从越橘中提取原花青素的方法与制作流程
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越桔提取物花青素
越桔提取物中花青素（Anthocyanidin）含量测定方法一、仪器与试剂紫外—可见光分光光度计.无水乙醇（A.R.）37%浓盐酸5%盐酸甲醇溶液：取5ml 37%浓酸盐加甲醇至100 ml。
二、样品溶液制备准确称取越桔提取物约10mg，置100ml 圆底烧瓶中，加入60ml 5%的盐酸-甲醇溶液，沸水浴中加热回流60min，放凉转移至100ml 容量瓶中，用5%的盐酸-甲醇溶液定容，再吸取10ml用5%的盐酸-甲醇溶液稀释至100ml作为供试样品溶液。
用1cm比色皿，以5%的盐酸-甲醇溶液做空白在535nm处测其吸光度（A）。
计算公式如下（以飞燕草素计）：A×1000含量（%）＝1020×W式中：A——样品吸光度1020——为飞燕草素的吸收系数W——样品称样量（g）花色甙（Anthocyanosides）含量%＝飞燕草素（delphinidin）%×1.44|Method of determination of anthocyanidin in Bilberry Extract 1、Apparatus and reagentUltra – violet visible spectrophotometerAnhydrous alcohol (A.R)37% hydrochloric acid5% hydrochloric acid-methanol solution: 5ml hydrochloric acid was added into methanol to reach 100 ml2、Preparation of sample solutionAccurately weigh some 10mg Bilberry P.E. into a 100ml Erienmeyer flask, dilute with 60ml 5% hydrochloric acid-methanol solution. The solution was heated and refluxed in boiled water bath for 60mins and transferred to 100ml volumetric flask after its cooling down. 5% hydrochloric acid-methanol solution was used to reach the volume. Extract 10 ml, then use 5% hydrochloric acid-methanol solution to dilute to 100ml, obtain the sample.1cm cell was used. Use 5% hydrochloric acid-methanol solution as blank at 535nm to determine the absorbance capacity of the sample solution.3、Calculate the result by formula (calculated by delphinidin)A×1000Content (%)＝1020×WA: absorbance of sample1020: absorbance coefficient of delphinidinW: weight of sample (g)Anthocyanosides%＝delphinidin%×1.44。
原花青素提取 分离纯化方法的研究进展
3、微波辅助提取法
微波辅助提取法也是一种高效的提取方法。该方法利用微波的加热作用，使 植物材料内部的分子振动，从而破碎细胞，释放出其中的花青素。微波辅助提取 法的优点是加热均匀，且提取时间短。
二、花青素的分离方法
1、柱层析法
柱层析法是一种常用的分离方法，可用于花青素的分离。该方法利用不同物 质在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。常用的柱层析法包括 硅胶柱层析、聚酰胺柱层析等。
参考内容二
花青素是一种广泛存在于植物中的天然色素，具有许多重要的生物学和化学 特性。它们赋予植物丰富多彩的颜色，帮助植物在自然环境中生存和繁衍。近年 来，随着科技的不断进步，花青素的提取、分离和纯化方法也在不断改进和完善。 本次演示将综述花青素提取、分离与纯化方法的研究进展。
一、花青素的提取方法
高速逆流色谱法是一种新型的分离技术，其原理是利用不同物质在两相溶剂 中的分配系数不同来进行分离。该方法具有分离效率高、纯度高、操作简便等优 点，但需要使用大量的有机溶剂，且设备成本较高。
毛细管电泳法则是一种利用电泳原理来进行分离的方法。该方法具有分离效 率高、分析速度快、样品用量少等优点，但难以用于大规模生产。
沉淀法则是利用某些物质在一定条件下能够与原花青素形成共沉淀来进行分 离的方法。该方法具有操作简便、成本低等优点，但难以获得高纯度的产品。
三、展望
随着科学技术的不断发展，相信未来还会有更多新的技术和方法被应用于原 花青素的提取、分离和纯化。例如，超临界流体萃取技术、分子印迹技术等都有 望为原花青素的提取和分离带来新的突破。随着人们对原花青素的药理作用和生 物合成途径等方面的深入研究，也将为原花青素的开发和应用提供更为广阔的前 景。
2、膜分离法
膜分离法是一种高效的纯化方法。该方法利用膜的孔径大小不同，截留不同 分子量的物质，从而实现纯化。常用的膜分离法包括超滤、纳滤等。膜分离法的 优点是纯化效果好、能耗低，但膜的孔径大小难以控制。
原花青素的分离纯化实验方案(修改)
原花青素的分离纯化一、实验目的对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程二、仪器、材料及试剂原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶三、实验步骤大孔树脂的预处理：新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。
将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。
通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。
大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制：1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照）2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。
然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。
将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。
溶剂萃取法提取花青素工艺流程
溶剂萃取法提取花青素工艺流程1.首先将鲜花或植物材料放入提取器中。
First, put fresh flowers or plant materials into the extractor.2.加入适量的有机溶剂。
Add an appropriate amount of organic solvent.3.然后以适当的温度和时间进行浸泡。
Then soak at an appropriate temperature and time.4.使用搅拌器搅拌混合物，以增加提取效率。
Stir the mixture with a stirrer to increase extraction efficiency.5.过滤提取液以去除固体颗粒。
Filter the extract to remove solid particles.6.蒸发溶剂，使溶剂蒸发，留下花青素。
Evaporate the solvent, leaving behind the anthocyanin.7.对残留物进行干燥处理。
Dry the residue.8.最后得到纯净的花青素。
Finally, obtain pure anthocyanin.9.这是溶剂萃取法提取花青素的基本工艺流程。
This is the basic process of solvent extraction of anthocyanins.10.具体工艺流程可以根据不同的材料和要求进行调整。
The specific process can be adjusted according to different materials and requirements.11.溶剂萃取法是一种常用的花青素提取方法。
Solvent extraction is a common method of anthocyanin extraction.12.此方法可有效提取花青素，且操作简便。
蔓越莓中提取原花青素的方法[发明专利]
![蔓越莓中提取原花青素的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/157c40e348649b6648d7c1c708a1284ac950057c.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101239962A [43]公开日2008年8月13日[21]申请号200710037281.8[22]申请日2007.02.07[21]申请号200710037281.8[71]申请人上海华珠生物科技有限公司地址200023上海市斜土路716号3号楼309室[72]发明人史彤 高飞 [74]专利代理机构上海智信专利代理有限公司代理人薛琦[51]Int.CI.C07D 311/62 (2006.01)C07D 311/22 (2006.01)权利要求书 2 页 说明书 9 页 附图 1 页[54]发明名称蔓越莓中提取原花青素的方法[57]摘要本发明涉及一种从蔓越莓中提取原花青素的方法，包括如下步骤：原料处理，制得蔓越莓提取液；再进行脱脂处理；然后采用柱层析法进行分离提纯，即可。
本发明的方法工艺流程简单、生产成本低，易于产业化。
200710037281.8权 利 要 求 书第1/2页1. 一种从蔓越莓中提取原花青素的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)原料处理，制得蔓越莓提取液；(2)将蔓越莓提取液进行脱脂处理；(3)采用柱层析法进行分离提纯，即可。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的原料处理的方式为：将蔓越莓果在溶剂中进行研磨，再去除果肉，再蒸干溶剂，将提取物溶于水即可；或用水稀释蔓越莓浓缩汁即可。
3. 如权利要求2的所述的方法，其特征在于：所述的溶剂含体积百分比70％的丙酮和体积百分比30％的甲醇，以及0.1g/100m l柠檬酸。
4. 如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的蔓越莓果与溶剂的重量体积比为2克∶1毫升～5克∶1毫升。
5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)所述的溶剂脱脂处理的方式为：在蔓越莓提取液中加入脂溶性有机溶剂进行脱脂处理，之后蒸干，得蔓越莓提取物。
6. 如权利要求5的所述的方法，其特征在于：所述的脂溶性有机溶剂为石油醚。
一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法[发明专利]
![一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/94ba923203020740be1e650e52ea551810a6c99d.png)
(10)申请公布号 CN 102807545 A(43)申请公布日 2012.12.05C N 102807545 A*CN102807545A*(21)申请号 201210279401.6(22)申请日 2012.08.08C07D 311/62(2006.01)A61P 29/00(2006.01)(71)申请人宁波杰顺生物科技有限公司地址315806 浙江省宁波市北仑区元宝山路529号(72)发明人季进军(74)专利代理机构余姚德盛专利代理事务所(普通合伙) 33239代理人郑洪成(54)发明名称一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法(57)摘要本发明公开了一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤（1）：取蔓越莓果实，粉碎；和步骤（2）：加入pH 值为1.0-3.0、质量分数为65-85%的乙醇溶液，30-60℃下逆流提取4-6h ，过滤后合并收集滤液，浓缩，得蔓越莓原花青素提取物。
本发明采用逆流提取法，能够更加充分地对原花青素成分进行提取，与现有技术方法相比具有原料处理更加容易、节省溶剂、提取效率高、成本低等特点，适于工业化生产。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书5页 附图4页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 4 页1/1页1.一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）：取蔓越莓果实，粉碎；和步骤（2）：加入PH 值为1.0-3.0、质量分数为65-85%的乙醇溶液，30-60℃下逆流提取4-6h ，过滤后合并收集滤液，浓缩，得蔓越莓原花青素提取物。
2.如上述权利要求1所述一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，加入PH 值为1.0、质量分数为85%乙醇水溶液，在40℃下逆流提取6小时。
权 利 要 求 书CN 102807545 A一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法技术领域[0001] 本发明涉及植物有效成分提取技术，特别涉及一种蔓越莓中原花青素提取物的制备方法。
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本技术涉及植物有效成分的提取，具体地说，本技术提供了一种从越橘中提取原花青素的生产方法，将越橘原料粉碎后经负压空化法提取，超滤有机膜过滤，树脂纯化步骤，得到原花青素制品。
本技术所述方法提高了原花青素的收率，减少对环境的污染，并有利于工厂生产的进行和生产成本的降低。
权利要求书1.一种从越橘中提取原花青素的方法，其特征在于，包含如下步骤：（1）粉碎：将越橘洗净、干燥、粉碎、过筛，得到越橘粉末；（2）提取：将越橘粉末及提取溶剂加入负压空化设备，料液比为1:4～1:6，进行负压空化提取，过滤得到提取液；其中，提取溶剂为乙醇-水混合物，乙醇与水的体积比为6:4～8:2，压力为-0.08MPa～-0.06MPa，提取次数2～3次，提取时间30～60min，提取温度为25～40℃；（3）膜分离：将步骤2）得到的提取液经超滤有机膜截留，得到透过液；（4）树脂纯化：将步骤3）得到的透过液上预处理好的大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至无糖，再用5～10倍柱体积、质量浓度为20～50%的乙醇水溶液洗脱，得到洗脱液；浓缩洗脱液并干燥，得到原花青素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）取越橘洗净、60℃真空干燥，用机械粉碎法进行粉碎，过80目筛。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中越橘粉末与提取溶剂的料液比为1:5，提取溶剂中乙醇与水的体积比为3:2，压力为-0.08MPa，提取2次，提取时间30min，提取温度为40℃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中先经截留分子量为500～1000的超滤有机膜截留，收集截留液，弃透过液，收集到的截留液再经截留分子量为50000～100000的超滤有机膜截留，得到透过液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中大孔吸附树脂是AB-8、XAD-7、XAD-10或D101。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中洗脱液经浓缩后，冷冻干燥或喷雾干燥，得到原花青素制品。
说明书一种从越橘中提取原花青素的方法技术领域本技术涉及植物有效成分的提取，具体地说，涉及一种从越橘中提取原花青素的方法。
背景技术越橘（Vacciniumspp），又名温普、红豆（黑龙江）、牙疙瘩（大兴安岭），是杜鹃花科的落叶灌木植物，有“北国红豆”赞誉，原产北美，现广泛分布在北半球从北极到热带高山地区。
越橘有130种以上，主要有兔眼越橘、狭叶越橘、澳洲越橘、蔓越橘等。
越橘果实近圆形，直径多为0.5-2cm，蓝黑或深红色。
越橘主要功效有：防止血管破裂，也被誉为毛细血管的修理工；保护眼睛；防癌变；对慢性乙肝也有改善作用等。
对越橘榨汁，糖伴，做包子都是主要的食用方法。
越橘果实含有丰富营养，包括花色苷、果胶、单宁、熊果苷、原花青素、C族和B族维生素等多种成分，其中生物活性成分主要是花色苷。
原花青素，英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins（OPC），是一大类多酚类化合物的总称，由儿茶素及表儿茶素没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8连接而成的不同聚合度的混合物。
原花青素的水溶性好，极易被机体吸收，生物利用度高达90%以上，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂和自由基清除剂，其在体内抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍。
原花青素还具有对心血管系统的作用、抗衰老、降血压、降血糖、抗肿瘤、抗炎症、抗菌、抗病毒等作用。
国内外关于原花青素生产技术的研究报告很多。
常见提取原花青素的方法主要有溶剂提取法、微波提取法、超声提取法和超临界二氧化碳萃取法等。
戴安娜天然食品有限公司申请的中国专利公开号为CN10155423A的技术专利“美国蔓越橘提取物及其用途”，采用逆流提取法提取原花青素。
该方法应用到亚硫酸盐、焦亚硫酸盐和乙醛或乙酸乙酯等物质，存在安全隐患大、环境污染严重、腐蚀设备、溶剂残留难控制等问题，且原花青素的含量只达到15%。
上海华珠生物科技有限公司申请的中国专利公开号为CN101239962A的技术专利“蔓越莓中提取原花青素的方法”，首先进行原料处理，在进行脱脂处理，然后采用凝胶柱层析法进行分离提纯得到80%原花青素提取物。
该方法应用到丙酮、石油醚等易燃易爆有毒的试剂，安全隐患大，对环境污染严重，溶剂残留控制难；凝胶柱层析法分辨率不高，分离操作慢；并且该方法只是实验室的小型试验，难以实现大规模工业化生产。
宝鸡市虹源生物科技有限公司申请的中国专利公开号为CN101999648A 的技术专利“蔓越橘果实中花色苷及原花青素成分的提取方法”，经过果实破碎，生物酶酶解后，在pH值1.0-5.5条件下水浸提，残渣再进行醇提萃取，合并，再进行大孔树脂纯化，得到含花色苷和原花青素类成分的混合物。
该方法中使用到磷酸调pH，对环境污染严重；得到的产品是花色苷和原花青素的混合物，原花青素含量低；并且该方法只是实验室的小型试验，难以实现大规模工业化生产。
技术内容为了解决现有技术中存在的问题，本技术的目的是提供一种从越橘中提取原花青素的新方法，提高原花青素的收率，减少对环境的污染，并有利于工厂生产的进行和生产成本的降低。
为了实现本技术目的，本技术提供了一种从越橘中提取原花青素的方法，包含如下步骤：（1）粉碎：将越橘洗净、干燥、粉碎、过筛，得到越橘粉末；（2）提取：将越橘粉末及提取溶剂加入负压空化设备，料液比为1:4～1:6，进行负压空化提取，过滤得到提取液；其中，提取溶剂为乙醇-水混合物，乙醇与水的体积比为6:4～8:2，压力为-0.08MPa～-0.06MPa，提取次数2～3次，提取时间30～60min，提取温度为25～40℃；（3）膜分离：，将步骤2）得到的提取液经超滤有机膜截留，得到透过液；（4）树脂纯化：将步骤3）得到的透过液上预处理好的大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至无糖，再用5～10倍柱体积、质量浓度为20～50%的乙醇水溶液洗脱，得到洗脱液；浓缩洗脱液并干燥，得到原花青素。
进一步地，步骤（1）中取越橘洗净、60℃真空干燥，用机械粉碎法进行粉碎，过80目筛。
步骤（2）中越橘粉末与提取溶剂的料液比为1:5，提取溶剂中乙醇与水的体积比为3:2，压力为-0.08MPa，提取2次，提取时间30min，提取温度为40℃。
步骤（3）中先经截留分子量为500～1000的超滤有机膜截留，收集截留液，弃透过液，收集到的截留液再经截留分子量为50000～100000的超滤有机膜截留，得到透过液。
步骤（4）中大孔吸附树脂是AB-8、XAD-7、XAD-10或D101。
步骤（4）中洗脱液经浓缩后，冷冻干燥或喷雾干燥，得到原花青素制品。
本技术的有益效果在于：1、负压空化提取技术是利用负压空化气泡产生强烈的空化效果和机械振动，造成样品颗粒细胞壁快速破裂，加速了胞内物质向介质释放、扩散和溶解，促进提取过程。
具有提取率高、设备简单、易于操作的特点，适合工业化生产。
2、有机超滤膜兼有纯化和浓缩功效，系统回收率高，所得产品品质优良，可实现物料的高效分离、纯化及高倍数的浓缩；运行压力低、能耗低、易控制，占地小，没有二次污染，减少了对环境的污染，工艺化程度高。
3、整个工艺物毒性试剂只用到乙醇，产品质量安全，可直接用于食品药品的生产。
4、低毒环保经济高效的技术路线：本技术采取的是一种绿色环保经济的技术路线，该路线中采用的提取，浓缩，纯化装置等生产设备均可采用密闭的体系，操作的过程中，能最大限度的避免操作人员接触到试剂，有效地保障了他们的健康。
该方法中采用的溶剂能循环使用，能降低物料损失，提高产品得率。
本技术一旦扩大生产，则能大大地推动我国越橘产业链的发展，与我国可持续发展的模式相呼应，有良好的社会效益。
5、该工艺是根据从越橘中提取原花青素的实际生产情况出发，通过大量的实践摸索，克服了诸多难点，使得产品质量得到有效的提升，而且所用生产设备均为常规设备，不需要对设备有新的要求，更有利于工厂生产的进行和生产成本的降低。
具体实施方式以下实施例用于说明本技术，但不用来限制本技术的范围。
实施例1取越橘经洗净、干燥、粉碎过80目筛的越橘粉末500kg（经检测原花青素含量为0.85%），加入负压空化设备中，加入60%乙醇2000L，调节压力为-0.06MPa，提取温度25℃，提取30min，过滤，药渣中再次加入2000L60%的乙醇进行第二次提取，同条件下提取30min，过滤，合并两次提取液；将提取液先经截留分子量为1000的超滤有机膜截留，得到截留液，弃透过液；截留液再经截留分子量为100000的超滤有机膜截留，得到透过液；将透过液加入预处理好的50kgAB-8大孔吸附树脂柱中，先用去离子水洗脱至无糖，再用8倍柱体积、质量浓度为50%的乙醇水溶液洗脱，得到洗脱液；洗脱液真空减压浓缩，喷雾干燥后得到紫红色粉末3.5kg。
实施例2取越橘经洗净、干燥、粉碎过80目筛的越橘粉末500kg（经检测原花青素含量为0.85%），加入负压空化仪中，加入80%乙醇3000L，调节压力为-0.08MPa，提取60min，提取温度40℃，过滤，药渣中再次加入3000L80%的乙醇进行第二次提取，同条件下提取60min，提取温度40℃，过滤，合并两次提取液；将提取液先经截留分子量为500的超滤有机膜截留，得到截留液，弃透过液；截留液再经截留分子量为100000的超滤有机膜截留，得到透过液；将透过液加入预处理好的50kgAB-8大孔吸附树脂柱中，先用去离子水洗脱至无糖，再用10倍柱体积、质量浓度为50%的乙醇水溶液洗脱，得到洗脱液；洗脱液真空减压浓缩，喷雾干燥后得到紫红色粉末3.8kg。
对比例1参考张兴茂等公开的长白山笃斯越桔果实原花青素浸提工艺的研究（张兴茂等，长白山笃斯越桔果实原花青素浸提工艺的研究，食品科学，2007,28(11)），其最佳工艺为：浸提溶剂60%乙醇，浸提温度60℃，料液比1∶50，浸提时间80min，浸提两次。
实验例1原花青素含量检测1、使用Waters高效液相色谱仪，色谱柱C18(4.6mm×250mm,5um)，流动相为V（乙腈）：V（水）=8:92，检测波长为280nm，流速为1.0mL/min，进样量为60uL。
2、结果见表1：表1越橘原花青素的含量检测含量收率回收率实施例1 95.13% 0.70% 78.34%实施例2 95.02% 0.76% 84.96%对比例1 87.35% 0.63% 64.74%由结果可知：本技术相对于越橘的常规提取技术，耗能小，提取周期短，收率及回收率显著提高，并且提取过程与后面的纯化过程联系紧密，本技术的提取技术也使得含量明显增加。
本技术运用膜技术纯化越橘原花青素，纯度能达到95%以上，且含量稳定，高效，低损耗。