高效液相色谱技术的原理和分析方法

广西植保　３　

文章编号：１００３—８７７９（２０１２）０１－０００３－０４　

嘧霉胺高效液相色谱和气相色谱２种分析方法研究　

蒋廷福　

（广西壮族自治区农药检定管理所，南宁市５３００２２）　

摘要：采用高效液相色谱法和气相色谱法对嘧霉胺进行定性定量比较分析。结果表明：高效液相色谱法的线性相关系数　为０．９９９２，标准偏差为０．０８６，变异系数为０．２７％，平均回收率为９９．４３％；气相色谱法的线性相关系数为１，标准偏差为０．１５，　变异系数为０．４６％，平均回收率为９９．５２％。　关键词：嘧霉胺；气相色谱；高效液相色谱　中图分类号：０６５７．７２　文献标识码：Ｂ　

嘧霉胺是防治灰霉病的一种高效、低毒杀菌剂，　具有内吸传导和熏蒸作用，施药后可迅速传到植物　

体内各部位，有效抑制病原菌侵染酶的产生，从而阻　止病菌侵染，彻底杀死病菌。其化学名称为Ｎ一（４，　

６一二甲基嘧啶一２一基）苯胺。气相色谱法或高效　

液相法对嘧霉胺进行定性定量分析方法已有报道，　但采用气相色谱法和高效液相法２种分析方法对嘧　

霉胺进行定性定量比较分析未见报道。　

１材料与方法　

１．１液相色谱法　１．１．１试剂和溶液甲醇：色谱纯；水：新蒸２次蒸　

馏水；嘧霉胺标样的质量分数为９８．０％（由农业部　农药检定所提供）；３０％嘧霉胺ＳＯ（由桂林集琦生化　

有限公司提供）。　

１．１．２仪器高效液相色谱仪：Ｗａｔｅｒｓ１５２５液相色　谱仪，配有２４８７可变波长紫外检测器和７１７自动进　

样器；Ｗａｔｅｒｓ色谱工作站，色谱柱：２５０　ｍｍ×４．６　ａｌｉａ　

（ｉ．ｄ．）不锈钢柱，内装Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ一３　Ｃ１８填充料，　粒径为５　ｍ。　

１．１．３液相色谱操作条件流动相：甲醇＋水＝７５＋　２５（Ｖ／Ｖ）；流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：３５℃；检测波长　

２７０ｎｍ，进样体积：５　ｍ。在上述液相色谱操作条件　

下，系典型操作参数，可根据不同仪器特点，对给定　的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。典型　

高效液相色谱法的原理及影响因素

高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种在液相中进行分离和分析的高效分析技术。它具有高分辨率、高灵敏度、良好的线性范围和广泛的适用性。以下是关于HPLC的原理和影响因素的详细介绍。

一、高效液相色谱的原理：

高效液相色谱的原理基于物质在液态流动相中的分配和吸附特性，通过调节流动相的组成和性质，控制样品成分在固定相中的分离。高效液相色谱的基本组成包括进样器、流动相系统、柱和检测器。

1.进样器：样品通过进样器引入色谱柱中。进样器可以分为自动进样器和手动进样器两种类型。

2.流动相系统：流动相系统由溶剂混合器、溶剂泵和压力传递系统组成。溶剂混合器用于混合不同溶剂的比例，以制备合适的流动相。溶剂泵用于将流动相以一定的流速送入色谱柱中，常用的泵有恒压泵和梯度泵等。 3.柱：色谱柱是高效液相色谱的核心部件。分离是通过样品成分在柱中的相互作用和分配系数的差异实现的。色谱柱常见的填充物包括C18、C8和氨基硅胶等，不同填充物对于不同的样品具有不同的分离效果。

4.检测器：搭配不同的检测器可以对样品成分进行定性和定量分析。常见的检测器包括紫外可见光谱检测器（UV）、荧光检测器（FLD）、电化学检测器和质谱检测器等。

五、高效液相色谱的影响因素：

高效液相色谱的分离和分析结果受多种因素的影响，包括以下几个方面：

1.流动相组成：流动相的组成直接影响样品成分在固定相上的分配系数，进而影响分离效果。流动相的成分要根据样品的性质和需要进行选择。常用的流动相包括纯溶剂、溶剂混合物和缓冲液等。

2.流动相性质：流动相的性质包括溶液的pH值、离子强度、流速和温度等。其中，溶液的pH值和离子强度的变化可以影响分析物的离子态，进而影响分离效果。流速的选择要根据分析物的种类和浓度进行调整。温度的增加可以提高分子的扩散速度，加快分离过程。

高效液相色谱法基本原理

一、实验目的

1. 了解高效液相色谱法分离的基本原理；

2. 了解高效液相色谱仪的基本构造；

3. 了解高效液相色谱仪的基本操作。

二、基本原理

高效液相色谱（HPLC）法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。

高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。

高效液相色谱分析原理：

（一）高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。

（二）高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有３个组分，Ａ、Ｂ和Ｃ，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分Ａ不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分Ｃ在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分Ｂ的分配系数介于Ａ，Ｃ之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

高效液相色谱法的原理

高效液相色谱法的原理主要包括样品的注入、流动相的输送、柱填料的分离和检测器的检测四个步骤。首先，样品通过自动进样器被注入到色谱柱中，样品中的各种成分在色谱柱中的填料上以不同速度进行分离。然后，流动相以高压输送，使得样品在色谱柱中快速分离。柱填料的选择对分离效果有很大影响，通常会选择具有不同亲和性的填料来实现对不同成分的分离。最后，检测器对分离后的成分进行检测和定量分析。

高效液相色谱法的应用非常广泛，例如在药物分析中，可以对药物的成分进行分离和检测，保证药物的质量和安全性；在环境监测中，可以对水体、大气等样品中的有害物质进行分析，保障环境的安全。此外，高效液相色谱法还可以用于食品、化工等领域的分析。

总之，高效液相色谱法作为一种高效、灵敏的分析技术，其原理简单清晰，应用广泛。通过对样品的分离和检测，可以快速准确地获得样品中各种成分的信息，为化学、生物、医药、环境等领域的研究和生产提供了重要的技术支持。希望本文的介绍对您有所帮助。