生化实验血糖的测定-PPT文档
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实验报告
课程名称: 水处理工程实验 指导老师: 胡宏 成绩:__________________
实验名称: 废水可生化性测定实验 类型:________________同组学生姓名: 陈巧丽、林蓓
一、实验目的和要求(必填) 二、实验内容和原理(必填)
三、主要仪器设备(必填) 四、操作方法和实验步骤
五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析(必填)
七、讨论、心得
一、实验目的和要求
根据微生物的降解性能,有机污染物可分为三种类型。第一类是可生物降解的有机污染物,第二类是难生物降解的有机污染物,第三类是不可生物降解的有机污染物。考虑到毒性,第一、第二类有机污染物又可分为四种类型:①能够为微生物所降解,而且对微生物的生理功能无抑制作用的有机污染物;②能够为微生物所降解,但对微生物有毒害作用的有机污染物;③难于为微生物所降解,但对微生物无毒害作用的有机污染物;④难于为微生物所降解,而且对微生物有毒害作用的有机污染物。上述四种类型的有机污染物中,第一类适宜于采用生物处理技术进行处理。第二类经过对微生物作一定时间的驯化,有可能采用生物处理技术进行处理。第三类也有可能采用生物处理技术进行处理,但必须对微生物进行较长时间的诱导驯化。第四类不宜采用生物处理技术进行处理。
本实验通过测定微生物的呼吸耗氧特性来确定某种废水是否具有进行生化处理的可能性。
二、实验内容和原理
微生物降解有机污染物的物质代谢过程中所消耗的氧包括两部分:(1)氧化分解有机物,使其分解为CO2、H2O、NH3(存在含氮有机物时)等为合成新细胞提供能量;(2)供微生物进行内源呼吸,使细胞物质氧化分解。下例可以说明物质代谢过程中的这一关系。
8CH2O+3O2+NH3→C5H7NO2+3CO2+6H2O
3CH2O+3O2→3CO2+3H2O+能量
实验十-血糖的测定
实验十 血糖的测定
血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定,维持在3.9mmol/L~6.1mmol/L之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一,有着双重实际意义:其一,维持稳定的能源供给,满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二,保证机体不因进食致血糖浓度过高,导致糖的丢失。
因此,血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同,大致分三类:氧化还原法 ,缩合法(主要有邻甲苯胺法),酶法(主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法)。下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法
【目的】
1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理,能进行血糖测定的操作。
2. 掌握血糖测定的临床意义。
【原理】
葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase,GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase,POD)作用下,分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物,即 Trinder
反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比,在505nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下:
2H2O2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物POD2H2O2H2O2O2葡萄糖+葡萄糖酸+GOD+
【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计
【试剂】
1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)
称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调节pH至7.0,然后用蒸馏水稀释至1L。
2. 酶试剂
称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L NaOH调pH至7.0,加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存,4℃可稳定3个月。
一、实验目的
1. 了解血糖测定的原理和方法。
2. 掌握分光光度法在血糖测定中的应用。
3. 通过实验操作,提高对血糖测定的实际操作技能。
二、实验原理
血糖测定是临床医学中常用的生化检验项目,主要用于诊断糖尿病及其并发症。分光光度法是一种常用的血糖测定方法,其原理基于葡萄糖在特定波长下与显色剂反应生成有色物质,通过测定该有色物质的吸光度来计算血糖浓度。
实验中,葡萄糖与显色剂在碱性条件下发生氧化还原反应,生成深蓝色复合物。该复合物在特定波长下具有特征吸收峰,其吸光度与葡萄糖浓度成正比。
三、实验仪器与试剂
1. 仪器:分光光度计、微量移液器、离心机、恒温水浴锅等。
2. 试剂:葡萄糖标准溶液、显色剂、磷酸盐缓冲液、葡萄糖酶、无水乙醇等。
四、实验步骤
1. 准备工作:将葡萄糖标准溶液、显色剂、磷酸盐缓冲液等试剂分别配制成所需浓度,备用。
2. 标准曲线绘制:分别取不同浓度的葡萄糖标准溶液,加入显色剂,混匀后放置一定时间,用分光光度计测定其在特定波长下的吸光度,以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3. 样品测定:取待测样品,按照实验步骤加入显色剂,混匀后放置一定时间,用分光光度计测定其在特定波长下的吸光度。
4. 计算血糖浓度:根据样品的吸光度,在标准曲线上查找对应的葡萄糖浓度,即为样品的血糖浓度。
五、实验结果与分析
1. 标准曲线绘制:绘制标准曲线,观察曲线的线性范围和斜率。
2. 样品测定:测定样品的吸光度,根据标准曲线计算血糖浓度。 3. 结果分析:比较实际测定的血糖浓度与临床诊断标准,判断样品是否符合要求。
六、实验总结
通过本次实验,我们了解了血糖测定的原理和方法,掌握了分光光度法在血糖测定中的应用。实验过程中,我们学会了使用分光光度计、微量移液器等仪器,提高了实际操作技能。同时,通过实验结果的分析,我们对血糖测定的准确性和可靠性有了更深入的认识。
七、注意事项
1. 实验过程中,严格控制反应条件,确保实验结果的准确性。
一、实验目的
1. 掌握血糖测定的原理和方法。
2. 了解血糖水平与人体健康的关系。
3. 培养实验操作技能,提高实验数据分析能力。
二、实验原理
血糖是指在血液中葡萄糖的浓度。正常人体血糖水平相对稳定,维持在一定范围内。血糖的测定对于糖尿病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。
葡萄糖氧化酶法是一种测定血糖的常用方法,其原理是葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下,与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下,使色原物质氧化产生颜色变化,根据颜色变化程度,可以计算出样品中的葡萄糖浓度。
三、实验材料
1. 试剂:葡萄糖标准溶液、显色剂、显色剂储备液、反应缓冲液、显色剂工作液、空白试剂、待测血液样品。
2. 仪器:微量移液器、移液管、移液器、酶标仪、试管、水浴锅、吸管、滤纸等。
四、实验步骤
1. 标准曲线绘制
(1)取6支试管,分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml葡萄糖标准溶液,加入0.5ml反应缓冲液。
(2)将各试管充分混匀,置于水浴锅中,恒温30分钟。
(3)取出试管,加入0.5ml显色剂,充分混匀,室温放置10分钟。
(4)以空白试剂为参比,用酶标仪在波长540nm处测定各管吸光度。
(5)以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
2. 待测样品测定
(1)取6支试管,分别加入0.5ml反应缓冲液、0.5ml显色剂、0.5ml待测血液样品。 (2)将各试管充分混匀,置于水浴锅中,恒温30分钟。
(3)取出试管,加入0.5ml显色剂,充分混匀,室温放置10分钟。
(4)以空白试剂为参比,用酶标仪在波长540nm处测定各管吸光度。
(5)根据标准曲线,计算待测样品的血糖浓度。
五、实验结果与分析
1. 标准曲线绘制:根据实验数据绘制标准曲线,线性范围为0-2.5mmol/L。
2. 待测样品测定:根据标准曲线计算,待测样品的血糖浓度为3.8mmol/L。