实验诊断学4-常用生化检查分析

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------常见的生化检测方法Western-blot 法 Western Blot 印迹法是把通过电泳分离的蛋白质组分从凝胶转移至一种固相支持物，通过抗体与附着于固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生特异性反应进行检测。

Western Blot 既可以定性，又可以半定量，是初步鉴定靶蛋白表达的最方便也是最通用的方法。

1、试剂耗材的准备：⑴、转膜缓冲液（48 mM Tris-HCl， 39 mM 甘氨酸， 0. 037% SDS， 20%甲醇）：⑵、 10丽春红染液：⑶、 TBS 缓冲液：⑷、 TBST 缓冲液（含 20%Tween20 的 TBS 缓冲液）：⑸、封闭液（含 5%脱脂奶粉的 TBST 缓冲液）：⑹、一抗、二抗及抗体稀释液：参照说明书，以封闭液或 TBST 进行稀释。

⑺、底物显色液 ECL，4℃ 避光保存，现用现配。

⑻、显影液和定影液。

用水稀释 10-20 倍于铝盒中，可多次使用。

室温避光存放。

2、实验步骤：⑴、蛋白样品制备：1 / 15用细胞裂解液抽提蛋白，并测蛋白浓度。

⑵、取 1mg 蛋白进行 SDS-PAGE。

⑶、转膜：（转膜缓冲液4℃预冷备用，冷却装置于-80℃冰箱冷冻备用）。

⑷、将 2 张海绵垫、 2 张滤纸、转膜夹子及玻棒浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。

⑸、戴上手套，剪一张与凝胶尺寸相近的 PVDF 膜（83 mm75 mm），左上角剪一缺口作为标记，浸泡在盛有 20mL 甲醇的平皿中约 15 sec，直到膜变半透明。

用纯水冲洗膜2 次。

浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。

⑹、 SDS-PAGE 结束后，小心地剥下两块凝胶，一块用于考马斯亮兰染色观察电泳情况，另一块浸泡在转膜缓冲液中预平衡。

临床血液学检验Ⅰ、血液一般检验----红细胞系统一、红细胞生成起源二、红细胞及血红蛋白增多1、男：RBC>6.0×1012/L,Hb>170g/L女：RBC>5.5×1012/L,Hb>160g/L2、红细胞及血红蛋白增多的【临床意义】⑴、相对增多：血浆容量减少血液浓缩⑵、尽对增多①继发性：非造血系统疾病，要紧环节是EPO增多代偿性增加：血氧饱和度低，组织缺氧所致生理性：新生儿、高原居民病理性：慢性心肺疾病、异常血红蛋白病非代偿性增加：无血氧饱和度低和组织缺氧肿瘤和肾病所致：肾癌、肝细胞癌、卵巢癌、子宫肌瘤、肾盂积水、多囊肾等②原发性：真性红细胞增多症三、红细胞及血红蛋白减少1、贫血：男<120g/L,女<110g/L贫血程度：轻度：>90g/L中度：90-60g/L重度：60-30g/L极重度：<30g/L2、红细胞及血红蛋白减少的【临床意义】⑴、生理性减少：婴幼儿〔生长发育迅速〕，妊娠中、后期〔血容量增加，血液稀释〕，老人〔骨髓造血减少〕⑵、病理性减少①生成减少骨髓造血障碍造血干细胞异常：再障骨髓浸润：急性白血病等缘故不明或多种机制：慢性感染、肿瘤、肝病、内分泌病等伴发的贫血细胞分化和成熟障碍DNA合成障碍：巨幼细胞贫血血红蛋白合成障碍血红素合成障碍：IDA珠蛋白合成障碍：海洋性贫血②破坏过多红细胞内在缺陷〔遗传性〕：遗球、红细胞酶缺陷的溶贫、珠蛋白生成障碍性贫血、异常血红蛋白病、PNH 红细胞外在缺陷〔获得性〕：免疫性、机械性③失血急性失血慢性失血四、网织红细胞〔reticulocyte〕【定义】网织红细胞是晚幼红细胞到成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，胞质中尚残存多少不等的核糖核酸等嗜碱性物质。

用煌焦油蓝或新亚甲蓝进行活体染色，这些嗜碱性物质被凝聚沉淀并着色，在胞浆中呈现蓝色细颗粒状，颗粒间又有细丝状联缀而构成网状结构，故称网织红细胞。

生化检验各项目参考范围及临床意义目录一、生物化学检验 (2)1.1 血糖测定 (4)1.2 血脂测定 (5)1.3 电解质测定 (6)1.4 血清铁蛋白测定 (7)1.5 肌酐测定 (8)1.6 尿素氮测定 (9)1.7 胆红素测定 (10)二、免疫学检验 (11)2.1 肝功能检查 (12)2.2 乙肝病毒表面抗原测定 (13)2.3 丙肝病毒抗体测定 (14)2.4 甲状腺功能测定 (15)2.5 肿瘤标志物测定 (16)三、分子生物学检验 (17)3.1 基因检测 (18)3.2 药物代谢酶测定 (19)3.3 病毒抗体测定 (20)四、血液学检验 (22)4.1 血细胞计数 (23)4.2 出血时间测定 (24)4.3 血块收缩时间测定 (25)4.4 血小板计数 (25)五、尿液检验 (26)5.1 尿液常规分析 (27)5.2 尿沉渣分析 (29)5.3 尿液生化分析 (30)六、体液检验 (31)6.1 脑脊液检验 (32)6.2 精液检验 (34)6.3 阴道分泌物检验 (35)七、其他生化检验项目 (36)7.1 血清蛋白电泳 (38)7.2 免疫球蛋白测定 (39)7.3 血清酶学测定 (41)一、生物化学检验生物化学检验是指通过检测人体内的生化指标，如酶、蛋白质、糖类、脂质、电解质等，来了解人体生理功能和病理变化的一种检验方法。

生物化学检验在临床诊断中具有重要的参考价值，可以帮助医生判断患者的病情、制定治疗方案以及评估治疗效果。

酶是生物体内催化生化反应的重要物质，其活性水平的异常可能反映出机体的病理变化。

常见的酶类指标包括：谷丙转氨酶(ALT):主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，其水平升高提示肝损伤。

谷草转氨酶(AST):同样主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，AST 也会释放到血液中，其水平升高也提示肝损伤。

乳酸脱氢酶(LDH):存在于各种组织细胞中，其水平升高可能与组织坏死、缺氧、炎症等有关。

第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。

2. 掌握常见生化反应的原理和方法。

3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。

二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。

这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。

常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。

- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。

- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。

- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。

2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。

2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。

- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。

3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。

- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。

4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。

- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。

五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。

- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。

- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。

- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。

2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。

- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。

- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。

- 变形杆菌：吲哚试验阳性。

常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。

以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。

2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。

3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。

一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。

4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。

二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。

各种测定项目的分析参数（analysisparamete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。

生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。

因此必须理解各参数的确切意义。

一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。

1．试验名称试验名称（testcode）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。

2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。

生化检验知识点总结一、生化检验概述生化检验是临床医学中一项重要的检验手段，通过对患者血液、尿液、体液等样本进行化学成分和功能状态的检测，可以帮助医生判断疾病的诊断、疾病的发展和治疗效果，为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。

二、生化检验的临床意义1. 疾病的诊断：生化检验可以帮助医生确定患者是否患有某些疾病，如心脏病、糖尿病、肝病、肾病等。

2. 疾病的分析：通过生化检验可以分析患者的病情，了解疾病的类型、程度以及影响范围，有助于医生制定治疗方案。

3. 治疗效果的评估：生化检验可以评估治疗效果，了解患者是否已经康复，是否需要调整治疗方案。

4. 预防和健康体检：生化检验可以帮助人们及早发现潜在的健康问题，预防疾病的发生。

三、生化检验的常见项目生化检验的常见项目包括血液生化指标、尿液生化指标、体液生化指标等。

1. 血液生化指标（1）血糖：血糖是人体能量的重要来源，血糖的检测可以帮助医生诊断糖尿病、低血糖等疾病。

（2）肝功能：肝功能指标包括谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总胆红素、直接胆红素等，可以反映肝脏的功能状态。

（3）肾功能：肾功能指标包括肌酐、尿素氮、尿酸等，可以反映肾脏的排泄功能和肾小球滤过功能。

（4）血脂：血脂指标包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等，可以反映血液中脂质的代谢状况。

2. 尿液生化指标（1）尿酸：尿酸是人体代谢产生的一种废物，尿酸过高可以导致痛风等疾病。

（2）尿蛋白：尿蛋白可以反映肾小球滤过功能和肾小管重吸收功能的异常。

3. 体液生化指标（1）血清蛋白：血清蛋白是人体液体中的一种重要成分，可以反映患者的蛋白质代谢状态。

（2）电解质：电解质包括钠、钾、氯等，可以反映患者的酸碱平衡和水盐代谢状态。

四、生化检验的常见异常及意义1. 血糖异常：血糖异常可以导致糖尿病、低血糖等疾病，严重影响患者的生活质量和健康状况。

2. 肝功能异常：肝功能异常可以导致肝炎、肝硬化、肝癌等疾病，严重影响患者的生活质量和寿命。

实验诊断学第一章、血液学1、红细胞（RBC）计数（选择）【参考值】成年男子：4.0-5.5成年女子：3.5-4.0新生儿：6.0-7.0临床意义：（1）生理上：新生儿、气压降低、精神因素、剧烈运动、年龄与性别差异、妊娠（2）病理上：1）RBC↓：贫血A.急、慢性RBC丢失过多；B.RBC寿命↓：溶血；C.造血原料不足；D.骨髓造血能力↓。

2）RBC↑：A. 原发性RBC↑：骨髓增生性疾病；B.继发性RBC↑：机体缺氧；C.相对性RBC↑：体内水分丢失。

2、贫血：单位容积循环血液中，红细胞数、血红蛋白量低于参考值底线。

以血红蛋白（Hb）为标准：成年男子HGB＜120g/L，成年女子HGB＜110g/L轻度：90——110（120）中度：60——90重度：30——603、网积红细胞：是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的尚未完全成熟的红细胞，胞质内残存有嗜碱性物质（RNA），是表明骨髓造血能力的指标。

网织红细胞计数（Ret）的临床意义：（1）反应骨髓造血能力：1）增多：表示骨髓造血能力旺盛，溶血性贫血、急性失血。

2）减少：表示骨髓造血能力低下，再生性障碍、白血病。

（2）贫血疗效观察；（3）骨髓移植后监测骨髓造血恢复。

4、红细胞沉降率：简称血沉，是指在一定条件下红细胞沉降的速率，沉降速率和红细胞本身、血浆成分相关，后者为主要因素。

血沉增快的临床意义：1）生理上：老人、儿童、孕妇。

2）病理上：炎症、组织损伤及坏死、恶性肿瘤、高球蛋白血症、贫血、高胆固醇血症。

5、血细胞比容（PCV）：又称“血细胞压积”，是指血细胞在血液中所占容积比值。

临床意义：增高：血液浓缩；减少：贫血。

6、平均红细胞血红蛋白浓度：是指每L血液中平均所含血红蛋白浓度（克数），用g/L表示。

7、粒红比例：是指粒细胞系的百分数÷有核红细胞系的百分数所得的比值，正常值为（2—4）：1。

8、类白血病反应：是指机体因某些刺激产生的类似于白血病的血象反应。

检验科生化学常见检测与分析方法生化学是一门研究生物体内化学变化及相互关系的科学。

在检验科中，生化学是一项重要的技术领域，用于检测和分析样本中的化学成分和反应。

本文将介绍一些生化学常见的检测与分析方法。

一、色谱法色谱法是一种常见的分离和检测技术，广泛应用于生化学领域。

其中，气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）是两种常见的色谱方法。

1. 气相色谱法气相色谱法是将气体或者挥发性液体样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。

该方法适用于分离和检测样品中的挥发性有机化合物和气体。

它的原理是通过样品在高温下蒸发，然后被带动进入色谱柱中。

在色谱柱中，不同物质由于相互作用力的差异而分离，最终通过检测器检测。

气相色谱法常用于环境监测、食品安全等领域。

2. 液相色谱法液相色谱法是将溶解在溶剂中的样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。

该方法适用于分离和检测样品中的非挥发性有机化合物和离子。

它的原理是将样品溶解在流动相中，通过色谱柱的分离作用，不同物质在色谱柱中的停留时间不同，从而实现分离和检测。

液相色谱法常用于药物分析、食品成分分析等领域。

二、光谱法光谱法是一种通过物质对光的吸收、散射或者发射来进行分析的方法。

常见的光谱方法包括紫外可见光谱法（UV-Vis）、红外光谱法（IR）和质谱法（MS）。

1. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种用于测定物质在紫外和可见光波段吸收特性的方法。

该方法适用于分析样品中的有机物、无机物和生物分子等。

紫外可见光谱法的原理是通过物质对紫外或者可见光的吸收来得到样品的吸收光谱，进而推断出样品中的成分和浓度。

紫外可见光谱法在药物分析、环境监测等领域得到广泛应用。

2. 红外光谱法红外光谱法是一种用于测定物质在红外光波段吸收特性的方法。

该方法适用于分析样品中的有机物和无机物等。

红外光谱法的原理是通过物质对红外光的吸收来得到样品的红外光谱，进而推断出样品中的分子结构和化学键的类型。

红外光谱法在药物研发、聚合物材料分析等领域具有重要应用价值。

血液生化检验前言血浆生化的基本原理血浆基本上就是流动的细胞外液，内含用来保持水分的蛋白(通过提高渗透压)，它把大量的物质从吸收部位或生成部位运输到利用部位或分泌部位，除蛋白质外，血浆还含有许多其它物质，这些物质对维持细胞外液正常功能是十分重要的。

因此，对血浆样品的分析可以提供非常重要的信息。

血浆某种物质浓度异常降低，可能是由于进入血浆中的量减少(合成障碍、营养缺乏、吸收不良、缺乏前体等)或血浆中的清除加快(需要量的增加、排泄量的增加、病理性丢失等)造成的。

某种物质浓度异常升高，可能是由于进入血浆的量增加(生成和摄入的增加或从细胞内病理性漏出)或血浆中清除减慢(利用减少、排泄障碍等)造成的。

同时，在有些病例中，不要忘记正常的体液平衡机制干扰的影响。

这里讨论的血浆的成分是临床上最常用的，还有许多其它的可用于特异性诊断的检验项目(如激素化验)，但这些项目不在这里讲述。

血清和血浆当含有抗凝剂的血样被离心后，上清液就是血浆，而血清是未抗凝的血样凝固后的上清液。

一般来说，大多数的生化检验都可用血清或肝素抗凝的血浆进行，除了化验项目本身的需要外，很少有特殊的例外。

但有时肝素抗凝的血比凝固的血被更广泛应用，这是因为它更容易操作的原因，它可以毫不耽误时间地进行离心。

凝固的样品必须在室温下静置2小时，以使凝血形成(这不适于急诊病例)，而且分离也是十分麻烦的。

除非使用(昂贵的)玻璃收集试管，否则样品必须离心两次，这样引起的结果是血清比血浆更容易引起溶血。

血浆的唯一的问题是在电冰箱中贮存时，它会形成微小的凝血块，但这不是主要的问题。

第一节血浆蛋白质测定正常的总蛋白大约为60-80g/L (犬的稍低)。

正常的白蛋白约为25-35g/L (犬和猫的比大动物低)。

血浆含有蛋白的混合物――白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原。

它们除具有营养功能、维持胶体渗透压及酸碱平衡的作用外，还具有酶、抗体、凝血因子及运输营养代谢产物的作用。

白蛋白、大部分α-球蛋白及β-球蛋白是由肝脏合成的，而免疫球蛋白则是由淋巴器官中的淋巴细胞和浆细胞分泌的。