NG-MAST在淋球菌耐药监测工作中的应用 - 中国疾病预防控制中心 ...

基金项目:国家科技基础条件平台国家微生物资源平台奖补经费资助项目(NIM Ｒ2015-2作者简介:王春娥(1980－,女,助理研究员,主要从事医学微生物菌种资源的收集、保藏及相关科研。

通讯作者:叶强,主任技师,E-mail:qiangyee@nifdc．org．cn ·论著·淋病奈瑟菌核酸检测试剂盒国家参考品的制备王春娥,卢旭,刘茹凤,石继春,李红,陈琼,唐静,陈翠萍,叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050摘要:目的制备淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG核酸检测试剂盒国家参考品。

方法分别将10株NG和10株非NG参考菌株在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜无污染培养物,用比浊法和显微计数法将不同的培养物制备成10份NG菌悬液阳性参考品、5份精密性参考品和10份非NG菌悬液阴性参考品以及最低检出限参考品,然后利用5种不同来源的NG核酸检测试剂盒验证各种参考品,并考察参考品在不同处理条件下的稳定性。

结果每株菌在各自适宜的培养基和温度下培养后,均生长良好,无杂菌污染。

经5种试剂盒验证检测,10份阳性参考品的检测结果均为阳性,10份阴性参考品的检测结果均为阴性,精密性参考品检测结果为Ct值的CV均小于5．0%;5种试剂盒的最低检出限均能达到1000/mL,其中试剂盒B和E的最低检出限达100/mL。

参考品在28ħ放置7d、37ħ放置3d的热稳定性及反复冻融5次以内的稳定性良好。

结论制备的NG核酸检测试剂盒国家参考品的准确性、特异性及精密性均符合要求,可用于NG核酸检测试剂盒的质量评价。

关键词:淋病奈瑟菌;核酸;试剂盒;参考品中图分类号:Ｒ392-33文献标志码:A文章编号:1005-5673(201605-0021-05DOI:10．13309/j．cnki．pmi．2016．05．004Preparation of national reference for detection kit ofneisseria gonorrhoeae nucleic acidWANG Chun-e,LU Xu,LiuＲu-feng,SHI Ji-chun,LI Hong,CHEN Qiong,Tang Jing,CHEN Cui-ping,YE Qiang National Institutes for Food and Drug Control,Key Laboratory of Method and Standardization for Quality Control ofBiotechnical Products,Ministry of Public Health,Beijing100050,ChinaCorresponding author:YE Qiang,E-mail:qiangyee@nifdc．org．cnAbstract:Objective To prepare the national reference for the detection kit of neisseria gonorrhoeae nucleic acid．Metho-d s Allof10strains of neisseria gonorrhoeae and10strains of non-neisseria gonorrhoeae were cultured in a suitable mediaand temperature,then fresh and uncontaminated cultures were collected．The preparation of references was carried out in bacterial susponsion of both10positivereference of neisseria gonorrhoeae and10negtive reference of non-neisseria gonor-rhoeae,bacterial susponsion of5precision reference,and a bacterial susponsion of minimal detection limit reference by tur-bidimetry and microscopic counting．The references were verified by five PCＲdetection kits for neisseria gonorrhoeae from different companies,and evaluated by stability test under various conditions．Ｒesults Each from all strains grew well inits own suitable media and temperature,and the cultures were not contaminated．The detections showed correct results for10positive and10negative references,respectively,and the CV were all less than5．0%for tested results of precision by verification of the five PCＲdetection kits．A bacterial concentration of1000/mL was determined by the five kits,and a concentration of100/mL determined by the kit No．B and E．The stability tests showed good results on the references after stored at2－8ħfor7days,or37ħfor3days,or5cycles of freezing-thawing,respectively．Conclusion The accuracy, specificity,reproducibility can met the relevant requirements for the prepared national references,which could be used in evaluation of quality control of PCＲdetection kit for neisseria gonorrhoeae nucleic acid．Key words:Neisseria gonorrhoeae;Nucleic acid;Kit;Ｒeference淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG属革兰阴性球菌,为严格的人体寄生菌。

淋球菌耐药检测方法金标准概述说明以及解释1. 引言1.1 概述淋球菌（Neisseria gonorrhoeae）是一种常见的性传播疾病病原体，全球范围内都存在广泛传播。

然而，近年来淋球菌感染的耐药问题日益严重，已成为公共卫生领域面临的严重挑战之一。

因此，有效、准确地检测淋球菌耐药性以及对其治疗方案进行个体化调整变得极为重要。

本文将就淋球菌耐药检测方法金标准进行概述，并详细说明及解释该金标准的应用和意义。

1.2 文章结构本文分为五个部分：引言、淋球菌耐药检测方法金标准概述、淋球菌耐药检测方法金标准说明、淋球菌耐药检测方法金标准解释以及结论。

以下将依次介绍每个部分内容。

1.3 目的本文旨在对淋球菌耐药检测方法的金标准进行概述、说明和解释，进一步加深对该领域的理解与认识。

同时，通过全面了解淋球菌耐药问题背景、现有检测方法以及金标准的应用，促进淋球菌耐药性的科学研究和临床实践，为未来的研究和应用提供借鉴和指导。

2. 淋球菌耐药检测方法金标准概述2.1 淋球菌耐药问题背景淋球菌是一种通过性接触传播且引起生殖系统感染的细菌，被认为是全球最常见的细菌性性病之一。

然而，在过去的几十年里，对于淋球菌抗药性的报告和研究逐渐增加，表明淋球菌感染出现抗药性严重的趋势，给治疗带来了巨大挑战。

2.2 现有淋球菌耐药检测方法目前常用的淋球菌耐药检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和基于PCR 技术的检测方法等。

然而，这些方法在可靠性、效率和灵敏度方面存在着局限，并且不能提供具体的耐药信息。

因此，寻找一个可靠、快速并且有效评估淋球菌耐药性的金标准成为了迫切需求。

2.3 金标准的重要性和定义金标准是指在特定领域或问题中被普遍接受并视为最可靠和准确的参考标准或方法。

在淋球菌耐药检测中，金标准应该能够准确、可靠地确定淋球菌是否对特定药物具有耐药性，并提供详细的耐药信息。

金标准的制定将有助于统一淋球菌耐药检测方法，促进不同实验室和研究机构之间的结果比较和交流。

结核病管理信息系统国家子系统操作手册中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心修改记录目录1。

前言 (4)2。

用户计算机硬件和软件要求 (4)3。

用户计算机软件要求 (5)4.登陆方法 (5)5。

功能操作 (5)5。

1报卡管理 (5)5.1.1报告卡查询 (5)5.1。

2报告卡添加 (6)5。

1。

3报告卡订正或修改 (6)5.1.4报告卡删除 (7)5.1.5报告卡恢复 (7)5。

1.6报告卡审核 (8)5。

1.7报告卡追踪信息填写 (8)5.1.8报告卡收治 (8)5.1.9报告卡放弃收治 (9)5。

1。

10................................................................................................. 显示追踪登记本95.1.11报告卡查重 (9)5。

1.12排除卡浏览 (10)5.2病案管理 (10)5.2.1患者病案登记 (10)5。

2.2患者病案管理 (12)5.2.3患者病案修改 (13)5.2.4患者病案删除 (14)5。

2。

5患者重新登记 (14)5.2.6疑似耐多药患者管理 (14)5.2。

7患者转出 (15)5。

2.8患者转出管理 (15)5.2。

9患者转入管理 (15)5。

2。

10............................................................................................................. 结案审核165.2.11取消审核 (16)5.3项目管理 (16)5.3。

1项目维护 (16)5。

3。

2项目启动情况统计表 (17)5。

4季度录入报表 (17)5.4。

1药品用量季度录入表 (18)5。

4。

2痰涂片盲法复检结果 (18)5。

4。

3初诊患者检查情况 (19)5。

4。

4结核病实验室工作情况 (19)5。

淋病奈瑟菌的耐药性及分子流行病学观察淋病是由淋病奈瑟菌( 淋球菌) 引起的性传播疾病，在世界范围内广泛流行，每年新发感染患者达到1. 06 亿，已严重影响人类的公共卫生安全。

在我国，淋球菌的治疗主要以广谱头孢菌素为主，如头孢曲松、头孢克肟［1］。

近年来，随着抗菌药物的广泛使用，已经出现了对头孢菌素敏感性下降的淋球菌，甚至出现了头孢菌素治疗失败的临床病例报道［2-3］。

各国研究人员均在寻找有效的抗菌疗法，如联合疗法、替代药物、新药研发等。

然而控制感染的蔓延更是重中之重，不同地区感染淋球菌的型别有所差异，NG-MAST 分型是基于测序技术的淋球菌基因分型方法，通过具有高度变异性的porB 基因( 编码孔蛋白) 和tbpB 基因( 编码转铁结合蛋白) 测序分析并与数据库比对后得到基因型，对于了解区域感染淋球菌的分子流行特征及预防控制有一定的意义。

因此，本研究对本区域分离的淋球菌进行耐药性分析及分子分型，报告如下。

1 材料与方法1. 1 菌株收集126 株淋球菌分离自2015 －2016 年浙江萧山医院就诊的泌尿生殖道感染患者，男性标本采自尿道分泌物，女性标本采自宫颈分泌物，剔除同一患者中分离的重复菌株。

所有菌株经过革兰染色镜检、氧化酶试验以及API NH 鉴定试剂条( 法国Bio-Merieux 公司) 鉴定为淋球菌，菌株保存于20%甘油肉汤，置－80℃冰箱备用; 质控菌株ATCC49226 由浙江大学医学院Stijn 教授惠赠。

1. 2 仪器和试剂GeneAmp PCＲSystem 9600 为美国ABI 公司产品( Applied Biosystems) ，EPS-100 电泳仪为上海天能科技有限公司产品，UV-3B 紫外成像仪为珠海黑马医学仪器有限公司产品; Premix Taq Version2. 0 及DNA Marker 购自宝生物工程( 大连) 有限公司。

引物合成及PCＲ扩增产物测序均由上海生物工程有限公司完成。

淋球菌耐药检测方法金标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：淋球菌是一种性传播疾病，感染者可能会出现尿道分泌物增多，尿道或阴道痒感、尿痛、排尿困难等症状。

越来越多的淋球菌感染病例被报告，这也引起了人们对淋球菌耐药性的关注。

淋球菌的耐药性意味着治疗可能面临更大的挑战，因此及早做好耐药性检测至关重要。

淋球菌耐药性检测方法的金标准是一个被广泛认可的标准方法，可以帮助医生准确判断感染者的淋球菌对抗生素的耐药情况，从而选择最有效的治疗方案。

以下将介绍一种被认为是淋球菌耐药检测方法金标准的方法。

首先，淋球菌耐药性检测通常会选择使用培养法。

培养法是一种通过将分离的微生物菌株在适宜的培养基上培养并观察其生长情况来判断其对抗生素的敏感性的方法。

对于淋球菌来说，培养法是最常用的检测方法之一，因为淋球菌在人体内的繁殖速度相对较慢，需要在适宜的培养条件下进行培养才能准确检测其对抗生素的耐药情况。

其次，淋球菌耐药性检测方法金标准还包括了分子生物学方法。

分子生物学方法是一种通过检测微生物的基因组来判断其对抗生素的耐药情况的方法。

通过PCR技术可以快速、准确地检测淋球菌的基因组，并判断其对抗生素的耐药性。

分子生物学方法在淋球菌耐药性检测中起到了至关重要的作用，可以帮助医生更快速、更准确地做出治疗决策。

最后，淋球菌耐药性检测方法金标准还需要考虑到药物敏感性测试。

药物敏感性测试是通过将淋球菌菌株与不同抗生素的药物敏感性进行实验观察，以确定淋球菌对抗生素的耐药情况。

不同的淋球菌品系可能对同一种抗生素表现出不同的耐药性，因此药物敏感性测试是淋球菌耐药性检测方法金标准中必不可少的一环。

总的来说，淋球菌耐药性检测方法金标准是一种综合性的检测方法，结合了培养法、分子生物学方法和药物敏感性测试等多种技术手段，可以帮助医生准确判断淋球菌对抗生素的耐药情况，选择最适合的治疗方案。

只有通过这样的金标准检测方法，才能更好地应对淋球菌耐药性的挑战，保障患者的健康。

ctng罗氏组合检测内容罗氏组合检测宣布，用于筛查及诊断沙眼衣原体（CT）与淋球菌（fungus)（NG）病原体感染的全新cobas4800CT/NG检测项目，于2014年12月获中国国家食品药品监督管理局（CFDA）批准在华上市。

据悉，该检测是唯一同时获得CFDA和美国食品药品监督管理局（FDA）认证的CT/NG检测项目，通过体外核酸扩增技术，帮助在常规临床筛查和诊断中发现有症状和无症状CT/NG感染者，实现对病患的早期筛查与早期治疗，为减少患者远期并发症及安全提供保障。

CT/NG被认为是全球引起性传播疾病（STD）的首位和第二位的病原体，男女均可感染，以性行为为主要传播途径。

在我国，自1980年以来，STD发生率显著增加。

在所有STD中，由CT/NG感染引起的沙眼衣原体疾病和淋病占比也分别达到20.7%、17.7%。

CT/NG感染在我国存在严重的发现不足，问题之一就是检测方法。

中国疾病防止控制中心性病控制中心副主任陈祥生教授表示，cobas4800CT/NG检测的上市对于预防及控制性传播疾病具有非常重要的意义。

目前，预防及控制性传播疾病已成为全球性的公共卫生问题。

性传播疾病的急性感染、慢性症状都有可能导致女性不孕、异位妊娠、宫颈癌等后果。

若能尽早诊断和治疗，CT/NG感染是可以实现治愈的。

因此，除了对公众进行健康宣传及教育，提高人群对疾病的认识，采取有保护措施等行为干预外，针对高危人群进行筛查，提高临床诊断及治疗的生物医学干预更加重要。

北京大学第一医院妇产科感染学组组长刘朝晖教授指出，需要特别关注的是，CT/NG具有无症状感染的特性。

在女性病患中，约80%－90%的CT感染和50%的NG感染无症状。

CT暴露后约有1－3周的潜伏期，而NG在暴露后有少则2－5天，多至30天的潜伏期。

若未经治疗，会引起严重的感染并发症，如不孕不育、异位妊娠、慢性疼痛。

而男性感染后会引发尿道炎，出现尿道分泌物和排尿的现象，还可并发急性附睾炎。

２５８中国感染与化疗杂志２００６年８月１５日第６卷第４期ｃｈｉｎＪＩｎｆｅｃｔｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ａｕｇ．２００６，Ｖｏｌ－６，Ｎｏ．４女性患者淋病奈瑟球菌的耐药性分析管琳，张贤华・实验研究・摘要：目的了解女性淋病患者中分离的淋病奈瑟球菌对抗菌药物的耐药性。

方法用纸片扩散法检测淋病奈瑟球菌对７种抗菌药物的敏感性，用头孢硝噻吩检测产青霉素酶淋病奈瑟球菌（ＰＰＮＧ）。

结果９５株淋病奈瑟球菌中ＰＰＮＧ检出率４０．ｏ％（３８／９５），９５株淋病奈瑟球菌对大观霉素敏感率１００％，对青霉素、四环素、喹诺酮类药物的敏感率仅ｏ％～２．６％，对头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟的敏感率均高于９０％。

结论大观霉素和头孢菌素类药物可作为治疗女性淋病奈瑟球菌感染的首选药物。

关键词：淋病奈瑟球菌；耐药性中图分类号：Ｒ８２８．２；Ｒ３７８．１６文献标识码：Ｂ文章编号：１｛１ｆ伊７７０８（２００６）０４一０２５８—０２ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＮＰＺｓｓｅｒｉｎｇＤ咒Ｄｒｒ庇ｏｅｎＰｉｓｏｌａｔｅｓｆｐｏｍｆｅｍａｌｅｐａｔｉｅｎｔｓ（爿姒ＮＬｉ行，ＺＨＡＮＧＸｉ口柙一矗“口．（Ｌｎ６０，‘ｎｆｏｒｙ＾４Ｐｄｉ（。

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