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第11章 基因表达和功能的

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基因表达的调节名词解释

基因表达的调节名词解释

基因表达的调节名词解释基因表达是指基因中的信息被转录为RNA，并进一步转化为蛋白质的过程。

然而，基因表达的调节是指细胞能够对基因表达进行控制和调节的过程。

这一过程非常复杂且关键，它决定了细胞所处的状态和功能。

在细胞内，有许多机制来调节基因表达，其中包括转录调节、转录后调节和转化调节。

转录调节是指在基因转录过程中，通过不同的转录因子、启动子和转录辅因子的相互作用来控制基因表达。

转录因子是一类能够结合到特定DNA区域上的蛋白质，它们可以促进或抑制转录过程。

启动子是位于基因序列上的特定DNA区域，它可以与转录因子结合，并启动转录过程。

转录辅因子是参与调节转录的蛋白质，它们可以与转录因子相互作用，从而调控基因表达。

转录后调节是指在基因转录完成后，通过不同的机制来调控RNA分子的稳定性和功能。

其中一个重要的机制是RNA剪接，它是一种将RNA前体分子中的不同区段组合起来形成成熟RNA的过程。

RNA剪接可以产生多种不同的成熟RNA，从而调节基因功能。

此外，转录后修饰也是一种重要的转录后调节机制。

通过添加化学修饰物或其他分子到RNA分子上，可以影响它们的稳定性和功能。

转化调节是指在细胞内，以蛋白质为媒介，调控基因表达的过程。

这个过程主要通过蛋白质的结构、功能和互作来实现。

蛋白质可以通过相互作用形成蛋白质复合体，这些复合体可以影响DNA的结构，从而改变基因表达。

此外，蛋白质还可以调控转录因子的活性，进一步影响基因表达。

基因表达调节的重要性不言而喻，它直接决定了细胞功能和生物个体的特征。

例如，在多细胞生物中，基因表达的调节可以使不同细胞具备不同的功能，从而形成组织和器官。

此外，基因表达的失调也与许多疾病的发生和发展密切相关。

如果基因表达调节失调，会导致蛋白质功能异常以及细胞失衡，甚至可能引发疾病。

综上所述，基因表达的调节是细胞内一系列复杂的过程，包括转录调节、转录后调节和转化调节。

它决定了基因的转录、稳定性和转化过程，从而影响细胞的状态和功能。

分子生物学 第11章

分子生物学 第11章


反式作用因子从功能上分析，其结构可包含不同区 域：DNA结合域、转录激活域、连接区
（一）蛋白质直接和DNA结合
在DNA结合结构域中具有一些特殊结构基序： 1. 螺旋-转角-螺旋结构基序
2. 锌指结构基序
3. 螺旋-突环-螺旋结构基序
4. 亮氨基拉链结构基序
5. 碱性结构域 6. Β折叠
•基元，基序或模序（motifs or modules） •在许多蛋白质中，有两个或三个具有二级结构的肽 段在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象， 称为基序。有的将这种规则的二级结构的聚集体称 为超二级结构，它们可直接作为三级结构的“建筑 块”或域结构的组成单位，是蛋白质发挥特定功能 的基础。 •类型：αα、ββ、αβα、锌指结构、亮氨酸拉链…
第11章 真核生物的基因表达调控
真核生物基因表达与调控与原核生物有很大不同
•原核生物同一群体的每个细胞都和外界环境直接接 触，它们主要通过转录调控，以开启或关闭某些基 因的表达来适应环境条件（主要是营养水平的变 化），故环境因子往往是调控的诱导物。 •而大多数真核生物，基因表达调控最明显的特征时 能在特定时间和特定的细胞中激活特定的基因，从 而实现“预定”的，有序的，不可逆的分化和发育 过程，并使生物的组织和器官在一定的环境条件范 围内保持正常的生理功能。
1. 螺旋-转角-螺旋（Helix-turn-helix, HTH)
•HTH是第一个被确立的DNA结合结构。 很多细菌的调节蛋白是以螺旋-转角-螺旋这种基序 存在，如Lac阻遏蛋白，Trp阻遏蛋白、分解代谢激 活蛋白（CAP），λ噬菌体阻遏蛋白（Cro），噬菌 体434阻遏蛋白。在酵母中涉及交配型的a1和a2蛋 白以及在高等真核生物中的Oct-1和Oct-2也属于此 类型。
生物化学第10~12章基因信息传递的习题与答案

生物化学第10~12章基因信息传递的习题与答案

第十一章基因信息的传递一、选择题【A1型题】1.DNA复制的主要方式是A.半保留复制B.全保留复制C.滚环式复制D.混合式复制E.D环复制2.关于原核生物DNA聚合酶Ⅲ的叙述正确的是A.具有5＇—3＇外切酶活性B.具有核酸内切酶活性C.具有3＇—5＇外切酶活性D.底物为NTPE.不需要引物3.原核生物DNA聚合酶Ⅰ不具有下列哪种作用A.聚合DNAB.修复作用C.校读作用D.连接作用E.切除引物4.真核生物DNA聚合酶中，同时具有引物酶活性的是A.DNA聚合酶αB. DNA聚合酶βC. DNA聚合酶γD. DNA聚合酶δE. DNA聚合酶ε5.DNA聚合酶的共同特点不包括A.以dNTP为底物B.有模板依赖性C.聚合方向5＇→3＇D.需引物提供3＇羟基末端E.不耗能6.在原核生物中，RNA引物的水解及DNA片段的延长是依赖于A.核酸酶HB. DNA聚合酶ⅠC. DNA聚合酶ⅡD. DNA聚合酶αE. DNA聚合酶β7.拓扑异构酶的作用是A.解开DNA双螺旋使其易于复制B.使DNA解链时不致于缠结C.使DNA异构为RNA引物D.辨认复制其始点E.稳定分开的DNA双链8.单链结合蛋白（SSB）的生理功能不包括A.连接单链DNAB.参与DNA的复制与修复C.防止DNA单链重新形成双螺旋D.防止单链模板被核酸酶水解E.激活DNA聚合酶9.关于大肠杆菌DNA连接酶的叙述正确的是A.促进DNA形成超螺旋结构B.除去引物，填补空缺C.需ATP供能D.使相邻的两个DNA单链连接E.连接DNA分子上的单链缺口10.原核生物DNA复制需要多种酶参与①DNA聚合酶Ⅲ②DNA解旋酶③DNA聚合酶Ⅰ④引物酶⑤DNA连接酶A.①②③④⑤B.②④①③⑤C.②④⑤①③D.①③②⑤④E.⑤③②①④11.关于DAN复制中生成的冈崎片段A.是前导链上形成的短片段B.是滞后链上形成的短片段C.是前导链模板上形成的短片段D.是滞后链模板上形成的短片段E.前导链和滞后链上都可形成短片段12.端粒酶的作用是A.防止线性DNA分子末端缩短B.促进线性DNA分子重组C.促进DNA超螺旋构象的松解D.促进细胞染色质的分解E.促进细胞染色体的融合13.紫外线辐射造成的DNA损伤，最易形成的二聚体是A.CTC.TTD.TUE.CU14.亚硝酸盐造成DNA损伤是A.形成TT二聚体B.使G的N-7烷化C.使C脱氨成UD.转换T为CE.取代A并异构成G15.DNA点突变的形式不包括A.重排B.转换C.颠换D.缺失E.插入16.不参与DNA损伤修复的酶是A.光复活酶B.引物酶C. DNA聚合酶ⅠD.DNA连接酶E.核酸内切酶17.DNA的切除修复不包括下列哪一步A.识别B.切除C.修补D.异构E.连接18.逆转录的遗传信息流向是A.DNA→DNAB.DNA→RNAC.RNA→DNAD.DNA→蛋白质E.RNA→RNA19.逆转录酶不具有下列那种特性A.存在于致癌的RNA病毒中B.以RNA为模板合成DNAC.RNA聚合酶活性D.RNA酶活性E.可以在新合成的DNA链上合成另一条互补DNA链20.DNA分子中能被转录的链称为A.编码链B.无意义链C.模板链D.互补链E.反义RNA链21.转录与复制有许多相似之处，但不包括A.均需依赖DNA为模板的聚合酶B.以DNA单链为模板C.遵守碱基配对原则D.有特定的起始点E.以RNA为引物22.转录过程中需要A.引物B.dNTPC.RNA聚合酶D.连接酶E.解旋酶23.利福霉素抗结核杆菌的机理是A.与δ亚基结合，抑制RNA聚合酶与模板的结合B.与β亚基结合，阻碍磷酸二酯键的形成C.使RNA聚合酶解聚D.使启动子构象改变E.以上都不是24.真核生物中合成hnRNA的酶是A.RNA聚合酶ⅠB. RNA聚合酶ⅡC. RNA聚合酶ⅢD.核心酶E.以上都不是25.真核生物中合成tRNA的酶是A.RNA聚合酶ⅠB. RNA聚合酶ⅡC. RNA聚合酶ⅢD.核心酶E.以上都不是26.α-鹅膏覃碱可强烈抑制A.蛋白质合成B. hnRNA的合成C.cDNA合成D.45SrRNA合成E.核苷酸合成27.RNA合成的原料是A.dNTPB.dNDPC.NMPD.NTPE.NDP28.新合成的mRNA链的5＇端最常见的核苷酸是A.ATPB.TTPC.GMPD.CTPE.GTP29.真核生物的mRNA帽子结构最常见的是A.GpGB.m6ApppGC.m7GpppGD.pppGmE.GpppA30.外显子是指A.基因突变序列B.mRNA5＇端的非编码序列C.断裂基因中的编码序列D.断裂基因中的非编码序列E.成熟mRNA中的编码序列31.真核细胞hnRNA的内含子切除需A.snRNPB.限制性核酸内切酶C.RNaesPD.RibozymeE.蛋白水解酶32.成熟tRNA分子3＇末端CCA序列的形成A.通过转录合成B.通过剪切加工形成C.由核苷酸转移酶催化合成D.通过碱基修饰形成E.通过基因突变形成33.核酶的特点不包括A.是一种变构酶B.化学本质是核糖核酸C.一级结构在进化上高度保守D.具有自催化剪切作用E.二级结构呈“锤头”或“发夹”状34.能代表多肽链合成起始信号的遗传密码A.UAGB.GAUC.AUGD.UAAE.UGA35.遗传密码的特点不包括A.通用性B.连续性C.特异性D.简并性E.方向性36.参与多肽链释放的蛋白质因子是A.RFB.IFC.eIFD.EF-TuE.EFG37.原核生物翻译时的启动tRNA是A.Met-tRNA MetB. Met-tRNA i MetC.fMet-tRNA i MetD.Arg-tRNA ArgE.Ser-tRNA Ser38.关于氨基酸的活化正确的是A.活化的部位为氨基B.氨基酸与tRNA以肽键相链C.活化反应需GTP供能D.在胞液中进行E.需核糖体参与39.核糖体循环是指A.活化氨基酸缩合形成多肽链的过程B.70S起始复合物的形成过程C.核糖体沿mRNA的相对移动D.核糖体大小亚基的聚合与解聚E.多聚核糖体的形成过程40.多肽链的延长与下列哪中物质无关A.GTPB.转肽酶C.EF-TD.EF-GE.ATP41.能识别终止密码的是A. EF-GB.polyAC.RFD.m7GTPE.IF42.翻译后的加工修饰不包括A.新生肽链的折叠B.N端甲酰蛋氨酸或单氨酸的切除C.氨基酸残基侧链的修饰D.亚基的聚合E.变构剂引起的分子构象改变43.分子病是指A.细胞内低分子化合物浓度异常所致疾病B.蛋白质分子的靶向输送障碍C.基因突变导致蛋白质一级结构和功能的改变D.朊病毒感染引起的疾病E.由于染色体数目改变所致疾病44.关于镰刀型红细胞贫血病的叙述错误的是A.血红蛋白β-链编码基因发生点突变B.血红蛋白β-链第6位残基被谷氨酸取代C.血红蛋白容易互相粘着D.红细胞变成镰刀状E.红细胞极易破裂，产生溶血性贫血45.氯霉素抑制细菌蛋白质生物合成的机制是A.与核糖体大亚基结合，抑制转肽酶活性B.引起密码错读而干扰蛋白质的合成C.激活蛋白激酶使起始因子磷酸化而失活D.与小亚基结合而抑制进位E.通过影响转录来抑制蛋白质的合成46.基因表达中的诱导现象是指A.阻遏物的生成B.细菌利用葡萄糖作碳源C.细菌不能利用乳酸作碳源D.由底物的存在引起酶的合成E.低等生物可以无限制地利用营养物47.操纵子模型主要用于说明A.蛋白质生物合成的机制B.基因表达的调控机制C.DNA的复制机制D.mRNA的成熟机制E.RNA逆转录48.乳糖操纵子的诱导剂是A.乳糖B.葡萄糖C.β-半乳糖苷酶D.果糖E.cAMP49.色氨酸操纵子的控制区不包括：A.增强子B.调节基因C.启动基因D. 操纵基因E.衰减子50.色氨酸操纵子的阻遏剂是A.乳糖B.葡萄糖C.色氨酸合成酶D.σ因子E.色氨酸51.关于同源结构域的叙述错误的是A.至少由两段保守的α-螺旋构成B.螺旋间通过成环连接C.其识别螺旋能识别特异的DNA序列D.其侧链基团能与DNA小沟的碱基相互作用E.能与DNA骨架的磷酸基形成氢键52.关于锌指模体的叙述正确的是A.凡含Zn2+的蛋白质均可形成B. 凡含Zn2+的酶皆可形成C.必须有Zn2+和半胱氨酸或组氨酸形成配位键D.DNA与Zn2+ 结合就可形成E.含有很多半胱氨酸通过二硫键形成【A2型题】53.在一DNA复制体系中,以同位素32P标记的а-磷酸基dNTP为原料合成DNA,从原代起至少在第几代可以得到两条链均带有32P标记的子代DNA双链A.第二代B.第三代C.第四代D.第六代E.第八代54.进行DNA复制试验时,保留全部DNA复制体系成分但以DNA聚合酶Ⅱ代替DNA连接酶,试分析可能会出现什么后果A. DNA高度缠绕,无法作为模板B. DNA被分解成无数片段C. 无RNA引物,复制无法进行D. 随从链的复制无法完成E. 冈崎片段的生成过量55.原核生物DNA复制中① DNA聚合酶Ⅲ②解链酶③ DNA聚合酶④ DNA指导的RNA聚合酶⑤ DNA连接酶⑥ SSB 的作用顺序是A.④、③、①、②、⑤、⑥B.②、③、⑥、④、①、⑤C.④、②、①、⑤、⑥、③D.④、②、⑥、①、③、⑤E.②、⑥、④、①、③、⑤56.利用电子显微镜观察原核生物和真核生物DNA复制过程，都能看到伸展成叉状的复制现象，其可能的原因是A. DNA双链被解链没解开B.拓扑酶发挥作用形成中间体C. 有多个复制起点D.冈崎片段连接的中间体E. 单向复制所致57．真核生物的结构基因是断裂基因，其转录生成的hnRNA在核内经首尾修饰后，再形成套索RNA进行剪接，剪接后的产物是A. tRNAB. snRNAC. snRNPD. mRNAE. rRNA58.原核生物是以RNA聚合酶结合到DNA的启动区作为转录起始的。

第十一章-表观遗传学

第十一章-表观遗传学

印迹基因DNA复制的不同步性。
雄性生殖系 雌性生殖系
父系染色体
母系染色体
合子
父系配子
母系配子
亲代基因组印迹在生殖系的重新编程
Key features of genomic imprinting in mammals
cis-Acting mechanism A consequence of inheritance Imprints are epigenetic modification acquired by one
Both syndromes can be caused by genetic or epigenetic defects
基因组改变：
微缺失的关键区域有成簇排列的，富含CpG岛的基因表 达调控元件——
印迹中心（imprinting centers, ICs）
父源 母源
染色体上的ICs呈现差异甲基化
parental gamete Imprinted genes are mostly clustered together with a
noncoding RNA Imprints can modify long-range regulatory elements that
act on multiple genes Imprinted genes play a role in mammalian development
组蛋白的化学修饰：乙酰化、甲基化 （1）组蛋白中不同氨基酸残基的乙酰化一般与活化的 染色质构型和有表达活性的基因相关联； （2）组蛋白中氨基酸残基的甲基化与浓缩的异染色质 核基因表达受抑有关。
也有例外: 组蛋白甲基化抑制或激活基因表达取决于 被修饰的赖氨酸的位置,
生物化学 第11章、代谢调控

生物化学 第11章、代谢调控


色氨酸操纵子 调节基因产生的阻遏蛋白没有生物) 酶蛋白
阻遏蛋白不能跟操纵基因结 合, 结构基因可以表达 B:有色氨酸 色氨酸与阻遏蛋白结合,从 而使阻遏蛋白能够结合到 操纵基因,结构基因不表达
代谢产物
色氨酸合成途径还存在色氨酸操纵子中衰
减子所引起的衰减调节。
操纵子（operon ）：指原核生物基因表达的的 调控单位。包括一个操纵基因(operator,O) ， 一群功能相关的结构基因(S）和专管转录起始 的启动基因(P)。
调节 基因
R
启动 操纵 基因 基因
P O S
1
结构 基因
S
2
S
3
操纵子
操纵子可分为：
可诱导操纵子：基因在正常情况下不表 达，
加入诱导物后基因表达。如乳糖操纵子 可阻遏操纵子：基因在正常情况下表达， 有辅阻遏物存在时不表达。如色氨酸操纵子
酶促反应的前馈和反馈
：
前馈作用（feedforward）：代谢途径中前
面的底物对其后某一催化反应的调节酶有作用。
前馈激活——底物对后面的酶起激活作用。
前馈抑制——底物对后面的酶起抑制作用
丙酮酸激酶
G → G-6-P → F-6-P → FDP →→→ PEP
前馈激活
丙酮酸
乙酰CoA+CO2 + H2O + ATP
前馈抑制
乙酰CoA羧化酶
丙二酸单酰CoA+ADP+ Pi
反馈调节（feedback）—某一代谢途径的产物或 终产物积累时，反过来对反应序列前头的限速 酶发生的调节作用
正反馈（反馈激活）——产物能使反应速度加快 负反馈（反馈抑制）——产物能使反应速度减慢
第十一章 DNA文库的构建和目的基因的筛选

第十一章 DNA文库的构建和目的基因的筛选

和仅为4.6%，低丰度 的比例高达95.4% 基因组DNA饱和杂交法&基于复性，使筛选差异 表达基因的可能性大大提高 原理：将含目的基因的组织或器官的mRNA群体作为 待测样本（tester），将基因表达谱相似或相近但不 含目的基因的组织或器官的mRNA群体作为对照样本 （driver），使tester和driver的cDNA进行多次杂交， 去掉在二者之间都表达的基因，而保留二者之间差 异表达的基因。
(3) 引导合成法
Okayama-Berg方法
（4）引物-衔接头合成法
4、双链 cDNA连接到质粒或噬菌体载体并导入 大肠杆菌中繁殖的分子克隆
1.同聚100dA/dT, 20dG/dC) • 同聚尾结合的质粒： cDNA杂合分子转化 E.coli的效率随宿主不 同而不同。
该法聪明地利用了反转录过程中用接头锚定的方法， 与传统法相比，全长cDNA的比例得到大幅提高
2. G
1. 抑制性扣除杂交 suppression subtractive hybridization, SSH
含目的基因的cDNA：供体 tester 不含目的基因的cDNA：驱动 driver
• RsaI消化tester和driver • 将tester一分为二，分别加上接头1和接头2R • 第一轮杂交中，用过量的driver cDNA分别与带两种 接头的tester cDNA杂交 • 第二轮杂交中，将第一轮杂交的两个体系混合，再 加入过量的driver cDNA • 补平第二轮杂交产物的末端，进行两轮PCR扩增 • 巢式引物进行第二轮PCR扩增，富集差异表达基因 • T/A克length cDN因： • cDNA第二链合成工程中聚合酶的外切酶活性； • mRNA降解； • 反转录酶合成特性，从转录复合体上anism at 5' end of RNA • 指导合成高分子量蛋白质的能力 无细胞翻译体系（源于网织红细胞） 哺乳动物总mRNA可编码 10～100kDa蛋白
第11章 生物调控

第11章 生物调控


激素举例之三——多肽及蛋白质激素 脑垂体激素： 脑垂体激素： 垂体分前叶、中叶和后叶三部分； 垂体分前叶、中叶和后叶三部分； 前叶和中叶能合成激素 前叶和中叶能合成激素 合成 后叶只能存储和分泌激素（下丘脑合成） 后叶只能存储和分泌激素（下丘脑合成） 存储和分泌激素 调节和控制其他类型激素： 调节和控制其他类型激素：生长发育 和促进其它腺体分泌激素。 和促进其它腺体分泌激素。
钙调蛋白 CaM
钙结合蛋白， 结合后才有活性； 钙结合蛋白，与Ca2+结合后才有活性； 活性Ca CaM复合物可以通过与靶酶作用方式调控代谢过程 复合物可以通过与靶酶作用方式调控代谢过程。 活性Ca2+CaM复合物可以通过与靶酶作用方式调控代谢过程。
5.一氧化氮（NO） 生物体内发现的最小、 生物体内发现的最小、最简单的生物信息物质
四聚蛋白酶： 2个调节亚基+2个催化亚基 调节亚基抑制催化亚基 每个调节亚基上有2个cAMP的结合位点 cAMP与调节亚基结合后，催化亚基分 离，获得活性 解离出的活性蛋白激酶催化ATP分子与 目标代谢酶分子的磷酸化反应。
4. 钙离子和钙调蛋白
生物体内钙离子的特点：
细胞内Ca 的浓度受激素的调控发生显著变化： 细胞内Ca2+的浓度受激素的调控发生显著变化：在激素和其它外界因素的刺 激下，钙通道被打开，细胞质内Ca 浓度升高； 激下，钙通道被打开，细胞质内Ca2+浓度升高； Ca2+与蛋白中带负电的氧或极性氧原子配价结合，诱导蛋白构象变化，在细 与蛋白中带负电的氧或极性氧原子配价结合，诱导蛋白构象变化， 胞内传递信息。 胞内传递信息。
Robert F. Furchgott 佛奇哥特
Louis J. Ignarro 伊格纳罗
细胞生物学课程第11章(细胞外基质)

细胞生物学课程第11章(细胞外基质)


1.分子结构
• • 纤粘连蛋白分子的不同肽链结构亚单位具有极为相似的氨基酸序列，每一肽链亚单位构成多个具 有特定功能的球形结构域。 不同的球形结构域可分别与不同的生物大分子或细胞表面受体结合，是一种多功能分子。
2.RGD序列
• RGD（Arg-Gly-Asp）序列，整合素识别与结合的部位。 • 化学合成的RGD三肽可抑制细胞在纤粘连蛋白基质上粘附。
1.分子结构
• 一条重链（α ）和二条轻链（β 、 γ ）二硫键交联而成的异三聚体， 外形呈十字形，三条短臂各由三条 肽链N端序列构成。 多个结构域可和多种物质结合
•
2.功能
基底膜的主要组分，在基底 膜的基本框架的构建和组装 中起了关键作用。 有RGD序列，使细胞黏附在 基底膜上，促进细胞的生长 并使细胞铺展而保持一定的 形态。 通过与细胞间的相互作用， 可直接或间接控制细胞的活 动。
胶原有刺激上皮细胞增殖的作用，是细胞贴附的重要基质成分。 胶原可诱导细胞分化，如干细胞在不同类型胶原诱导下可向不 同的细胞进行分化。
哺乳动物发育的不同阶段表达不同的胶原
胎儿皮肤中含有大量III型胶原，成人皮肤中被I型胶原所代替
5.胶原与疾病
• 坏血病：
• 皮肤过度松弛症 (Ehlers-Danlos): 胶原纤维不能正常装配，皮肤和其他结缔 组织降低强度而变得非常松弛。
一方面细胞通过控制基质成分的合成和降解决定 细胞外基质的组成； 另一方面细胞外基质影响细胞的各种生命活动。
细胞对细胞外基质的影响
（一）细胞外基质是由其所在组织细胞分泌的
各种组织的细胞外基质的成分、含量和存在形式不同，都是由该组织 的细胞合成与分泌的。 同一个体的不同组织，不同的发育阶段，所产生的细胞外基质也有所 不同。
生物化学教案——第十一章 RNA的生物合成

生物化学教案——第十一章 RNA的生物合成

第十一章RNA的生物合成RNA的生物合成包括转录和RNA的复制。

转录（transcription）：以一段DNA的遗传信息为模板，在RNA聚合酶作用下，合成出对应的RNA的过程，或在DNA指导下合成RNA。

转录产物：mRNA 、rRNA、tRNA、小RNA除某些病毒基因组RNA外，绝大多数RNA分子都来自DNA转录的产物。

转录研究的主要问题：①RNA聚合酶②转录过程③转录后加工④转录的调控①~③是基本内容，④是目前研究的焦点，转录调控是基因调控的核心。

转录与DNA复制的异同：相同：要有模板，新链延伸方向5’→3’，碱基的加入严格遵循碱基配对原则。

相异：①复制需要引物，转录不需引物。

②转录时，模板DNA的信息全保留，复制时模板信息是半保留。

③转录时，RNA聚合酶只有5’→3’聚合作用，无5’→3’及3’→5’外切活性。

转录是基因表达的第一步，也是最关键的一步。

基因表达的终产物：①RNA ②蛋白质转录过程涉及两个方面①RNA合成的酶学过程②RNA合成的起始信号和终止信号，即DNA分子上的特定序列。

DNA正链：与mRNA序列相同的DNA链。

负链：与正链互补的DNA链。

转录单位的起点核苷酸为+1，起点右边为下游（转录区），转录起点左侧为上游，用负数表示：-1，-2，-3。

DNA指导的RNA合成（转录）RNA链的转录，起始于DNA模板的一个特定位点，并在另一位点终止，此转录区域称为一个转录单位。

一个转录单位可以是一个基因（真核），也可以是多个基因（原核）。

基因的转录是有选择性的，细胞不同生长发育阶段和细胞环境条件的改变，将转录不同的基因。

转录的起始由DNA上的启动子区控制，转录的终止由DNA上的终止子控制，转录是通过DNA指导的RNA聚合酶来实现的。

一、RNA聚合酶RNA合成的基本特征①底物：NTP（ATP、GTP、CTP、UTP）②RNA链生长方向：5’→3’③不需引物④需DNA模板反应：1、E.coli RNA聚合酶（原核生物）E.coli和其它原核细胞一样，只有一种RNA聚合酶，合成各种RNA（mRNA、tRNA、rRNA）。

生物化学复习资料重点试题第十一章代谢调节解读

生物化学复习资料重点试题第十一章代谢调节解读

第十一章代谢调节一、知识要点代谢调节是生物在长期进化过程中,为适应外界条件而形成的一种复杂的生理机能。

通过调节作用细胞内的各种物质及能量代谢得到协调和统一,使生物体能更好地利用环境条件来完成复杂的生命活动。

根据生物的进化程度不同,代谢调节作用可在不同水平上进行:低等的单细胞生物是通过细胞内酶的调节而起作用的;多细胞生物则有更复杂的激素调节和神经调节。

因为生物体内的各种代谢反应都是通过酶的催化作用完成的,所以,细胞内酶的调节是最基本的调节方式。

酶的调节是从酶的区域化、酶的数量和酶的活性三个方面对代谢进行调节的。

细胞是一个高效而复杂的代谢机器,每时每刻都在进行着物质代谢和能量的转化。

细胞内的四大类物质糖类、脂类、蛋白质和核酸,在功能上虽各不相同,但在代谢途径上却有明显的交叉和联系,它们共同构成了生命存在的物质基础。

代谢的复杂性要求细胞有数量庞大、功能各异和分工明确的酶系统,它们往往分布在细胞的不同区域。

例如参与糖酵解、磷酸戊糖途径和脂肪酸合成的酶主要存在胞浆中;参与三羧酸循环、脂肪酸β-氧化和氧化磷酸化的酶主要存在于线粒体中;与核酸生物合成有关的酶大多在细胞核中;与蛋白质生物合成有关的酶主要在颗粒型内质网膜上。

细胞内酶的区域化为酶水平的调节创造了有利条件。

生物体内酶数量的变化可以通过酶合成速度和酶降解速度进行调节。

酶合成主要来自转录和翻译过程,因此,可以分别在转录水平、转录后加工与运输和翻译水平上进行调节。

在转录水平上,调节基因感受外界刺激所产生的诱导物和辅阻遏物可以调节基因的开闭,这是一种负调控作用。

而分解代谢阻遏作用通过调节基因产生的降解物基因活化蛋白(CAP促进转录进行,是一种正调控作用,它们都可以用操纵子模型进行解释。

操纵子是在转录水平上控制基因表达的协调单位,由启动子(P、操纵基因(O和在功能上相关的几个结构基因组成;转录后的调节包括,真核生物mRNA 转录后的加工,转录产物的运输和在细胞中的定位等;翻译水平上的调节包括,mRNA 本身核苷酸组成和排列(如SD序列,反义RNA的调节,mRNA 的稳定性等方面。

动物生理学课件：第11章内分泌

动物生理学课件：第11章内分泌

第十一章 内分泌(endocrine)
内分泌系统是动物机体内所有分泌腺和散在的内
分泌细胞组成的一个体内信息传递系统 。机体的腺体 按其不同组织结构可分为两大类：凡分泌物从腺体经
导管流至皮肤表面或某些体腔中的这类腺体称为有管 腺或外分泌腺，如汗腺和各种消化腺等；凡没有导
管的腺体，其分泌物由腺细胞经出胞作用直接透入血 液（组织液）或淋巴，从而传布至局部或全身的这种
2.甾体类激素作用的机理—基因表达学说
类固醇激素的分子小，可透过细胞膜进入细胞。在进入 细胞之后，经过两个步骤影响基因表达而发挥作用，故把 此种作用机制称为二步作用原理，或称为基因表达学说。 第一步是激素与胞浆受体结合，形成激素—胞浆受体复合 物,导致受体蛋白发生构型变化，从而使激素—胞浆受体复 合物获得进入细胞核内的能力，由胞浆转移至细胞核内。 第二步是与核内受体结合，形成激素—核受体复合物，从 而激发DNA的转录过程，生成新的mRNA,诱导蛋白质合 成，引起相应的生物效应。
内分泌腺或散在的内分泌细胞分泌的高效能的生物活性物质， 经组织液或血液传递而发挥调节作用，这种生物活性物质，称 为激素（hormone)。
•神经激素(neurohormone) •局部激素(local hormone) •外激素(phermone)
2.典型激素的特点
①具有一定的特异性，只对特定的靶细胞产生作用； ②只调节细胞内生理反应的速度，不能发动新的反应； ③表现高效性，微量激素就能起显著反应； ④分泌速率不均一，常表现间断性或周期性分泌； ⑤通过代谢在肝脏或靶组织内失活，不断从体内消失。
下丘脑与腺垂体在结构上通过垂体门脉有血管联系；在功 能上，下丘脑分泌的调节性多肽由垂体门脉输送到腺垂体， 实现对腺垂体各激素分泌的调节。

七年级生物第11章知识点

七年级生物第11章知识点生物学是一门研究生物的学科，它涵盖了生命的所有方面。

在第11章中，我们将解析一些关键知识点，这些知识点是生物学的基础。

本章中，我们将研究生命的特征、细胞的结构、DNA的结构与功能，并了解生命的起源。

生命的特征1. 生命的共同特征：生命的定位标准是一组共同特征，其中包括几个重要点。

2. 组成生物的所有化学物质均含碳元素。

3. 细胞是生命的基本单位。

所有生命体都是由一个或多个细胞组成的。

4. 生物能够调节其内部环境。

5. 生物能够对外部刺激做出反应。

6. 生命具有遗传性。

生物的特征通过多代传承。

细胞的结构生物的特征是由其细胞的结构决定的。

细胞是生物的基本单位，并在组织、器官等级别上组成生命体。

本节将探究细胞的结构。

1. 细胞壁：这是一个强壮的、具有厚度和坚硬度的层，在植物细胞中常见。

其存在有助于保护和保持细胞的形状。

2. 线粒体：线粒体是能够生成 ATP 的“电力工厂”。

电子被传递，并在这种过程中产生化学能，最终转化为能够使用的能量。

3. 内质网：内质网是一系列膜结构，有利于蛋白质的产生和运输。

其存在有助于调节和维护细胞内部环境。

4. 核糖体：核糖体是蛋白质合成的场所，将氨基酸组合成蛋白质。

5. 溶酶体：这是一类“清洁工”，它们通常能分解废旧物质、病毒和细胞残留。

它还可以参与基因表达和调节细胞内的 pH 值。

DNA的结构与功能遗传信息是以 DNA 的形式存储在生物细胞中的。

这一节将集中讨论 DNA 分子的结构与功能。

1. DNA的结构：DNA 分子由四种氮碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成。

这些碱基的顺序影响着一个生物的特征和性状。

2. DNA的功能：DNA的功能包括复制、转录和翻译。

复制是表明每个细胞必须拥有相同数量的基因的过程。

转录和翻译是基因表达的两个关键步骤，使遗传信息被转换为蛋白质。

生命的起源生命最初是如何产生和发展的，一直是生物学家的研究课题。

生命起源分为两种观点：创造论和进化论。

第十一章代谢调节讲解

第十一章代谢调节—、知识要点代谢调节是生物在长期进化过程中，为适应外界条件而形成的一种复杂的生理机能。

通过调iT作用细胞内的各种物质及能量代谢得到协调和统一，使生物体能更好地利用环境条件来完成复杂的生命活动。

根据生物的进化程度不同，代谢调节作用可在不同水平上进行：低等的单细胞生物是通过细胞内酶的调右而起作用的：多细胞生物则有更复杂的激素调节和神经调节。

因为生物体内的各种代谢反应都是通过酶的催化作用完成的，所以，细胞内酶的调节是最基本的调肖方式。

酶的调节是从酶的区域化、酶的数量和酶的活性三个方而对代谢进行调节的。

细胞是一个髙效而复杂的代谢机器，每时每刻都在进行着物质代谢和能量的转化。

细胞内的四大类物质糖类、脂类、蛋白质和核酸，在功能上虽各不相同，但在代谢途径上却有明显的交叉和联系，它们共同构成了生命存在的物质基础。

代谢的复杂性要求细胞有数虽庞大、功能各异和分工明确的酶系统，它们往往分布在细胞的不同区域。

例如参与糖酵解、磷酸戊糖途径和脂肪酸合成的酶主要存在胞浆中；参与三竣酸循环、脂肪酸B ■氧化和氧化磷酸化的酶主要存在于线粒体中：与核酸生物合成有关的酶大多在细胞核中：与蛋白质生物合成有关的酶主要在颗粒型内质网膜上。

细胞内酶的区域化为酶水平的调节创造了有利条件。

生物体内酶数量的变化可以通过酶合成速度和酶降解速度进行调节。

酶合成主要来自转录和翻译过程，因此，可以分别在转录水平、转录后加工与运输和翻译水平上进行调^在转录水平上，调节基因感受外界刺激所产生的诱导物和辅阻遏物可以调节基因的开闭，这是一种负调控作用。

而分解代谢阻遏作用通过调巧基因产生的降解物基因活化蛋白（CAP）促进转录进行，是一种正调控作用，它们都可以用操纵子模型进行解释。

操纵子是在转录水平上控制基因表达的协调单位，由启动子（P人操纵基因（0）和在功能上相关的几个结构基因组成：转录后的调节包括，真核生物mRNA转录后的加工，转录产物的运输和在细胞中的泄位等；翻译水平上的调节包括，mRNA 本身核苜酸组成和排列（如SD序列），反义RNA 的调节，inRNA的稳宅性等方而。

基因表达方式

基因表达方式
摘要：
1.基因表达方式的定义
2.基因表达的方式
3.基因表达的意义
4.基因表达的应用
正文：
基因表达方式是指基因信息从DNA 传递到蛋白质的过程，通常包括转录和翻译两个主要步骤。

在转录过程中，DNA 模板链上的信息被转录成mRNA 分子。

这个过程中，RNA 聚合酶在DNA 上滑动，将DNA 的信息转录成mRNA 分子，然后mRNA 分子离开细胞核，进入细胞质。

在翻译过程中，mRNA 分子被翻译成蛋白质。

这个过程中，核糖体在mRNA 上滑动，将mRNA 上的信息翻译成蛋白质，这些蛋白质可以在细胞内发挥各种生物学功能。

基因表达的意义在于，它使得细胞可以对不同的环境刺激作出不同的响应。

通过调节基因表达，细胞可以改变蛋白质的合成量和种类，从而适应不同的环境条件。

基因表达的应用非常广泛，包括基因诊断、基因治疗、基因编辑等领域。

在基因诊断中，可以通过检测基因表达水平来确定某个基因是否在某个组织或细胞中表达。

在基因治疗中，可以通过修改基因表达来治疗疾病。

在基因编辑
中，可以通过修改基因表达来改变生物的性状。

第11章-细胞核与染色质(翟中和第四版)

亲核蛋白：指在细胞质内合成后，需要或能够进入细胞 核内发挥功能的一类蛋白质。
大多数的亲核蛋白往往在一个细胞周期中一次性地被转 运到核内，并一直停留在核内行使功能活动，典型的如组 蛋白、核纤层蛋白等；
有一些亲核蛋白需穿梭于核质之间进行功能活动，如 importins。
核定位序列或核定位信号（ NLS ）
核被膜上由内外两层膜局部融合形成的许多核孔， 核孔是由一组蛋白质（至少50种不同的蛋白质）以 一定方式排布形成的复杂结构，可沟通核质和胞质。
一般哺乳动物细胞平均有3000个核孔。 细胞核活动旺盛的细胞中核孔数目较多，反之较少。
（一）结构模型—— “fish-trap”(鱼笼)
在电镜下观察，核孔是呈圆形或八角形，现在一般认 为其结构如fish-trap（鱼笼）。
• 组成：核被膜、核纤层、染色质、核仁及核体组成。 • 功能：①遗传 ②发育。
哺乳类成 熟红细胞 无细胞核
肝细胞和 心肌细胞 可有双核
植物成 熟筛管 细胞无 细胞核
a
a破骨细
胞可有
a
6-50个
细胞核
a a
本章主要内容
• *核被膜 • *染色质 • 染色质的复制与表达 • *染色体 • *核仁与核体 • 核基质
DNA 3 种构型
三种DNA构型中,大沟的特征在遗传信息表 达过程中起关键作用,调控蛋白都是通过其分 子上氨基酸侧链与沟中碱基对两侧潜在的氢 原子供体(=NH)或受体(O和N)形成氢键而识别 DNA遗传信息的。
另外, Z型DNA同细胞癌变有一定的关系。
二、染色质蛋白
• 组蛋白（histone）
– 与DNA 结合没有序列特异性
2．核孔复合体的主动运输
A 对运输颗粒大小的限制。主动运输的功能直径（约10～ 20nm）比被动运输大，核孔复合体的有效直径的大小是 可被调节的；

第十一章生化简明教程章节习题集

第十一章代谢调节一、练习题目(一)名词解释1．限速步骤反应 2．关键酶 3．时序调节和适应调节 4．诱导作用 5．诱导物 6．诱导酶 7．阻遏作用 8．辅阻遏物 9．阻遏物 10．阻遏酶 11．操纵子 12．组成酶 13．组成突变体 14．超阻遏突变体 15．启动子 16．操纵基因 17．结构基因 18．调节基因 19．降解物基因活化蛋白 20．降解物阻遏 21．酶分子的修饰 22．共价修饰调节 23，级联系统 24．反馈抑制 25．累积反馈抑制 26．顺序反馈抑制 27，协同反馈抑制 28．前馈激活 29．前馈抑制 30．反馈激活 3l，交叉调节 32．能荷(二)问答题1．代谢调节的生物学意义是什么?2．生物体在哪几种水平上进行代谢调节?3．对酶促反应来说，可以在哪些方面进行调节?4．底物供应调节的限制因素有哪些?5．酶水平调节包括哪些方面?6．举例说明酶合成的诱导和阻遏现象。

7．操纵子学说的基本内容有哪些?8．酶活性调节的方式有哪些?9．糖元磷酸化酶和糖元合成酶活性是如何联系、调节的?10．根据能荷公式，解释能荷大小对物质代谢的调节作用。

11．真核生物细胞器的分化对代谢调节起什么作用?12．总结各物质代谢相互间的关系。

(三)填空题1．诱导酶的合成是由于___________与由调节基因所产生的__________结合，使_________变构 __________便不能与________基因结合，结构基因不被关闭的缘故。

2．由DNA分子的调节基因编码的蛋白质称为_________。

3．酶合成的调节是__________水平调节，是________调。

4．酶活性的调节是酶分子_________上的调节，是__________调。

5．真核细胞内基因表达的调节因子是___________。

6．糖元磷酸化酶被磷酸基团修饰后，该酶呈___________状态，磷酸基团来自于__________。

7．大肠杆菌乳糖操纵子包含有__________、___________和__________DNA区段。

第十一章 表观遗传学


着不同的影响，这种现象称基因组印迹。
两个亲本的等位基因差异性甲基化是基因组印
迹现象的基础。
疾病的基础： 15q11-13 微缺失
Prader-Willi syndrome, PWS（父源）：肥胖、矮 小, 中度智力低下
Angelman syndrome, AS （母源）：共济失调, 严重 智力低下
表观遗传修饰调控的复杂性
机体表观遗传模式的变化在整个发育过程中高度有序/ 严格受控: RNA干涉（影响组蛋白修饰） 组蛋白结构修饰 调控网络 DNA甲基化
动态而有序地调控组织细胞特异性的基因表达模式
RNA 干涉？
2006年10月2日，瑞典皇家卡罗林医学院宣 布，本年度诺贝尔生理学和医学奖的桂冠授 予两位美国人： A.Z. Fire （安德鲁· 法尔） C.C. Mello （克雷格· 梅洛） 他们获奖，是因为发现了RNA的干扰机制。 诺贝尔奖评委会的公报说， Fire 和 Mello 获奖是因为他们“发现了控制遗传信息流动 的基本机制。”
意外发现：导入双链RNA的产生功能干扰的有效
性远高于导入单链RNA, sense or antisense
RNA导入均如此。
仅需少数分子即可产生干扰效应，提示酶促反
应或分子扩增的存在。
上述现象提示： 1. 存在超越简单反义RNA作用的机理。 2. RNA靶向的作用也不能排除。
3. 同时可能存在RNA与染色质的直接作用，影
父源非甲基化
染色体上的ICs呈现差异甲基化 母源甲基化
人类基因组已发现ICs 50多个，分布于基因组的12 个区
域，大多成簇排列，与疾病发生相关。 Beckwith-Wiedemann syndrome, BWS：11p15.5
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Bait gene
Prey (Y) Bait (X)
AD Gal4激活域
BD Gal4结合域
LacZ
Repoter gene operator
LacZ
Repoter gene
operator
BD gene Bait plasmid
AD gene prey gene prey plasmid
诱饵与靶蛋白之间 的相互作用激活了 报告基因的表达

反转录PCR（见第八章）
11.1.4 其他研究RNA转录的技术
cDNA 末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends, RACE） 5’-RACE 3’-RACE

SMARTTM 3‘-RACE的原理是: 1、利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点， 以连有SMART寡核核酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN 作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。 2、然后用一个基因特异引物GSP1(gene specific primer,GSP)作 为上游引物。
非变性聚丙稀酰氨凝胶
原理: 蛋白与DNA结合 后,保护这段被结合的DNA 不被内切核酸酶降解,电泳检测不到这段被覆盖的 蛋白,形成类似脚印的区域. 具体实验过程描述:P197
修饰干扰实验

碱基被修饰后,影响了其与蛋白质的结合能力, 对目标DNA中的碱基进行修饰 从能被蛋白结合的到不能被蛋白结合.
11.3.3 蛋白与蛋白之间的相互作用的 研究
D、肽库与被测试的靶蛋白分子经过一定时间孵 育后，洗去未结合的游离噬菌体，然后以竞争 受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体 E、洗脱的噬菌体感染宿主细胞后经繁殖扩增， 进行下一轮洗脱 F、经过3轮～5轮的“吸附-洗脱-扩增”后，与靶 分子特异结合的噬菌体得到高度富集。所得的 噬菌体制剂可用来做进一步富集有期望结合特 性的目标噬菌体。
B、酵母双杂系统的组成部分 （1）与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋 白称诱饵蛋白（bait）； （2）与AD融合的蛋白表达载体，被其表达 的蛋白称靶蛋白（prey）； （3）带有一个或多个报告基因的宿主菌株。 C、酵母双杂系统的工作原理
BD gene Bait plasmid
AD gene prey gene prey plasmid
1、利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以连有 SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录 合成标准第一链cDNA。
2、利用逆转录酶具有末端转移酶的活性，使末端加 上寡聚C。

3、人工合成的接头引物的3’末端具有寡聚G，与寡聚C配对合 成第二链cDNA。 4、利用基因特异的引物作为下游引物和用一个含有部分接头 序列的通用引物(universal primer,UPM)作为上游引物扩增基因 的5‘末端。
Bait gene
Prey (Y) Bait (X)
AD Gal4激活域
BD Gal4结合域
operator
LacZ
Repoter gene
Trp-
NH2
Gal4
BD
X
COOH 共转化
Gal4
+
Gal4 Gal4
? BD X
AD
NH2
AD cDNA Leu-
COOH Promoter Reporter
由两条合成的寡核苷酸组成的,当它们退火时,会按 设计要求产生出克隆需要的粘性末端, 由于不存在 异源双链的中间体,因此重组质粒全部是突变体。
盒式突变举 例1
HindIII
Eco RI
Mutagenic oligonucleotides
·· ·AAGCTT·· ·target· GAATTC·· · · · AGCT ·· ·TTCGAA·· ·target· CTTAAG·· · · ·
检测被修饰的碱基的位置
11.2.2 通过缺失分析来识别调控序列
报告基因 通过报告基因转入宿主中,区别原有的在 基因组中的基因的拷贝 报告基因具备的两个特点(P201)


缺失分析 将具有不同程度缺失的调控序列与报告基因融 合的载体,转化给宿主,检测宿主中报告基因的 表达模式以及强度的方法
第十一章 基因表达和功能的研究
主要内容
克隆基因转录的研究 对基因是否有内含子以及转录的起始点和终止 点进行的研究
基因表达调控的研究 鉴定和研究克隆基因的翻译产物
11.1. 克隆基因转录的研究
对于转录的起始点、终止点和基因是否 具有内含子等的研究 11.1.1电子显微镜分析核酸分子
用寡核苷酸在克隆基因上导入点突变 借助于M13单链和双链的特殊形式，将 目标突变导入，筛选出一半突变了基因。 并通过表达载体上突变了基因的表达， 研究点突变对蛋白质功能的影响。具体 的过程如P207，图11.25
11.3.2 通过体外突变研究蛋白质
其他定点突变 A、盒式突变 1、原理：利用一段人工合成的具有突变序 列的寡核苷酸片段,取代野生型基因中的 相应序列。 2、人工合成的突变序列的特征
11.3.3 蛋白与蛋白之间的相互作用的 研究
2 酵母双杂交系统 原理
A、转录激活因子GAL4

N端：147个氨基酸组成的DNA结合域(DNA binding domain,BD) C端：113个氨基酸组成的转录激活域(transcription activation domain,AD)。 GAL4分子的DNA结合域可以和上游激活序列 (upstream activating sequence，UAS)结合，而转录激活 域则能激活UAS下游的基因进行转录。
(d)
3’
+
3’
PCR with primer B and primer C
11.3.3 蛋白与蛋白之间的相互作 用的研究
1、噬菌体展示技术原理 A、噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码基因 或目的基因片段克隆入噬菌体外壳蛋白结构基因 的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋 白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳 蛋白融合表达。 B、融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬 菌体表面。 C、被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间 结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。

11.1.2 通过核酸酶处理来研究 DNA-RNA杂交物
确定基因是否含有内含子 确定基因转录起点的位置

消化单链部分
碱性条件下降解RNA
缺点：不能确定不同的片段在基因上的确切位置
确定转录起始的位置






首先将可能的包含转录起 始点以及上游的DNA克 隆进入载体，获得单链的 DNA片段 加入转录物，进行温育， 退火，杂交 用S1核酸酶降解单链部 分，获得RNA-DNA杂合 双链 通过碱变性，降解RNA 检测被RNA保护的DNA 片段的长度 判断所克隆的DNA片段 中转录起始点的位置
TTAA
Melt and anneal oligos T4 polynucleotide kinase
优点： 快速高效 无异源双链的形成 无需DNA聚合酶 缺点: 需要在目标序列的两侧 具有限制性内切酶的位点
Gel purify vector DNA
·· ·A ·· ·TTTCGA
AATTC·· · G·· ·
其他定点突变
C、定点诱变的PCR方法
根据靶DNA序列设计一对互补的内侧引物A和A’(引物A和A’ 互补)，他们在相同的位点具有同样的碱基突变； 分别以左侧引物A和右侧引物A’进行两轮PCR扩增； 除去未参入的多余引物，由于具有重叠序列，故经变性和 退火形成异源双链分子 其中只有具3’凹陷末端的双链分子可通过TaqDNA聚合酶的 及外侧引物B和C的作用下，形成其突变位点是位于靶DNA 序列中但远离两端的突变体。
11.2 基因表达调控的研究
研究调控区域的存在以及所发挥的作用 研究调控区域DNA分子的蛋白结合区域

11.2 基因表达调控的研究
12.2.1 识别DNA分子的蛋白结合区(DNA-蛋 白的相互作用的方法) 凝胶阻滞实验 DNA酶I足迹法 修饰干扰实验

Electrophoretic mobility shift assay, EMAS

(a)
Primer A Primer A’ 5’ PCR Primer A’ 5’ Primer C PCR PCR
(b)
5’ PCR Primer A 5’ Primer B
5’ 3’
5’ 3’
Mix,denature and anneal
DNA plotmerase
(c)
5’
+
3’
5’ 3’
cDNA library
酵母双杂交系统的小结
用途：

快速筛选与一种已知蛋白结合的目的蛋白，
发现新基因 验证 已知蛋白间的相互作用及作用强度
酵母双杂交系统(Yeast Two-hybBiblioteka id System) 优点：
根据兴趣蛋白的基因序列 即可筛选与其作用 的目的蛋白 蛋白质在真核细胞内，处于天然状态，蛋白质 之间的相互作用符合细胞内情况，即使是两种 蛋白质的瞬时结合也可被检测出来 可以直接获得目的蛋白的基因序列，从而可以 初步判断目的蛋白的结构和功能。
AGCT
GTAC
Xho I
Sph I
利用混杂寡聚核苷酸方法的突变
11.3.2 通过体外突变研究蛋白质
其他定点突变
B、人工基因合成方法 1、原理 利用一段人工合成的150甚至更长的碱基 （内含需要突变的位点）,通过部分重叠 和DNA聚合酶的延伸完成整合基因的多个 位点的突变。