神经元特异性烯醇化酶(NSE)作业指导书

小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 1，25-二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)的含量。

小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠1，25-二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)水平。

用纯化的大鼠 1,25-(OH)2D3 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 1,25-(OH)2D3，再与 HRP 标记的 1,25-(OH)2D3 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。

TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的 1,25-(OH)2D3 呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠1，25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48 孔配置 96 孔配置保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片（48） 2 片（96）密封袋 1 个 1 个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：90ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存终止液 3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。

大鼠神经元特异性烯醇化酶酶联免疫分析（NSE-ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0537r预期应用ELISA法定量测定大鼠血清中NSE含量，有助于诊断小细胞肺癌及相关性疾病。

概述烯醇化酶（Enolase）是参与糖酵解的酶，催化2-磷酸甘油酸向磷酸烯醇丙酮酸的转化，由三种亚基（α、β、γ）组成的二聚体同功酶。

其中αγ和γγ烯醇化酶同功酶存在于神经元及神经来源的细胞中，也称为神经元特异性烯醇化酶（Neurone specific enolase ，NSE）。

在正常大鼠群中NSE含量较低，但在某些神经内皮细胞增生的恶性疾病，如神经母细胞瘤（Neuroblastoma），其含量往往上升。

由于小细胞肺癌（Small cell lung carcinoma，SCLC）是最常表现有神经内分泌性质的肿瘤，目前NSE也是SCLC最敏感最特异的肿瘤标志物。

肺癌是近年来发病率日趋增高的癌种，在种种肺癌中小细胞肺癌占大约20%，因此正确诊断肺癌的类型，特别是确定小细胞肺癌的诊断很重要。

小细胞肺癌患者的αγ和γγ同功酶含量均有不同比例的增高，因些必须在同一敏感度下同时检测NSE的αγ和γγ同功酶含量。

本试剂盒所用单抗只针对NSE的γ亚基，而与α或β亚基无交差反应。

据文献报道，NSE含量测定可作为肺癌、成神经细胞瘤、黑素瘤、精原细胞瘤以及中枢精神系统损伤的诊断指标。

同时，也可用于SCLC治疗前后疗效的监测与预后，以及SCLC 与其它型肺癌的鉴别诊断。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定血清中NSE水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NSE抗原、生物素化的抗大鼠NSE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的NSE呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

《文件已阅声明表》《Procedure circulation form》文件名称: 神经元特异烯醇化酶检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02《文件修改记录页》《Procedure amendment form》表号:KM-MP03.02.03《文件信息表》《Procedure information form》表号:KM-MP03•02•04神经元烯醇化酶（NSE）检测作业指导书（Standard operation procedure for analysis of NSE）1.原理（Test principle）:反应原理“三明治”法，总检测时间：18 分钟。

第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗NSE 特异性单克隆抗体一起孵育，一份钌复合体标记的NSE 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合体。

第二次孵育：加入链酶亲和素包被的微粒，复合体在链酶亲和素和生物素相互作用下形成固相。

将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。

未结合的物质通过ProCell 除去。

在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。

通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2 定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。

2.样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:2.1样本收集（specimen collection）：类型（type）：血清（serum）；用量（volume）50μL，仪器加样量（sample volume ）20μL。

2.2拒收标本（specimen rejection）：EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血（hemolysis）标本拒收2.3标本储存条件(sample storage conditions)：室温（room temperature）保存6小时； 2-8℃24小时； -20℃3个月；十五天后处理标本。

医疗器械产品技术要求编号：
神经元特异性烯醇化酶(NSE)测定试剂盒(化学发光免疫分析法) 1.产品型号/规格及其划分说明
1.1型号规格
480测试/盒，96测试/盒。

1.2结构组成
校准品靶值批特异，详见定值单。

不同批号的组分不得混用。

1.3适用范围
用于体外定量测定人血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的含量。

2.性能指标
2.1外观
组分齐全、完整；溶液无混浊，无沉淀或絮状物；微孔板包装袋无破损、漏气现象。

2.2准确度
回收率应在90%～110%范围内。

2.3线性
在[0.5，200]ng/mL范围内，r应不小于0.9900。

2.4空白限
应不大于0.50ng/mL。

2.5精密度
2.5.1批内精密度
手工操作应不大于10.0%，全自动操作应不大于8%。

2.5.2批间精密度
应不大于15.0%。

2.6特异性
根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定了校准品的来源、赋值以及不确定度等内容，溯源至企业工作校准品。

2.8稳定性
2.8.1效期末稳定性
NSE试剂盒在2～8℃保存，有效期12个月。

在NSE试剂盒有效期满后2个月内，分别检测2.1～2.4，2.5.1项，结果应符合各项要求。

2.8.2校准品复溶后稳定性
复溶后的校准品在2～8℃条件下保存7天后检测2.2～2.4，2.5.1项，结果应符合各项要求。

神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specific enolase）神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）是一种在神经系统中高度表达的酶，属于烯醇化酶家族。

它是一种非常重要的标记物，用于检测神经元的功能状态、损伤程度以及各种神经系统疾病的诊断和监测。

一、NSE的基本特性NSE是在神经元中高度表达的一个酶，也称为γγ-烯醇化酶，它主要参与糖酵解途径中的催化作用。

在人体中，NSE主要存在于大脑、脊髓和外周神经系统中的神经细胞体和轴突。

由于NSE仅在神经系统中表达，并且与其他组织中的烯醇化酶有明显区别，因此被广泛应用于神经系统疾病的诊断和监测。

二、NSE的生理功能1. 参与糖酵解途径NSE作为一种催化酶，在神经元中参与糖酵解途径，将葡萄糖分解为丙酮酸和乳酸，提供能量给神经细胞。

2. 维持神经元的正常功能NSE在神经元的能量代谢中发挥着重要作用，它能够调节神经元的能量供应，维持神经元的正常功能。

3. 参与神经元的发育和成熟研究表明，NSE在神经系统的发育和成熟过程中起着重要作用。

它参与了大脑皮层神经元的生成和迁移，对神经元的形成和连接具有调控作用。

三、NSE与神经系统疾病的关系由于NSE在神经系统中高度表达，在神经系统疾病中有一些特殊的表现，因此NSE被广泛用于神经系统疾病的诊断和监测。

1. 脑损伤脑损伤是指各种原因引起的大脑功能受损。

在脑损伤过程中，由于神经元受到损伤，会释放出大量的NSE。

因此，NSE的检测可以用作脑损伤的指标，在临床上被广泛应用于脑损伤的诊断和评估。

2. 脑肿瘤脑肿瘤是指发生在大脑、脑膜和脑室内的肿瘤。

研究表明，NSE在脑肿瘤的发生和发展过程中发挥着重要作用。

脑肿瘤细胞中的NSE 水平显著升高，因此可以用作脑肿瘤的标记物，帮助医生进行诊断和治疗监测。

3. 神经退行性疾病神经退行性疾病是一类以神经元损伤和退行性变为特征的疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病等。

神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶介绍：神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)是参与糖酵解途径的烯醇化酶中的一种，存在于神经组织和神经内分泌组织中。

NSE在脑组织细胞的活性最高，外周神经和神经分泌组织的活性水平居中，最低值见于非神经组织、血清和脊髓液。

它被发现在与神经内分泌组织起源有关的肿瘤中，特别是SCLC中有过量的NSE表达，导致血清中NSE明显升高。

神经元特异性烯醇化酶正常值：≤12.5μg/L。

神经元特异性烯醇化酶临床意义：(1)小细胞肺癌患者(SCLC)血清NSE明显增高，其诊断灵敏度达80%，特异性达80%～90%，而非小细胞肺癌(NSCLC)患者并无明显增高，故可作为SCLC与NSCLC的鉴别诊断。

血清NSE水平与SCLC的临床分期呈正相关，因此，血清NSE检测对SCLC的监测病情、疗效评价及预测复发具有重要的临床价值。

(2)神经母细胞瘤时，NSE阳性率可达96%～100%，其测定值明显增高，血清NSE水平与病期及预后相关。

测定血清NSE对该类肿瘤的早期诊断及预后判断具有较高的临床价值。

(3)血清NSE增高还可见于少数NSCLC、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、转移性精原细胞癌、黑色素瘤、胰腺内分泌瘤等。

临床医学的研究表明，神经元特异性烯醇化酶(NSE)是一种在临床上很有应用价值的分子学标记物。

这是从2个方面的应用来评述的，一是NSE可以作为肺癌和儿童神经母细胞瘤的肿瘤标记物，用于肺小细胞癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)的鉴别诊断；监测肺小细胞癌和神经母细胞瘤的病情、治疗反应和预报复发。

二是NSE的活性改变同神经损伤所致的许多神经性疾病关系密切。

本文将主要对NSE作为一种有用的肿瘤标记物来评述其临床意义。

(一)NSE对肺小细胞癌的临床意义1．NSE在正常组织中的活性分布对正常人和不同种属动物组织NSE活性测定表明，NSE在脑组织细胞的活性最高，外周神经和神经分泌组织的活性水平居中，最低值见于非神经组织、血清和脊髓液。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。

人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。

大鼠神经特异性烯醇化酶NSE ELISA本试剂盒用于定量检测大鼠血清和血浆中的NSE的浓度。

本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。

抗大鼠NSE单抗包被于酶标板上，大鼠标本中的NSE会与单抗结合。

加入生物素化的抗大鼠NSE（二抗），它将与结合在单抗上的大鼠NSE结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。

辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。

加入TMB显色。

大鼠NSE的浓度与OD(450nm)成正比。

酶标板(Coated Wells) 48wells Anti-Rat NSE Biotin 1 vial浓缩洗涤液(40X)(Washing Concentrate)12.5ml 标准品(Standards) 1 vial显色液(TMB Substrate) 6ml 标准品稀释液(Standard Diluent) 7ml终止液(Stop Solution) 6ml 浓缩酶联物（HRP） 1 vial酶联物稀释液(HRP Diluent) 7ml 生物素稀释液(Biotin Diluent)7ml1.可在450nm处进行读数的酶标仪；2.能精确吸取10-200µL的移液器；3.可调多道（8）移液器（50－200µL）；4.供可调多道移液器使用的试剂存放槽；5.洗瓶或洗板机；6.蒸馏水或去离子水；7.1升的圆柱形量筒；8.移液器：1和（10或25 mL）；9.移液器枪头；10.纸巾；11.计时器，用以监控温育步骤；12.处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。

所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。

使用后立即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确可以导致不准确的结果。

在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。

温育过程中不要让微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中神经特异性烯醇化酶(NSE)的含量。

试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：请来电咨询保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)水平。

用纯化的小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入神经特异性烯醇化酶(NSE)，再与HRP标记的神经特异性烯醇化酶(NSE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的神经特异性烯醇化酶(NSE)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)浓度。

产品型号/规格及其划分
说明1.1规格
包装规格为100人份/盒、100人份×5/盒。

1.2主要组成成分
表1主要组成成分注：校准品靶值、质控品质控范围批特异，具体浓度详见靶值单。

性能指标: 2.1 物理性能
试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；
中文包装标签应清晰，无磨损。

2.2 溯源性
根据GB/T 21415-2008的有关规定，提供所用校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至企业工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

2.3 准确度
回收率应在90%～110%之间。

2.4 线性
在线性范围［0.5，200］ng/mL内，相关系数r应≥0.9900。

2.5 重复性
重复性（CV%）应不高于8%。

2.6 批间差
批间差（CV%）应不高于15.0%。

2.7 空白限
空白限应不高于0.3ng/mL。

2.8 特异性
表2 与细胞角蛋白19片段、非特异性神经元烯醇化酶的交叉反应
反应因子浓度测定结果细胞角蛋白19片段100ng/mL <0.3ng/mL
非特异性神经元烯醇化酶500ng/mL <0.3ng/mL。