第4卷 第1期生命科学研究V ol.4N o.1 2000年3月Life Science Research M ar.2000文章编号:1007-7847(2000)01-0060-05水分胁迫对芒果(Mangif era indica L.)幼叶细胞活性氧伤害的影响陈由强,朱锦懋,叶冰莹(福建师范大学生物工程学院,中国福建福州 350007)摘 要:对芒果进行水分干旱胁迫处理.结果表明,水分胁迫使芒果幼叶的相对含水量RWC(relativ e w ater co ntent)和叶水势 T下降.芒果幼叶的超氧离子O-2 产生速率随水分胁迫处理强度加大而增加.丙二醛M D A(malondialdehy de)含量的变化趋势与O-2 产生速率的变化趋势相似,超氧歧化酶SO D(supero x ide dism uta ce),过氧化物酶PO D(per ox idase)和过氧化氢酶CA T(cat alase)的活性水平也与O-2 的变化相一致,细胞相对质膜透性加大.说明芒果幼叶的水分胁迫损伤,是由O-2 引发的膜脂过氧化,致使M DA含量增加,破坏了细胞膜系统所致.关键词:水分胁迫;超氧阴离子自由基;膜脂过氧化;丙二醛;超氧物歧化酶;芒果中图分类号:Q945.78 文献标识码:AEffects of Drought Stress on Active Oxygen Damage and Membrane Lipid Peroxidation of Leaves in Mango(Mangif era indica L.)CHEN You-qiang,ZHU Jing-mao,YE Bing-ying(Bio-eng ineering College,Fujian No rma l U niv ersity,Fuzhou350007,F ujian,China)Abstract:T he leaves o f m ang o(Mangif era indica L.)of seedlings w ere treated w ith different w ater stress for our study ing on the mechanism of cell injury.T he results show ed that the relative w ater content and w ater po tential decreased w ith the increase in w ater stress.T he rate o f superox ides free radical generation increased w ith the incr ease in w ater stress.The w ater stress streng th was in direst proportion to the amo unt of O-2 generation.The trend o f chang e in M DA co ntents w as similar to that in O-2 g eneratio n rate.It can be concluded that the cell dam ag e of leav es in w ater stress is caused by membrane lipid perox idation first,meanw hile,increase in M DA co ntent,and cytoplas-mic sy stem destruction.Key words:water stress;super oxide fr ee r adical;membrane lipid perox idation;m alon- 收稿日期:1999-11-08;修订日期:1999-12-22基金项目:福建省教委科研基金资助项目(K92020,JB99007)作者简介:陈由强(1956-),男,福建福州人,福建师范大学副教授,博士研究生,从事植物生理学和分子生物学研究,已发表研究论文30余篇.朱锦懋,叶冰莹(略).dialdehyde;super oxide dismutase;M angif er a indica L.在植物生长环境因子中,以供水条件最为重要.研究结果证明植物在干旱逆境中损伤时植物细胞膜系统受破坏[1~3].Fridovich [4]提出生物自由基伤害是细胞膜系统破坏的主要原因.认为植物体内自由基大量产生的毒害会引发膜脂过氧化作用,造成细胞膜系统的破坏,直至植物细胞的死亡.细胞内存在清除O -2自由基的保护系统,如超氧物歧化酶,过氧化氢酶和过氧化物酶等.干旱胁迫造成植物伤害就是细胞内O -2的产生与清除的不平衡.芒果是我国亚热带地区的重要水果种类,近年来大力发展山地种植水果,山地果园夏秋季经常遇到季节性干旱,水分胁迫常常成为限制芒果生长的重要原因.本试验以芒果为对象,研究其在水分胁迫下O -2 产生和由O -2引发的膜脂过氧化对细胞质膜的伤害,以及超氧物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶的活性变化.旨在为提高芒果抗旱育种能力提供科学依据.1 材料与方法1.1 试验材料本试验于1995~1996年在福建师范大学生物工程学院完成.供试材料为芒果一二年生盆栽幼苗.盆钵口径35cm ,高30cm ,内含沙壤土,土壤称重,并测定土壤含水量.定量供水,保持土壤湿度.1.2 水分胁迫处理水分胁迫处理以称重法控制供水方式在6月至10月间进行.于每日下午4 00~5 00补充水分,补水量通过称重确定.分4个水平,以田间保持水量的百分数计算.对照为60%,轻度干旱为50%,中度干旱为40%,严重干旱为30%.为了便于比较水分胁迫反应的程度,参照Hsiao 提出的标准[5],将RWC 降低8%~10%,10%~20%和20%以上,分别定为轻度、中度和严重水分胁迫反应.1.3 测定相对RWC 测定按华东师范大学的方法测定[6].叶水势 T 采用压力室法测定[7].相对质膜透性(RPMP)的测定按陈由强[8]方法测定.SOD 活性的测定按王爱国等[9]的方法测定.CAT 活性的测定按中山大学的方法测定[10].POD 活性的测定按华东师范大学的方法测定[6].O -2产生速率的测定参照罗广华等[11]的方法测定.M DA 含量测定按张承烈[12]方法测定.每个处理测定3个重复,试验结果以t 检验测定其差异显著性.2 结果2.1 水分胁迫对芒果叶相对含水量RWC ,水势 T 和细胞相对质膜透性(RPMP )的影响质膜透性可用电解质相对渗透率表示,从表1可看出,随水分胁迫的强度增加,芒果幼叶细胞质膜相对透性加大.芒果幼叶RW C 和水势T则随水分胁迫强度加大而下降.61 第1期 陈由强:水分胁迫对芒果(M angif era ind ica L .)幼叶细胞活性氧伤害的影响 表1 水分胁迫对芒果叶RWC ,水势 T 和细胞质膜透性RPMP 的影响1)Table 1 Ef f ects of water stress on RWC , T and RPMP 1)处理T r eats RW C (%) T M P a RP M P (%)对照Contr ol 90.39(1.08)aA -0.67(0.04)aA 12.38(0.44)aA 轻度水分胁迫L ig ht wat er str ess 89.39(0.88)aA -1.71(0.03)bB 16.61(0.24)bB 中度水分胁迫M ediat e wat er str ess 64.40(3.77)bB -2.63(0.04)cC 31.74(1.07)cC 重度水分胁迫Heav y w ater stress61.42(1.14)cC-3.72(0.05)dD51.61(0.67)dD1)表中数字后附不同字母者表示差异显著,大小写字母分别表示差异达0.01和0.05显著水平.1)Value in a column for the same variety follow ed by the same capital or sm all letter are sign ificantly differen t at p =0.01or p =0.05level res pectively.2.2 对芒果叶O -2产生速率和MDA 含量的影响在水分胁迫条件下,芒果幼叶O -2产生速率和MDA 含量随水分胁迫的强度增加而迅速增加,当达到中度水分胁迫时二者均达到最高值.而后O -2 产生速率有所减缓,M DA 含量也降低(见表2).表2 水分胁迫对芒果叶O -2 产生速率和MDA 含量的影响1)Table 2 Ef f ects of water stress on the generation rate of O -2 and the concentration of MDA1)处理T r eats O -2 的速率/( mo l g-1min)R ate of O -2( mol g -1 min)M DA 含量/( mo l g -1)M DA co ntent ( mo l g -1)对照Contr ol 2.79(0.15)aA 0.51(0.06)aA 轻度水分胁迫L ig ht wa ter str ess 6.58(0.33)bB 2.72(0.22)bB 中度水分胁迫M ediat e water str ess 13.67(1.00)cC 3.63(0.29)cC 重度水分胁迫Heav y w ater stress6.41(0.35)dD4.53(0.22)cC1)数字后附不同字母者表示差异显著,大小写字母分别表示差异达0.01和0.05显著水平.1)Value in a column for the same variety follow ed by the same capital or small letter are sign ifican tly differ-ent at p =0.01or p =0.05level r esp ectively.2.3 水分胁迫对芒果叶SOD ,CAT 和POD 活性的影响SOD 在细胞中催化O -2发生歧化反应产生H 2O 2和O 2,H 2O 2经CA T 和POD 清除,因此称SOD ,CAT 和POD 为细胞保护酶系统.表3中可看出,在轻度和中度水分胁迫时62 生 命 科 学 研 究 2000年 SOD,CAT 和POD 的活性均随胁迫的增强而提高,而在重度水分胁迫时SOD,CAT 和POD 活性都出现了下降的趋势.2 讨 论芒果幼叶细胞在水分胁迫条件下,O -2 产生速率随水分胁迫增强而递增,这是细胞在水分逆境条件下损伤的初始反应.O -2 属活性氧类[13],它在细胞内具有很强的毒害作用,已引起许多研究者的重视[14~16],O -2 可启动膜脂不饱和脂肪酸的过氧化作用,而过氧化作用过程中又产生O -2,如此反复,进一步增强了过氧化作用,使质膜受到严重的伤害.表3 水分胁迫对芒果叶SOD ,CAT 和POD 活性的影响1)Table 3 Eff ects of water stress on the activities of SOD ,CAT and POD 1)处理T reats SO D U nit 2)CA T U nit 2)PO D U nit 2)对照Contr ol 77.24(2.63)aA 121.77(2.19)aA 126.87(10.77)aA 轻度水分胁迫L ight w ater stress 82.75(2.43)aA 256.52(8.04)bB 287.19(10.13)bB 中度水分胁迫M ediate w ater st ress 180.92(4.05)bB 151.73(6.80)aA C 356.02(22.69)cC 重度水分胁迫Heavy wa ter str ess139.14(1.08)cC131.41(5.39)cC241.49(13.98)dA1)表中数字后附不同字母者表示差异显著,大小写字母分别表示差异达0.01和0.05显著水平.1)Value in a column for th e same variety followed by the s am e capital or small letter are significantly different at p =0.01or p =0.05level res pectively.2)1U=16.67×10-9mol/s.膜脂过氧化作用会产生M DA ,它对细胞质膜和细胞中的许多生物功能分子均有很强的破坏作用.因此,M DA 的增加既是细胞质膜受损的结果,也是伤害的原因之一.超氧歧化酶能通过以下反应催化O -2 发生歧化作用:O -2 +O -2+2H 2OH 2O 2+O 2并起到清除O -2 的作用.超氧歧化酶将O -2歧化产生的H 2O 2由细胞内CAT 和POD 清除.水分胁迫初期,SOD ,CAT 和POD 活性增强.随着水分胁迫的加重,SOD ,CA T 和POD 活性下降.因此,在芒果抗旱育种实践中,如结合应用SOD,CAT ,POD,RW C 和 T 等生理指标可作为芒果抗旱育种的辅助指标,使芒果抗旱育种的早期鉴定更为准确.参考文献:[1] 蒋明义,荆家海,王韶唐.渗透胁迫对水稻膜脂过氧化及体内保护酶系统的影响[J ].植物生理学报,1991,17(1):80-84.[2] 孙昌祖.渗透胁迫对青杨叶片氧自由基伤害及膜脂过氧化的影响[J ].林业科学,1993,29(2):104-109.[3] 罗华建,刘星辉,谢厚钗.水分胁迫对枇杷叶片活性氧代谢的影响[J].福建农业大学学报,1999,28(1):33-37.63 第1期 陈由强:水分胁迫对芒果(M angif era ind ica L .)幼叶细胞活性氧伤害的影响 [4] F RID OV ICH I.Supero x ide dismutase[J].A nn R ev Bio chem,1975,44:147-159.[5] HSIA O 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