液基细胞学-巴氏染色细胞图片

（4）由于标本的不同，同样配方的EA染液可造成偏蓝、偏绿和偏红，对 不同的标本应该使用不同的EA染液。一般认为，EA36和EA50用于妇科 标本，而EA65或改良EA用于非妇科标本。 （5）胞浆不分色的另一重要原因是由于EA染液的PH值不恰当所致。如 染色为红色，可以加少许磷钨酸溶液纠正；如染色均为蓝色或绿色， 可以加少许饱和碳酸锂溶液纠正。

简易EA染色结果
细胞核：呈蓝色
基底层、中层、表层角化前细胞质： 蓝绿色
表层细胞质：红色
挖空细胞辨认清晰
念珠细菌：紫红色 滴虫细胞质：浅绿色、细胞核深蓝 色 阴道杆菌：紫蓝色。
简易巴氏染色注意事项

固定：用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定 使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又 湿润时，立即放入盛有95 ％酒精的固定缸内。制 片在固定液内至少保持15-30min 。 湿固定的重要性：标本在新鲜时及时固定是保证 染色效果的重要因素。如苏木素对细胞核的染色， 巴氏染色中胞浆的特殊着色作用，均可因标本干 燥后固定而大受影响 。
氨基酸结构通式
氨基酸三维结构
巴氏染液原理

苏木素染色原理：苏木素是碱性染料，能与细胞核内的主 要化学成分脱氧核糖核酸结合而呈紫蓝色。
苏木素结构
墨水树
巴氏染液原理

桔黄G：是一种小分子染料，能够很快地作用于胞浆。

作用：使宫颈、阴道上皮中非正常角化细胞和角化型鳞癌 细胞的胞浆呈鲜艳的橘黄色。
桔黄G
简易巴氏染色步骤?将刚离心好的tct玻片放入95的酒精15min以上此步骤为湿固定tct玻片不能用吹风机吹干?70酒精15s?50酒精15s?自来水水洗?苏木素染色?1盐酸分化?05氨水蓝化?自来水洗?02磷钨酸水溶液1min?简易ea工作液5min?95酒精清洗?100酒精清洗简易巴氏染色?简易ea染色液的配置

７ ９ ３ ９例 和 Ｃ Ｓ检测 ３ ５ ７ ６例 ．对细胞 学 阳性 患者行 阴道镜 下宫 颈组织病理检查 。
１ ． ２ 方 法
例（ Ｏ ． ６ ％） 。 ３ ５ ７ ６例 ｃ ｓ涂片 中， 阳性 率 ２ ． ５ ％， 其 中非典型细胞 ６ ７ 例（ １ ． ９ ％） 、 鳞状上 皮 内低度 病变 １ ５例 （ ０ ． ４ ％） 、 鳞状 上皮 内高度
１ 资料 与 方 法
２ ． ２ 检 测 的 阳性 率
７ ９ ３ ９例 Ｔ Ｃ Ｔ检查 中 ， 阳性率 ９ ． ２ ％， 其 中鳞状细胞癌 （ Ｓ Ｃ Ｃ ） ９ 例（ ０ ． １ ％） 、鳞状上皮 内高度 病变（ ＨＳ Ｉ Ｌ ） １ ０ ４例（ １ ． ３ ％） 、 鳞 状上皮
内低度病变 （ Ｌ Ｓ Ｉ Ｌ ） １ ４ ９例 （ １ ． ９ ％）、意义不明 的不典型鳞 状细胞
口囫
２ ０ １ ３ Ｎ ０ ． ２ ３ … …
影像与检验
液基与传统巴氏细胞学在宫颈病变筛查中 的对 比分析
刘 香 欧 阳雪
武警上 海总队医院病 理科 ， 上海
２ ０ １ １ ０ ３
【 摘要】 目的 探讨液基细胞学 （ Ｔ Ｃ Ｔ ） 与传统 巴氏细胞 学（ ｃ ｓ ） 在子宫颈病变 中的检出率。方法 采用 Ｔ Ｃ Ｔ与 ｃ ｓ检测 方法对细 胞学分类 诊断 ， 将诊断 Ａ Ｓ Ｃ Ｕ Ｓ （ 不典 型鳞状 细胞 ） 以上病变均列为 阳性 病例 ， 阳性 病例均行阴道镜检查 及多点活 检 ， 并 行病
【 关键词】 膜式液基 薄层 细胞学 ； 传统 巴氏细胞 学 ； 阴道镜 ； 宫颈癌
［ 中图分类号】Ｒ ７ １ １ ． ７ 【 文献标识码】Ａ ［ 文章编 号】１ ６ ７ ４ — ０ ７ ４ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ８ （ ｂ ） － ０ １ ８ ８ － ０ ２

● 自动平衡技术；
● 自动干燥技术；
● 细胞分散技术；
● 细胞防脱粘附技术，有效保证 诊断成分不丢失；
● 细胞匀铺技术，结果诊断更准确。 ● 机器小巧轻便，操作简单。
当前19页，总共39页。
5、耗材系列
制片器（杯）
当前20页，总共39页。
5、耗材系列
宫颈采样刷
当前21页，总共39页。
三、操作方法
当前9页，总共39页。
开展TCT的必要性
诊断优势
相比巴氏检测法：
对异常细胞检出率提高了103%
对低度病变检出率提高了200%。
当前10页，总共39页。
世界卫生组织 中国卫生部
中国妇产科学会
倡议
年满18周岁且有过性生活的女性，每1—2年均应
进行宫颈细胞学防癌体检。
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二、产品介绍
样本前处理（递度离心、全程自动化 混匀、转移）需要人工 处理。
单层均匀平铺 标准化自动染色 6个（单种染色） 高
单层均匀平铺 标准化自动染色 32个（多种染色） 约前者的1/2-3
当前17页，总共39页。
3、液基细胞自动制片机
技术特点 ● 5分钟一次性处理36份标本； ● 八种操作模式，标准化处理
背景干净， 细胞结构清
晰，易于显
微镜观看。 大大提高诊
断准确性。
当前6页，总共39页。
液基细胞学（TCT）技术特点
提高细胞学 诊断准确性
有效保存细胞形态及结构 有效去除红细胞、粘液及杂质等干扰成分
多用途诊断
癌前病变细胞及癌细胞的诊断
宫颈炎的程度评估 微生物感染的诊断
对女性激素水平作出评估
有效保存细胞核DNA，标本可同时应用于免疫组化及HPV分型检测(和众 产品)。

40
宫颈细胞学质量控制三大环节
标本采集的合理性－－妇科医生 涂片制备的优良性－－技术员、供应商 细胞学诊断准确性－－细胞学诊断医生
41
标本采集的合理性＿＿妇科医生
• 规范化的标本采集至关重要 • 最大限度地保持细胞量多和及时固定以保存
细胞结构，阳性率就会提高。 • 妇科医生既要确保采集到足靠量的细胞并及
感技术，细胞转移效果好 纳米膜，孔径7μm，100%截留诊断细胞 细胞数量充足，平铺均匀，薄层 重复制片，满足各种实验需要
14
沉降式液基细胞制片技术LCT
自动化程度最高的液基制片技术 沉降式液基涂片直径1.3cm 原理：梯度离心、自然沉降 FDA认证代表产品：LCT，1998年通过了 1999年引进中国
1、生物感染：HPV（人乳头状瘤病毒，Human Papiloma Virus） 病毒与肿瘤： HBV－肝癌 EBV－鼻咽癌/淋巴瘤
4
美国宫颈癌筛查制（2008）
• 宫颈细胞学筛查间隔时间是每1年1次。连续3次正常者， 可2年1次。
5
宫颈癌前病变及宫颈癌 三阶梯辅助诊断步骤
1、宫颈细胞学检查 2、阴道镜检查 3、宫颈活检病理学检查
25
宫颈液基：HE染色
判读结果：HSIL
26
宫颈液基：巴氏染色
巴氏染色能更加 清楚的表达核的 信息。细胞学的 诊断关键还是在 于核的异型性改 变，核膜，核染 色质，核仁等信 息的表达清楚与 否非常重要。
27
宫颈液基：HE染色
判读意见：HSIL
28
巴氏染色
巴氏染色能 很好的显示 胞浆的色彩 变化，如： 角化不全嗜 橘黄改变， 病原微生物 感染嗜双色 改变，放疗 反应呈多彩 性改变
29

HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值1. 引言1.1 背景介绍宫颈液基细胞检查是一种常见的癌症筛查方法，通过对宫颈细胞进行染色和观察，可以及早发现潜在异常细胞的存在，从而帮助医生及时进行治疗和干预。

而在宫颈液基细胞检查中，HE染色和巴氏染色是两种常用的染色方法。

HE染色是指用苏木精红染色液对细胞组织进行染色，然后通过镜检查细胞结构和形态的变化，从而判断细胞是否正常。

HE染色在宫颈液基细胞检查中具有较高的分辨率和清晰度，可以清晰显示细胞的核质比和细胞核的形态，有利于医生进行细胞学分析和诊断。

巴氏染色是一种特殊的染色方法，可以通过染色剂对细胞核进行染色，使异常细胞核在显微镜下呈现出特殊的形态和颜色。

巴氏染色在宫颈液基细胞检查中常用于检测细胞的DNA含量和核型，可以帮助医生判断细胞的恶性程度和预后。

HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中发挥着重要的作用，它们可以相互补充，提高检测的准确性和灵敏度，为患者提供更准确的诊断和治疗方案。

1.2 研究目的研究目的是通过比较分析HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中的应用价值，探讨它们在临床实践中的优劣势和适用范围。

具体来说，我们的研究目的包括以下几个方面：1. 比较HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的染色效果和细胞形态学分析的准确性，评估它们对细胞结构和形态的显现能力。

2. 探讨HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的操作流程和技术难易度，比较它们的操作成本和时间消耗。

3. 调查HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的临床应用情况和效果评价，探讨它们在筛查、诊断和预后评估等方面的作用及价值。

通过深入研究HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的不同应用价值，我们旨在为临床医生提供更具参考意义的细胞学诊断方法，促进宫颈疾病的早期发现和治疗，提高宫颈液基细胞检查的准确性和可靠性。

1.3 意义宫颈液基细胞检查是一种重要的筛查方法，可用于早期发现宫颈病变及癌变，对于提高宫颈癌的早期发现率和治疗效果具有重要意义。

（27）

（28）

（29）

（30）

（31）

（32）

（33）

（34）

细胞立体结构（宫内膜细胞， 一般5到10个细胞一团
2.胞浆内常出现空泡，挤压细 胞核呈印戒样 3.核轻微增大，核仁可明显
4.一般来说数量较少，背景干 净

他莫昔芬（三苯氧胺） 是一种选择性雌激素受体调节剂，主要用于某些乳 腺癌和卵巢癌的治疗；也可以用于抗骨质疏松治疗 。
第一：判断的要点，在于特征性的核的改变（毛玻璃样外 观）。多核，核内包涵体，镶嵌状排列等特点，并不是最 主要的。 第二：核膜的改变。核膜明显并不是核膜自身的增厚，而 是由于核内病毒颗粒和染色质聚集在核膜下使其增厚。 第三：核内包涵体的注意事项。首先是染色并不一定都是 教科书上说的嗜伊红性，蓝色，蓝绿色等其它颜色也可出 现。其次，疱疹病毒感染不会都出现核内包涵体，一般是 感染的晚期才可见。

念珠菌感染，往往伴有鳞状上皮的轻度增生， 如果是普遍性的增生，核体积增大不超过中层 细胞核的2倍，核膜光滑，核染色质均匀细腻 ，不要随意的归纳为ASC-US。
念珠菌感染的背景与滴 虫感染类似，可见中表 层鳞状上皮细胞非常明 显的“虫蛀样改变”及 细胞的嗜双色现象。比 较而言，滴虫感染炎症 更加明显，细胞碎片多 ，背景更脏；念珠菌感 染则低倍镜下更容易找 到被菌丝串起来的上皮 细胞团。
（22）
（23）

细胞学观察要有组织学基 础，要把平面的图像观察 与立体结构联系起来。
熟悉柱状细胞的形态特点 和成像特点，有助于理解 蜂窝状结构，是阅片过程 中判断腺和鳞来源的技巧 之一。
（24）

四、细胞学检查基本技术： （一）、细胞标本采集方法： １．肿瘤表面直接压片（印片）或刮片法：
宫颈、阴道、口腔、肛管、皮肤等
２．自然分泌液涂片：
痰液，前列腺液，乳头溢液等。
３．穿刺抽吸物涂片（粗针穿刺或细针穿刺） ４．体腔积液涂片。
穿刺抽液至少50ml以上，最好是200ml。
病变细胞采集器(一次性使用)
（一）阅片前了解病史注意结合临床表现 （二）阅片时认真、仔细、全面，防止遗漏， 有效标记阳性细胞。
细胞学诊断报告方式
（一）直接法 （二）分级法 改良巴氏五级分类法：ⅠⅡ Ⅲ Ⅳ Ⅴ （三）描述性诊断报告方式（TBS）
直接法细胞学诊断内容 应包括： 1、有无炎症或特异性炎症；
2、有无核异质细胞（轻、中、重）
3、有无恶性细胞
4、提出建议或提供参考意见（复查、
Hale Waihona Puke 随访、取活检）改良巴氏五级分类法 （多用于宫颈/阴道涂片）
Ⅰ级: 涂片内未见异常细胞(基本正常) Ⅱ级: 涂片内见异常细胞,但均为良性。 Ⅱa 轻度核异质细胞。 Ⅱb 中-重度核异质细胞,属癌前病变。 Ⅲ级: 可疑癌。须随访观察或复查。 Ⅳ级: 有癌细胞，但不典型，尚须证实。 Ⅴ级: 有癌细胞，形态典型。
宫 颈 外 、 内 基 底 细 胞
宫 颈 外 基 底 细 胞 和 炎 细 胞
宫 颈 外 基 底 细 胞 与 炎 细 胞
中层：上皮中部的棘细胞，有棘状 突起，体积较大,30-40um,卵 圆、菱形，胞浆丰富，核居 中，核浆比1：2-3。
中层 外基底层
表层
宫内膜腺细胞
各层上皮细胞
角化前细胞：角质层，梭形、多边 形，40-50um，胞浆丰 富，核小、居中、圆 形，核浆比1：3-5。

HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值【摘要】宫颈液基细胞检查是一项重要的筛查方法，而HE染色和巴氏染色是其中常用的染色方法。

本文从染色原理和特点入手，探讨了两种染色方法在宫颈液基细胞检查中的应用价值。

HE染色可以清晰显示细胞核和细胞质，有利于细胞形态学的分析和诊断；而巴氏染色则能够突出核蛋白质，有助于观察病理性细胞改变。

通过比较两种染色方法的优劣，我们发现结合使用可以提高宫颈液基细胞检查的准确性，进一步优化细胞学诊断的技术和方法。

结合HE染色和巴氏染色的优势，能够更全面地评估细胞形态学的特征，为临床诊断提供更加可靠的依据。

【关键词】关键词：HE染色、巴氏染色、宫颈液基细胞检查、应用价值、原理、特点、比较、优势、准确性、细胞学诊断、技术、方法。

1. 引言1.1 HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值HE染色是一种广泛应用的染色方法，其原理是利用不同细胞结构和染色质的亲和性，通过镜下观察不同颜色反映出细胞的特征。

在宫颈液基细胞检查中，HE染色可以帮助医生明确细胞形态、结构和异型细胞的出现，从而提高癌前病变和癌症的诊断准确性。

相比之下，巴氏染色是一种特异性染色方法，其原理是利用特定的染色剂选择性染色细胞某些成分，如细胞核或核蛋白。

巴氏染色在宫颈液基细胞检查中能够更加清晰地显示细胞核的形态和结构，有助于鉴别异常细胞和癌细胞。

HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中各有其独特的应用价值，结合使用能够提高检查的准确性，进一步优化细胞学诊断的技术和方法，为宫颈癌的早期筛查和诊断提供更为可靠的依据。

2. 正文2.1 HE染色的原理和特点HE染色是一种最常用的组织学染色方法之一，它利用荧光染料霰粒子，使细胞核染色为蓝色，胞质染色为红色，从而观察细胞内各种结构和器官。

HE染色的原理主要是通过染色剂对细胞成分的亲和性，将细胞内的不同结构染色出不同颜色来，以帮助研究和诊断细胞组织的形态结构。

巴氏染色的操作方法染色有4个步骤：1、固定；2、核染色；3、胞浆染色；4、透明。

主要满足以下要求：1。

核结构清晰；2.高透明度；3.适当的分色。

一、固定1、固定的目的细胞制备的快速固定是制备过程中的关键步骤，否则会影响细胞学诊断的准确性。

不同的标本需要不同的固定方法。

最常用的固定方法是以95%乙醇为固定液的湿固定法。

酒精作为一种脱水剂，可以防止细胞内的酶分解蛋白质和自足物质，并固化细胞内的蛋白质、脂肪和糖等物质，从而维持与组织生命相似的成分，从而使细胞的所有部分，尤其是核染色质，易于染色。

酒精固定对Pap染色最重要。

酒精浓度不足导致的固着不良可导致细胞的人为变化，并导致假阳性或假阴性诊断。

2.固定方法湿固定法：作为用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定使用湿固定法。

制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95％酒精的固定缸内。

制片在固定液内至少保持15-30min。

固定时间通常不超过1周。

这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。

如果细胞制剂需要送到另一个实验室或邮寄到其他地方进行染色，可以固定15分钟，取出制剂后立即放入密封容器中，或使用甘油防止制剂干燥。

因为无论固色前后，干燥都会影响染色效果。

3.固定注意事项固定液的过滤：为了防止细胞污染，凡是使用过的固定液，必须过滤后才能再使用。

使用过长的固定液，必须用酒精相对密度计测定，酒精浓度低于90％时应该及时更换新液。

湿固色的重要性：当试样再次新鲜时，及时固色是确保染色效果的重要因素。

例如，苏木精在细胞核上的染色，以及巴氏杀菌染色中细胞质的特殊染色效果，都会受到干燥后样本固定的极大影响。

制片标本的邮寄：标本再固定15min后取出，立即加甘油数滴于制片上，装入密封的小盒中。

实验室在收到标本后，先浸入95％酒精中，使甘油溶去，再进行染色。

二、核染色1.苏木精溶液的浸泡时间一般为3-5分钟，但必须根据气体温度和染色条件进行更改。

苏木精染料溶液在夏季放置时间较长或容易染色，且时间应缩短；冬季，新配制的苏木精染色液和长期使用的稀释苏木精溶液不易染色，应延长染色时间。

HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值1. 引言1.1 研究背景宫颈液基细胞检查是一种常用的筛查宫颈癌前病变的方法，对于早期发现和治疗宫颈异常细胞具有重要意义。

在宫颈液基细胞检查过程中，染色方法是至关重要的环节，其影响着细胞形态的清晰度和准确性。

目前，常用的染色方法包括HE染色和巴氏染色，它们在宫颈液基细胞检查中的应用具有各自的特点和优势。

HE染色是一种广泛应用的常规染色方法，能够显示出细胞的核和胞浆结构，使细胞形态更加清晰可见。

而巴氏染色则是一种专门用于观察细胞核形态和结构的染色方法，能够更加明显地显示出核的特征。

两种染色方法各有其适用的场合和优势，因此在宫颈液基细胞检查中的应用价值也不尽相同。

在深入研究HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的应用之前，有必要对其研究背景进行充分了解，以便更好地理解这两种方法的特点和优势。

通过比较分析HE染色和巴氏染色方法，在实际应用中能够更好地选择适合的染色方法，提高宫颈液基细胞检查的准确性和有效性。

1.2 研究意义宫颈液基细胞检查是一种常见的临床检查方法，用于早期筛查宫颈癌和前癌病变。

而在这一检查过程中，HE染色和巴氏染色是两种常用的染色方法，它们在提高细胞检查准确性和敏感性方面具有重要意义。

通过对HE染色和巴氏染色两种方法在宫颈液基细胞检查中的应用及优缺点进行深入研究，可以为临床医生提供更多的选择，并提高检查结果的可靠性，降低漏检和误诊率，为患者提供更好的诊疗服务。

对这两种染色方法的比较分析也可以促进技术的进步和改进，为宫颈液基细胞检查的发展提供新的思路和方向。

对HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的综合价值进行评估，能够为日后的相关研究提供重要参考和借鉴。

研究HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的应用价值，对于促进医学进步，提高临床诊断水平具有重要的现实意义和深远意义。

2. 正文2.1 HE染色在宫颈液基细胞检查中的应用1. HE染色在细胞形态学评估中的应用：HE染色是一种常用的染色方法，可以染色细胞核和胞质，使细胞结构清晰可见。

巴氏染色评分标准
巴氏染色是一种用于检测细胞形态和结构的常用染色方法，常用于细胞学检查。

其评分标准通常包括以下几个方面：
1. 细胞核的形态：正常的细胞核应该呈现圆形或卵圆形，核膜完整，核仁清晰。

如果细胞核形态异常，如核畸形、核深染或核仁不明显等，可能表示细胞存在病变。

2. 细胞质的颜色和质地：正常的细胞质应该呈现浅蓝色或浅粉色，质地均匀。

如果细胞质颜色异常，如变黄、变红或变绿等，或者细胞质质地不均匀，可能表示细胞存在病变。

3. 细胞的大小和形态：正常的细胞大小和形态应该相对一致。

如果细胞大小不一或形态异常，如出现多核、巨核或小核等，可能表示细胞存在病变。

4. 细胞核与细胞质的比例：正常的细胞核与细胞质的比例应该适中。

如果细胞核相对较大或细胞质相对较少，可能表示细胞存在病变。

5. 其他特征：还可能观察其他特征，如细胞的排列方式、是否有异常细胞群体等。

巴氏染色评分标准的具体细节和权重可能会因不同的实验室和临床应用而有所差异。

在解读巴氏染色结果时，通常需要结合临床病史、其他检查结果以及医生的专业知识进行综合判断。

宫颈细胞学液基薄层制片与传统宫颈涂片巴氏染色的制片效果对比分析闫秀英（1975年），女，汉族，甘肃兰州人，大学本科，病理学主管技师，主要从事病理学技术方面的工作，擅长免疫组织化学染色和分子病理学技术。

宮颈癌在目前全球女性最常见的恶性肿瘤中位于第二，严重危害妇女的身体健康;发展中国家及不发达地区宫颈癌的患病率及死亡率均高于发达国家及地区;发展中国家每年宫颈癌新发病例数约占世界每年宫颈癌新发病例数的80%[1-3];我国宫颈癌的患病率约占世界宫颈癌患病率及死亡率的1/3。

宫颈癌的死亡率仅次于乳腺癌，预后较差。

宫颈癌是能够早期预防、早期诊断、早期治愈的，因此对于宫颈的癌前病变进行早期筛查、早期诊断和早期治疗是提高宫颈癌生存率和治愈率的主要方法。

最基本、最简单的方法是采用传统的宫颈涂片巴氏染色检测技术，目前较发达地区多采用宫颈液基薄层细胞学检测（TCT）进行对宫颈的癌前病变以及宫颈癌的筛查。

液基薄层制片（Thin-Cytologic Test，简称TCT）是近年应用于临床细胞病理学诊断的一种新技术，从根本上解决了常规脱落细胞制片技术难题，如假阴性率高、涂片质量差和丢失细胞1/ 7率高等，为脱落细胞学诊断做出了重大贡献。

TCT 可全自动制备均匀的薄层标本，采用机械、气动和流体动力学原理，大大减少了影响阅片的血液、黏液和炎性细胞。

我们分别对20XX年至20XX年本院1000例妇科传统宫颈涂片和20XX年至20XX年本院1000例液基薄层检测标本进行了回顾性分析、对比，比较了2种方法的制片效果和细胞形态及其影响因素。

1材料与方法1.1材料：由兰州市第一人民医院妇科门诊、住院部及体检中心提供宫颈涂片和液基细胞保存液处理过的标本瓶，所有标本均是新鲜采集及时送检。

细胞保存液、细胞提取液、标本收集瓶、一次性使用宫颈采样拭子刷等由泰普生物科学（中国）有限公司提供。

拭子刷A2型号，由刷杆、套管和刷头（包括刷毛部分和连接部分）组成;刷杆和套管由聚丙烯（PP）制成，刷头由聚乙烯（PE）制成。

巴氏染色原理及操作步骤巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。

苏木素染液，细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。

苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。

因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。

蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。

EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。

伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。

巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌：灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。

生理盐水
15
四 、实验步骤
（1） 取材用灭菌的牙签轻刮口腔上皮，（第一遍弃去 ，注意不要刮破上皮）涂3-4个玻片，晾干。（或刮取 发根毛囊置于载玻片上，晾干）。 （2） 加1N的盐酸水解10-15分钟。轻轻水洗，晾干。 （3） 硫瑾染色15-20分钟。 （4） 压片。 （5） 显微镜观察。巴氏小体靠近核膜边缘，染色较深 ，实际大小1-1.5μm，放大400x 后大约0.4-0.6mm 。
16
要求：
观察尽量多的细胞，统计巴氏小体出现的几率。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是l条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。
巴氏小体直径为lμm左右，其形状有微凸形、三角形、 卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意巴氏小体与细胞 的比例.巴氏小体一般位于核膜附近（为什么？），颜色 比周围的核物质深。
为什么会发生一条染色体的异固缩呢？
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2、剂量补偿（Dosage complement effect） 在XY型性别决定的生物中，性连锁的基因表达在两性 间有相同或相近的剂量遗传效应，也就是说，在雌雄 动物的细胞中，由X染色体编码的酶或其它蛋白等基 因产物在数量和质量上相等或相近。 剂量补偿效应的补偿方式： 哺乳动物 X染色体随机失活或父源X染色体失活 有袋动物 父源X染色体失活 黑腹果蝇 雄性个体X染色体基因表达水平加倍 秀丽线虫 雌性两条X染色体基因表达水平减半
机理； 2. 掌握巴氏小体的玻片制备方法。
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二 、实验原理
1、巴氏小体（Barr body, sex-chromatin body, X-body） 1949年，神经生物学家巴尔在检测雌猫 的神经细胞间期核时发现有一个深染的结构，之后在 女性的许多组织间期细胞核中也发现这种深染的结构 普遍存在，而男人体内没有发现。现在一般认为巴氏 小体是存在于XY型性别决定的生物中，雌性动物的 一条X染色体在间期异染色质化形成深染的结构。这 个小体叫巴氏小体，又叫X小体，性染色质，这种小 体与性别和X染色体的数量有关。