菌落计数器操作规程

A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤A.1.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g乳糖5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g月桂基硫酸钠0.1 g蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。

分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。

121 ℃高压灭菌15 min 。

菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。

二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。

三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。

2.QC主管监督检查执行情况。

四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。

3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。

3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。

3.4天平：感量为0.1 g。

3.5均质器。

3.6振荡器。

3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。

3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。

3.9无菌培养皿：直径90 mm。

3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3.11放大镜或和菌落计数器。

4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。

4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。

5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。

图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

全自动菌落计数器安全操作及保养规程概述全自动菌落计数器是一种广泛应用于生物科研、医疗、环保等领域的实验仪器。

使用全自动菌落计数器，能够方便、快速地对菌落进行计数和鉴定，提高实验效率和准确度。

为了更好地使用全自动菌落计数器，保障实验安全和设备使用寿命，本文提供了全自动菌落计数器安全操作和保养规程。

全自动菌落计数器安全操作规程1. 选择合适的环境充分了解实验特点，并保证在适宜的环境中操作仪器。

在使用前应保证仪器环境符合要求：干燥、清洁、无噪音和极少的振动。

2. 准备仪器在使用前，需要进行事先准备。

将仪器表面的灰尘和污垢除去，并连接电源。

操作人员应全程佩戴手套、防护眼镜等个人防护装备。

3. 操作前检查按照仪器说明书检查仪器的机械、电器和软件系统的运转是否正常。

特别需要检查的是，玻璃门、窗户和面板是否有破损或损坏。

如果发现异常情况，应及时整修或修理。

4. 样品的操作将需要检测的样品外转0.8mL的LB平板，自然晾干后，直接放在仪器样本架。

取样器轨道上放置含菌样品的架子，然后启动程序，开始自动检测和计数。

5. 操作完成后将样品架从样品架装置中取出，并断开电源。

检查操作位置是否清洁，如有样品残渣，则应及时清除干净。

全自动菌落计数器保养规程1. 日常保养除按照操作规程使用仪器外，要注意仪器表面的干净，并保持干燥。

使用后，要及时清除仪器表面的细颗粒。

2. 周期性维护在正常运行中，定期进行全自动菌落计数器的日清洁和消毒，避免积累过多的细菌或菌落。

3. 不适用时的处理当全自动菌落计数器长时间不使用，应放置在干燥、清洁、无噪音和极少的振动的环境中，不要暴露在阳光下，以免受到紫外线的侵蚀。

4. 维修保养如果全自动菌落计数器出现故障或其他异常情况，应及时找专业的技术人员进行维修保养，以免影响实验或造成二次污染。

总结全自动菌落计数器是一种实验室中常用的仪器，它能够方便、快速地对菌落进行计数和鉴定，提高实验效率和准确度。

在使用全自动菌落计数器时，需要遵守安全操作规程，并进行日常和周期性的保养维修，以保障实验安全和设备使用寿命。

微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面生产线微生物控制及验证计划。

本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面产品菌落总数、大肠菌群检测。

2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。

GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。

GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。

4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。

恒温水浴箱：46℃±1℃。

天平：感量为0.1g。

无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。

无菌培养皿：直径90mm。

无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。

灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。

显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。

无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。

乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。

伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。

乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。

EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。

格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。

5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。

三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。

a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。

菌种检定操作规程
《菌种检定操作规程》
一、目的
菌种检定操作规程旨在规范菌种检定过程，确保检定结果准确可靠，保障实验室菌种质量。

二、适用范围
本规程适用于各类实验室对菌种进行检定的操作。

三、设备和试剂
1. 必备设备：无菌工作台、培养箱、平板计数器等。

2. 必备试剂：琼脂培养基、生理盐水、甘油等。

四、菌种检定操作流程
1. 取样准备：将待检菌种进行悬浮液制备或直接取样，保证单一菌种在接种时的质量。

2. 培养基接种：将取样溶液均匀涂敷于琼脂培养基表面，将琼脂培养基放入培养箱进行培养。

3. 孵化：将接种后的琼脂培养基置于培养箱中，进行相应的温度和时间的培养。

4. 菌落计数：使用平板计数器对菌落进行计数，记录结果。

5. 结果分析：根据计数结果，对菌种进行鉴别和鉴定。

五、结果确认与报告
1. 只有经过两名以上实验人员的确认，结果方可出具。

2. 将检定结果填写在检定记录表上，并进行备份存储。

六、质量控制
1. 定期对实验室设备和试剂进行检验、校正。

2. 定期进行内部质量控制，对检定结果进行复核和比对。

七、附则
1. 对于异常情况的处理：出现异常结果时，要及时进行排查并记录处理过程。

2. 本规程未尽事宜，由实验室主管负责进行详细规定。

以上即为《菌种检定操作规程》的内容，希望各实验室严格按照此规程进行菌种检定工作，确保实验室菌种质量及检定结果的准确性。

菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。

注意培养基的成分和质量。

2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。

二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。

2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。

取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。

三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。

2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。

3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。

四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。

2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。

五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。

2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。

每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。

六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。

2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。

七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。

2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。

以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。

在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。

实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。

目的：本程序《菌落计数器使用说明书》规定了菌落计数器操作程序。

范围：本程序适用于JLQ—S型菌落计数器。

职责：质量管理部、QC内容：1接通200V电源，打开照明开关，将待检菌落平板翻转，底部朝上，放在灯光透射处，调节放大镜位置至菌落看的最清楚后固定镜头，探笔插入面板右上角孔中。

2按以下步骤操作计数计算器，先按一下ON/C键，显示器上显示“0”，再按一下“1”的数字键，显示器显示“1”，再按一下“+”号键，此时显示器显示“1”，再按一下“=”号键，显示器仍显示“1”，再按一下“0”字键，此时显示器显示“0”。

这时即可用探笔在菌落平板上进行累加计数。

3探笔使用方法：探笔是由三种不同颜色的针管尼龙笔和一支金属探笔头组成，在使用探笔时，需拔下尼龙笔的笔套、笔杆、将相同于笔杆颜色的彩色小墨水瓶剪开，对准储水芯徐徐挤入，墨水不宜加得太多，将加好墨水的储水芯连同笔尖套插入有带引线及插头的金属探笔头的套管内，使尖套塑料部分暴露在金属管外28mm左右，并有插入到底的感觉。

然后插入计数器插孔中进行计数器是否正常计数的试验。

探笔一般按平常书写钢笔时的握法（但不能握在笔尖塑料部分），宜倾斜一些，不能垂直于工作面，探笔在平板上进行碰触计数器时，能感觉到探笔有轻微的摆动。

计数完毕后，应将笔尖塑料杆连同储水芯从金属探笔头上取下，装入原来的塑料笔套中，以免墨水干掉，为了区别菌落在不同培养阶段的检测记录，仪器所备的三种颜色笔，后按上述方法换装不同的颜色。

4在计数时，将探笔在平板上碰触一下，计数器即计一个数，与此同时，探笔在平板上点上一个色点，表示此菌落已被数过。

以后每碰触一次，探笔点一个色点，计数器即累加一个数，直到所有的菌落都被点上色点，显示器中显示的读数即为该平板的菌落数。

5在计完某菌落平板后，如需再计其它平板的菌落数，可继续直接累加，待总的平板都数完后除以平板数即是平均数，也可使用存储键求平均数，在数完一个平板后，按一下M±键显示器上角显示“MEM”，表示此数已被存入，再按一下“0”字键，显示器上角显示“MEM”，右边显示“0”，即可继续计数。

菌落总数检验操作规程菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。

二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。

三、职责1. 检验人员严格按检验操作规程进行检验。

2. QC主管监督检查执行情况。

四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。

3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。

3.3 恒温水浴箱：46 ℃ ±1 ℃。

3.4天平：感量为0.1 g。

3.5均质器。

3.6振荡器。

3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。

3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。

3.9无菌培养皿：直径90 mm。

3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3.11放大镜或和菌落计数器。

4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。

4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。

5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。

图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～***** r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。

食品中霉菌及酵母菌计数测定方法操作规程一、范围本规程规定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的计数方法。

本规程适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。

二、编写依据GB 4789. 15-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母菌计数》三、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1冰箱：21〜5（。

3.2恒温培养箱：28o C±ΓCo3.3均质器。

3.4恒温振荡器。

3.5 显微镜：10×-100×o3.6电子天平：感量0. 1g。

3.7无菌锥形瓶：容量500mL. 250mLo3.8无菌广口瓶：500mLo3.9无菌吸管：1mL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0. 1mL刻度）。

3.10无菌平皿：直径90mmo4.11 无菌试管：10mm×75mmo5.12无菌牛皮纸袋、塑料袋。

四、培养基和试剂6.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：同GB 4789. 15项下制法。

6.2孟加拉红培养基：同GB 4789. 15项下制法。

6.3氢氧化钠Imol/L： 8g配200ml蒸储水。

6.41ICL lmol/L：7. 3g 配200ml 蒸储水。

五、检验程序5.1样品的稀释5.1.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸储水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。

或放入盛有225 mL无菌蒸储水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的样品匀液。

5.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无菌蒸储水的锥形（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。

7.1.3取1 mL 1:10稀释液注入含有9 mL无菌水的试管中，另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸，此液为1： 100稀释液。

5.1.4按5. 1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。

菌落计数器计数方法详解菌落计数器（Colony Counter）是一种用于快速计算微生物菌落数量的仪器，广泛用于微生物学研究、环境保护、食品工业、医学和农业等领域。

本文将详细介绍菌落计数器的使用方法及注意事项。

1. 菌落计数器的结构一般来说，菌落计数器包括菌落计数板、LED光源、灯罩、目镜、宽幅板调节钮、突起按钮等部分。

在计数过程中，将培养基平板放在菌落计数板上，开启LED光源照射培养基平板，目镜上方会出现大量菌落，使用突起按钮进行纪录和计数。

2. 菌落计数器的使用方法2.1 准备工作在开始使用菌落计数器前，需要进行以下准备工作：1.准备好待测样本，应按照标准操作流程进行操作。

2.准备好培养基平板，应在标准条件下进行制备，避免污染和偏差。

3.清洁菌落计数器，并将培养基平板放在菌落计数板上。

2.2 计数步骤1.打开菌落计数器，并调节合适的光源亮度。

2.选择一个适宜的倍率，一般为1-1.5倍，使用宽幅板调节钮使目镜聚焦。

3.开始计数前，应将菌落计数板上的菌落进行清点，以免重复计数或漏计。

4.用突起按钮逐个记录每个菌落的数目，轻按一下突起按钮记录一个菌落。

5.计数结束后，应将目镜反转清洗，以避免污染。

2.3 防止误差的注意事项1.尽量避免检测手部微生物的可能性，操作人员必须在洁净间内使用无菌手套等防护装备。

2.培养基平板质量和保存条件应符合标准，以保证菌落的形成和生长。

3.菌落计数板的数量应符合要求，并根据菌落的密度调整倍率和光源亮度。

4.计数过程中应切勿使用手指或其他物体触碰培养基平板或菌落计数板，避免污染和误差。

5.若发现菌落过多或过密，可采用分区方法计数，避免漏计或重复计数。

3. 菌落计数器的常见问题3.1 菌落计数结果偏低菌落计数结果偏低可能是因为培养基平板制备不当，或者是计数过程中操作不规范，应重新制备培养基平板并检查计数方法。

3.2 菌落计数与实际数量不符这可能是因为样本不均匀或者操作错误导致的，应重新操作，并注意操作规范。

菌落总数检验操作规程目的：该操作规程用于规范公司产品及原料的活菌数量检验操作。

范围：该操作规程适用于公司要求检查该项的产品和原料的菌落总数检验责任人：微生物检验员，QC主管内容：1 技术依据及原理菌落总数计数采用平板菌落计数法，这是活菌计数方法之一。

该方法以在琼脂平板上，样品经过处理在一定条件下培养后，所得1ml（或1g）检样中形成菌落的总数。

测定结果只反映在规定条件下，只包括一群在平板计数琼脂生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。

在进行本法测定时，必须严格按本法规定的条件操作，以免产生实验误差。

2 材料、仪器、试剂的准备及基本要求2.1 无菌室2.1.1 结构和要求无菌室面积不超过10m2，高度不超过2.4m，应采光良好、避免潮湿、远离厕所所及污染区，有缓冲间（2个）、操作间组成。

操作间与缓冲间之间应有样品传递窗（箱），出入操作间和缓冲间的门不应直对。

无菌室应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。

操作间内不得安装下水道。

无菌室照明灯应嵌装在天花板内，室内光照分布均匀，光照度不低于300勒克斯。

缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3）, 紫外线杀菌灯距实验台面高度不超过1 m，并定期检查其辐射强度，辐射强度不低于70µW·cm-2（1 m距离），不符合要求的紫外线杀菌灯应即使更换。

2.1.2 温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外线杀菌灯的杀菌效果，故应控制温度18～26℃，相对湿度40～60%。

操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，压差不低于4.9Pa。

2.1.3 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。

洁净度应不低于10000级，局部净化度100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯、打火机、大小橡皮乳头等。

2.1.4 缓冲间缓冲间应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。

化验室菌落总数与大肠菌群MPN计数法相关操作规程（假设做2个样品）早上工作安排：一；配药(培养基的配置）《1》，设备与材料：锥形瓶（500ml的1个，250ml的2个），烧杯（500ml的2个），量筒（500ml，1000ml，10ml 的各一只）移液管（10ml的一支）称量纸（2张），勺子（3个）试管（18支装大肠发酵液，4支装生理盐水稀释液），小倒管，nacl，月桂基硫酸盐蛋白胨（LST),PCA平板计数，蒸馏水。

《2》配制过程：1，生理盐水的配制；打开电子称，在上面放一张称量纸，调零称取25.5gnacl,蒸馏水定容到3000ml(12.75g定容到1500ml）分别在两个250ml锥形瓶上装225ml生理盐水另外，装四支9ml的生理盐水试管盖好胶塞，用报纸包扎好。

2，LST初发酵液的配制：取7.12gLST加蒸馏水定容到200ml放在加热器上加热并搅拌至沸腾冷至适宜温度后分装在18支试管内（每支试管都要先加小倒管）盖好胶塞，用报纸包扎好3，PCA平板计数培养基；取11.75gPCA加蒸馏水至500ml放在加热器上加热搅拌至溶解冷至适宜温度后包扎好二：高温蒸煮灭菌1，先在灭菌锅内加适量水2，将上述配置好的溶液（2瓶225ml生理盐水，4支9ml生理盐水管，1瓶PCA，18支LST 发酵管）全部放入灭菌蓝3，开启电源，调节时间（121摄氏度15分钟）三，实验前需清洗并消毒的用具移液管，培养皿，勺子，剪刀。

将上述器具清洗干净后放入铁盒内并放入干燥箱内干燥并消毒。

四，取样，取洗干净并烘干的取样盒到车间取样，将取好的样品放到冰箱内五，下班前1，检查无菌室内实验操作需要用的用具以及材料(电子称1台，油性笔1支，酒精灯1台，酒精棉1罐，镊子一把，剪刀一把，打火机一把，一罐备用自来水或者一块是抹布）2，配制250PPM消毒水（二氧化氯甲液2.5g甲液，加入50ml 水，再加入2.5g乙液，搅拌活化十分钟后，再加4L的水）然后对无菌微检室进行喷洒消毒。

微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。

样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。

如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。

1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。

结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。

2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。

菌落计数器操作规程
《菌落计数器操作规程》
一、概述
菌落计数器是用于计算微生物菌落数量的仪器，通常应用于食品、药品、环境等领域。

正确的操作规程对于准确测得样品中的微生物菌落数量至关重要。

二、操作规程
1. 准备
在进行菌落计数之前，应确保工作台面干净整洁，使用紫外线灯或75%酒精擦拭工作台面。

同时确认菌落计数器灯管是否正常工作，灯管是否需要更换。

2. 样品处理
将待测样品放入灭菌的培养皿中，转动培养皿使样品均匀地分布在培养基表面。

3. 计数
将培养皿放入菌落计数器中，使用放大镜观察培养皿中的微生物菌落。

注意：在观察过程中要避免培养皿与灯管直接接触，以免造成灯管污染。

4. 记录结果
使用计数器进行菌落计数，记录每个培养皿中的菌落数量。

注意：每个培养皿中大于300个菌落的样品，应选取少于300个菌落的培养皿进行计数。

5. 结果分析
根据计数结果计算出菌落的数量，并根据需求制作相应的报告。

6. 清洁消毒
使用75%酒精或其他消毒液清洁菌落计数器的工作台面，确
保下次使用前的卫生条件。

三、注意事项
1. 在操作时要做到轻拿轻放，避免碰撞造成培养皿破裂。

2. 观察过程中注意保持适当的距离，避免过多照射紫外线对人体健康造成伤害。

3. 每次使用后及时进行清洁消毒，保持设备的卫生条件。

通过严格按照菌落计数器的操作规程进行操作，可以保证结果的准确性，为食品、药品、环境等领域的微生物检测提供可靠的数据支持。

1目的为建立平板计数测定操作标准，规范平板计数操作行为特制定本规程。

2范围本规程适用于本公司液态或固态产品的全部可成活细菌和芽孢数量进行计数的操作。

3职责操作人员、研发部技术总监对本规程负责。

4仪器及试剂4.1 仪器4.1.1菌落计数器4.1.2水浴锅4.1.3回旋振荡器4.1.4移液器及刻度吸管4.1.5喷雾干燥孢子稀释液4.2 培养基及缓冲液4.2.1平板计数琼脂培养基根据CPORX/SOP-R&D-002配制。

4.2.2磷酸缓冲液根据CPORX/SOP-R&D-001配制。

5程序5.1 细菌总数的标准平板计数程序5.1.1把经过滤的液体孢子中间物混合45秒钟。

根据计数最大化的需要来改变混合。

如果使用固态或其他液态产品可以省略这个步骤。

5.1.2量出1±0.01克(干燥或粘性液体样品)或1±0.01毫升 (液体样品)样品并转移到99毫升消毒磷酸盐缓冲物中(稀释度=10-2),如是喷雾干燥孢子则采用孢子稀释液。

为了从不均匀的样品中得到更有代表性的计数，有时必须称出更多样品（例如11±0.01克/99毫升=10-1稀释度）。

5.1.3如果是干燥产品，至少在室温下水化30分钟同时以每分钟100-200转的速度摇晃。

把第一次稀释瓶中的溶液转移到一个清洁的搅拌器中并低速搅拌。

把干燥的孢子混合90秒，所有其他产品混合15秒。

如果是液体产品则可以省略这一步骤。

根据计数最优化的需要改变混合。

5.1.4用1000μl吸管把1毫升样品转移到含有9或99毫升消毒磷酸盐缓冲物的试管或瓶子中（如果是固体产品那么就需要使用广口吸管以防止阻塞）。

5.1.5彻底混合。

5.1.6根据需要准备1:10或1:100的稀释液，以便最终使每个平板含有25-250个菌落。

5.1.7用100μl吸管从适当的平皿培养稀释液中转移3份0.1ml液体到每个包含适当平皿培养介质的皮氏培养皿表面。

5.1.8用预先消过毒的平板刮刀把0.1毫升液体分散在每个平皿的琼脂表面，操作方法是把皮氏培养皿放在手上，把平板刮刀放在琼脂上，旋转培养皿直到样品均匀分布到琼脂的表面为止。

细菌、霉菌及酵母菌计数操作规程1. 目的本规程旨在为微生物计数提供一个标准化方法。

2. 适用范围微生物实验室3. 责任者QC主管生测员4. 安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染。

5. 规程a．平皿菌落计数法：取供试液各1ml，加入90mm的平皿中，每个稀释度各2个平皿。

每个平皿加15-20ml已融化并冷至45℃的培养基（细菌用营养琼脂培养基，霉菌和酵母菌用玫瑰红钠琼脂培养基），快速摇匀，待凝后，倒置进行培养。

同时各做一个空白对照。

b．薄膜过滤法：取相当于1mL供试品的供试液，加至适量的稀释级中，混匀，用pH7.0蛋白胨-氯化钠无菌缓冲溶液冲洗滤膜，冲洗时应注意保持供试品的溶剂及冲洗液覆盖整个滤膜表面。

冲洗量不宜过大，每张滤膜每次冲洗量约为100mL，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基上。

同时做一个空白对照。

c．培养：细菌30-35℃培养3天，计菌落数；霉菌、酵母菌25-28℃培养5天，计菌落数；空白对照应无菌生长。

必要时延长培养时间为7天6．结果判断细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu，霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1mL供试品中所含的菌数。

7. 附表及附录附录1：细菌、霉菌及酵母菌计数报告8. 制定依据参照《中华人民共和国药典》2010版第二部细菌、霉菌及酵母菌计数（附录XI J）微生物限度标准，和GB/T14233.2医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分生物学试验方法。

附录1：细菌、霉菌及酵母菌计数报告。

菌落计数器的基本操作及操作规程菌落计数器的基本操作菌落计数器在皮氏培育皿上计算微生物的数目是一件特别耗时的工作。

有了菌落计数器这种仪器，用户就不必为这项多而杂的操作费心了，它可广泛应用在每个生物试验室中。

菌落计数器基本操作一般包括：样品的稀释——倾注平皿——培育48小时——计数报告1．操作方法：培育到时间后，计数每个平板上的菌落数。

可用肉眼察看，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算处原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。

2．到达规定培育时间，应立刻计数。

假如不能立刻计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。

3．计数时应选取菌落数在30～300之间的平板（SN标准要求为25～250个菌落），若有二个稀释度均在30～300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决议，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。

4．若全部稀释度均不在计数区间。

如均大于300，则取较高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。

如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30～300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

如全部稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。

有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。

5．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。

如显现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能显现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。

6．当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。

菌落计数器操作规程
1、目的：建立菌落计数器的操作规程，使检测员正确使用菌落计数器。

2、适用范围：本方法适用于菌落计数器的使用。

3、责任人：检测员。

4、正文：
4.1操作步骤
4.1.1将电源插头插入220V电源插座内。

4.1.2将探笔插入仪器上的探笔插孔内。

4.1.3将电源开关拨向“开”，计数池内灯亮。

同时显示明亮的“000”表示允许进行计数。

4.1.4将待检的培养皿，皿底朝上放入计数池内。

4.1.5用探笔在培养皿底面面对所有的菌落逐个点数。

此时，菌落处被标上颜色，显示窗内数字自动累加。

4.1.6用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏，计数即已完毕。

4.1.7显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。

4.1.8记录数字后取出培养皿，按复0键，显示恢复“000”。

为另一培养皿的计数做好准备。

4.2 注意事项
4.2.1仪器应放置在平整牢固的试验台上使用。

4.2.2点数菌落时，探笔不要过于倾斜。

轻轻点下有弹跳感时，数字即被输入。

4.2.3仪器应防潮、防强烈震动、防直接日光曝晒、防酸碱侵蚀。

用后应加防尘罩。

4.2.4注意防止细菌污染计数池。

4.2.5仪器及探笔均不能随意拆卸，发现故障，应请有经验的专业人员检修。