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烟草重要基因篇：3. 烟草烟碱合成代谢相关基因作者：张洪博来源：《中国烟草科学》2014年第03期烟碱（nicotine），即尼古丁，是烟草生物碱（包括烟碱、降烟碱、新烟草碱和假木贼碱等）的一种，约占烟草生物碱总含量的90%～95%[1]。
烟叶烟碱含量占叶片干重的0.6%～3.0%，是烟草和卷烟质量的一项重要指标。
对烟碱代谢的分子遗传学研究可以揭示烟碱代谢累积的分子机制，并为烟碱含量及烟碱成分调节相关的育种工作提供理论基础。
近年来，有关烟碱合成、转运及转化的一些重要基因已被陆续克隆，对烟碱合成代谢机理研究和烟草遗传育种工作产生了重要推动作用。
1 烟碱合成相关基因烟碱分子由一个吡咯烷环和一个吡啶环构成，在烟草根部合成，通过木质部向地上部运输，在烟草植株的叶片中含量最高，茎部含量最低[2-3]。
烟碱吡咯烷环由氮代谢中形成的腐胺合成。
腐胺可通过精氨酸脱羧酶（ADC，arginine decarboxylase）催化精氨酸脱羧形成，或由鸟氨酸脱羧酶（ODC，ornithine decarboxylase）催化鸟氨酸脱羧形成[4-6]。
腐胺在腐胺N-甲基转移酶（PMT，putrescine-N-methyltransferase）作用下获得由S-腺苷蛋氨酸（SAM，S-adenosyl-L-methionine）提供的甲基形成 N-甲基腐胺[7-9]，这是一个依赖S-腺苷蛋氨酸合成酶（SAMS，S-adenosylmethionine synthase）活性的反应。
N-甲基腐胺在N-甲基腐胺氧化酶（MPO，N-methylputrescine oxidase）催化下形成4-甲氨基丁醚[10]，并通过自身环化形成N-甲基-△1-吡咯啉阳离子，随后与提供吡啶环部分的烟酸衍生物发生缩合反应形成烟碱[11]。
烟碱吡啶环部分由烟酸提供，其前体是由天冬氨酸合成的喹啉酸[12]。
喹啉酸在喹啉酸磷酸核糖转移酶（QPRT，quinolinate phosphoribosyltransferase）催化下形成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），然后经由吡啶核苷酸循环途径生成烟酸[7，13]。
DAPI染⾊液说明书DAPI染⾊液产品简介：DAPI染⾊液(DAPI Staining Solution)是经过精⼼优化⼏乎适⽤于所有常见细胞和组织细胞核染⾊的染⾊液。
DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分⼦式为C16H15N5 ·2HCl ，分⼦量为350.25 ，CAS Number 28718-90-3。
DAPI是⼀种可以穿透细胞膜的蓝⾊荧光染料。
和双链DNA结合后可以产⽣⽐DAPI⾃⾝强20多倍的荧光。
和EB(ethidium bromide)相⽐，对双链DNA的染⾊灵敏度要⾼很多倍。
DAPI染⾊常⽤于细胞凋亡检测，染⾊后⽤荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI也常⽤于普通的细胞核染⾊以及某些特定情况下的双链DNA染⾊。
DAPI的最⼤激发波长为340nm，最⼤发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最⼤激发波长为364nm，最⼤发射波长为454nm。
本DAPI染⾊液可以直接⽤于固定细胞或组织的细胞核染⾊。
保存条件：-20℃避光保存，⼀年有效。
注意事项：本DAPI 染⾊液的浓度经过碧云天的优化，确保可以满⾜各种常规染⾊的需要。
如需使⽤特定浓度的DAPI，请选购碧云天的DAPI(C1002)。
荧光染料都存在淬灭的问题，建议染⾊后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使⽤抗荧光淬灭封⽚液。
抗荧光淬灭封⽚液(P0126)可以向碧云天订购。
DAPI对⼈体有⼀定刺激性，请注意适当防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴⼀次性⼿套操作。
使⽤说明：1.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。
随后如果需要进⾏免疫荧光染⾊，则先进⾏免疫荧光染⾊，染⾊完毕后再按后续步骤进⾏DAPI染⾊。
如果不需要进⾏其它染⾊，则直接进⾏后续的DAPI染⾊。
2.对于贴壁细胞或组织切⽚，加⼊少量DAPI染⾊液，覆盖住样品即可。
小麦花培品质育种各世代的品质参数分析张立平,苏 青,刘建平,单福华,赵昌平(北京市农林科学院北京杂交小麦工程技术研究中心,北京 100097)摘 要:通过对冬小麦花培1代至花培5代的品质测试,研究了花培品质育种的品质测试的世代程序和有效性.结果表明,品质性状在花培早代已趋于稳定,高分子量谷蛋白亚基组成从H 1起就稳定遗传,115对H 1与H 2材料和62对H 2与H 3材料的籽粒蛋白质含量、硬度和沉降值具有高度相关性,且籽粒蛋白质含量和SDS 沉降值H 2与H 3世代间差异不显著.对中选的京单00-594的H 4和H 5世代进一步品质测定结果表明,通过花培早代选出的优质材料是可靠的,其优质性状能稳定遗传.提出了花培品质育种各世代品质测试的程序,证明了花药培养结合早代品质测试,是一条快速、有效的小麦品质育种途径.Clon ing an d character izat ion of a novel bar leygene ,HvO R G 4,in duced by Fus a ri umgra minea r um inf ect ionMENG Xiang 2bing 1,WANG Fu 2xin 1,YANG Dian 2er 1,L I U H ong 2yu 1,L U Wei 2zhong 2,Y U Da 2zha o 3,Theo V an 2Der Lee 4,WANG Bin 13(11Institute of G enetics and Develo pmental Biology ,Chinese Academy of Sciences ,Beijing 100101;21Institute of G enetics and Phys iology ,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences ,Nan jing ,210014;31Instit ute for Plant Protection and Soil Sciences ,Hubei Academy of Agricultural Sciences ,Wuhan ,430064;41Pla nt Research International B 1V 1,Wageningen ,The Net herlands)Abstract :Barley Fusari um head blight (FHB ),caused by species of t he Fus ari u m fungus ,is a devast at ing di sease t hat is reemergi ng worldwide in recent years 1In t his study ,a novel gene ,HvO R G 4,was cloned from barley by usi ng cDNA library and suppression subt ract ive hybridization (SSH )library st rat egies 1The SSH library and cDNA li brary were const ruct ed from t he Chinese barley cultivar Jing02-461(resi st ance to FHB )i nfected by Fusari um graminearum isolate Huanggang -11For t he SSH anal ysis ,more than 120differentially expressed cDNAs were i dentified and sequenced 1One of t hem showed high homology to t he AtOR G 4gene and was used as a probe to screen t he cDNA library of Jing02-4611Si x posi tive clones were identified and one of t hem cont ained a full -lengt h cDNA ,which was named HvOR G 41Sequence analysis showed t hat HvO RG4encoded a deduced basic prot ein of 197amino acids 1Nort hern blot ting analysi s showed t hat HvO R G 4was constit uti vely expressed i n root and st alk ,not in leaf or spike ,and st rongl y induced i n barley spikelet s in response f F 11I y x f O RG f f ,y y f f F B y 1212湖南农业大学学报(自然科学版)2007年8月to in ection wit h gra minearu m isolate Huanggang -1t s homolog and e pression pro ile suggest t hat the Hv 4might unction as a t ranscription actor pla i ng an import ant role in signal t ransduct ion pat hwa or de ense against H in barle。
牦牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶（GGPS）的生物信息学分析张鹏飞;王宁;周蔓;李萍【摘要】GGPS is an important branch point enzyme for terpenoids systhesis, but also it's catalyting enzyme of GGPS.This study select 9 different families of plants, implement a series of detailed analyses to the physicochemical properties of GGPS nucleotide and amino acid sequence,protein structure and function and phylogenetic and so on. The results indicate that full length of DNA sequence from 9 species is in the range from 1 000 bp to 2 000 bp.All the GGPS amino acid sequence dont contain signal peptide and trmenbrance structure;α-helix and random coil are the primary structure of GGPS secondary structure and don't have any β-sheet structure, extension chain and β-corner are scattered throughout the protein.Reasonably prediction based on bioinformatics methods provide important theoretical basis for further research GGPS enzymatic properties.%GGPS是萜类化合物合成的一个重要分支点酶，同时也是合成GGPP 的催化酶。
西那卡塞在慢性肾脏病所致甲状旁腺功能亢进中的临床应用进展肖智;张娜;张敏;周文华【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P168-170)【作者】肖智;张娜;张敏;周文华【作者单位】吉林大学第二医院肾内科，吉林长春 130041;吉林大学第二医院肾内科，吉林长春 130041;吉林大学第二医院肾内科，吉林长春 130041;吉林大学第二医院肾内科，吉林长春 130041【正文语种】中文20年前人们发现了钙敏感受体(CaSR)，在随后的时间里围绕调节CaSR活性的药物有了快速的发展，包括CaSR激动剂和CaSR抑制剂。
CaSR激动剂主要用于治疗原发性和继发性甲状旁腺功能亢进,而CaSR抑制剂的主要用于骨质疏松的治疗。
本文主要介绍CaSR及CaSR的Ⅱ型别构激动剂西那卡塞的临床应用进展，同时对西那卡塞及维生素D及其衍生物的临床应用比较展开讨论。
细胞内的Ca2+在信号传导通路中作为第二信使从细胞外穿过细胞外膜进入细胞内已经众所周知。
随后,人们发现,细胞外Ca2+本身就是一种催化剂或者抑制剂,因为许多组织和细胞都能感知和应答细胞外Ca2+浓度变化，其中就包括内分泌细胞。
对大部分内分泌组织和细胞来说，细胞外Ca2+浓度能够刺激多种激素的分泌，比如胰腺的B细胞和甲状腺的C细胞。
20年前布朗等[1]发现感知细胞外Ca2+浓度的感受器位于细胞膜，并且成功的克隆了这种感受器，称之为CaSR，CaSR是一种G蛋白藕联受体。
CaSR的激活，相对于其它细胞外受体来说，需要的细胞外Ca2+浓度要高的多，当然细胞外Ca2+浓度并不是唯一激活因素，镁、铝、钆等阳离子也能够激活CaSR。
CaSR 对Ca2+浓度的调节主要是通过与一系列G 蛋白偶联而发挥作用[2]，如Gq /11、Gi和G12 /13 。
刺激Gq /11 可激活磷脂酶C (PLC) ，引起肌醇3 磷酸生成增加，进而促使内质网中Ca2+释放，使细胞内Ca2+浓度增加; 刺激Gi可抑制腺苷酸环化酶，减少cAMP的生成; 刺激G12 /13 可生成Ras 相似物A(RhoA) 基因，进而活化磷脂酶D(PLD) 产生磷脂酸以调节下游的信号转导途径。
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装CHEM001 BCA蛋白浓度测定试剂盒102ml包装清单：产品编号产品名称包装CHEM001A BCA试剂A 100mlCHEM001B BCA试剂B 3mlCHEM001C 蛋白标准（2mg/ml） 1.2ml—说明书1份产品简介：增强型BCA蛋白浓度测定试剂(Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。
Viagene的BCA测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。
增强型BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
能够耐受低浓度的EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。
增强型BCA蛋白浓度测定试剂适合用于测定Western Blotting样品，EMSA核提取液的蛋白浓度。
检测灵敏度达到10μg/ml。
按照本说明书操作，每套试剂可进行145次比色杯法测定或500次微板法测定。
比色杯法测定的BCA工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。
使用说明：A.比色杯法测定1、根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积（每个测定需0.7ml工作液），按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。
BCA工作液在室温可稳定24小时。
2、试管编号，按以下操作。
管号S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品xH2O （µl）20 19.5 19 17.5 15 10 0 20样品制备液（µl） 4 4 4 4 4 4 4 －蛋白标准液（µl）0 0.5 1 2.5 5 10 20 －样品体积－－－－－－－ 4反应体积24 24 24 24 24 24 24 24 BCA工作液（ml）0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7蛋白浓度（µg/µl）0 1 2 5 10 20 40 待定注：1）标准曲线一般做4个点加一个空白。
链格孢属真菌(Alternaria)属有丝分裂孢子真菌类群丝孢纲丝孢目，是半知菌暗色丝孢菌中一类非常常见的真菌。
链格孢属真菌是引起植物病害的重要真菌类群之一。
大部分链格孢属真菌寄生于不同种植物，特别是农作物，常引起包括玉米、小麦、马铃薯、苹果和番茄等几十种农作物的病害，而给农业造成重大经济损失。
有些链格孢属真菌是人和动物的条件致病菌，常引起多种疾病。
链格孢属真菌产生许多有毒代谢产物，包括腾毒素(tentoxin) ，链格孢毒素(altertoxins)，细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)，交链孢霉烯(altenuene)和交链孢酚(alternariol)等，其中有些毒素是其作用于植物的主要致病因子，通过毒素的作用不仅使植物产生症状，造成危害，而且人和动物摄入被污染的食品或饲料后可导致慢性或急性中毒。
有些毒素可用作除草剂和杀菌剂等，是有应用潜力的生物资源(Barkai-Golan, 2008)。
腾毒素是由一些链格孢属真菌产生的一个天然环四肽。
这个属的链格孢(A. alternata)，柑桔链格孢(A. citri) ，长柄链格孢(A. longipes) ，苹果链格孢(A. mali) ，葱链格孢(A. porri)和细链格孢(A. tenuis)的一些菌株已被报道产生腾毒素(Meyer, 1971; Liebermann, 1983; Kono, 1986; Suemitsu, 1990)。
从腐烂的西红柿和浓缩苹果汁中都检测到被链格孢属真菌污染而产生的腾毒素(Andersen, 2004; 何强，2010)。
腾毒素的化学结构是[cyclo-(L-MeAla-L-Leu-MePhe*(Z)∆+-Gly)] (Meyer, 1971)。
腾毒素的主要生物活性是选择性抑制一些高等植物叶绿体F1-ATP酶活性而导致植物萎黄病(Steele, 1976)。
其抑制机理是低浓度下抑制叶绿体F1-ATP酶中ATP水解和合成(Steele, 1976)，因此常用于研究F1-ATP酶的反应机制(Pavlova, 2004; Meiss, 2008)。
波赛链霉菌dnrK基因中断突变株代谢产物鉴定余贞;王继栋;李美红;周军;黄隽【摘要】目的鉴定波赛链霉菌HS062(柔红霉素工业菌株)dnr基因中断突变株新次级代谢产物.方法将dnrK基因中插入了阿泊拉霉素抗性基因及“海正”标记片段的中断载体pBSSP-KA导入波赛链霉菌HS062,筛选获得dnrK插入失活的突变株DK55,通过HPLC-MS和NMR对DK55菌株产生的新代谢产物进行结构鉴定.结果 dnrK中断突变株DK55产生了一个新的蒽环类代谢产物,该化合物经结构鉴定为histomodulin,并且其效价远远高于原产物柔红霉素.结论本研究通过基因工程手段获得高产histomodulin菌株,为该化合物的应用研究打下了基础;同时,探讨了工业菌株中dnrK基因敲除后菌株代谢产物变化原因, 为进一步提高柔红霉素及其衍生物的产量提供了新的思路.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2015(040)011【总页数】6页(P813-817,835)【关键词】波赛链霉菌;dnrK;Histomodulin;基因中断【作者】余贞;王继栋;李美红;周军;黄隽【作者单位】浙江海正药业股份有限公司,台州318000;浙江海正药业股份有限公司,台州318000;浙江海正药业股份有限公司,台州318000;浙江海正药业股份有限公司,台州318000;浙江海正药业股份有限公司,台州318000【正文语种】中文【中图分类】R978.1自1963年意大利学者DiMarco等[1]从波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)分离获得柔红霉素(daunorubicin,6)以来，国内外学者对波赛链霉菌进行了深入研究，先后分离出多柔比星(doxorubicin,7)[2]、表柔红霉素(epidaunorubicin)[3]、表阿霉素(epirubicin)[3]、洋红霉素(carminomycin,3)[4]、13-脱氧洋红霉素(13-deoxocarminomycin)[5]等一系列临床应用十分广泛的蒽环类抗肿瘤抗生素。
E-cad在膀胱癌中的表达及意义张东东;梁衍锋;罗振国;朱金铃;欧叶涛;扈清云【摘要】目的:探讨E-cad在膀胱癌中的表达及意义.方法:通过免疫组织化学法和RT-PCR法检测E-cad在膀胱癌和正常膀胱组织中的表达.结果:免疫组织化学方法对正常膀胱组织和膀胱癌组织中的E-cad进行了检测,发现E-cad蛋白在膀胱癌组织中的阳性表达率为32.39%(23/71).正常膀胱黏膜组织表达的阳性率为100%,E-cad在膀胱癌组织中的表达明显低于正常组织.RT-PCR法从基因水平检测正常膀胱组织和膀胱癌组织中E-cad的表达,E-cad在正常膀胱组织所得光密度值为0.940±0.052.膀胱癌组织的光密度值为0.754±0.044,经统计学分析,E-cad在膀胱癌组织中的表达与正常膀胱组织表达相比差异有显著性(t=11.142,P<0.01).结论:无论是在蛋白还是基因水平上,E-cad在膀胱癌组织中的表达低于正常膀胱组织的表达.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2010(033)006【总页数】2页(P10-11)【关键词】E-cad;膀胱癌;组织;免疫组化;RT-PCR【作者】张东东;梁衍锋;罗振国;朱金铃;欧叶涛;扈清云【作者单位】佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯154007;佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯154003;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯154007【正文语种】中文【中图分类】R737.14;Q786膀胱癌是泌尿系统肿瘤中最常见的一种原发于膀胱上皮细胞的恶性肿瘤,是一类恶性程度较高的疾病。
膀胱癌的发病因素包含很多,其中主要是与患者的基因和环境因素有关。
在以往研究中发现,膀胱癌的发生是由膀胱细胞内单个或多个基因的改变决定的,主要是癌基因的激活和抗癌基因的失活,因此,对膀胱的分子遗传学研究不仅有助于肿瘤的诊断及预后判断,而且对肿瘤发病机制及肿瘤基因的研究均有着十分重要的意义。
90×35=31分。
叙述清楚，逻辑性较强。
Sp1基因与白血病的研究进展丘国彬 200671149 06本硕四班指导老师：蒋纪恺摘要转录因子Sp1是存在于哺乳动物细胞中的一种基因调控锌指蛋白，它特异性地结合GC 盒启动因子，选择性地活化从含功能识别位点的基因到mRNA的转录，它的c端含有3个连续的cys2His2型的锌指。
有许多蛋白能与sp1作用，它是通过磷酸化和在单糖乙酰葡萄糖胺的O键的糖基化而被修饰的。
在与白血病的关系的研究中，也有部分成果：1.Sp1能调控PML(promyelocytic leukemia早幼粒细胞白血病基因)的转录，降解PML-RARα蛋白诱导APL 细胞分化；2.Sp1能调控EFN的表达，限制EFN的过量表达而达到治疗白血病的效果；3.Sp1对K562白血病细胞增殖、凋亡及耐药性产生影响。
前言Sp1转录因子的简介：Sp1最早是在类人猿病毒40的启动子中被发现的，它可以和GC盒结合而激活基因转录[1]。
1987年Kadonaga等人从Hela细胞中克隆出了人SP1的部分cDNA序列，在通过聚丙烯酰胺葡聚糖和磷酸纤维素纯化后被命名为Sp1。
随着Sp1的纯化和克隆，证实Sp1只是特异蛋白(specificity protein)家族的一员，它们通过GC盒调节转录[2]。
它的c端含有3个连续的cys2His2型的锌指。
锌指(Zinc finger)，是存在于真核细胞转录因子中的重要的DNA结合蛋白结构域(DNA-binding protein domain)之一。
1.Sp1的结构与功能（Fig1 sp1的结构区。
右侧标明为氨基酸的含量和分子量）Sp1基因编码105kDa的蛋白质，2000年从cDNA序列推算出了人类Sp1氨基酸序列[3]。
Sp1蛋白被分为数个功能亚区[4](Fig.1)。
转录激活区包括A、B两个亚区，当通过DNA结合区与DNA结合后，它们都可以发挥促转录活性。
