Ca++ Mg++- ATP酶活性测定使用说明
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ATP荧光检测仪使用说明解析
ATP荧光检测仪使用说明解析ATP荧光检测仪是一种用于检测微生物活性的仪器。
ATP是细胞内的能量储存分子，其浓度与细胞活性呈正相关关系。
ATP荧光检测仪可以通过测量样品中ATP分子的荧光强度，快速、准确地评估样品中微生物的活性水平。
本文将对ATP荧光检测仪的使用说明进行详细解析。
第一步：仪器准备1.检查仪器是否安装正确，所有连接口是否连接牢固。
2.检查是否有足够的ATP检测试剂盒和清洗溶液，并确保这些试剂的保存条件符合要求。
3.打开ATP荧光检测仪的电源开关，让仪器预热10-15分钟。
第二步：样品准备1.根据需要选择合适的样品类型（如水质、食品、土壤等）。
2.依据样品特性和使用的ATP检测试剂盒，选择合适的提取方法将样品中的ATP释放出来，常用的提取方法包括破碎细胞、离心沉淀等。
3.提取样品中的ATP后，获取样品的取样体积，根据ATP检测试剂盒的说明书，将相应体积的ATP检测试剂加入样品中。
第三步：测量操作1.将ATP样品和ATP检测试剂混合均匀，确保反应发生。
2.打开ATP荧光检测仪的样品室盖，将混合样品倒入样品室中。
注意不要超过样品室的标记线。
3.关上样品室盖，调节仪器的参数（如增益、积分时间等），确保仪器的测量参数符合试剂盒说明书中的建议。
4.点击仪器上的开始测量按钮，等待一定时间（通常几秒钟到几分钟不等），仪器将测量并记录样品中的ATP荧光强度。
5.把样品室清洗干净，避免交叉污染。
第四步：数据分析1.仪器测量完毕后，ATP荧光检测仪将显示出测量结果。
2.根据ATP检测试剂盒的说明书，将测得的荧光强度转化成对应的ATP浓度。
3.将不同样品的ATP浓度进行比较，并结合样品的特性和背景资料，评估样品中微生物的活性水平。
第五步：仪器的日常维护1.每次使用完毕后，将ATP荧光检测仪的样品室和周围区域彻底清洗干净，以防止污染和交叉感染。
2.定期检查仪器的电源线、通信线和连接线是否完好无损。
3.定期检查ATP检测试剂盒的保质期和存储条件，及时更换过期或损坏的试剂盒。
ATP检测试剂盒使用说明书北京康碧泉代理
1. Introduction
ATPLite TM is an Adenosine TriPhosphate (ATP) monitoring system based on firefly (Photinus pyralis) luciferase. This luminescence assay is the alternative to colorimetric, fluorometric and radioisotopic assays for the quantitative evaluation of proliferation and cytotoxicity of cultured mammalian cells. ATP monitoring can be used to assess the cytocidal, cytostatic and proliferative effects of a wide range of drugs, biological response modifiers and biological compounds 1,2,3,4,5,6. The major advantages of this system are high sensitivity, excellent linearity, simplicity, fast results and the lack of cell harvesting or separation steps. Furthermore, the PerkinElmer ATPLite “Constant Quanta TM ” assay system produces a long lived “glow” type signal with a half-life of greater than five hours, therefore a special luminometer with injectors is not required. The kit is ideal for use with the PerkinElmer TopCount Microplate Scintillation and Luminescence Counter and the LumiCount Microplate Reader in both 96- and 384-well microplates. The simplicity of the ATPLite assay system in a 96-well microplate is illustrated in Figure 1.
ATP荧光快速检测仪的操作介绍
ATP荧光快速检测仪的操作介绍ATP荧光快速检测仪是一种实时监测微生物污染的现场检测设备，主要利用荧光素酶系统检测样品中的ATP（三磷酸腺苷）含量，从而快速获得样品的微生物负载情况，是目前水质监测、食品卫生、药品生产等行业中常用的检测手段之一。
本文将介绍ATP荧光快速检测仪的基本操作。
准备工作使用ATP荧光快速检测仪进行检测需要准备以下物品：•ATP检测仪•检测笔•校准液•样品采集容器（如杯子或培养皿）•蒸馏纯水•消毒剂在开始检测前，需要先进行一些准备工作：1.样品采集：根据需求选择合适的样品采集容器，正常情况下，采集的样品应全程使用消毒器材，并保证容器内外无杂质。
2.样品浓度：ATP检测仪适用于样品的浓度在10-10-10-12M范围内，需要根据具体情况进行浓度调整。
3.样品准备：将采集好的样品置于ATP检测仪准备好的检测采样区域内，等待检测仪进行检测。
检测流程ATP荧光快速检测仪的操作流程分为以下几步：1.校准：在进行检测前，需要进行ATP检测仪的校准。
选择适合的校准液，在ATP检测仪的校准区域进行校准操作。
注：使用过期的校准液可能会影响检测结果。
2.荧光探针：校准完成后，选择正确的荧光探针，并将探针插入ATP检测仪的检测区域，等待仪器自动校准。
3.采样：将准备好的样品放置于ATP检测仪的样品区域内，按下检测笔，让检测笔尽量贴近样品液面，等待荧光测量结果。
4.结果读取：ATP荧光快速检测仪通常会在3秒内给出样品的ATP负载量（以RLU为单位），通常将结果温馨提示标记为通过或未通过。
需要注意的是，不同行业适用的ATP检测范围可能不同，需要根据实际需求进行设置。
5.维护保养：检测完毕后，需要对ATP检测仪进行清洁，以保证仪器的精度和可靠性。
注意事项在操作ATP荧光快速检测仪时，也需要遵守以下注意事项：1.样品的采集应该全程使用消毒器材。
2.样品的存储时间长短、条件等都会影响检测结果，需要注意存储。
ATP酶活性检测试剂盒
ATP酶活性检测试剂盒（样本无需高速离心样本无需高速离心，，可测Na+k+、Ca2+Mg2+、Ca2+、Mg2+_ATPase)说明书修订日期：2019.01.22 Cat number：KGT026Store at -20 for for 6 months℃For Research Use Only（科研专用）一、试剂盒介绍ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。
本试剂盒的测定原理是依据ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
本试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。
二、试剂组份组份名称KGT02650tests保存条件试剂A 10mL×3试剂B 10mL×1试剂C 10mL×12-8℃试剂D 粉剂×3 -20℃试剂E 粉剂×1试剂F 粉剂×12-8℃试剂G 10mL×2 RT试剂H 粉剂×3试剂I 粉剂×12-8℃试剂J：2.5 mol/L 硫酸100mL×1 RT 试剂K：10 m mol/L 标准磷储液10mL×1 2-8℃试剂D：-20℃以下保存6个月。
用时每支加双蒸水至5ml，现用现配。
余下的-20℃以下可保存一周。
试剂E：用时每支加双蒸水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。
试剂F：用时每支加双蒸水至10ml[注1]，充分加热使其完全溶解，室温保存。
试剂H：用时每瓶加双蒸水至40ml溶解，（溶解后避光4℃可保存一周）。
试剂I：用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。
0.5umol/ml标准磷工作液配制：用时将试剂K作20倍稀释: 取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。
定磷剂的配制：按双蒸水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
ATP荧光检测仪器的使用
ATP荧光检测仪器的广泛应用是因为人们越来越重视食品的快速检测，现在为了保持食品的色泽和风味，延长食品的保质期，一些商家开始向食品中添加各种添加剂给食品安全带来了许多隐患。
每年都有很多食物在这种背景下，开展全面的食品微生物检测是非常重要的必要。
那为什么要用ATP荧光检测仪器来测定食品中微生物的含量呢？是这样，传统的检测技术耗时长，检测效率慢，难以适应快速发展社会需求，随着检测技术的不断创新，新的食品快速检测技术和方法正在保障食品产品安全扮演着越来越重要的角色。
随着社会的进步和发展，食品检验设备可以快速检测随着快速发展，新的食品快速检测设备得到了开发和用户的认可，被广泛使用。
ATP荧光检测仪器采用手持设计。
体积小，携带方便，可以满足用户随时进行现场移动快速检查的需求。
它的工作工作原理是ATP荧光法。
三磷酸腺苷在所有生物的细胞中都非常丰富，它是由荧光剂和三磷酸腺苷发出的利用生物发光现象测定样品。
ATP荧光检测仪器详细介绍：可用于医疗系统物体表面及操作人员手等表面洁净度快速测定的专用设备。
也可用于表面洁净度测定及微生物生长控制。
该设备采用化学反应检测ATP，用ATP拭子采集标本。
ATP拭子被缓冲液浸湿，这样有助于从干燥或湿润的表面提取生物物质（ATP）。
拭子也含有一种可以冲破生物膜的试剂，使其下可能存在的生物体暴露出来。
标本采集后，拭子应浸泡在能将细胞内ATP释放出来的容剂中。
而后细胞内部释放出的ATP、以及拭子从设备表面抹取的ATP再和Ultrasnap独特的液体试剂一起反应。
ATP荧光检测仪器特性：灵敏度高——10-15～10-18 mol速度快——常规培养法18-24h以上，而ATP只需要十几秒钟.可行性——微生物数量与微生物体内所含ATP有明确的相关性。
通过检测ATP含量，可间接得出反应中微生物数量可操作性——传统培养方法需要在实验室由经过培训的技术人员进行操作；而ATP快速洁净度检测操作非常简便，只需简单的培训即可由一般工作人员进行现场操作。
Ca++ Mg++- ATP 酶活性测定说明书
货号：QS1701 规格：50管/24样Ca++ Mg++-ATP 酶活性测定说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
测定原理：根据Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
自备实验用品及仪器:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体50mL ×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×3 支，-20℃保存。
用时每支加1mL蒸馏水，现用现配；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。
用时加入3mL蒸馏水，4℃保存。
试剂七：粉剂×1瓶, 4℃保存。
用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。
试剂八：粉剂×1瓶, 4℃保存。
用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。
试剂九：液体25mL×1 瓶，室温保存。
试剂十：10mmol/L 标准磷贮备液10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂十 20倍稀释，即取 0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水充分混匀。
O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为定磷剂的配制：按H2浅黄色。
若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
样品酶液的制备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
限制酶使用说明
■ 保存
开封后室温保存。
Double Digestion(双酶切反应)时 Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表
■ 说明 使用二种酶同时进行 DNA 切断反应 (Double Digestion) 时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa 采用 Universal Buffer 表示系统，并对每种酶表示了在各 Universal Buffer 中的相对活性。尽管如此，在进行 Double Digestion 时，有时还 会难以找到合适的 Universal Buffer。 本表以在 pUC 系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了在 Double Digestion 可使用的最佳 Universal Buffer 条件。在本表 中，各 Universal Buffer 之前表示的 [数字×] 是指各 Universal Buffer 的反应体系中的最终浓度。TaKaRa 销售产品中添附的 Universal Buffer 全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1×时稀释至10倍，2×时稀释至5倍进行使用。 ■ 注意 ◇ 1 μg DNA 中添加10 U 的限制酶，在50 μl 的反应体系中，37℃下反应1小时可以完全降解 DNA。 ◇ 为防止 Star 活性的产生，请将反应体系中的甘油含量，尽量控制在10%以下。 ◇ 根据 DNA 的种类，各 DNA 的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生 Double Digestion 不能顺利进行的可 能。
泳图谱，判断酶中是否夹杂有非特异性核酸酶。 2. 基因组 DNA 分析
对指定的限制酶(在酶的分项介绍中标明)进行该项检测。在适当的细菌 DNA 底物中 (琼脂糖凝胶块 中的 DNA 浓度为0.5 μg/50 μl)加入20～150 U 的限制酶，反应24小时，然后进行琼脂糖电泳，根据电泳 图谱，确认酶中是否含有杂质。 3. 连接—再切检定
ATP酶(ATPase)说明书活性微生物
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
再与 HRP 标记的 ATP 酶（ATPase）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底 洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最 终的黄色。颜色的深浅和样品中的 ATP 酶（ATPase）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下
测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中 ATP 酶（ATPase）活性浓度。
计算 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
再与 HRP 标记的 ATP 酶（ATPase）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底 洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最 终的黄色。颜色的深浅和样品中的 ATP 酶（ATPase）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下
测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中 ATP 酶（ATPase）活性浓度。
计算 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
ATP测定试剂盒使用说明书 产品简介：
即使出厂的时候经过严格的操作，标准检测溶液中可能还会有微量的 ATP 残留，可以 通过在室温下静止的方法烧光其中的 ATP，一般需要 20 分钟，这一步对于测量超微量 ATP 是十分必要的。
本试剂盒使用方便，通常可以在 30-60 分钟内测定完成 10-20 个样品的测定。 本试剂盒提供的试剂可以检测 100 个样品。 包装清单：
ATP 检测试剂
1ml×5 瓶
ATP 标准溶液(1mM)
1ml
ATP 检测裂解液 5×
5ml
说明书
1份
保存条件： -20℃保存，半年有效。-70℃保存，一年有效。 ATP 检测试剂需避光保存。ATP 检测
沈阳中科靓马生物工程有限公司
ATP测定试剂盒使用说明书
产品简介：
本公司提供的 ATP 测定试剂盒(ATP Determination Kit),是基于有 ATP 存在的条件下，萤
火虫荧光素酶可催化底物 D－荧光素氧化并发射荧光（约 560nm，pH7.8），以及在除 ATP
外其它底物处于过量的情况下，光子数量与 ATP 量呈线性关系这一原理。
液 4℃保存请于 5 天内使用完。 注意事项： 1、ATP 检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融将导致失活。 2、ATP，特别是裂解后样品中的 ATP 在室温下不稳定，需在 4℃或冰上操作。
1
沈阳中科靓马生物工程有限公司
3、5×ATP 检测裂解液要用双蒸水稀释成 1 倍浓度后使用。 4、本试剂盒须与光度计或液闪仪匹配使用。 5、实验时应穿戴一次性手套操作，以免外源 ATP 污染。 使用说明： 1. ATP 标准曲线制定：
⑴．冰浴上溶解待用试剂，把 ATP 标准溶液用双蒸水或去离子水稀释成适当的浓度梯 度。具体的浓度需根据样品中 ATP 的浓度而定。一共需稀释 5 个梯度。加入标准检测溶液 中稀释的 ATP 标准溶液其体积不应超过总检测液的 10％。
本试剂盒使用方便，通常可以在 30-60 分钟内测定完成 10-20 个样品的测定。 本试剂盒提供的试剂可以检测 100 个样品。 包装清单：
ATP 检测试剂
1ml×5 瓶
ATP 标准溶液(1mM)
1ml
ATP 检测裂解液 5×
5ml
说明书
1份
保存条件： -20℃保存，半年有效。-70℃保存，一年有效。 ATP 检测试剂需避光保存。ATP 检测
沈阳中科靓马生物工程有限公司
ATP测定试剂盒使用说明书
产品简介：
本公司提供的 ATP 测定试剂盒(ATP Determination Kit),是基于有 ATP 存在的条件下，萤
火虫荧光素酶可催化底物 D－荧光素氧化并发射荧光（约 560nm，pH7.8），以及在除 ATP
外其它底物处于过量的情况下，光子数量与 ATP 量呈线性关系这一原理。
液 4℃保存请于 5 天内使用完。 注意事项： 1、ATP 检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融将导致失活。 2、ATP，特别是裂解后样品中的 ATP 在室温下不稳定，需在 4℃或冰上操作。
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沈阳中科靓马生物工程有限公司
3、5×ATP 检测裂解液要用双蒸水稀释成 1 倍浓度后使用。 4、本试剂盒须与光度计或液闪仪匹配使用。 5、实验时应穿戴一次性手套操作，以免外源 ATP 污染。 使用说明： 1. ATP 标准曲线制定：
⑴．冰浴上溶解待用试剂，把 ATP 标准溶液用双蒸水或去离子水稀释成适当的浓度梯 度。具体的浓度需根据样品中 ATP 的浓度而定。一共需稀释 5 个梯度。加入标准检测溶液 中稀释的 ATP 标准溶液其体积不应超过总检测液的 10％。
ATP含量检测试剂盒(可见分光光度法)使用说明
ATP含量检测试剂盒（可见分光光度法）使用说明注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0300规格：100T/48S产品内容：组分规格保存试剂一底物液Ⅰ粉剂×1瓶室温保存底物液Ⅰ配制：用时加10mL煮沸双蒸水溶解，并沸水浴使溶解完全；临用前观察如有结晶，可沸水浴溶解后置于37℃保存待测。
试剂二底物液Ⅱ20mL×1瓶4℃保存试剂三促进剂粉剂×2支-20℃保存稀释液760μL×2瓶4℃保存试剂三应用液（促进剂）配制：临用前取1支试剂三稀释液加入1支试剂三粉剂中，充分溶解备用。
试剂四沉淀剂液体 5.5mL×1瓶4℃保存试剂五显色剂甲液7mL×4瓶4℃保存乙液6mL×4瓶4℃保存显色应用液的配制：用时取一瓶显色剂甲液加入一瓶显色剂乙液中，充分混匀4℃待用，现用现配。
试剂六终止剂50mL×1瓶室温保存试剂七ATP标准品粉剂×2支4℃保存5mmol/L ATP标准品贮备液配制：用时加双蒸水定容至1mL，制备5mmol/L ATP标准品贮备液。
1mmol/L ATP标准品应用液配制：将标准品贮备液与双蒸水1:4稀释，即5倍稀释。
产品说明：三磷酸腺苷（adenosine5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。
ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。
ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。
通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。
通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。
ATP含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的ATP水平。
自备仪器和用品：分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、台式离心机、研钵和蒸馏水。
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Ca++Mg++-ATP酶活性测定使用说明
分光光度法货号：BC0960
规格：50管/24样
产品说明：
Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
根据Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP 酶活性高低。
需自备的仪器及用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×3支，-20℃保存。
用时每支加1mL蒸馏水，现用现配。
用不完的试剂-20℃可保存一周。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。
用时加入3mL蒸馏水，4℃保存。
试剂七：粉剂×1瓶，4℃保存。
用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。
试剂八：粉剂×1瓶，4℃保存。
用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。
试剂九：液体25mL×1瓶，室温保存。
试剂十：10mmol/L标准磷贮备液10mL×1瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL标准磷应用液配制：将试剂十20倍稀释，即取0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水充分混匀。
定磷剂的配制：按H2O:试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。
若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
样品酶液的制备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
操作步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应（在EP管中加入下列试剂）
对照管测定管
试剂一（μL）13090
试剂二（μL）4040
试剂三（μL）4040
试剂四（μL）4040
试剂五（μL）40
样本（μL）200
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴10min。
试剂六（μL）5050
样本（μL）200
混匀，8000g，常温离心10min，取上清液
3、定磷（1.5mLEP管中依次加入下列试剂）
空白管标准管对照管测定管
0.5μmol/ml标准磷应用液（μL）100
上清液（μL）100100
蒸馏水（μL）100
定磷试剂（μL）1000100010001000
混匀，室温放置30min，在660nm处比色。
注意事项：
1、由于每一个样都必须做对照，本试剂盒50管只能测24份Ca++Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。
所以对测定所用试管要求严格无磷。
避免磷污
染是检测成败的关键。
3、空白管和标准管只要做一管。
计算
1、血清（浆）Ca++Mg++-ATPase活力的计算:
定义：规定每小时每毫升血清（浆）中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++Mg++-ATP酶活力（U/mL）=[C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷V样÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
组织中Ca++Mg++-ATPase的计算：
2、组织、细菌或细胞中Ca++Mg++-ATPase活力的计算：
（1）按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
ATP酶活力(U/mg)=[C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷（V样×Cpr）÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++Mg++-ATP酶活力(U/g)=[C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A 空白管）÷(W×V样÷V样总)÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
定义：规定每小时每1万个细菌或细胞中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++Mg++-ATP酶活力(U/104)=[C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷(500×V样÷V样总)÷T=0.015×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空
白管）
C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.5mL；V样：加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1/6小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。