实验一薄层色谱和纸色谱课件
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实验一薄层色谱法(TLC)一、实验目的掌握薄层色谱法的基本原理,进而掌握色谱分离、纯化、定性、定量的理论基础,掌握TLC在农药残留分离中的定性应用二、实验原理1、TLC分离原理残留农药中各组分本身分子结构不同,极性、溶解度大小也不同,各组分对吸附剂的吸附能力也就不同。
当展开剂流经吸附剂时,各组分会发生无数次的吸附—解吸附的过程,吸附力弱的组分随流动相迅速向前,而吸附力强的组分则滞后,由于各组分之间的迁移速度不同而实现分离。
组分被分离后在TLC上的位置,常用比移值R f表示。
R f=原点至被测组分斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离2、TLC显色方法(1)紫外显色(2)显色剂(参考文献)➢通用型显色剂:碘熏、高锰酸钾、重铬酸钾、磷钼酸等➢专属型显色剂:硝酸银、氯化铁、香草醛等三、实验试剂、材料薄层层析板(硅胶)、层析缸、点样毛细管、紫外分析仪、碘熏缸(自制碘熏)、乙酸乙酯、石油醚四、实验步骤1、取一薄层层析板,在距离上、下边缘0.5 cm处,用铅笔各画一水平直线,然后在下方直线上等距离标记三个点,作为原点。
(注意:标记点不要紧靠薄层板两侧,以防止产生边缘效应。
)2、用点样毛细管在标记的原点处,依次点入测试样品A、AB、B。
然后,紫外灯照射,观察各样品斑点的初始形态特征,并记录1。
(注意:毛细管不可混用;垂直点样,不可戳破硅胶薄层;点样斑点直径尽可能小,斑点之间不可交叉。
)3、层析缸中倒入一定体积的溶剂A,然后将点好样品的薄层板放入,待溶剂前端展开到薄层板上方直线以后,取出。
待溶剂挥发完全后,紫外灯照射,观察各样品斑点在薄层板上的迁移情况,并记录2。
(注意:层析缸中溶剂不可加入过多,溶剂面不可高于薄层板下方所画直线,以防止点样样品解吸附到溶剂中。
)4、将上述层析缸中的溶剂A更换为溶剂B,然后将溶剂已经挥发完全的薄层层析板放入,按照上述方法,待溶剂前端展开至薄层板上方直线后,取出。
紫外灯照射,观察各样品斑点迁移情况,并记录3。