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基因组学杨金水电子版
基因工程 电子版
导读：就爱阅读网友为您分享以下“基因工程 电子版”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对的支持!
作 者：吴乃虎
出版社：高等教育出版社
第一章 基因工程概述
第一节 基因操作与基因工程
一、基因操作与基因工程的关系
二、基因工程的诞生与发展
第二节 基因工程是生物科学发展的必然产物
2 一、基因是基因重组的物质基础
二、DNA的结构和功能
三、基因操作技术的发展促进基因工程的诞生和发展
四、基因工程的内容
第三节 基因的结构——基因操作的理论基础
一、基因的结构组成对基因操作的影响
二、基因克隆的通用策略
第一篇 基因操作原理
第二章 分子克隆工具酶
第一节 限制性内切酶
一、限制与修饰
3 二、限制酶识别的序列
三、限制酶产生的末端
四、DNA末端长度对限制酶切割的影响
五、位点偏爱
六、酶切反应条件
七、星星活性
八、单链DNA的切割
九、酶切位点的引入
十、影响酶活性的因素
十一、酶切位点在基因组中分布的不均一性
第二节 甲基化酶
4 一、甲基化酶的种类
二、依赖于甲基化的限制系统
三、甲基化对限制酶切的影响
第三节 DNA聚合酶
一、大肠杆菌DNA聚合酶
二、KIenow DNA聚合酶
三、T4噬菌体DNA聚合酶
四、T7噬菌体DNA聚合酶
五、耐热DNA聚合酶
六、反转录酶
七、末端转移酶
5 第四节 其他分子克隆工具酶
一、依赖于DNA的RNA聚合酶
二、连接酶
三、T4多核苷酸激酶
四、碱性磷酸酶
五、核酸酶
六、核酸酶抑制剂
七、琼脂糖酶
八、DNA结合蛋白
九、其他酶
第三章 分子克隆载体
6 第一节 质粒载体
一、质粒的基本特性
二、标记基因
三、质粒载体的种类
第二节 λ噬菌体载体
一、λ噬菌体的分子生物学
二、λ噬菌体载体的选择标记
……
第四章 人工染色体载体
第五章 表达载体
第六章 基因操作中大分子的分离和分析
第15章酵母基因工程
o酵母基因工程的发展
o酵母表达系统
o酿酒基因工程的应用
15.1 酵母基因工程的发展
o酵母菌是一类群体庞大的单细胞真核微生物，
种类繁多，至少包括80个属，600多种，10 000
多菌株。
o酵母菌有完整的亚细胞结构和严谨的基因表达
调控机制，它既能通过有丝分裂进行无性繁
殖，也可通过减数分裂实现有性繁殖。
15.1.1 酵母基因工程的优点
①是真核生物，大多具有较高的安全性；
②繁殖速度快，能大规模生产，具有降低基因工程产品成本的潜力；
③将原核生物中已知的分子和基因操作技术与真核生物中复杂的转译后修饰能力相结合，能方便地用于外源基因的操作；
④采用高表达启动子，可高效表达目的基因，而且可诱导调控；
⑤提供了翻译后加工和分泌的环境，使得产物与天然蛋白一样或类似；
⑥酵母菌可将表达的外源蛋白与末端前导肽融合，指导新生肽分泌，同时在分泌过程中可对表达的蛋白进行糖基化修饰；
⑦不会形成不溶性的包涵体，易于分离提纯；
⑧移去起始甲硫氨酸，避免了在作为药物使用中引起免疫反应的问题；
⑨酵母菌（主要是酿酒酵母）已完成全基因组测序，它具有比大肠杆菌更完备的基因表达调控机制和对表达产物的加工修饰及分泌能力；
⑩酵母可进行蛋白的N-乙酰化、C-甲基化，对定向到膜的胞内表达蛋白具有重要作用。
15.1.2 发展现状
o在酵母基因工程中发展和应用较多的酵母:
酿酒酵母
乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）
巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）
多形汉逊酵母（Hansenulapolymorpha）
烷烃利用型降脂耶氏酵母（Yarrowia
lipolytica）
粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomycespombe）
o应用:改造酵母本身用以提高发酵性能和表达异源
蛋白两方面。
1．酿酒酵母自身的改造
⑴将葡萄糖淀粉酶基因导入酿酒酵母，水解多糖
⑵将外源的蛋白水解酶基因导入酿酒酵母,水解
麦汁中蛋白
⑶将β-葡聚糖酶基因导入酵母，水解β-葡聚
作 者：吴乃虎
出版社：高等教育出版社
第一章 基因工程概述
第一节 基因操作与基因工程
一、基因操作与基因工程的关系
二、基因工程的诞生与发展
第二节 基因工程是生物科学发展的必然产物
一、基因是基因重组的物质基础
二、DNA的结构和功能
三、基因操作技术的发展促进基因工程的诞生和发展
四、基因工程的内容
第三节 基因的结构——基因操作的理论基础
一、基因的结构组成对基因操作的影响
二、基因克隆的通用策略
第一篇 基因操作原理
第二章 分子克隆工具酶
第一节 限制性内切酶
一、限制与修饰
二、限制酶识别的序列
三、限制酶产生的末端
四、DNA末端长度对限制酶切割的影响
五、位点偏爱
六、酶切反应条件
七、星星活性
八、单链DNA的切割
九、酶切位点的引入
十、影响酶活性的因素
十一、酶切位点在基因组中分布的不均一性
第二节 甲基化酶
一、甲基化酶的种类
二、依赖于甲基化的限制系统
三、甲基化对限制酶切的影响
第三节 DNA聚合酶
一、大肠杆菌DNA聚合酶
二、KIenow DNA聚合酶
三、T4噬菌体DNA聚合酶
四、T7噬菌体DNA聚合酶
五、耐热DNA聚合酶
六、反转录酶
七、末端转移酶
第四节 其他分子克隆工具酶
一、依赖于DNA的RNA聚合酶
二、连接酶
三、T4多核苷酸激酶 四、碱性磷酸酶
五、核酸酶
六、核酸酶抑制剂
七、琼脂糖酶
八、DNA结合蛋白
九、其他酶
第三章 分子克隆载体
第一节 质粒载体
一、质粒的基本特性
二、标记基因
三、质粒载体的种类
第二节 λ噬菌体载体
一、λ噬菌体的分子生物学
二、λ噬菌体载体的选择标记
第一章 核酸的制备
1. 名词解释：
脱氧核糖核酸：
核糖核酸：
ccc-DNA：当两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构时，称为共价闭合环形DNA（cccDNA）
oc-DNA：如果两条核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现一至数个缺口时，称为开环DNA（ocDNA）
l-DNA,：发生双链断裂而形成线性分子（L—DNA），L构型
DNA变性： 双联变成单链
DNA复性：单链又变成双链
PCR, 模板，引物
2. 分别阐述用CTAB裂解法，SDS裂解法，碘化钠裂解法以及蛋白酶K裂解法和溶菌酶裂解法裂解细胞的依据。
溶菌酶：破坏细胞的细胞壁肽聚糖骨架，在内部渗透压的作用下使得细胞胀破。
CTAB裂解法：CTAB作为离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚
SDS裂解法：利用中性去污剂NP-40破坏全血的红细胞膜，离心弃去溶血液，收集白细胞沉淀，加入去污剂SDS以破坏白细胞核膜，并使核蛋白解离，再加入高浓度的NaCl使DNA溶解，同时使蛋白盐析。通过离心收集水相，加2——2.5倍体积的无水乙醇，沉淀DNA
碘化钠裂解法：低渗破坏细胞，碘化钠破坏核膜
蛋白酶K裂解法：蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解
3. 用于检测样品纯度和浓度的方法有哪些？简述个各方法的基本原理。
电泳、OD值、荧光定量法
第二章 基因工程工具酶
1. 名词解释：
限制性内切核酸酶：在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开
DNA连接酶：催化DNA上裂口两侧(相邻)核苷酸裸露的3＇羟基和5＇磷酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使断开的DNA•裂口连接起来
逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶
DNA聚合酶：是一类催化DNA合成的酶类，酶的作用需要DNA或RNA作为模板，合成DNA链的序列与模板的序列互补
Klenow片段（Klenow酶）：大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理,获得N端三分之二的大肽段,即Klenow 酶
