细胞培养的缺点 现在人工模拟体内环境的技术已经很高, 但人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相 同。 当细胞被置于体外培养后, 生活在缺乏动态平衡的环境中, 时间久了,必然发生变化
体内外细胞的差异 1. 与体内主要不同 相对孤立、相对单一,
缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响 2. 主要表现
抗原决定簇---抗原分子上可以诱导出抗体的部位或片段
多克隆抗体----一种抗原通常具有多个不同的抗原决定簇,因此能刺激多个 B 淋巴细胞产生 相应的单克隆抗体,因此血清中的抗体是针对不同抗原决定簇的单克隆抗体混合物,称为多 克隆抗体
杂交瘤细胞---将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的
人抗鼠抗体(HAMA)反应----鼠来源的单抗在人体内是外源物质,很可能会产生人体免疫系 统对它的排斥反应:产生抗鼠的抗体
血清的缺点 对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,可能改变某种细胞在体内的
正常状态 血清含一些对细胞产生毒性的物质 动物个体不同,血清产地、批号不同,每批质量差异甚大,其成分不能保持一致。 取材中可能带入支原体、病毒,对细胞产生潜在影响,可能导致实验失败或实验结果不可靠 性。 血清的使用使得实验和生产的标准化困难,其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产 中分离纯化工作很难完成。 大规模生产中,血清来源越来越困难,价格昂贵,是构成动物细胞培养对生产成本的主要部 分之一
体外培养细胞生存所需基本物质 (一)糖 (二)氨基酸 (三)维生素 (四)促生长因子 (五)其它物质
细胞培养的常用液体 水 平衡盐溶液---由无机盐、葡萄糖组成,维持细胞渗透压平衡,保持 pH 稳定及提供简单的营 养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。 消化液---进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液,传代培养时也需要将贴 壁细胞从瓶壁上消化下来。胰酶溶液和 EDTA 溶液,胶原酶溶液 消化酶抑制剂----血清,大豆胰蛋白酶抑制剂 pH 调整液----NaHCO3 溶液,HEPES 溶液 抗生素液---青霉素,链霉素 谷氨酰胺补充液----(1)频繁打开盖子,增加了破坏无菌状态的可能性;