血痕检验(预实验及种属实验)

实验六血痕的联苯胺试验检验血痕应先作预试验，包括联苯胺试验、酚肽试验、愈创木酯试验、孔雀绿试验、邻联甲苯胺试验，氨基比林试验，鲁米那试验、紫外线浓硫酸试验及纸色谱法等。

血痕预试验的基本原理是血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化酶活性，遇H2O2可使之分解成H2O与[O]，后者可使某些化学物质氧化，形成氧化产物而呈颜色反应。

某些植物汁中也含有某种具有过氧化酶活性的物质，可使预试碱发生阳性反应。

氧化剂也可直接氧化某些化学物质，故预试验阳性只能说明被检斑痕可能是血痕，但不能确证为血痕，阴性可否定血痕。

（一）仪器设备及试剂1. 仪器设备剪刀、凹玻片2. 试剂（1）联苯胺无水酒精饱和液：取联苯胺l克置于棕色瓶内，加20毫升无水酒精，放50℃温箱中2小时助溶，然后降至室温。

此时大部分联苯胺已溶解，上清液即为联苯胺无水酒精饱和液，放冰箱中备用。

（2）冰醋酸（3）3％过氧化氢（二）检材血痕、果汁斑、唾液斑、植物汁斑、高锰酸钾、尿液、痰。

（三）联苯胺试验原理血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化酶活性，能使H2O分解成H2O及[O]，后者使联苯胺氧化成翠兰色的联苯胺兰，反应式见图（四）实验方法1. 剪取或刮取检材少许，置凹玻片孔内或小滤纸片上。

2. 加冰醋酸1滴，然后加联苯胺无水酒精饱和液l滴。

3. 1-2分钟后，若不出现兰色反应，再加3％过氧化氢l滴。

立即出现翠兰色为阳性反应，若不出现为阴性反应。

4. 比较血痕与唾液斑、果汁斑、植物斑、尿液、痰、高锰酸钾等实验结果，并进行讨论。

【注意事项】1、必须严格遵守加试剂的顺序。

2. 本试验方法灵敏，微量检材即够，严禁在检材上直接滴加试剂作反应，以免破坏检材。

3. 取检材时，应防止相互污染。

【思考题】：l、联苯胺试验阳性，是否证明检材含有血?为什么?2、本实验为什么必须严格遵守加试剂的顺序?。

一、实验目的1. 了解血痕检验的基本原理和方法。

2. 掌握血痕检验的操作技能。

3. 培养学生的实验操作能力和分析问题、解决问题的能力。

二、实验原理血痕检验是法医物证学的一个重要组成部分，通过对血痕的检验，可以确定血痕的存在、血型、性别、年龄、死因等，为案件侦破提供重要线索。

血痕检验的基本原理是利用血痕中的蛋白质、酶、核酸等生物大分子在特定条件下与相应试剂发生反应，产生颜色变化或荧光现象，从而判断血痕的存在。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：血痕样本、生理盐水、蒸馏水、碘液、斐林试剂、双缩脲试剂、硝酸银试剂、DNA提取试剂盒等。

2. 实验仪器：显微镜、离心机、电热恒温水浴锅、分光光度计、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 样本采集与处理（1）采集血痕样本，注意避免污染。

（2）将血痕样本用生理盐水清洗，去除杂质。

（3）将清洗后的血痕样本浸泡在蒸馏水中，使血痕溶解。

2. 血痕定性检验（1）蛋白质检验：取少量血痕溶液，加入双缩脲试剂，观察颜色变化。

若出现紫色，则表明血痕中含有蛋白质。

（2）酶检验：取少量血痕溶液，加入斐林试剂，观察颜色变化。

若出现红色，则表明血痕中含有酶。

（3）核酸检验：取少量血痕溶液，加入硝酸银试剂，观察颜色变化。

若出现黑色，则表明血痕中含有核酸。

3. 血痕定量检验（1）DNA提取：按照DNA提取试剂盒说明书进行操作，提取血痕样本中的DNA。

（2）DNA浓度测定：使用分光光度计测定DNA溶液的吸光度值，计算DNA浓度。

（3）血痕含量计算：根据DNA浓度和血痕样本体积，计算血痕含量。

4. 血型检验（1）抗A、抗B试剂：分别加入抗A、抗B试剂，观察血痕溶液颜色变化。

若出现凝集现象，则表明血痕中含有相应的血型抗原。

（2）血型鉴定卡：使用血型鉴定卡进行血型鉴定。

5. 性别检验（1）Y染色体DNA检测：提取血痕样本中的DNA，进行Y染色体特异性PCR扩增，观察扩增产物。

（2）X染色体DNA检测：提取血痕样本中的DNA，进行X染色体特异性PCR扩增，观察扩增产物。

第一章血液及血痕检验第一节概述一、血痕检验1.血痕（bloodstains）血痕是最常见的物证检材，血痕检验是法医物证检验中最常遇到和最重要的检验项目,血痕检验约占法医物证检验的80%左右。

凡在现场（凶杀、斗殴、抢劫、盗窃、碎尸、灾害事故等）、致伤物、衣物（受害人与嫌疑人）上发现的可疑血液或血痕均涉及血痕检验。

（1）血痕的定义: 血液在人体外干燥后所形成的斑迹称为血痕。

（2）血痕存在的启示：①血痕的存在，多数情况下表示有人受伤。

在伤害或凶杀案件的现场以及相关的物品上大多数都会遗留下血痕。

②根据现场血痕的分布、形状等情况，可以推断案件的性质，分析案件属于他杀、自杀或者是因灾害事故。

在凶杀案件中，现场血液或血痕可提示被害人死亡原因、案件发生的时间和地点，可以分析罪犯和被害人之间的相互位置关系，有无搏斗过程等重要线索。

③犯罪嫌疑人身上、可疑凶器和其他物体上沾有被害人的血液，常为重要物证。

因为搏斗或越墙、爬窗、破门时受伤，在现场和被害人的身上可能遗留罪犯的血痕，对案件的侦破极为重要。

（3）血痕的特点：①血液一旦离开人体，就面临外界物理、化学以及生物学因素的作用和影响。

②血液的降解、污染和腐败过程十分迅速。

离开机体的时间越长，血液成分的改变越大。

尤其是大分子的抗原蛋白质和DNA破坏会增加血痕个体识别的难度。

所以血痕的检验方法比临床检验复杂，比新鲜血液检验更加困难。

血痕越陈旧，检验的阳性率越低。

因此及时发现和提取血痕，立即检验极为重要。

二、血痕检验的目的和要求1.血痕检验需要解决以下问题：①提取和送检的可疑斑痕是否是血痕。

②血痕是人血还是动物血。

③确定人血后，检测血液的遗传标记，进行个体识别。

④其他检验，如血痕的性别、出血量、出血时间及出血部位推断等。

2.血痕检验的一般顺序为：①肉眼检查；②预试验；③确证试验；④种属鉴定；⑤遗传标记测定；⑥其他检验等。

三、肉眼检查现场的血痕可因雨淋、日晒而变淡，凶器上或衣服上的血痕又可被洗涤而难以辨认。

第一章血液及血痕检验第一节概述一、血痕检验1.血痕（bloodstains）血痕是最常见的法医物证检材，血痕检验是法医物证检验中最常遇到和最重要的检验项目,血痕检验约占法医物证检验的80%左右。

凡在现场（凶杀、斗殴、抢劫、盗窃、碎尸、灾害事故等）、致伤物、衣物（受害人与嫌疑人）上发现的可疑血液或血痕均涉及血痕检验。

（1）血痕的定义: 血液在人体外干燥后所形成的斑迹称为血痕。

（2）血痕存在的启示：①血痕的存在，多数情况下表示有人受伤。

在伤害或凶杀案件的现场以及相关的物品上大多数都会遗留下血痕。

②根据现场血痕的分布、形状等情况，可以推断案件的性质，分析案件属于他杀、自杀或者灾害事故发生。

在凶杀案件中，现场血液或血痕可提示被害人死亡原因、案件发生的时间和地点，可以分析罪犯和被害人之间的相互位臵关系，有无搏斗过程等重要线索。

③犯罪嫌疑人身上、可疑凶器和其他物体上沾有被害人的血液，常为重要物证。

因为搏斗或越墙、爬窗、破门时受伤，在现场和被害人的身上可能遗留罪犯的血痕，对案件的侦破极为重要。

（3）血痕的特点：①血液一旦离开人体，就面临外界物理、化学以及生物学因素的作用和影响。

②血液的降解、污染和腐败过程十分迅速。

离开机体的时间越长，血液成分的改变越大。

尤其是大分子的抗原蛋白质和DNA破坏会增加血痕个体识别的难度。

所以血痕的检验方法比临床检验复杂，比新鲜血液检验更加困难。

血痕越陈旧，检验的阳性率越低。

因此及时发现和提取血痕，立即检验极为重要。

二、血痕检验的目的和要求1.血痕检验需要解决以下问题：①提取和送检的可疑斑痕是否是血痕。

②血痕是人血还是动物血。

③确定人血后，检测血液的遗传标记，进行个体识别。

④其他检验，如血痕的性别、出血量、出血时间及出血部位推断等。

2.血痕检验的一般顺序为：①肉眼检查；②预试验；③确证试验；④种属鉴定；⑤遗传标记测定；⑥其他检验等。

三、肉眼检查现场的血痕可因雨淋、日晒而变淡，凶器上或衣服上的血痕又可被洗涤而难以辨认。

实验一血痕的预备试验联苯胺试验（一）实验目的：掌握血痕预备试验中联苯胺实验的方法，对实验结果进行讨论分析。

写出实验报告。

（二）实验原理：红细胞中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化酶活性，能使过氧化氢释放出新生态氧，将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝。

（三）实验器具：凹玻片或滤纸（四）实验试剂：联苯胺无水酒精饱和液、冰醋酸、3%过氧化氢（五）实验检材：1血痕、2果汁斑（或其他植物汁斑）、3高锰酸钾、4铁锈、5唾液斑（六）实验步骤：1、剪取或刮取检材少许，置四玻片的凹内或小滤纸片上。

2、加冰醋酸一滴，然后加联苯胺无水酒精饱和液一滴。

3、1-2分钟后，若不出现蓝色反应，再加3%过氧化氢一滴。

若立即出现绿色或蓝色为阳性反应，若无颜色反应为阴性反应。

4、比较血痕与其他各种检材的实验结果并进行讨论。

注意事项：1、本方法灵敏，微量检材即可。

严禁在检材上直接滴加试剂，以免破坏检材。

2、依据实验原理，应严格遵守滴加试剂的顺序。

3、取检材时，应防止互相污染。

新鲜血ABO血型的测定（一）实验目的：1、掌握新鲜血ABO型的测定方法2、掌握测定结果的判定（二）实验器具：凹玻片、试管、试管架、剪、镊、滴管、滤纸（三）实验试剂：抗-A标准血清，抗-B标准血清，生理盐水（四）实验检材：A型红血球，B型红血球，未知血型血液（五）实验方法：1、取凹玻片一片（两凹），分别标记A、B。

2、加抗-A标准血清（效价1：32）滴于A侧凹内，加抗-B标准血清（效价1：32）滴于B侧凹内3、取被检的全血配成5%红细胞悬液（取血1滴加生理盐水9滴）。

在A、B两侧凹内各加1滴，与抗血清混匀，静置于室温中。

4、15分钟后，转动玻片数次，肉眼观察结果，必要时用低倍镜核对。

5注意事项：1、要用已知A、B血型作对照试验。

2、还可以测检材血清中的凝集素。

和前述试验结束相对照。

方法是取被检者血清与已知A、B型红血球分别混合，观察凝集与否。

实验三唾液斑定性实验（一）实验目的：通过实验达到掌握唾液斑证明方法的目的。

⾎痕检验（预实验及种属实验）⼀、⾎痕预试验——联苯胺试验〈⼀〉实验⽬的从提供的6个未知检材中排除不是⾎痕的检材，筛选出可能是⾎的检材，以待进⼀步检验。

〈⼆〉实验原理⾎痕中的⾎红蛋⽩或正铁⾎红素具有过氧化物酶活性，能将过氧化氢分解，释放出新⽣态氧，使⽆⾊的联苯胺氧化成有⾊的联苯胺蓝，本实验是依据此原理检验检材中是否具有氧化物酶作⽤的物质。

〈三〉实验步骤1、分别剪取或刮取各检材少许，按顺序置于滤纸上；或将滤纸折叠，以折⾓擦拭斑痕，展开滤纸。

（检材只需取少量）2、分别往检材上滴加冰醋酸、联苯胺⽆⽔⼄醇饱和液各⼀滴，此时应不出现蓝⾊。

〔若出现蓝⾊能否说明原因？）3、再加3%双氧⽔⼀滴。

（按次序滴加试剂）4、⽴即呈现翠蓝⾊为阳性反应，反之为阴性反应。

5、实验结果记录“⼗”表⽰阳性反应，“⼀”表⽰阴性反应〈四〉结果分析1、哪些检材为阳性反应？是否能判断其⼀定是⾎，为何？有哪些情况还可能出现阳性反应？分析原因？2、阴性结果的检材有哪些？阴性结果是否⼀定能排除是⾎？为何？3、判断此实验的特异性和灵敏度如何？⼆、⾎痕的种属试验（抗⼈Hb⾦标试纸试验）〈⼀〉实验⽬的从预试验阳性的检材中确定出哪些是⼈⾎痕。

〈⼆〉实验原理抗原、抗体具有表⾯结合的特异性，当⼆者⽐例合适时，组成复合物，出现明显的沉淀带。

抗⼈⾎红蛋⽩⾎清，只与⼈的⾎红蛋⽩发⽣反应，因此⽤它与被检⾎痕的⽣理盐⽔浸出液作沉淀反应。

可确证检材是否为⼈⾎。

〈三〉实验步骤1、取预试验阳性的检材少许（约1cm⼤⼩）剪碎，分别置于不同⼩试管中；2、往⼩试管中加⼊适量⽣理盐⽔，约lml，以刚好浸没检材为宜，浸泡时间长短以浸出液出现颜⾊为准。

3、⽤另⼀⽀⼩试管把浸出液倒出，若浸出液浓度太⾼可滴加⽣理盐⽔进⾏释稀。

4、再⽤⼀⽀⼩试管取稀释好的浸出液少许。

5、把试剂条从包装袋中取出，于带有MAX标志⼀端⼊到浸出液中（注意液⾯勿及MAX线）6、5min内观察结果。

7、抗⼈Hb⾦标试纸条上出现两条明显紫红⾊线的为阳性反应，说明该检材上⾎为⼈⾎，若为⼀条紫红⾊线即为阴性反应。