于《神农本草经》，列为上品，《伤寒论》、《千金翼方》、《经史证类备急本草》、《本草求真》等历代医家名著中均有详细记载[1]。

原名为茈胡，历代本草对其名称也各不相同，别名有山菜、茹草（《吴普本草》）、柴草（《本草品汇精要》）、竹柴胡、金柴胡、飘带草（《滇南本草》）等。

2015版《中国药典》收载柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC．或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd．的干燥根。

按性状不同，前者习称为“北柴胡”，又名硬柴胡，主产于河北、河南、辽宁、湖北、陕西等省；狭叶柴胡习称为“南柴胡”，又名软柴胡、香柴胡，主产于湖北、四川、安徽、黑龙江、吉林等省。

春、秋二季采挖，除去茎叶和泥沙，干燥。

生用、酒炒或醋炒。

1药理作用及化学成分研究《神农本草经》记载柴胡“味苦，平”，《本草原始》[2]载“柴胡气味俱轻，阳也，升也”，《得配本草》[3]载“苦，微辛，微寒”。

现代研究认为，柴胡味苦、辛、性微寒，主要归心包络、肝、三焦、胆经，具有疏散退热、疏肝解郁、升阳举气的功效等作用。

主要用于治疗感冒、发热、寒热往来、胸胁苦满等症；现代药理实验证明有解热、抗炎、镇静、保肝、降低血压、减缓心率等多种生物活性。

柴胡的药用部位为根，主要有效成分为柴胡皂苷和挥发油，还含有芸香甙、脂肪油（为油酸、亚麻仁油酸、棕榈酸、硬脂酸等的甘油酯）、a-菠菜甾醇、葡萄糖等。

柴胡皂苷有抗炎、抗实验性肝损伤、调节内分泌和免疫系统的功能，临床已用于慢性病毒性肝炎的治疗。

柴胡药理学研究进展摘要：综述了柴胡解热,抗病毒4抗细菌内毒素、抗炎、降脂、促酶分泌、保肝、调节免疫、抗肿瘤和镇静等几方面的药理作用。

关键字：柴胡药理学研究进展柴胡始载于《神农本草经》，列为上品，《伤寒论》、《千金翼方》、《经史证类备急本草》、《和剂局方》、《本草求真》等历代医家名著中均有详细记载[1]。

柴胡具有抗炎、保肝、解热、镇痛等功效，临床用于治少阳症，肝气郁结所致头痛，月经不调，痛经；气虚下陷证；感冒，胃及十二指肠溃疡，胆结石，痢疾，胆汁返流性胃炎心[2]。

柴胡根中主要成分为柴胡皂苷，其次含有植物甾醇、侧金盏花醇，以及少量挥发油、多糖；地上部分主要含黄酮类、少量皂苷类、木脂素类、香豆素类成分[3]。

研究发现柴胡皂苷具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、调节内分泌及免疫系统等作用。

1.解热柴胡味苦而微辛，有和解退热的功效。

《本草纲目》中称柴胡是“引清气退热必用之药”。

现代药理学证明大剂量柴胡煎剂对人工发热的家兔有解热作用[4]，其有效成分为柴胡挥发油。

柴胡对外感，内伤所致高热均可奏效，且退热平稳，无反跳现象，也可安全用于儿童及孕妇[5],这是其他退热药无法比拟的。

故而现在临床上常用柴胡制成的柴胡注射剂治疗各种热症，如感冒发热，癌症发热等。

2.抗惊厥、抗癫痫作用柴胡皂苷150mg/kg与挥发油300mg/kg合理配伍后有很强的抗惊厥作用[6]，柴胡皂苷还可以延长猫的睡眠时间[7]，故柴胡治疗神经精神科疾病有较好的疗效，如惊恐症，神经分裂症等[8]，还有癫痫这一神经科常见疾病。

柴胡作用于毛果芸香碱致痫的家兔和大鼠，可使癫痫发作次数和发作持续时间显著减少，发作间隔时间延长，研究结果显示柴胡对癫痫模型大脑皮质放电及中枢神经系统的突触传递过程有明显的抑XXX用[9]可见柴胡对于癫痫病有显著的抑XXX用。

黄运生等将8周龄健康SD大鼠，随机分为6组，正常对照组(A)、癫痫模型组(B)、拉莫三嗪组(C)、柴胡皂苷小剂量组(D)、柴胡皂苷中剂量组(E)和柴胡皂苷大剂量组(F)每组10只，后5组动物用青霉素致癫痫，在成功造模及用药物治疗后，分别检测脑电图和观察癫痫性发作行为，结果显示：A组脑电图正常，B组脑电图显示明显癫痫放电，C组和F组癫痫大鼠脑电图恢复正常，D组大鼠脑电图有少量癫痫放电，E组大鼠脑电图基本恢复正常，C、D、E、F组与B组脑电图相比较有显著性差异(P<0．001)，因此证明柴胡皂苷对癫痫大鼠脑电图及癫痫性发作有明显改善作用[10]。

第一作者简介：王奕匀，药师；研究方向：药理学。

Ｔｅｌ：０９３１ ７８２２９９０；１５１１７２８９６７２；Ｅ ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙｉｙｕｎ０８８＠１２６ ｃｏｍ 通讯作者简介：马迎春，副主任药师；研究方向：药理学及安全性评价。

Ｔｅｌ：０９３１ ７８２２９９０；１３９１９７６８１６３；Ｅ ｍａｉｌ：１４２５２６４９７５＠ｑｑ ｃｏｍ红花、柴胡注射液的细菌内毒素检查研究王奕匀，马迎春，吕栋，贺军权（甘肃省药品检验研究院药品化妆品安全评价中心，兰州７３００７０）摘要　目的：探索红花、柴胡注射液进行细菌内毒素检查的可行性并建立方法。

方法：依据《中国药典》２０１５年版四部通则中的细菌内毒素检查法进行试验，并将结果与家兔法进行比较。

结果：红花注射液稀释至３０倍（细菌内毒素限值为１５ＥＵ·ｍＬ－１），柴胡注射液稀释至２００倍（细菌内毒素限值为７５ＥＵ·ｍＬ－１）进行细菌内毒素检查是可行的。

结论：红花、柴胡注射液均可用细菌内毒素检查法进行检验。

关键词：红花注射液；柴胡注射液；细菌内毒素；干扰试验；家兔法中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２０）－４－０３５５－５ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２０ ０４ ０１４ＩｎｖｅｓｔｉｇａｏｔｉｏｎｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｆｏｒＳａｆｆｌｏｗｅｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄＢｕｐｌｅｕｒｕｍＩｎｊｅｃｔｉｏｎＷＡＮＧＹｉｙｕｎ，ＭＡＹｉｎｇｃｈｕｎ，Ｌ Ｄｏｎｇ，ＨＥＪｕｎｑｕａｎ（ＧａｎｓｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，ＤｒｕｇａｎｄＣｏｓｍｅｔｉｃｓＳａｆｅｔｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈａｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｏｆＳａｆｆｌｏｗｅｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄＢｕｐｌｅｕｒｕｍＩｎｊｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｓｐｅｒｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅ ｉａ２０１５ＶｏｌｕｍｅⅣ Ｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｐｙｒｏｇｅｎｒａｂｂｉｔｔｅｓｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｅｌｉｍｉｎａｔｅｄｗｈｅｎＳａｆｆｌｏｗｅｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓｄｉｌｕｔｅｄ３０ｔｉｍｅｓａｎｄＢｕｐｌｅｕｒｕｍＩｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓｄｉｌｕｔｅｄ２００ｔｉｍｅｓ ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＴＡＬｗａｓ０ １２５ＥＵ·ｍＬ－１ａｎｄ０ ２５ＥＵ·ｍＬ－１ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｆｏｒＳａｆｆｌｏｗｅｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄＢｕｐｌｅｕｒｕｍＩｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＳａｆｆｌｏｗｅｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎ；ＢｕｐｌｅｕｒｕｍＩｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ；ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｓ；ｐｙｒｏｇｅｎｒａｂｂｉｔｍｅｔｈｏｄ 红花注射液具有活血化瘀的作用，用于治疗闭塞性脑血管疾病，冠心病，脉管炎。

NEW柴胡有效成分研究及注射液研制柴胡有效成分研究及注射液研制班级：药剂二班姓名：刘佳学号：1046030202一、柴胡药理研究1.对中枢神经系统的作用：1.1 抗惊厥作用：小鼠（10只）灌胃柴胡煎剂20g（相当生药）/kg，l小时后皮下注射不同剂量的咖啡因，与对照组相比，15分钟内各组发生惊厥的动物数，求出用药组与对照组的半数有效量分别为350（385.O-318.2）mg/kg和250（302.5-206.6）mg/kg，表明柴胡煎剂对小鼠咖啡因惊厥有对抗作用。

1.2 解热镇痛作用：给大鼠（每组6只）腹腔注射北柴胡油300mg/kg（1/4半数致死量），北柴胡总皂甙380和635mg/kg（1/5和1/3半数致死量）。

结果表明，在注射酵母后5-8小时内均有明显的解热作用。

采用电击鼠尾法，北柴胡总皂甙478mg/kg（1/4半数致死量）有明显的镇痛作用。

小鼠灌胃柴胡煎剂10g（相当生药）/kg亦具有镇痛作用，其镇痛作用可破阿托品灌胃25mg/kg或纳络酮皮下注射0.26mg/kg部分拮抗。

1.3 镇静作用：柴胡制剂和柴胡总皂甙均有明显镇静作用，小鼠口服粗柴胡皂甙200-800mg/kg即可出现镇静作用。

在小鼠攀登试验中，粗柴胡皂甙有与眠尔通相似的镇静作用，口服的运动半数抑制剂量（CD50）为347mg/kg。

粗皂甙对大鼠的条件性回避、逃避反应均有明显的抑制。

小鼠口服柴胡总皂甙500mg/kg 能延长环己巴比妥钠的睡眠时间。

1.4 抗炎作用：大鼠肌肉注射50mg/kg、25mg/kg2%柴胡总皂甙水溶液，能明显抑制由右旋糖酐（6%溶液0.1ml/只）引起的足浮肿，抑制作用与剂量相关，大鼠去两侧肾上腺后抑制作用明显减弱。

小鼠腹腔注射l00mg/kg总皂甙的2%水溶液和0.6%醋酸0.2ml/只，对醋酸引起的小鼠腹腔液的渗出有明显的抑制作用。

柴胡总皂甙和挥发油腹腔注射对角叉菜胶所致大鼠足肿均有明显的抑制作用。

中药注射剂的细菌内毒素检查研究现状新会中医院张健民蒋三员细菌内毒素检查法是应用鲎试剂检测内毒素的方法，具有灵敏度高，方法简便等特点，越来越受到人们的重视。

我国1991年就收入卫生部部颁标准，1995年版《中国药典》正式收载该法。

但主要是用于一些西药的内毒素检查。

近年来也有学者进行了中药注射剂的应用研究，取得了一定的进展，为了了解国内中药注射剂的细菌内毒素检测的研究现状，笔者查阅了国内公开刊物发表的论文，对有关中药注射剂进行细菌内毒素检查的研究现状作一综述，以供参考。

1. 板蓝根注射液宋田政等研究结果L＝5Eu/ml，用0.25Eu/ml 的鲎试剂，MVD＝20（倍）。

样品为1：2、1：4稀释倍数，λ＞2.0Eu/ml,有抑制作用。

按1：8、1：16倍数稀释后对细菌内毒素试验无明显干扰。

取板蓝根注射液按家兔法规定检查10批均为阴性，细菌内毒素检查9批呈阴性，1批呈阳性，呈阳性的检品用家兔法检测家兔升温总和达1.38℃，接近不合格边缘。

实验结果认为细菌内毒素法可用于板蓝根注射液的热原检测试验。

2. 刺五加注射液廖建萍等研究结果L＝0.714Eu/ml,用0.25Eu/ml的鲎试剂，MVD＝2.8倍。

刺五加注射液2倍稀释液对细菌内毒素试验无干扰。

将3批热原检查合格的刺五加注射液用BET 水稀释2倍，用λ＝0.25Eu/ml的TAL，按细菌内毒素检查进行检查，结果3个批号均符合规定，与家兔法结果一致。

3.丹参粉针剂冯文军等研究结果细菌内毒素理论限值（L）＝10Eu/ml，用0.125Eu/ml鲎试剂对4批丹参样品依法作内毒素检查，并增设阳性对照管，并用家兔法做热原检查，检验结果全部合格。

4.参附粉针剂刘相辉等研究结果细菌内毒素理论限值（L）＝0.83Eu/ml,用0.25Eu/ml的鲎试剂MVD＝3.3（倍），取三批样品稀释成0.3mg/ml,1mg/ml两个浓度，按照《中国药典》规定的干扰试验方法进行实验，结果两个浓度对鲎试验均不存在干扰。

柴胡的化学成分及药理作用研究摘要柴胡来源于伞形科（Umbelliferae）柴胡属（BupleurumL.）植物。

其中主要包括了多糖、发挥油、柴胡皂苷一些化学成分。

国内外的文献研究发现，柴胡对解决抗病毒、抗细菌内毒素、降脂、抗炎等方面有很好的疗效，这是近10年发现的。

柴胡的主要毒性成分是柴胡皂苷和柴胡的挥发油，这些毒性把器官作为主要肝脏，与多种途径的氧化损伤有关的是肝损伤机制。

对柴胡毒性有影响的问题是在临床实验中发现的，这都是根据不同的品种与方法进行的，柴胡的皂苷和含的挥发油量也影响着其毒性的大小。

关键词柴胡化学成分药理作用现代研究毒理作用ABSTRACT Root from Umbelliferae BupleurumL plants.Mainly contain volatile oil,saikoside and polysaccharide.Through nearly 10 years of domestic and foreign literature research found that toot on antipyretic、antiviral、anti bacterial endotoxin、anti-inflammatory、reducing blood lipid、liver、regulating immune and antitumor analgesic and so on several aspects has pharmacological effect.At the same time,the essential oil is zhe main component of the toxicity of the volatile oil from zhe root and zhe root of the Chinese.The toxicity target organ is mainly liver.The mechanism of liver injury is related to oxidative stress injury in many ways.Different varieties,different processing methods,different extraction methods and so on the toxicity of the root of the root of the root is in the process of clinical use gradually found,the size of the toxicity and the content of volatile oil.KEY WORDS Root Chemical composition Pharmacological action Modern research toxicological effects前言形状是伞状且多年的草本植物的是柴胡，它的根晒干后可以入药，这是在《神农本草经》中记载的。