液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的维拉帕米

液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量王健吉林大学药物代谢研究中心（130021）E-mail: wjpsw@摘 要：本文建立了液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量。

色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，5µm粒径，150×4.6 mm I.D.，美国Agilent公司；流动相：甲醇-水-甲酸（80:20:1，v/v/v）；流速：0.8 mL/min。

本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度以及专属性，完全适用于临床应用及药物代谢研究。

关键词：佐米曲普坦；LC/MS/MS1. 引言佐米曲普坦（Zolmitriptan）为选择性5-HT1B/1D受体激动剂，通过对颅部血管扩张和三叉神经系统感觉神经的5-HT1B/1D受体的激动作用，促进颅部血管收缩，抑制炎症后神经肽的释放，临床用于治疗偏头痛[1,2]。

本试验建立了测定人血浆中佐米曲普坦含量的液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）分析方法用于临床应用及药物代谢研究。

2. 试验2.1仪器与药品API 4000型三重四极杆串联质谱仪，配有离子喷雾离子化源以及Analyst 1.3.2 数据处理软件，美国Applied Biosystem公司；Agilent 1100 高效液相色谱系统，包括二元输液泵，自动进样器，切换阀，美国Agilent公司。

佐米曲普坦标准品（纯度>99％）：英国AstraZeneca公司提供；苯海拉明对照品（纯度>99％）：中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，空白人血浆由吉林大学第一医院提供。

2.2血浆样品的分析方法血浆样品的预处理精密取血浆样品0.5 mL置具塞试管中，加入内标溶液（2 ng/mL- 1 -苯海拉明甲醇溶液）100 µL，加入100 µL甲醇-水（50:50，v/v）混合溶液，加入1 mol/L Na2CO3溶液100 µL，混匀；加入3mL正已烷-二氯甲烷-异丙醇（300:150:15，v/v），涡流混合1 min，往复振荡10 min（240次/分），离心5 min（3500 rpm），取上层有机相于另一试管中，40°C 空气流下吹干，残留物加入100 µL流动相溶解，涡流混合，取20 µL进行LC/MS/MS分析。

基于液相色谱串联质谱法的人血清中亚胺培南、美罗培南、万古霉素和替考拉宁的含量测定分析王月园;项铮;屈昱晨;樊锴;苏存锦【期刊名称】《抗感染药学》【年(卷),期】2024(21)1【摘要】目的:基于液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS),建立同时快速测定人血清中亚胺培南、美罗培南、万古霉素和替考拉宁含量的方法,为临床感染患者的治疗药物监测提供参考。

方法:采用Agilent 1260系列液相色谱仪和API 4000三重串联四级杆质谱仪,以Phenomenex KINETEX XB-C18(2.6μm,3×50 mm)为色谱柱,以0.1%甲酸-水和纯乙腈为流动相,以电喷雾离子源、多反应离子监测结合正离子模式作为质谱条件,建立同时快速测定人血清中亚胺培南、美罗培南、万古霉素和替考拉宁4中抗菌药物含量的方法。

结果:测定结果显示,4种抗菌药物和2种内标物质在保留时间处均未出现干扰峰;4种抗菌药物在各自的浓度范围内线性关系良好,其相关系数(r^(2))均大于0.99,其最低定量限的S/N均大于10;精密度和准确度检测结果显示,4种抗菌药物测定结果的日间和日内相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于10.00%,而其相对误差(relative error,RE)则均在±10.00%以内;4种抗菌药物测定结果的回收率均在85.00%~115.00%之间;稳定性考察显示,在不同温度和放置时间条件下,4种抗菌药物测定结果的RE则均在±10.00%以内。

结论:LC-MS/MS可以同时快速测定血清中亚胺培南、美罗培南、万古霉素和替考拉宁4种抗菌药物的含量,且具有精密度和准确度高、稳定性强的特点,因而可以为临床治疗药物监测提供较好支撑。

【总页数】5页(P14-18)【作者】王月园;项铮;屈昱晨;樊锴;苏存锦【作者单位】苏州大学附属第二医院【正文语种】中文【中图分类】R978.1;R97【相关文献】1.高效液相色谱-串联质谱测定猪肉中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁2.固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱法测定乳与乳制品中万古霉素、去甲万古霉素残留3.在线固相萃取-二维液相色谱串联质谱法测定人脑脊液中替考拉宁浓度4.高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中万古霉素的浓度5.超高效液相色谱-串联质谱法测定人血清美罗培南浓度的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【摘要】建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定使用艾普拉唑后人血浆中二甲基精氨酸(ADMA)、对称二甲基精氨酸(SDMA)、单甲基精氨酸(NMMA)、瓜氨酸(Cit)和L-精氨酸(L-Arg)的浓度.采用HILIC亲水相互作用色谱和非衍生化的蛋白沉淀法进行分离分析,色谱柱选取Waters Atlantic HILIC柱(2.1 mm×50 mm×3μm),流动相由乙腈(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)-水(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)(85:15,v/V)组成,流速0.25 mL/min.采用多反应离子监测(MRM)模式,以电喷雾离子源(ESI)正离子方式检测.结果显示,ADMA、SDMA、NMMA、L-Arg和Cit的线性关系良好,相关系数r均大于0.994 0;ADMA、SDMA和NMMA的线性范围为0.1～5 mmol/L,L-Arg和Cit的线性范围为10～250 mmol/L;5种氨基酸的日内、日间精密度均小于15％,准确度在85％～115％之间.该方法快速、简便、灵敏,可为相关疾病的临床诊断提供一种高效的检测手段.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】7页(P446-452)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS);艾普拉唑;蛋白沉淀法;亲水性色谱【作者】田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【作者单位】福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730【正文语种】中文【中图分类】O657.63一氧化氮是人体重要的信使分子，L-精氨酸(L-Arg)在一氧化氮全酶(NOS)的催化下，产生一氧化氮(NO)和瓜氨酸(Cit)[1-2]。

2024年执业药师之西药学专业一通关提分题库及完整答案单选题（共45题）1、盐酸多柔比星，有称阿霉素，是广谱抗肿瘤药物，气化学结构如下A.抑制DNA拓扑异构酶ⅡB.与DNA发生烷基化C.拮抗胸腺嘧啶的生物合成D.抑制二氢叶酸还原酶E.干扰肿瘤细胞的有丝分裂【答案】 A2、生物药剂学分类系统根据药物溶解性和肠壁渗透性的不同组合将药物分为四类。

阿替洛尔属于第Ⅲ类，是高水溶性、低渗透性的水溶性分子药物，其体内吸收取决于（）。

A.渗透效率B.溶解速率C.胃排空速度D.解离度E.酸碱度【答案】 A3、药物的引湿性是指在一定温度及湿度条件下该物质吸收水分能力或程度的特性。

引湿性特征描述与引湿性增重的界定为：引湿增重不小于15％被界定为A.潮解B.极具引湿性C.有引湿性D.略有引湿性E.无或几乎无引湿性【答案】 B4、《中国药典》的英文缩写为A.JPB.BPPD.ChPE.Ph.Eur【答案】 D5、可的松的1位增加双键，A环几何构型从半椅式变为平船式，抗炎活性增大4倍，钠潴留作用不增加的药物是A.泼尼松B.氢化可的松C.泼尼松龙D.曲安奈德E.地塞米松【答案】 A6、有关散剂和颗粒剂临床应用的叙述错误的是A.散剂只可外用不可内服B.颗粒剂多为口服，不可直接用水送服C.外用或局部外用散剂：取产品适量撒于患处D.外用散剂，切忌内服，不可入眼、口、鼻等黏膜处E.外用散剂用药期间应常用温水洗浴，保持皮肤干净及排汗通畅【答案】 A7、生物半衰期A.AUCB.t1／2C.t0.9D.VE.Cl【答案】 B8、以下药物配伍使用的目的是阿司匹林与对乙酰氨基酚、咖啡因联合使用A.产生协同作用，增强药效B.延缓或减少耐药性的发生C.形成可溶性复合物，有利于吸收D.改变尿液pH，有利于排泄E.利用药物间的拮抗作用，克服药物的不良反应【答案】 A9、根据药典等标准，为适应治疗或预防的需要而制备的药物应用形式的具体品种称为A.药物剂型B.药物制剂C.药剂学D.调剂学E.方剂学【答案】 B10、厄贝沙坦的结构式为A.B.C.D.E.【答案】 C11、链霉素是一种氨基糖苷类药，为结核病的首选药物，链霉素容易损害听觉神经，可以引起眩晕，运动时失去协调(我们称共济失调)；可以引起耳鸣，听力下降，严重时出现耳聋。

论著 临床研究高效液相色谱Ｇ串联质谱法检测人血浆中５Ｇ羟色胺张㊀杰１,郭海洋１,曹海微１,姜㊀义２ә(１．吉林大学第一医院,吉林长春１３００２１;２．吉林大学第二医院,吉林长春１３００２１)㊀㊀摘㊀要:目的㊀建立高效㊁准确的高效液相色谱Ｇ串联质谱法(H P L CＧM S/M S)测定人血浆中５Ｇ羟色胺(５ＧH T)的方法,并应用于临床及科研的生物样本检测.方法㊀该方法采用奥卡西平作为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白,用初始流动相稀释后经A g i l e n t Z O R B A XE c l i p s eX D BＧC８色谱柱进行分离,流动相为０．２％甲酸水Ｇ乙腈,梯度洗脱.采用电喷雾离子源(E S I),正离子㊁多反应监测模式(M R M)进行监测,用于定量分析的离子为质荷比(m/z)１７７ң１６０.结果㊀５ＧH T在１０~８００n g/m L范围内线性良好(r＞０．９９９),定量下限为１０．０n g/m L.待测物日内㊁日间相对标准偏差均小于１５％.符合生物样品分析要求.结论㊀本方法适合临床及科研的生物样本中５ＧH T的快速检测.关键词:５Ｇ羟色胺;㊀血浆;㊀高效液相色谱;㊀质谱D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．２２．００５中图法分类号:R４５７．１＋４文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)２２Ｇ２７３７Ｇ０４文献标识码:AD e t e r m i n a t i o no f５Ｇh y d r o x y t r y p t a m i n e i nh u m a n p l a s m aw i t hh i g h p e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h yＧt a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r yZ HA N GJ i e１,G U O H a i y a n g１,C A O H a i w e i１,J I A N GY i２ә(１．J i l i nU n i v e r s i t y F i r s tH o s p i t a l,C h a n g c h u n,J i l i n１３００２１,C h i n a;２．J i l i nU n i v e r s i t y S e c o n d H o s p i t a l,C h a n g c h u n,J i l i n１３００２１,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀T oe s t a b l i s ha ne f f i c i e n t a n da c c u r a t eh i g h p e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h yＧt a nＧd e m m a s ss p e c t r o m e t r y(H P L CＧM S/M S)m e t h o df o r t h ed e t e r m i n a t i o no f５Ｇh y d r o x y t r y p t a m i n e(５ＧH T)i n h u m a n p l a s m a,a n d t o a p p l y i t t o t h e d e t e c t i o no f b i o l o g i c a l s a m p l e s i n c l i n i c a l a n d s c i e n t i f i c r e s e a r c h．M e t h o d s ㊀O k a s e p i nw a s u s e d a s t h e i n t e r n a l s t a n d a r d,t h e p l a s m a s a m p l e sw e r e p r e c i p i t a t e d p r o t e i nw i t ha c e t o n i t r i l e, a n d t h e ns e p a r a t e db y A g i l e n tZ O RB A X E c l i p s e X D BＧC８c h r o m a t o g r a p h i cc o l u m n．T h e m o b i l e p h a s e w a s ０．２％a c e t o n i t r i l e a n d g r a d i e n t e l u t i o nw a su s e da s e l u t i o nc o n d i t i o n．E l e c t r o s p r a y i o ns o u r c e(E S I),p o s i t i v e i o n s a n dm u l t iＧr e a c t i o nm o n i t o r i n g m o d e(M R M)w e r e u s e d f o rm o n i t o r i n g,a n d t h e i o n s u s e d f o r q u a n t i t a t i v e a n a l y s i sw e r em/z１７７ң１６０．R e s u l t s㊀５ＧH Tw a sw e l l l i n e a r i n t h e r a n g e o f１０－１０００n g/m L(r＞０．９９９),a n d t h e l o w e r l i m i to f q u a n t i t a t i o n w a s１０．０n g/m L,b o t hr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no f i n t r aＧd a y a n d i n t e rＧd a y w e r e l e s s t h a n１５％,w h i c hm e e t t h e r e q u i r e m e n t s o f b i o l o g i c a l s a m p l e a n a l y s i s．C o n c l u s i o n㊀T h i sm e t h o dm a y a p p l y t o l a r g e s a m p l e s a n d r a p i d a n a l y s i s．K e y w o r d s:５Ｇh y d r o x y t r y p t a m i n e;㊀p l a s m a;㊀H P L C;㊀m a s s s p e c t r o m e t r y㊀㊀５Ｇ羟色胺(５ＧH T)亦称血清素,是色氨酸衍生出的一种生物胺,被血脑屏障分隔为中枢血清素和外周血清素[１Ｇ２],人体内９０％的５ＧH T存在于消化道黏膜,８％~１０％存于血小板,１％~２％存在于中枢系统中,另有一部分存在于各组织的肥大细胞中[３Ｇ４].由于其广泛的存在而参与多种病理和生理学过程,其含量测定对多种疾病的诊断及治疗具有重要意义[５Ｇ８].目前５ＧH T的检测方法繁多,包括酶联免疫法[９]㊁免疫荧光法[１０]㊁高效液相色谱法[１１]㊁高效液相色谱Ｇ电化学法[１２]㊁高效液相色谱Ｇ荧光法[１３]㊁高效液相色谱Ｇ程序波长紫外检测法[１４]㊁超高效液相色谱Ｇ串联质谱法(H P L CＧM S/M S)[１５]等.本文建立了一种快速㊁准确的H P L CＧM S/M S直接测定血浆中５ＧH T,前处理简单,分析时间短,分析方法稳定,检测限低,适合临床及科研快速检测的需求.１㊀材料与方法１．１㊀仪器与试剂１．１．１㊀仪器㊀A B５５００Q T R A P型三重四极杆质谱仪,配有电喷雾离子源(E S I)和A n a l y s t１．５数据处理软件(美国A B公司),L CＧ２０A型高效液相色谱议(日本岛津公司),V o r t e xＧG e n i u s２型涡旋混匀器(美国S c i e n t i f i c I n d u s t r i e s公司),P I C O１７型离心机(美国７３７２国际检验医学杂志２０１８年１１月第３９卷第２２期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０１８,V o l．３９,N o．２２作者简介:张杰,女,主管药师,主要从事体内药物分析方面的研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:j i a n g y i１０２５＠y a h o o．c o m.本文引用格式:张杰,郭海洋,曹海微,等．高效液相色谱Ｇ串联质谱法检测人血浆中５Ｇ羟色胺[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(２２):２７３７Ｇ２７４０．T h e r m o公司);K QＧ１０００K D B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),M i l l i Q D i r e c tＧQ１６超纯水仪(美国M i l l i Q公司),D E N V E R T B２１５D分析天平(美国丹佛公司).１．１．２㊀试剂㊀５ＧH T(中国药品生物制品鉴定所,批号:１００６５７Ｇ２００４０１),奥卡西平(中国药品生物制品鉴定所,批号:１１１６５６Ｇ２００４０１),病毒灭活冰冻血浆(吉林省血液中心),甲酸(国药集团化学试剂有限公司,批号２０１７０４１９),乙腈(美国S i g m a公司,批号WX B C５４４１V),实验用水为M i l l iQ超纯水.１．２㊀色谱条件㊀色谱柱:A g i l e n tZ O R B A X E c l i p s e X D BＧC８(４．６m mˑ１５０m m,５μm);柱温:４０ħ;进样量:１０．０μL;流动相:A为０．２％甲酸水溶液,B为乙腈,流动相梯度组成和流速如表１所示.表１㊀㊀流动相梯度组成和流速时间(m i n)流速(m L/m i n)A(０．２％甲酸水)B(乙腈)０．１１．０９０１０１．５１．０９０１０２．１１．０５．０９５４．０１．０５．０９５４．１１．０９０１０８．０１．０９０１０１．３㊀质谱条件㊀质谱分析采用电喷雾离子源(E S I);使用气体均为高纯氮气,纯度ȡ９９．９９％;扫描方式为正离子扫描;检测方式为多反应监测(M R M);电喷雾电压(I S):５５００V;离子源温度(T E M):５００ħ;雾化气压力(G a s１):３４５k P a;辅助气压力(G a s２):３４５k P a;气帘气(C U R):２０７k P a;碰撞气强度:中等;入口电压(E P):１０V;碰撞池出口电压(C X P):１３．０V; M R M监测离子对㊁去簇电压(D P)及碰撞能量(C E)见表２.表２㊀㊀５ＧH T和奥卡西平的质谱参数注化合物母离子m/z子离子m/z D P(V)C E(e V)５ＧH T１７７１６０８０２０奥卡西平２５３２０８７０２６１．４㊀标准溶液的制备㊀精密称取５ＧH T及奥卡西平对照品１０m g于１０m L容量瓶中,加乙腈Ｇ水(１/１,v/ v)溶解并稀释至刻度,摇匀定容,配置成１m g/m L的５ＧH T和奥卡西平储备液.分别取适量１m g/m L的５ＧH T和奥卡西平储备液用乙腈Ｇ水(１/１,v/v)稀释成浓度分别为１０μg/m L和１００n g/m L的工作液.分别取适量的工作液,用空白血浆稀释至标准曲线所需的浓度,配制成相当于５ＧH T血浆浓度分别为１０．０㊁２０．０㊁５０．０㊁１００．０㊁２００．０㊁５００．０㊁８００．０n g/m L的标准系列溶液;分别取适量工作液,用空白血浆稀释至质控样本所需的浓度,配制成相当于５ＧH T血浆浓度分别为２０．０㊁１００．０㊁５００．０n g/m L的低㊁中㊁高质控溶液.１．５㊀血浆样本的处理㊀取若干１．５m LE P管,编号后精密吸取３０μL待测血浆样本,加入３０μL１００n g/ m L奥卡西平工溶液,加入１m L乙腈,涡旋混合１m i n,室温放置１０m i n,以１３３００r/m i n转速离心５m i n;取１００μL上清液于另一干净编号的E P管中,加入４００μL０．２％甲酸水Ｇ乙腈(１０/９０,v/v),涡混３０s,吸取１０μL进行H P L CＧM S/M S分析.１．６㊀基质效应㊀取３０μL空白血浆,除不加内标外,按 １．５血浆样本的处理 项下操作,取全部上清液,加入低㊁中㊁高浓度质控血浆溶液(５ＧH T的质量浓度分别为２０．０㊁１００．０㊁５００．０n g/m L)和内标溶液,按 １．５血浆样本的处理 项下操作,每一浓度进行６个样本分析,获得相应的平均峰面积(A).同时另取３０μL 水代替空白血浆,同样方法操作,获得相应的平均峰面积(B),以２种处理方法的平均峰面积比值计算待测物的基质效应,计算公式为B/Aˑ１００％.每一浓度基质效应相对标准偏差(R S D)ɤ１５％,可忽略基质效应影响.１．７㊀提取回收率㊀采用人空白血浆配制低㊁中㊁高３种浓度(５ＧH T加入浓度分别为２０．０㊁１００．０㊁５００．０n g/m L)的样品,按 １．５血浆样本的处理 项下操作,每一浓度进行６个样本分析.同时另取人空白血浆３０μL,除不加内标溶液外,按 １．５血浆样本的处理 项下操作,取全部上清液加入相应浓度对照溶液(５ＧH T加入浓度分别为２０㊁１００㊁５００n g/m L)和内标溶液,按 １．５ 项下操作,每一浓度进行６个样本分析,以每一浓度２种处理方法的峰面积比值计算提取回收率.１．８㊀精密度和准确度㊀按 １．４标准溶液的制备 项下的方法配制低㊁中㊁高３个浓度的质控(Q C)样品(５ＧH T的血浆浓度分别为２０．０㊁１００．０㊁５００．０n g/m L),按 １．５血浆样本的处理 项下操作,每一浓度进行６个样本分析,分别在３d内测试,根据当日标准曲线计算Q C样品的测得浓度,根据Q C样品结果计算本法的日内㊁日间精密度与准确度.１．９㊀稳定性㊀本研究考察了５ＧH T血浆样本室温放置３h㊁经处理后室温放置２４h㊁５ＧH T血浆样品经历３次冷冻Ｇ解冻循环,以及－８０ħ冷冻放置５０d的稳定性.按 １．４标准溶液的制备 项下的方法配制低㊁高２个浓度的样品(５ＧH T的血浆浓度分别为２０．０㊁５００．０n g/m L),按 １．５血浆样本的处理 项下操作,每一浓度进行３个样本分析.２㊀结㊀㊀果２．１㊀方法的特异性㊀５ＧH T和奥卡西平在正离子模式下,主要生成m/z１７７和m/z２５３的[M＋H]＋峰.选择性对[M＋H]＋峰进行二级质谱扫描分析,最终要选择噪音干扰小,丰度比相对较高产物离子,因此８３７２ 国际检验医学杂志２０１８年１１月第３９卷第２２期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０１８,V o l．３９,N o．２２５ＧH T 和奥卡西平的产物离子分别为m /z １６０和m /z２０８.在此离子对的基础上,分别得到空白血浆㊁空白血浆添加标准溶液以及人的血浆样本的色谱图,见图１.５ＧH T 及奥卡西平的保留时间分别为１．９１㊁３．７７m i n ,峰形良好,无内源性物质干扰.㊀㊀注:A 为空白血样;B 为空白血浆加５ＧH 对照品(１００n g /m L )和内标(１００n g/m L );C 为人血浆样品图１㊀㊀人血浆中５ＧH T 及奥卡西平的典型色谱图２．２㊀标准曲线及定量下限㊀得到１０．０㊁２０．０㊁５０．０㊁１００．０㊁２００．０㊁５００．０㊁８００．０n g /m L 的系列浓度血浆溶液的５ＧH T 及内标的峰面积,以血浆中５ＧH T 的浓度为横坐标(X ),待测物质峰与内标峰面积比值为纵坐标(Y ),用加权(w ＝１/x ２)最小二乘法进行回归运算,得到回归方程和标准曲线的相关系数为:Y ＝０．００４１３X ＋０．００５２７,r ＝０．９９９６.结果表明血浆中５ＧH T 浓度在１０．０~８００．０n g /m L 范围内,线性关系良好,定量下限为１０．０n g/m L ,检测的精确度高.２．３㊀基质效应㊀５ＧH T 在低㊁中㊁高３个浓度的基质效应分别为９６．５％㊁９９．０％和１０２．０％,相对标准差分别为４．８％㊁３．５％和１．９％.内标奥卡西平的基质效应为９３．７％,相对标准差为６．４％.结果表明,待测物及其内标在本实验选择的色谱和质谱条件下,可忽略基质效应的影响.２．４㊀回收率㊀采用沉淀蛋白法处理血浆样品,５ＧH T 在低㊁中㊁高３个浓度的回收率分别为８９．５％㊁９７．３％和１０１．２％.提取回收率均大于８５％,具有较好的提取回收率.２．５㊀准确度与精密度㊀根据Q C 样品计算本实验的准确度和精密度,结果表明,待测物Q C 样品测试结果均符合生物样品测定有关要求,具体数据见表３.每一浓度水平的Q C 样品的日内R S D 小于３．６％,日间R S D 小于２．５％,相对误差(R E )在０．５~８．０％.２．６㊀稳定性㊀高㊁低２个浓度的样本在室温放置３h ㊁处理后室温放置２４h ㊁３次解冻循环,以及－８０ħ冰箱储存的５０d 的长期放置等条件下的稳定性测定结果表明,５ＧH T 血浆样品在上述条件下均稳定,具体数据见表４.表３㊀㊀不同血浆浓度５ＧH T 的准确度和精密度项目２０μg /m L １００μg /m L ５００μg /m L 平均值(μg /m L )２０．１１０８．０５１０．０S D２．３７．０２８．４R E (％)０．５８．０２．０日内R S D (％)３．６３．６４．２日间R S D (％)１０．３２．５５．２表４㊀㊀血浆中５ＧH T 在不同存储条件下的稳定性(n ＝３)５ＧH T 血浆浓度(n g /m L )室温放置３h２０．０５００．０处理放置２４h２０．０５００．０３次冷冻循环２０．０５００．０－８０ħ放置５０d２０．０５００．０平均值(μg /m L )１９．４４８９．７２０．６４９０．１２０．２５１０．３２０．１４９２．２S D２．４２９．１３．０２７．４１．９２８．１２．８３０．３R E (％)－３．０－２．１３．０－２．０１．０２．１０．５－１．６R S D (％)３．９２．１６．７４．４２．５６．９７．４３．６３㊀讨㊀㊀论㊀㊀检测５ＧH T 的需求很多,样品种类包括血液(血浆㊁血小板)㊁脑组织㊁胃肠道组织㊁肾上腺组织等,开发出的检测方法也很多,但这些方法大多需要衍生化或浓缩样本,需要进行复杂的前处理和较长的分析时间,本实验采用沉淀蛋白前处理方式,避免了液液萃取和柱前衍生化的复杂步骤,分析时间短,适合临床大样本的快速检测需求.笔者对色谱条件进行了优化,５ＧH T 是高极性分子,尝试使用W a t e r s 公司的H i l i c 亲水性色谱柱进行分析,但与谢天发等[１６]研究结果不同的是,在此色谱柱上不能获得良好的峰形用于定量,因此本实验转而采用传统的C ８色谱柱,优化梯度洗脱,避开了柱前沿的出峰时间而获得良好的保留及优异的峰形用于准确定量.在流动相的选择上,可应用离子对试剂来调整５ＧH T 的保留时间,但离子对试剂容易带来色谱柱平衡缓慢㊁峰形较差㊁流动相配置繁琐等弊端,而且离子对试剂抑制质谱的负离子响应信号而影响仪器的后续检测.笔者通过优化梯度洗脱获得了良好的峰形.采用０．２％甲酸水作为水相,较０．１％的甲酸水更９３７２ 国际检验医学杂志２０１８年１１月第３９卷第２２期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r ２０１８,V o l ．３９,N o ．２２能改善峰形.当沉淀蛋白后直接进样时,标准曲线相关系数低于０．９９,怀疑为待分析物与内标的基质效应不同造成,故使用初始流动相稀释处理后的样本,以降低基质效应的影响,当稀释倍数为５倍时可达到合适的信噪比,并且标准曲线相关系数良好.本方法根据生物样本分析的要求进行了周密的验证,结果显示本方法灵敏,准确,可进行可靠的高敏感性和高选择性的分析.４㊀结㊀㊀论㊀㊀本实验利用高效液相色谱Ｇ三重四极杆质谱联用技术的优势,对检测的５ＧH T的质谱参数进行了优化,建立了一种简单㊁高效㊁准确的直接检测５ＧH T的方法,经方法学验证可以满足生物样本定量检测的要求,适用于临床及科研样本的快速检测.参考文献[１]G AMO H S,H I S A H,Y AMAMO T O R．５Ｇh y d r o x y t rＧy p t a m i n e r e c e p t o r s a s t a r g e t s f o rd r u g t h e r a p i e so fv a sＧc u l a rＧr e l a t e dd i 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国际检验医学杂志２０１８年１１月第３９卷第２２期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０１８,V o l．３９,N o．２２。

2021年1月January 2021Chinese Journal of ChromatographyVol.39 No.169〜76青年编委专辑（上）•研究论文DOI ： 10.3724/SP.J. 1123.2020.07033液液提取-固相萃取-高效液相色谱-串联质谱测定人体血液中16种有机磷酸酯侯敏敏W ,史亚利,蔡亚岐W（1.中国科学院生态环境研究中心，环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京100083； 2.中国科学院大学，北京100049）摘要:人体体液中有机磷酸酯（OPEs ）浓度的测定对于了解人体OPEs 的暴露水平以及评估人体健康风险具有重要意义。

然而，目前的研究大多数集中于尿液中OPEs 代谢物含量的分析测定,将其作为人体OPEs 暴露的生物标 志物，而对人体血液中OPEs 的分析研究较少，仅有的少量研究涉及的OPEs 种类有限。

该研究在优化前处理过程 （固相萃取,SPE ）和色谱分离的基础上，建立了人体血液中16种OPEs 的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS- MS ）测定方法。

血液样品经过乙睛摇床萃取后，经ENVI-18 SPE 小柱净化，然后采用Acquity UPLC BEH C18色谱 柱,以甲醇/5 mmol/L 的乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱对目标物进行分离，最后进行LC-MS/MS 测定。

质 谱分析采用电喷雾正离子模式电离，多重反应监测模式测定，内标法定量。

在优化的检测条件下,16种OPEs 的检 出限为0. 003 8~0. 882 ng/mL 。

除磷酸三甲酯（TMP ）外，其余15种OPEs 在3个浓度水平的血液基质加标回收率 为53. 1% -126%，相对标准偏差为0. 15% - 12. 6%。

样品的基质效应检测发现,4种OPEs 存在明显的基质抑制，选 用合适的同位素内标进行定量，可以部分消除基质影响。

该方法样品前处理简单，灵敏度高,适用于人体血液样品中OPEs 阻燃剂的测定。

执业药师《药学专业知识一》考试真题及答案1.含有喹啉酮不母核结构的药物是A.氨苄西林B.环丙沙星C.尼群地平D.格列本脲E.阿昔洛韦答案：B2.临床上药物可以配伍使用或联合使用，若使用不当，可能出现配伍禁忌，下列药物配伍或联合使用中，不合理的是A.磺胺甲口恶唑与甲氧苄啶联合应用B.地西泮注射液与0.9%氯化钠注射液混合滴注C.硫酸亚铁片与维生素C片同时服用D.阿莫西林与克拉维酸联合应用E.氨苄西林溶于5%葡萄糖注射液后在4小时内滴注答案：B3.盐酸氯丙嗪注射液与异戊巴比妥钠注射液混合后产生沉淀的原因是A.水解B.pH值的变化C.还原D.氧化E.聚合答案：B4.新药IV期临床试验的目的是A.在健康志原者中检验受试药的安全性B.在患者中检验受试药的不良反应发生情况C.在患者中进行受试药的初步药效学评价D.扩大试验，在300例患者中评价受试药的有效性、安全性、利益与风险E.受试新药上市后在社会人群中继续进行安全性和有效性评价答案：E5.暂缺6.暂缺7.人体胃液约0.9-1.5，下面最易吸收的药物是A.奎宁(弱碱pka8.0)B.卡那霉素(弱碱pka7.2)C.地西泮(弱碱pka 3.4 )D.苯巴比妥(弱酸7.4)E.阿司匹林(弱酸 3.5)答案：E8.属于药物代谢第Ⅱ相反应的是A.氧化B.羟基化C.水解D.还原E.乙酰化答案：E9.适宜作片剂崩解剂的是A.微晶纤维素B.甘露醇C.羧甲基淀粉钠D.糊精E.******纤维素答案：C10.关于非无菌液体制剂特点的说法，错误的是A.分散度大，吸收慢B.给药途径大，可内服也可外用C.易引起药物的化学降解D.携带运输不方便E.易霉变常需加入防腐剂答案：A11.上课用于静脉注射脂肪乳的乳化剂是A.阿拉伯胶B.西黄蓍胶C.卵磷脂D.脂防酸山梨坦E.十二烷基硫酸钠答案：C12.为提高难溶液药物的深解度常需要使用潜溶剂，不能与水形成潜溶剂的物质是(胆固醇)A.乙醇B.丙乙醇C.胆固醇D.聚乙二醇E.甘油答案：C13.关于缓释和控释制剂特点说法错误，A.减少给药次数，尤其是需要长期用药的慢病患者，B.血药浓度平稳，可降低药物毒副作用C.可提高治疗效果减少用药总量，D.临床用药，剂量方便调整，E.肝脏首过效应大，生物利用度不如普通制剂答案：D14.药物经皮渗透速率与其理化性有关，透皮速率相对较大的A.熔点高药物B.离子型C.脂溶性大D.分子体积大E.分子极性高答案：C15.固体分散体中，药物与载体形成低共溶混合物药物的分散状态是A.分子状态B.胶态C.分子复合物D.微晶态E.无定形答案：D16.以下不存在吸收过程的给药方式是，A.肌肉注射B.皮下注射C.椎管给药D皮内注射E，静脉注射答案：E17.大部份的药物在胃肠道中最主要的吸引部位是A.胃B.小肠C.盲肠D.结肠E.直肠答案：B18.铁剂治疗缺铁性贫血的作用机制是A.影响酶的活性B.影响核酸代谢C.补充体内物质D.影响机体免疫功能E.影响细胞环境答案：C19.属于对因治疗的药物作用是A.硝苯地平降血压B.对乙酰氨基酚降低发热体温C.硝酸甘油缓解心绞痛发作D.聚乙二醇4000治疗便秘E.环丙沙星治疗肠道感染答案：E20.呋塞米氯噻嗪环戊噻嗪与氢氯噻嗪的效价强度与效能比较见下图，对这四种利尿药的效能和效价强度分析，错误的是1.口服卡马西平的癫痫病患者同时口服避孕药可能会造成避孕失败，其原因是A.联合用药易导致用药者对避孕药产生耐药性B.联合用药导致避孕药首过消除发生改变C.卡马西平和避孕药互相竞争血浆蛋白结合部位D.卡马西平为肝药酶诱导药，加快避孕药的代谢E.卡马西平为肝药酶抑制药，减慢避孕药的代谢答案：D22.关于药物量效关系的说法，错误的是(奖药物的剂量或浓度改用对数值作图，则量-相应线为直方双曲线)A.量效关系是指在一定剂量范围内，药物的剂量与效应具有相关性B.量效关系可用量-效曲线或浓度-效应曲线表示C.将药物的剂量或浓度改用对数值作图，则量-相应线为直方双曲线D.在动物试验中，量-效曲线以给药剂量为横坐标E.在离体试验中，量-效曲线以药物浓度为横坐23.下列给药途径中，产生效应最快的是A.口服给药B.经皮给药C.吸入给药D.肌内注射E.皮下注射答案：C24.依据新分类方法，药品不良反应按不同反应的英文名称首字母分为A~H和U九类。