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摘要】目的比较耐顺铂的人肺腺癌细胞(A549DDP)凋亡相关基因的表达与亲代A549细胞的差异，探讨细胞凋亡与细胞耐药的发生机制。
方法应用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片，检测A549和A549DDP细胞相关凋亡基因表达水平。
结果A549DDP细胞表达BAD、BAG3、BFAR、CARD8、CASP6、GADD45、TNFRSF14、CD70、TRADD、TRAF1、TRAF3基因较亲代A549细胞显著增高(P<0.05),二者比值上调2倍以上。
结论肺腺癌A549DDP细胞过表达上述凋亡相关基因，可能是导致细胞凋亡受抑、细胞耐药的主要原因。
【关键词】肺癌;凋亡基因;细胞凋亡;耐药细胞耐药是导致化疗失败的主要原因。
研究发现耐药的发生与细胞凋亡基因的异常表达密切相关。
采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测细胞凋亡相关基因，具有敏感性高、速度快和重复性好等优点。
目前尚未见以Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测A549细胞凋亡相关基因的报道。
本文采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片检测人肺腺癌亲代细胞与耐顺铂细胞(A549和A549DDP)凋亡相关基因,并对检测结果的临床意义进行初步分析，进一步探讨肿瘤细胞凋亡与耐药的发生机制。
1 对象与方法1.1 对象人肺腺癌亲代A549细胞和耐顺铂的A549DDP细胞(华西医科大学新桥医院呼吸病研究所提供)。
1.2 方法1.2.1 细胞培养人肺腺癌A549与A549DDP细胞,以含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5% CO2条件下培养,每2～3 d传代1次,初始密度为2×105/ml(2 ml/6孔板)。
取对数生长期细胞进行实验。
1.2.2 凋亡基因检测按着Oligo GEArray基因芯片实验操作步骤进行(Oligo GEArray细胞凋亡基因芯片由上海康成生物科技有限公司提供)。
摘要】目的研究肺腺癌细胞株A549及耐药株A549/DDP放射敏感性差异，探讨肺腺癌的耐药性与放射敏感性的关系。
方法对指数生长期的A549、A549/DDP细胞用6 mV 直线加速器分成0、1、2、4、6、8、10、12 Gy 8个剂量点进行放射。
倒置显微镜观察细胞的形态变化，并根据细胞克隆计数，计算SF2，绘制细胞存活曲线。
结果放疗后两种细胞株的细胞形态发生改变,部分细胞死亡、破碎。
A549和A549/DDP细胞株的SF2分别为和。
结论肺腺癌肿瘤细胞产生耐药性后可以使其放射敏感性降低。
【关键词】A549细胞；耐药性；放射敏感性化疗和放疗结合的综合治疗是中晚期肺癌最常见的治疗模式，并多采用有铂类药物的诱导化疗方式，但是文献报道证明多次化疗后可以产生耐药性〔1，2〕。
因此，放化疗如何结合，化疗后的耐药性对放射敏感性有何影响，成为人们关注的问题。
本文对人肺腺癌细胞株A549与耐顺铂细胞株（A549/DDP）放射敏感性的变化进行研究，探讨耐药性对放射敏感性的影响。
1 材料与方法材料1.1.1 细胞株人肺腺癌细胞株A549由黑龙江省肿瘤研究所提供，A549/DDP自湖南省万佰生物有限公司购买。
1.1.2 试剂及药品优级胎牛血清购自中国医学科学院生物工程研究所；DMEM培养液购自(北京索莱宝公司)；胰酶由黑龙江省肿瘤研究所自行配制；二甲基四氮唑蓝（MTT）和二甲基甲砜（DMSO）为Sigma产品；顺铂为科鼎医疗有限公司产品。
1.1.3 仪器倒置显微镜为Olympus（日本产）；苏州市金燕净化设备厂生产的YJ1450B型医用净化工作台；北京医用离心机厂的低速离心机；电热手提式压力蒸汽消毒器为哈尔滨市松花江医疗器械厂生产；血球计数板为丹阳光学仪器厂生产；CO2恒温培养箱为美国REVCO RCO3000T，数码照像机为日本SONY T10。
方法1.2.1 细胞培养将A549细胞、A549/DDP细胞用高糖DMEM培养液培养（含10%的优级胎牛血清、青霉素100 U/ml、链霉素100 μg/ml），放置37℃、5%CO2孵箱中培养。
伊班膦酸对人肺癌细胞株A549生长及其对VEGF表达的影响伊班膦酸（Ibandronate）是一种氮杂稳定化合物，常被用于治疗骨质疏松症。
近年来，研究人员发现伊班膦酸在肿瘤治疗中也有潜在的应用价值。
本文研究伊班膦酸对人肺癌细胞株A549生长及其对VEGF表达的影响。
实验方法：1. 培养人肺癌细胞株A549，将细胞分为对照组和伊班膦酸组。
2. 对伊班膦酸组添加不同浓度的伊班膦酸（0.1μM、1μM、10μM），对照组仅添加等量的PBS缓冲液。
3. 对两组细胞进行培养24、48、72小时，观察细胞生长情况。
4. 对两组细胞进行RT-PCR、Western blot分析，检测VEGF基因和蛋白表达情况。
结果：1. 与对照组相比，伊班膦酸组在24小时后A549细胞的生长有所抑制。
随着时间的推移，伊班膦酸的抑制效果逐渐增强。
2. 伊班膦酸组中，10μM浓度的伊班膦酸对A549细胞生长效果最为显著，同等时间下细胞生长速率为对照组的1/3。
3. 与对照组相比，伊班膦酸组中A549细胞VEGF mRNA和蛋白表达均有所下调，其中以10μM浓度的伊班膦酸效果最为显著。
讨论：VEGF（vascular endothelial growth factor）是一种促进血管生成的蛋白质，与肿瘤生长、侵袭和转移密切相关。
伊班膦酸通过干扰骨髓细胞中的VEGF表达，可以抑制多种肿瘤的生长和转移。
本实验的结果也证实了伊班膦酸对人肺癌细胞株A549生长和VEGF表达的抑制作用。
此外，我们发现伊班膦酸的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性。
因此，我们可以推断，在使用伊班膦酸进行肺癌治疗时，需要选择合适的剂量和用药时间，以取得最佳治疗效果。
结论：伊班膦酸可以抑制人肺癌细胞株A549的生长，并降低VEGF 的表达水平。
这表明伊班膦酸在肺癌治疗中具有潜在的抗肿瘤作用。
但同时，还需要进一步的实验验证和临床研究，确定其最佳用药方案和疗效评估。
肺癌细胞株 A549、H1650、DMS53中整合素α3的表达比较张帆;唐妮娜;刘慧琳;郭琳琅【摘要】目的：比较整合素α3（ITGA3）在三种肺癌细胞株A549（肺腺癌）、H1650（肺泡细胞癌）、DMS53（小细胞肺癌）中的表达。
方法应用基因芯片技术提取A549、H1650、DMS53细胞株的mRNA，反转录为cDNA，以32 P标记cDNA，与整合素基因芯片进行杂交，经放射自显影后读取灰度值，并以基因表达的限制性分析（ RAGE）和流式细胞仪技术进行验证。
结果 ITGA3亚单位在A549、H1650、DMS53细胞株中的表达分别为7．58±1．37、8．10±1．51、2．38±0．20，A549、H1650与 DMS53细胞株比较，P 均＜0．01。
RAGE结果显示，经AvaⅡ酶切后，A549、H1650、DMS53细胞株均出现ITGA3（69 bp），分别为167．0、172．1、44．7，A549、H1650与DMS53细胞株比较，P均＜0．01。
流式细胞仪检测结果显示，ITGA3在A549、H1650、DMS53细胞株中的表达分别为83．62±1．40、90．86±4．78、1．24±0．53，A549、H1650与DMS53细胞株比较，P均＜0．01。
结论 ITGA3在A549和H1650细胞株中的表达上调，高于其在DMS53细胞株中的表达。
【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2015(000)031【总页数】3页(P25-26,27)【关键词】肺肿瘤;肺癌细胞;整合素α3【作者】张帆;唐妮娜;刘慧琳;郭琳琅【作者单位】南方医科大学珠江医院，广州510282;南方医科大学珠江医院，广州510282;南方医科大学珠江医院，广州510282;南方医科大学珠江医院，广州510282【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是全球常见的恶性肿瘤之一。
人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对Survivin的表达调控李伟;陈余清;孙艳;赵成岭;王效静【摘要】Background and purpose: Survivin gene is a unique member of the inhibitor of apoptosis protein (LAP) family. It plays an important role, not only in regulating mitosis but also in inhibiting apoptosis. It is highly expressed in almost all types of human tumors and fetal tissues but rarely detectable in normal adult tissues. High levels of survivin expression have been associated with tumor progression, resistance to radiation and drug treatments and poor survival rates in cancer patients. The current literature contains few reports on the transcriptional regulation of survivin expression in lung cancer. Previous studies have found that there are also 2 putative binding sites for hypoxia-inducible factor- la(HIF- la) in the core promoter region of survivin gene. Survivin promoter-luciferase reporter vectors Pgl3-SVP230-luc have been constructed early. The purpose of this study was to investigate the mechanism of (HIF-la)on transcriptional regulation of survivin in A549 cells by hypoxia. Methods: (l)Double labeling immunofluorescence method was used to detect co-expression of survivin/HIF-lα protein; (2)RT-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot was used to examine the level of survivin Mrna and protein in A549 cells transfected by HIF-lα expression plasmid and HIF-lα siRNA; (3)Luciferase activity was detected in A549 cells following cotransfection with Pgl3-SVP230-luc as well as HIF-la expression plasmid or HIF-lα siRNA to value the transcriptional activity of survivin. (4)Electrophoretic mobilityshift assay (EMS A) was performed to test the nuclear extract of the A549 cells binding to the r-32P labeled probes containing survivin promoter squences. Results: (l)Survivin/HIF-lα proteins c o-expressed in A549 cell; (2)Compared with control groups, the level of survivin Mrna and protein is markedly increased in A549 cells transfected with HIF-lα expression plasmid, but decreased in the HIF-lα siRNA group(P<0.01); (3)The relative activity of Pgl3-SVP230-luc in A549 cells transfected with HIF-lα expression plasmid was 78.84, which was significantly higher than that of both the pcDNA3.0 and the negative control group in the A549 cells (P<0.01), but was significantly lower in the HIF-la siRNA group (P<0.01); (4)DNA-neucleoprotein bands were observed when A549 nuclear extracts incubating with the r-32P labeled -18 bp probe (nucleotides -26 to -9) of survivin core promoter in EMSA assay. The specific bands were competed away by the cold 18 bp probe, but not the mutated cold probe in competition assay. Binding bands exhibited in Super-shift reaction. (5)The proliferation of A549 cells was inhibited after transfection with HIF-la siRNA. Cell apoptosis was significantly increased in HIF-la siRNA group compared to negative control group (P<0.01). Conclusion: The binding of HIF-la to the survivin core promoter (nucleotides-19 to -16 bp in its 5' flanking region) increases transcription and expression of the survivin gene. These observations have significant implications for understanding the part molecular mechanism of survivin transcriptional regulation in lung cancer.%背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切.但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少.课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-1uc,并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 α,HIF-1 α)的潜在位点.本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1 α调控survivin转录的确切机制.方法:(1)运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1 α与survivin的表达；(2)HIF-1α表达质粒和HIF-1α siRNA分别转染A549细胞,30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达；(3)pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1 α表达质粒和HIF-1α siRNA分别共转染A549细胞,测定萤光素酶的表达活性；(4)EMSA分析HIF-1 α与survivin核心启动子结合情况；(5)流式细胞术和MTT法检测细胞凋亡和增殖.结果:(1)HIF-1 α与survivin共表达于A549细胞中；(2)转染HIF-1α表达质粒组survivin mRNA和蛋白表达水平显著上调,转染HIF-1 α siRNA组survivin mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.01)；(3)HIF-1 α表达质粒组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为78.84,显著高于空质粒组及对照组(P＜0.01),HIF-1 α siRNA 组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为28.84,显著低于空质粒组及对照组(P均＜0.01);(4)HIF-1α与survivin核心启动子区转录起始点上游-19～-16 bp序列结合转录激活survivin(5)流式细胞术和MTT检测结果显示,HIF-1 α siRNA组细胞凋亡显著增加,细胞抑制率明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P均＜0.01).结论:缺氧状态下A549细胞中survivin与HIF-1 α存在共表达；HIF-1 α可以通过survivin核心启动子区的结合位点激活survivin转录和表达;靶向HIF-1 α可以诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖,并为survivin的靶向治疗研究提供了进一步的实验基础.【期刊名称】《中国癌症杂志》【年(卷),期】2011(021)006【总页数】8页(P427-434)【关键词】缺氧诱导因子-1α；survivin；转录调节；非小细胞肺癌【作者】李伟;陈余清;孙艳;赵成岭;王效静【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽蚌埠233003;蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽蚌埠233003;蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽蚌埠233003;蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽蚌埠233003;蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽蚌埠233003【正文语种】中文【中图分类】R734.2癌基因的激活和(或)抑癌基因失活导致细胞的增殖异常和凋亡障碍可能是肺癌发生、发展的关键。
A549肺癌细胞株干细胞表面标志的初步研究吴澄;钟丰文;罗列【摘要】目的:研究人肺癌干细胞的表面特征.方法:将肺癌细胞株制成单细胞悬液,接种到96孔板,每孔只有一个细胞,观察每孔细胞的存活,增殖以及分裂情况,将接种后能够持续分裂增殖的肿瘤细胞(实验组)和常规培养的肿瘤细胞(对照组)分别进行CD133细胞免疫组化,比较两组细胞的阳性表达率,将两组细胞按不同浓度梯度接种裸鼠,分析两组细胞的成瘤能力.结果:(1)仅有4.11％的肿瘤细胞具有增殖形成细胞克隆的能力.(2)单细胞体外培养具有增殖能力的细胞CD133阳性率明显高于常规培养的肿瘤细胞.(3)体外能够持续分裂的细胞成瘤能力强于常规培养的肿瘤细胞.结论:CD133可能是人肺癌干细胞的表面标志.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2015(035)004【总页数】3页(P529-531)【关键词】肺癌干细胞;表面标志;细胞免疫组化【作者】吴澄;钟丰文;罗列【作者单位】赣州市人民医院心胸外科,江西赣州 341000;赣州市人民医院心胸外科,江西赣州 341000;赣州市人民医院心胸外科,江西赣州 341000【正文语种】中文【中图分类】R734.2近年研究表明，肿瘤干细胞是肿瘤发生、发展、侵袭、转移及耐药的决定性因素，代表了肿瘤的主要生物学特性［1］。
本研究通过对肺癌细胞株A549的单细胞克隆能力的观察，筛选出能够持续分裂增殖的肿瘤细胞(实验组)，并将实验组和常规培养的肿瘤细胞(对照组)分别进行CD133细胞免疫组化，比较两组细胞的阳性表达率，了解两组细胞在裸鼠中的成瘤能力，初步研究肺癌干细胞的表面标志。
1 材料和方法1．1 材料人肺腺癌细胞株 A549，裸小鼠(BALA/c)，4～6周，体质量 10～20 g，由中山医科大学动物实验中心提供，RPMI 1640培养基，胎牛血清，胰蛋白酶，96孔板，兔抗人CD133单克隆抗体、SABC免疫组化试剂盒(均为武汉博士德)。
谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB
表达的影响
肺腺癌是临床上较为常见的恶性肿瘤之一，因其具有高度的可恶性、易转移等特点而备受关注。
近年来研究发现，谷氨酰胺具有一定的抗肿瘤作用，但其在肺腺癌A549细胞中的作用机
制尚未明确。
本文旨在探讨谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响。
实验方法：取肺腺癌A549细胞，采用不同浓度的谷氨酰胺处理，采用MTT法检测细胞增殖；沉降法检测细胞迁移；ELISA法检测TNF-α表达水平；Western blotting法检测NF-
κB表达水平。
结果发现，谷氨酰胺可以抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移。
当谷氨酰胺处理浓度为0.5mM时，其抑制率分别为35.2%和53.6%。
而治疗组和对照组的TNF-α和NF-κB表达分别为111.05pg/ml、94.23pg/ml 和0.22、0.46。
因此，谷氨酰胺可以
在一定程度上抑制肺腺癌A549细胞的增殖和迁移，同时降低TNF-α和NF-κB的表达水平。
结论：谷氨酰胺具有一定的抗肺腺癌作用，其机制可能主要是通过降低细胞增殖和迁移以及下调TNF-α和NF-κB的表达水
平实现的。
这为临床上肺腺癌的治疗提供了新的思路和方法。
但具体机制仍需要进一步深入研究。
