发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测

发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测——SDS-PAGE法1．适用范围本标准适用于测定发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测。

2．仪器设备2.1蛋白电泳仪：2.1.1 电泳仪；（建议使用：北京六一仪器DYY-2C型）2.1.2 电泳槽；（建议使用：美国伯乐公司的mini型）2.2 25μl微量进样器；2.3 制胶装置；（与电泳槽配套出售，包括玻璃板(厚度分别为1.0 mm和 1.5mm各一套)，梳子，拨胶板）2.4 移液枪(1000μl,200μl,10μl)以及其配套枪头；（属于常规实验耗材）3．试剂3.1 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED；（建议购至上海申能博彩，Chemisonic 进口分装，必须要进口的产品！国产做出来的结果很差）；分析纯；3.2 无水酒精，分析纯；3.3 甘氨酸，分析纯；3.4 Tris，分析纯；3.5 考马斯亮兰R250，分析纯；3.6甲醇，分析纯；3.7 冰醋酸，分析纯；3.8 甘油（丙三醇），分析纯；3.9 β-巯基乙醇，分析纯；3.10 溴酚蓝，分析纯；3.11 HCl，分析纯；4.试剂的配置4.1 SDS-PAGE溶液的配制：30%丙烯酰胺的配制：丙烯酰胺 30.0gN’N-甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至100ml4.2 10%过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于10.00ml去离子水中。

2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8)：称取Tris 121.14g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至8.8(要求准确)。

1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8)：称取Tris 60.57g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至6.8(要求准确)。

10%SDS：称取5gSDS溶于50ml蒸馏水中。

1.0% 溴酚兰：称取0.05g溴酚兰溶于5ml蒸馏水中。

4.3 染色液：考马斯亮兰R250 0.25g甲醇 45.40ml冰醋酸 9.20ml水 45.40ml4.4 脱色液：甲醇 456.0ml冰醋酸 72.0ml水 472.0ml4.5 4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8) 75ml10%SDS 4ml蒸馏水 21ml10%过硫酸铵 5ml4.6 4×堆积胶缓冲液：1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 50ml10%SDS 4ml蒸馏水 46ml10%过硫酸铵 5ml4.7 电泳缓冲液： Tris 3.0g甘氨酸 14.4gSDS 1.0g定容至1L，用HCl调节pH为8.3。

您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】发酵豆粕中的小肽与抗原蛋白是衡量品质优劣的两项重要指标，长期以来国内的发酵豆粕产品主要由乳酸菌通过厌氧发酵生产，而出于便捷考虑，业内通常使用酸溶蛋白法测定小肽含量，使用ELISA法测定抗原蛋白含量，但随着发酵豆粕使用普遍性提高，并且芽孢杆菌通过有氧发酵生产的发酵豆粕在国内市场上渐露锋芒，这两种测定方法是否适用，是否能作为客观反映小肽和抗原蛋白真实含量的指标，引起了关注与讨论。

1 小肽-酸溶蛋白法①不同pH 发酵(或酶解)的豆粕在酸中的溶解度不同微生物发酵过程中对蛋白质的分解，实质上就是微生物产蛋白酶的作用。

但是，不同酸碱性的蛋白酶酶解豆粕所得的小肽在酸中的溶解度不同，其中酸性蛋白酶酶解小肽高达96%可以溶于三氯乙酸，而碱性蛋白酶酶解小肽不到 50%。

因此，酸溶蛋白更适合评估酸性发酵或酶解的豆粕产品，将低估希杰速益肽这类芽孢杆菌发酵的中偏碱性产品的小肽含量(刘慧珍，江南大学硕士论文，2007)。

速益肽 55%CP 产品酸溶蛋白相对低(6-10%)。

②小肽应有明确的分子量定义食品国家标准《大豆肽粉GBT 22492》2008 版将小肽的定义由③酸溶蛋白只体现了速益肽小肽含量的一小部分希杰研究所实验发现，同时测定的发酵豆粕样品整体蛋白分布(红色峰)和三氯乙酸溶解后上清液的蛋白分布结果(蓝色峰)。

三氯乙酸提取的分子量5kDa 以下蛋白质部分，而红色图谱和蓝色图谱之间存在一个灰色的面积区域是三氯乙酸没有办法提取出来的样品中的肽含量的部分，即三氯乙酸并不能完全溶解出样品中的所有的肽，只能溶解出其中的一小部分(如下图)。

2 抗原蛋白-ELISA 法和SDS 法①ELISA 法测定加工豆类产品的缺陷致敏性不确定：目前已有商品化大豆抗原蛋白的检测试剂有大豆球蛋白检测试剂盒和β-伴大豆球蛋白检测试剂盒，但是另两种大豆抗原蛋白 Gly m Bd 30K 和 Gly m Bd 28K 并没有商品化试剂盒。

发酵豆粕检测方法（参考）目录1.检测用仪器简介 (2)2.变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 (3)3.Elisa 大豆球蛋白（酶联免疫法） (6)4.小肽的检测（酸溶蛋白） (10)5.寡糖的检测——薄板层析法（TLC） (11)6.乳酸的检测 (12)7.蛋白溶解度的检测（PS） (13)8.发酵豆粕蛋白溶解度的检测（改良） (14)9.水溶性蛋白的检测 (15)10.挥发性盐基氮（VBN） (17)11.PH 值测定 (19)12.水苏糖含量的测定 (20)13.水分、粗蛋白、粗灰分、粗纤维、尿素酶活性的检测 (20)1、检测用仪器简介2、变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速而且可重复的方法。

通过对电泳条带的观察和分析，可以很明显的看出发酵前后或不同产品的抗原蛋白含量。

一、 原理SDS —聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳主要依据蛋白质的分子量对豆粕中的抗原蛋白进行分离。

SDS 与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折迭结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。

SDS —蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。

由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。

SDS —PAGE 因易于操作和用途广泛， 成为许多研究领域中一种重要的分析技术。

二、 仪器 1、电泳仪及电泳槽 2、振荡器3、离心机（10000 转）4、移液枪（大、中、小）5、离心管（7ml 、5ml 或 1.5ml 、1ml ）三、 试剂： 1、单体母液： 100ml 丙烯酰胺（ACR ） 30g 甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至 100ml ，棕色瓶 4℃下存放。

可保存 3 个月。

2、分离胶缓冲液（（PH=8.8） 100mlTris-base （1.5mol/L ） 18.17gSDS 0.4g 浓 HCL 调节 PH 至 8.8，定容至 100ml ，过滤，4℃存放。

发酵豆粕的检测方法引言发酵豆粕是一种富含营养的饲料原料，通过发酵过程可以改变其营养成分和口感等特性。

为了确保发酵豆粕的品质和安全性，需要进行一系列的检测方法。

本文将介绍发酵豆粕的检测方法，并重点讨论营养成分、微生物、重金属以及有害物质的检测方法。

营养成分是评价饲料品质的重要指标之一、以下是一些常用的发酵豆粕营养成分的检测方法：1.水分含量检测：采用干燥法测定。

2. 粗蛋白含量检测：采用Kjeldahl法测定。

3. 粗脂肪含量检测：采用Soxhlet萃取法测定。

4. 粗纤维含量检测：采用Weende方法、AOAC方法或Van Soest方法测定。

5.粗灰分含量检测：采用高温炉燃烧法测定。

微生物含量是评估发酵豆粕安全性的重要指标。

以下是一些常用的发酵豆粕微生物检测方法：1.总菌落计数：采用平板计数法或膜过滤法。

2.酵母和霉菌计数：采用平板计数法或膜过滤法。

3.大肠菌群检测：采用MPN法或膜过滤法。

4.乳酸菌计数：采用平板计数法或膜过滤法。

重金属含量是评估发酵豆粕的环境污染程度的重要指标。

以下是一些常用的发酵豆粕重金属检测方法：1.铅和镉的测定：采用火焰原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法。

2.汞的测定：采用氢化物液相色谱法或电感耦合等离子体质谱法。

3.铬、镍、锰和锌的测定：采用火焰原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法。

有害物质的含量是评估发酵豆粕的安全性的重要指标。

以下是一些常用的发酵豆粕有害物质检测方法：1.黄曲霉毒素的测定：采用高效液相色谱法或气相色谱法。

2.农药残留的测定：采用气相色谱法或液相色谱法。

3.病原体的检测：采用PCR法或快速培养法。

结论发酵豆粕的检测方法包括营养成分、微生物、重金属以及有害物质的检测方法。

这些方法可以评估发酵豆粕的品质和安全性，确保其在畜牧养殖中的应用效果。

在实际应用中，还需要根据具体情况选择合适的检测方法，并严格执行相关的检测标准，保证检测结果的准确性和可靠性。

发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。

用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。

关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。

发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。

这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。

发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。

大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。

这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。

本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。

1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。

质检豆粕总结第1篇豆粕中存在着许多抗营养因子，如胰蛋白酶_、低聚糖、大豆凝血素、植酸、脲酶、大豆抗原蛋白(致敏因子)及致甲状腺肿素等，这些抗营养因子不仅影响饲料的适口性，还会影响饲料的营养价值和动物的物质消化吸收以及体内的一些生理过程，严重影响了动物的健康和生产性能。

通常检测豆粕品质的方法有以下几种：1.尿素酶活性(UA)测定法UA测定法是用于测定大豆中脲酶活性的方法，也是测定豆粕中胰蛋白酶_的间接方法，是评定大豆粕的加工程度是否适当及营养品质优劣的传统方法。

将粉碎的大豆粕与中性尿素缓冲溶液混合，在30±℃温度下保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨，在中性条件下用过量的盐酸中和氨，再用氢氧化钠回滴，计算出每分钟每克大豆粕释放氨态氮的毫克数来表示尿素酶的活性(UA)。

通常认为豆粕中脲酶活性越低，豆粕的营养价值就越高，但如果加热过度又会引起氨基酸的被破坏。

2.蛋白溶解度(PS)测定法此方法被认为是一项优于UA测定方法的评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。

方法主要是用氢氧化钾溶解豆粕，测定其中的蛋白含量占未用氢氧化钾处理的豆粕中的蛋白含量的百分比，来表示蛋白溶解度。

其原理是：加热使游离氨基酸与其他化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了蛋白质的溶解。

一般情况下蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，低于65%几乎可以肯定豆粕加热过度，严重过熟，致使蛋白的消化利用率会非常低。

近年来由于加工技术的改进，PS有增高的趋势。

有研究表明，豆粕蛋白在氢氧化钾溶液中的溶解度和脲酶活性呈正相关。

3.营养成分检测评定根据我国国家标准GB/T19541-2004，饲料用大豆粕的质量标准及分级标准主要以粗蛋白、粗纤维、粗灰分为质量指标，按含量分为三级。

三级大豆粕质量指标必须全部符合相应等级规定，二级饲用大豆粕为中等质量指标，低于三级者为等外品。

测定豆粕各项营养成分是评定豆粕营养价值的重要方法。

发酵豆粕教槽料是指猪出生5天后开始补料时至断奶后10 天内所使用的饲料。

在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。

为达到提早...教槽料是指猪出生5 天后开始补料时至断奶后10 天内所使用的饲料。

在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。

为达到提早乳猪猪诱食的目的，又能够克服乳猪断奶营养应激的效果，营养全面、适口性好、消化利用率高和降低腹泻的高品质的乳猪教槽料一直是科研人员研究的热点。

乳猪出生时胃内仅有凝乳酶，胃蛋白酶很少，由于胃底腺部缺乏游离盐酸，胃蛋白酶没有活性，不能很好地消化蛋白质，特别是植物性蛋白质。

这就要求在蛋白原料选择上，既要考虑原料的营养成分，又要考虑其适口性和乳猪的营养生理特点。

不能仅凭简单的实验室分析和资料的说明，应根据以往的经验和实际生产数据来进行选择。

1 蛋白质原料的选择蛋白质原料的选择应从消化率、氨基酸比例、降解产生小肽的速度、蛋白质含量和成本等多方面考虑。

在乳猪教槽料配方中，常用的蛋白质原料有血浆（球）蛋白粉、高蛋白的乳清粉、鱼粉、膨化大豆（豆粕）、发酵豆粕（大豆）和啤酒（核酸）酵母等等。

植物性蛋白中含有许多抗营养因子。

例如大豆抗原（主要以大豆球蛋白和B -伴大豆球蛋白为主）是一种致敏因子，是导致仔猪营养性腹泻的主要原因。

因此大家一直尽量少用植物蛋白，多选用动物蛋白。

动物性蛋白质也有一定的劣势，价格比较昂贵，一些动物性蛋白加工或储存不当容易携带或滋生病原体，鱼粉容易氧化产生过氧化物、组胺和肌胃糜烂素等，同时还有同源性比较近等生物安全问题。

这些问题常常困扰一些配方师，左右为难，难以取舍。

2 发酵豆粕的特点与优势发酵豆粕是利用现代生物技术将植物蛋白源同微生态技术完美结合在一起，是微生态制剂在饲料中原料化的一个体现。

发酵豆粕采用优质多菌种协同发酵，利用微生物丰富的酶系，将植物大分子蛋白降解为寡肽，并将植物蛋白中的抗营养物质如胰蛋白酶抑制因子、脲酶、血凝素、抗原蛋白等彻底分解，植物细胞壁100%破裂，蛋白质消化率大于95% ，显著改善了适口性和消化率。

豆粕品质的检测方法一、评定指标1、1：抗胰蛋白酶的活性：Trypsin Inhibitor Activity TIA大豆粕在0。

01mol/LnaOH浸泡1h过滤,滤液用PBPA水解.测胰蛋白酶活性TIU.1、2：尿酶活性（Urease Activity UA）国际标准法（ISO）、PH增值法（ΔPH法）、扩散法、酚红法。

CHINA规定ΔPH《0。

4 在0.02-0.2之间是优质豆粕.UA与TAI几乎同步失活.在加热过度以前,TIA以全部失活.1、3:蛋白质溶解度:(Protein Solubility)美国乔治大学:Dale & Araba (1987)以检测豆粕是否加热过度.一定量的豆粕与0.2%NaOH溶液混合离心过滤,滤液凯氏测氮.PS<70%,则加热过度,70-80%为适宜,测时其灵敏度不够,粒度影响,当粒度在60-80目时方稳定.1、4：有效赖氨酸:赖与精氨酸属热敏性AA,高温时Lys与还原糖发生Maillard反应.测定法有:A染料结合法(DBL):二硝基氟苯(FDNB),三硝基磺酸(TNBS),酸性橙-12,茚三酮发生特异性呈色反应.B 高效液相色谱法(HPLC)1、5：蛋白质的水溶解度和氮的水溶解度：蛋的质的水溶解度（PDI）与氮的水溶解度（NSI），二者只是与水混合后的搅拌强度不一样。

PDI是8500r/min的速度搅拌10min，NDI是120r/min搅拌30min。

PDI测定豆粕的加热程度比UA和PS（NaOH）灵敏，NSI在7-27.8%是可以接受。

NSI低于10%则为加热过度。

Balloun & Hgymard(1959):加热时间延长，NSI降低，加热过度，则大大降低，鸡的增重与饲料报酬降低。

1、6考马氏亮蓝法：Kratzer(1989): 考马氏亮蓝对蛋白质考马氏亮蓝考马氏亮蓝显色对AA不显色并与PS相关度好但考法测的实际值大大低于凯氏法测的蛋白质溶解度。

1方法薄板层析法（TLC）。

2原理利用不同大小的糖分子在硅胶薄板上的扩散速度的大小不同，将发酵豆粕中的寡糖分开。

3仪器及试剂3.1硅胶板：10*10cm；3.2层析缸（可供放置硅胶板）与硅胶板配套；3.3烘箱；3.4移液枪(10μl)以及其配套枪头；3.5高速离心机；3.6250ml 具塞锥形瓶；3.7乙醇（分析纯）3.8正丙醇（分析纯）3.9乙酸（分析纯）3.10α-萘酚（分析纯）3.11正磷酸（分析纯）4试剂的配制4.1展开液：正丙醇：乙酸：水＝1:1:0.1(V/V/V)4.2显色液：α-萘酚1ml 正磷酸10ml 乙醇989ml 共1000ml5实验方法及步骤检测技术规范与标准方法编号：QB/HHS JC002-2013修订：第1版第1次修改发酵豆粕中不良寡糖的定性检测方法起草：赵丽霞审核：刘永垒批准：执行日期：2013年06月15日5.1寡糖标样：用豆粕代替。

5.2样品的预处理准确称取发酵豆粕样品5.0g于250mL三角瓶中，加入50.0mL80％的乙醇溶液，70℃水浴浸提1h。

取2mL浸提液，10000r/min离心10min，4℃保藏备用。

5.3样品的测定在预制硅胶板上点样，点样量为5μL，点样干燥后在展开液中展开，展开至离硅胶板前沿2cm处。

自然晾干后，喷淋显色液，在140℃下烘5min显色。

6结果判定对比硅胶层析板上，样品和标样的条带，直接判读发酵豆粕中寡糖的降解情况。

不同发酵豆粕样品的TLC图谱6.1样品中寡糖的定性检测结果：1-4号：++++5-6号：+++7号：—8号：++6.2定性判定标准如下：++++：完全没有降解；(图谱斑点与豆粕相同，表现为三个斑点)+++：基本没有降解；(除了豆粕中的三个斑点外，蔗糖上方还多了一个单糖)++：降解不完全；(与豆粕相同有三个斑点，但亮度较暗，如8号样品)+：基本降解；(对应豆粕中的三个样品亮度较暗或很浅)—：完全降解；(图谱上无斑点，表现为图谱中非常干净)。

发酵豆粕饲用品质的评定指标及其应用摘要植物肽蛋白饲料发酵豆粕用品质的评定指标主要有感官指标、常规理化指标、非常规理化指标与尝试检测指标等，本方就这些指标的应用及应注意的问题进行了讨论，指出要正确认识植物肽蛋白饲料发酵豆粕的饲用品质，必须从感观、抗营养因子去除程度、小分子蛋白含量、挥发性盐基氮及有益菌、乳酸含量等方面对其饲用品质进行综合的整体评定。

关键词植物肽蛋白发酵豆粕饲用品质评定指标应用植物肽蛋白饲料发酵豆粕的饲用品质评定指标主要有感官指标、常规理化指标、非常规理化指标与尝试检测指标等。

1.感官指标及其在植物肽蛋白饲料发酵豆粕饲用品质评定上的应用1.1正常植物肽蛋白饲料发酵的色、香、味与粘度色：植物肽蛋白饲料发酵皆为棕黄色，这是由于豆粕经过发酵干燥颜色变深所致。

如果颜色较浅且不均匀，或与豆粕一致，有可能发酵程度不够或掺入生豆粕或其它浅色蛋白原料。

此外，同一批产品颜色应一致，不同批的产品颜色也应一致或接近一致。

香：淡淡的酸香味，无异味与霉味。

加适量的水煮开后有很强且愉快的发酵酸香气，无氨臭。

掺入了载机酸的植物肽蛋白饲料发酵豆粕，酸味较刺激且不均匀。

味：品尝正常无异物感，略带酸涩味。

粘度：植物肽蛋白饲料发酵豆粕按1：1~2加水调和后可感觉其粘度。

水泡评定：将植物肽蛋白饲料发酵豆粕放置到透明烧杯中用水泡，如果溶液及固体植物颜色金黄或灰黄且均匀，又无发黑杂志和黒（硬颗粒则为未发酵或发酵不彻底的豆粕），表明烘干时加热均匀，没有烘干过度，对营养成分保存较好。

闻之有酸香味但无刺鼻感。

上浮的杂质中无赖皮及其它植物杂质，手捏揉觉柔软但无明显颗粒感。

用水不断轻柔冲洗发现水溶物质较多，最后剩下较少渣滓，则质量较好。

这样的豆粕发酵程度较深，经发酵的其高分子蛋白（﹥66.2ku）、中分子蛋白（25~66.2ku）减少，小分子蛋白（﹤25ku）提高，还有更小的物质如肽、氨基酸等，水解度提高，故手捏无硬物颗粒感。

1.2凭感官指标对植物肽蛋白饲料发酵饮用品质评定的局限性常见的植物肽蛋白饲料发酵掺假是往豆粕中掺入其它非豆粕蛋白原料，常见的有玉米蛋白、大米蛋白、棉粕、菜粕与花生粕等植物源蛋白，或肉骨粉、氨基酸菌体蛋白、水解羽毛粉、水解皮革粉与劣质蛋白胨等以提高蛋白含量，但却降低了植物肽蛋白饮料发酵豆粕的饲用品质。

如何评判和检测发酵豆粕的质量?利用现代生物技术将豆粕转化为优质蛋白质饲料原料，是国际研究开发热点，产品问世不到十年，技术和产业化水平在国际上以丹麦最为突出。

我国在这方面的研究始于上世纪九十年代末，目前国内仍处于大规模产业化的初期，已有近百家企业生产发酵豆粕，但品质参差不齐，加之许多生产厂家片面宣传、有意或无意误导，使该类产品在市场上造成很大的混乱，用户无所适从。

如何评判和检测发酵豆粕的质量成为各饲料厂家，甚至有些发酵豆粕厂家(小厂)的一大难题。

1、豆粕发酵的目的明确豆粕发酵的目的，才能够确定评判发酵豆粕质量的主要指标。

豆粕经过发酵其主要目的有以下四个方面：1.1破坏豆粕中抗营养因子豆粕中含有胰蛋白酶抑制因子、低聚糖、凝集素、植酸、脲酶等抗营养因子，发酵过程中通过微生物、酶及发酵产生的有机酸的作用，使得抗营养因子被降解或者钝化，从而得到破坏。

1.2消除豆粕蛋白的抗原性豆粕中含有的 7S 和 11S 蛋白具有很强的抗原性，幼龄动物对其尤为敏感。

在发酵过程中，主要是通过将其降解而使其失去抗原性。

1.3降解大分子蛋白质豆粕中 11S 和 7S 蛋白分子量分别为 350KD 和180KD，通过发酵酶解，被降解为氨基酸及各种多肽，有利于动物的吸收利用。

1.4形成各种有益发酵产物目前豆粕发酵均采用枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌等安全菌株，产品发酵后往往含有较高数量的有益菌和有机酸、蛋白酶等代谢产物。

2、发酵豆粕评判程序对发酵豆粕的评判，可以按四个步骤进行，需要检测的指标如下：2.1感官评判包括色泽、气味、细度。

豆粕经过发酵、干燥后颜色变深，优质的发酵豆粕皆为棕黄色或浅黄褐色。

如果颜色浅而与豆粕一致，有可能发酵程度不够或掺入其他浅色蛋白原料;如果颜色过深(如深褐色)，则表明干燥过度，发生美拉德反应。

发酵豆粕的气味根据菌种和生产工艺的不同，也略有差异，但均应无豆腥味和霉味。

一般为酸香味(较浓郁)，酸味较浓的产品是以乳酸菌发酵为主，该类产品损耗低、成本低、有机酸含量较高、诱食效果较好，可部分降解抗营养因子、粗蛋白一般可提高4-5%、消化吸收率较高。

发酵豆粕检测方法一、乳酸的测定1、试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂2、仪器：磁力搅拌器离心机3、方法：（1）取发酵豆粕样品10g 置于150ml烧杯中加入溶于90ml蒸馏水，在磁力搅拌器上搅拌30min。

（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。

（3）取上清液10ml, 加40ml蒸馏水稀释（以消除底色的影响），用0.1molNaOH标准溶液滴定至溶液PH=8.2为滴定终点。

记录消耗的NaOH体积，记录为V（ml）或（加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH 标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。

（终点到溶液呈现粉红）4、计算乳酸（％）= C×（V－V0）×0.09008×90+mmC——NaOH标准溶液的浓度；V——样品消耗NaOH标准溶液体积；V0——未发酵豆粕消耗NaOH标准溶液体积；0.09008——乳酸的毫克当量。

m——样品质量二、pH的测定称取样品10g与100ml的烧杯中，移取90ml蒸馏水，搅拌30min后，用pHS-3C型pH计测定溶液的pH值。

三、小肽含量测定方法三氯乙酸（TCA）法1、原理：利用三氯醋酸作蛋白质沉淀剂，将发酵豆粕中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，经过滤、离心、消化、蒸馏，测定其蛋白质含量，并以其占样品粗蛋白质的百分数来表示含量。

本方法是参照中华人民共和国轻工行业标准大豆肽粉标准(QB/ T 2653 -2004)基础上修订而来。

2、试剂及仪器：1）15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）；2）4000 转/ 分钟的离心机。

3、方法：准确称取样品3克于100 ml烧杯中，准确加入15 %三氯乙酸溶液25 毫升，混合均匀，静置5 分钟，以中速定性滤纸干过滤，弃去少许初始滤液，将滤液转移至离心管，在4000 转/ 分钟下离心10 分钟，准确移取其上清液10ml于消化管中消化，按粗蛋白质测定方法测定其粗蛋白质含量。