Chap2C(2695泵)-2695

WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。

注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。

注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。

注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。

小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。

小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。

小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。

目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。

该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。

该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。

建立色谱库后可以实现定性分析。

第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。

2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。

用前均需过0.45μm 滤膜。

2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。

确认流动相管线和相对应的脱气管线。

WATERS 2695仪器操作简明流程2695分离单元使用操作：1)开机自检打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样表示自检成功。

2)脱气（Degas）按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。

3)设定柱温（可选项）在“Status（1）”界面，移动光标至“Col Htr Set”，输入目标温按Enter即可。

（可在工作站方法中设置）4)Prime Seal Wash（清洗柱塞杆）按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“Prime Seal Wsh”，“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。

5)Wet Prime在“Status（1）”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“2 Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。

将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。

6)Purge Injector（注射器排气泡及清洗）进入“Direct Function”界面后，选择“3 Purge Injector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。

7)Prime Needle Wash（清洗注射针）进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默认30秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。

注：以上4）-7）为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。

若发现注射器中有气泡，则可重复6）直至排除。

如果流动相中含有盐类，则实验结束后必须用水清洗柱塞杆（即操作4））。

Alliance 2695是美国Waters公司推出的一款高效液相色谱仪。

该设备以Waters2695分离模块为核心，并与Waters Empower2软件、PDA及ELSD检测器协同工作，达到了很好的性能和效率。

在生物医药、食品卫生、生态环境等领域广泛应用。

主要用于小分子天然产物、有机合成样品以及药品等的定量和定性分析。

主要技术指标：●四元梯度泵四元梯度高精度输液泵，真空在线脱气流速范围：流速范围：0.050～10.000mL/min，以0.001递增流速准确度：±1.0%，延迟体积：<650µL混合范围：0.0—100.0% 以 0.1% 增量泵最大耐受压力：345bar（5000psi）● 120位自动进样器由5个样品盘组成，每盘中有24个2mL样品瓶进样次数：每个样品1～99次进样进样范围：0.1—100µL进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗● 2998 PDA检测器光源：512对单一氘灯光源波长范围：190-800 nm，可满足全波长扫描检测池：含标准分析型检测池与微量半制备检测池● 2424 ELSD检测器光源：石英卤素灯水相样品雾化温度≤60°漂移管温度≥120°检测灵敏度：1.0 ng流速范围：0.3-3.0mL/min●柱温箱温度范围：室温+5℃至80℃● Waters Empower2色谱工作站可提供三维光谱图，内置ORACLE® 10g版图文数据库，强大的数据管理功能，保证数据的完整性和安全性。

原始数据、仪器条件和处理参数等信息的关联由软件自动建立，用户无需记忆就能找到相应的信息。

在数据库中，用户可以采用各种检索方式从大量的数据中取出想要的数据。

●送样要求：分子量≤1000，用孔径≤0.45μ的滤膜过滤。

Waters 2690分离单元溶剂瓶盘检测器接液盘前面板显示屏注射器箱门和键盘柱温箱软盘驱动器样品室门溶剂输送单元进入门溶剂配比单元进入门●溶剂管理系统指标K溶剂数目: 1 — 4K溶剂脱气: 真空脱气或氦气脱气K流速范围: 0.000 和0.010 to 10.000 mL/min,增量为0.001 mL/minK典型流速: 0.050 to 5.000 mL/min ,增量0.001 mL/min K柱塞杆密封垫清洗K梯度方案: 包括线性,台阶,凹线和凸线共11条曲线方式K流速坡度: 0.01 到30.00 min, 增量0.01 minK最大工作压力: 5000 psi (345 bar)K溶剂配比范围: 0.0 到100.0%, 增量为0.1%●样品管理系统指标K样品瓶数目: 120, 分装于5个样品盘(24瓶/盘)K进样次数: 每瓶可进1 到99次K标准样品瓶: 2 mLK样品温控: 4 到40o C ,增量1o CK进样体积: 标准配置:0.1 到100 uL,定量环选件:0.1到2000 uLK最小样品量: 10 uL, 用低体积的内插式小瓶K柱温控制: 20 (高于环境温度5o C)到60o C,增量为1o C●有关电学和通讯的指标K Four contact closuresK图表输出: 流速, 系统压力,流动相组成, 样品温度及柱温K进样开始K IEEE-488 接口K RS-232接口K软盘驱动器: 传递和存档方法文件和可报告的GLP日志理统系统系剂溶管理柱塞腔横截面示意图出口在柱塞腔内完成流动相的混合,-First In, First Out-(先进先出)来自比例阀2690工作示意图主柱塞排空主柱塞送液(转移蓄液柱塞并送到系统)蓄液柱塞预压缩相对速度+蓄液柱塞送液0 周周周周0.4观察到的柱塞速度-主柱塞吸液蓄液柱塞吸液(从主柱塞转移过来)充填时间(sec)访问和执行Direct Functions(直接功能)按Menu/Status键选择欲实行的directfunction 选择分离方法或在Status页中输入参数值输入功能参数按Direct此功能开始运行Function屏幕键●Main screen(主屏幕)按Menu/Status键,显示Status 屏幕按Menu/Status 键选择分离方法或在Status屏幕中输入参数值(第一页)各项参数的意义：1. METHOD: 所选用的方法。

2695 系统操作规程一、准备：流动相：按方法要求配制流动相，经0.45m微孔滤膜过滤，并超声波脱气。

将清洗管路（不透明管）和洗针管路（绿管）分别放入适当的溶剂中。

洗针液（Needle Wash）：溶解样品的良好溶剂（不要使用缓冲盐或酸、碱作为洗针液）。

柱塞杆密封清洗溶液(Seal Wash)：5%-10%甲醇的超纯水二：开机及平衡系统：打开计算机登录windows后，依次打开2695、检测器的电源，等到仪器自检完毕后，进入Empower3软件。

2695面板Diag键，选择Prime SealWash，清洗泵头约1分钟；再选择Prime NdlWash，清洗进样针1-2次；将配制好的流动相放入2695顶部左侧槽中，按2695面板Menu/Status键进入手动控制模式；按2695面板Direct Function键，将需要使用的A/B/C/D管路分别进行WetPrime，流速7.5mL/min，时间3-5分钟；设置A/B/C/D管路的流动相比例，按2695面板Direct Function 键，进行WetPrime，流速7.5mL/min，时间3-5分钟按2695面板Direct Function键，选择Purge Injector，冲洗进样器；打开Empower3软件，点击运行样品，选择存放数据文件的项目和采集数据的系统，确定，建立仪器方法（设置2695的单次输送体积、流速、流动相比例、柱温；2489的模式、波长、采样速率；2475的模式3D或2D、激发（发射）波长、采样速率）和方法组；点击监视，观察基线，待基线平稳，可准备进样。

三、进样：将样品放入2695样品盘中，记录每一样品对应的管号；先在单进样状态进样一次，若条件适合，确定运行时间；在样品状态编辑样品表，开始自动进样。

四、数据处理及打印：浏览项目→选择项目→通道→选择标准样→查看t →按钮进入向导→选择新方法→处理类型为LC→设置峰宽、阈值、积分区域、最小面积、峰命名→保存处理方法。

Waters 2695-2996/2487高效液相色谱仪仪器组成与主要功能Waters2695主机（高精度四元梯度泵、自动进样器等）+Waters2996二极管阵列检测器（Water 2487 双通道紫外检测器） + Waters Chemstation色谱管理软件。

用于对紫外有吸收的可溶性有机化合物、生物化合物等样品的定性、定量分析，给出可靠数据。

简单操作规程1、打开电源开关至ON(1)的位置，依次接通 2695主机、检测器、计算机的电源。

双击电脑桌面上的Empower图标，出现Empower登录窗口，输入用户名system和密码manager，进入Empower Pro窗口。

2、双击浏览项目图标，出现选择项目以及系统的画面，在右框中选择所需的色谱系统，然后单击“确定”。

3、在2695分离单元上的操作：3.1、启动诊断程序完成后，“分离单元”将进入 Idle （空闲）模式，流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】，进入“Status （ 1 ）”屏幕。

光标选“Degasser ”，按【 Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“On ”，按【 Enter 】。

光标再选“Compomtion ”中欲使用的流动相，输入 100％ ，按【 Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，按【 Enter 】，显示“Wet Prime ”屏幕，输入 7.5ml/min 和 2min ，按【 OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。

3.2、冲洗自动进样器在“Status （ 1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。

按【 Direct Function 】，光标选“ PurgeInjector ”，按【 Enter 】，显示“Purge Injector ”屏幕，输入“Sample Loop Volumes 6.0 ” ，光标下移“ Compression Check ”，按任意数字键，按【 OK 】。