DyLight594标记山羊抗兔IgG二抗

Abbkine, Inc • Redlands, CA • USA •Not for further distribution without written consent. Copyright © Abbkine, Inc. Biotin, Goat Anti-Rabbit IgG# A21220Product InformationProduct Name: Biotin Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)Catalog Number: A21220 Lot Number: Refer to vial Formulation: Liquid Size: 100ul/500ul Storage: Store at -20°C. Avoid repeatedfreeze / thaw cycles. Note: Contain sodium azide.Background: Abbkine's secondary antibodies are available conjugated to enzyme, biotin or fluorophore for use in a variety of antibody-based applications including Western Blot, ImmunoHistoChemistry, ImmunoFluorescence, Flow Cytometry and ELISA. We offer high quality secondary antibodies from goat, rabbit and donkey sources for your each application. Serum adsorbed secondary antibodies are also available and are recommended for use with immunoglobulin-rich samples.Purity: Affinity purified using solid phase Rabbit IgG (H&L) with finally > 95% purity based on SDS-PAGE.Specificity: The antibody reacts with whole molecule rabbit IgG. It also reacts with heavy chains of rabbit IgG, and light chains of all other rabbit immunoglobulins. It has no reactivity on non-immunoglobulin serum proteins, while it may cross-react with immunoglobulins from other species.Application Notes: Optimal working dilutions should be determined experimentally by the investigator. Suggested starting dilutions are as follows: WB (1:1,000-1:10,000), IHC (1:500-1:1,000) and ELISA (1:1,000-1:10,000).Storage Buffer: 30 mM Triethanolamine, 5 mM Magnesium Chloride, 0.1 mM Zinc Chloride, 50% Glycerol pH 7.4.Stabilizer: 1% Bovine Serum Albumin (IgG and Protease Free).Preservative: 0.05% (w/v) Sodium Azide.Storage Instructions: Stable for one year at -20°C from date of shipment. For maximum recovery of product, centrifuge the original vial after thawing and prior to removing the cap. Aliquot to avoid repeated freezing and thawing.Note: The product listed herein is for research use only and is not intended for use in human or clinical diagnosis. Suggested applications of our products are not recommendations to use our products in violation of any patent or as a license. We cannot be responsible for patent infringements or other violations that may occur with the use of this product.。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验，这名字听起来就很炫酷，对吧？其实它就是一个让我们能同时看到两种不同标记物的实验。

没错，就是让我们在显微镜下像变魔术一样，看到细胞中的不同成分。

为了能让这个实验顺利进行，我们得好好挑选一抗和二抗，别小看这两个“小家伙”，它们可是实验成功的关键哦。

接下来，我们就来聊聊挑选一抗和二抗的那些事儿。

1. 选择一抗的基本要求首先，一抗是我们的“主角”，它负责直接和目标抗原结合。

为了让实验更靠谱，我们在挑选一抗的时候有几个基本要求。

首先，得确保一抗的特异性。

简单来说，就是一抗要能够准确地识别目标抗原，不会跟其他东西搭上关系。

你可以把它想象成找一个能只看中你家猫的侦探，千万别让它误认成了邻居家的狗狗。

此外，一抗的亲和力也很重要。

亲和力高的话，一抗就能牢牢地抓住目标抗原，不容易掉链子。

就像是找一个有“强烈吸引力”的好朋友一样，这样才能在关键时刻依靠得住。

1.1 一抗的来源选择一抗时，来源也要考虑清楚。

市面上的一抗分为很多种，有的是从小鼠身上提取的，有的是从兔子身上提取的，甚至还有从山羊身上提取的。

每种来源的一抗都有自己的优点和缺点。

例如，小鼠单克隆抗体常常具有高度的特异性，但可能在某些实验条件下效果不如其他来源的抗体好。

像兔子或者山羊的抗体则可能在灵敏度上表现得更好。

了解这些，才能找到最适合你实验的一抗。

1.2 一抗的纯度一抗的纯度也不能忽视。

想象一下，如果你的试剂里混杂了很多其他东西，就像是在派对上有太多不认识的人一样，肯定会让实验结果变得扑朔迷离。

因此，选择纯度高的一抗非常重要，它能让你减少实验中的干扰，提高结果的准确性。

选择纯度高的一抗，就像在举办一个小型的、只有好友参与的派对，所有人都知道自己干嘛的，大家都玩得开心。

2. 选择二抗的基本要求说完了一抗，接下来咱们聊聊二抗。

二抗是我们的“帮手”，它负责和一抗结合，并且带上荧光标记。

二抗的选择也有讲究，首先是它的特异性。

一抗的选择检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：分析试验应用的类型l样本蛋白的结构性质l样本的种属l抗体宿主的种类l抗体的标记和检测l1.分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2.样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

l 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。

当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。

免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧据一抗种属及类型-如何选择二抗?如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。

辛伐他汀刺激骨髓间充质干细胞的成骨分化邢磊;高静媛;汪晓旭;陈俞洁;迟博婧;田发明【摘要】背景:体外研究显示辛伐他汀有明确的刺激骨髓间充质干细胞成骨分化的作用,但机制不清.最新研究显示Hedgehog信号通路是骨髓间充质干细胞成骨分化的重要信号通路.目的:结合Hedgehog通路阻断剂环杷明的应用,观察辛伐他汀体外刺激大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用机制.方法:4周龄SPF级雌性SD 大鼠8只,分离出股骨和胫骨并去除干骺端,应用全骨髓贴壁培养法提取骨髓间充质干细胞.选取第2代骨髓间充质干细胞随机分成4组:①对照组:用成骨诱导培养基培养;②辛伐他汀组:用含有10-7 mol/L辛伐他汀的成骨诱导培养基培养;③辛伐他汀+阻断剂组:用含5μmol/L环杷明的完全培养基预先阻断2 h后,与辛伐他汀组同时加入含辛伐他汀的成骨诱导培养基培养;④阻断剂组:用含有5μmol/L环杷明的成骨诱导培养基培养.给药第7天行碱性磷酸酶染色,免疫荧光染色法和Western blot 检测Ⅰ型胶原、骨钙素的表达;给药第28天行茜素红钙染色.结果与结论:辛伐他汀组与对照组比较,碱性磷酸酶阳性着色细胞和钙结节增多,Ⅰ型胶原、骨钙素荧光强度和相应蛋白表达增高(P<0.05);除骨钙素荧光强度和蛋白表达外,其他指标在辛伐他汀+阻断剂组显著低于辛伐他汀组(P<0.05);阻断剂组各项指标均低于对照组(P<0.05).结果证实辛伐他汀通过刺激Hedgehog信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且不完全被环杷明阻断.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)025【总页数】6页(P3961-3966)【关键词】骨质疏松;骨髓间充质干细胞;辛伐他汀;环杷明;Ⅰ型胶原;骨钙素;成骨分化;河北省自然科学基金【作者】邢磊;高静媛;汪晓旭;陈俞洁;迟博婧;田发明【作者单位】华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学医学实验研究中心,河北省唐山市 063000【正文语种】中文【中图分类】R459.9;R394.20 引言 Introduction骨质疏松症是一种以骨量低下、骨组织微结构损坏为特征，最终导致骨脆性增加，容易发生骨折的全身性骨疾病[1-2]。

IFKine驴抗小鼠IgG二抗，绿色荧光标记（IF实验优化）IFKine Green AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG（H+L）应用类型：1:50 - 1:400适用于大部分应用免疫原：小鼠IgG来源宿主：驴反应性：该IFKine驴抗小鼠IgG二抗，绿色荧光标记（IF实验优化）与小鼠IgG分子有特异性反应，经过特殊处理，与人、兔、山羊等种属来源的蛋白样本或抗体几乎没有交叉反应。

保存建议：在-20℃稳定保存1年IFKine Green是一种新型绿色荧光团，其最大吸收波长在493nm，相应的最大发射波长是518nm。

IFKine是独特的系列新型荧光抗体产品，由于其具有市场上最高的荧光染色亮度和耐光性，并兼具较少的非特异性杂交和背景，非常适合作为免疫荧光和流式细胞术实验。

IFKine系列二抗采用最新一代的荧光染料，包括IFKine Green、IFKine Orange和IFKine Red 三种不同荧光团；IFKine均为驴来源二抗以确保在多标使用中的通用型，并且经过特殊处理，其与其它种属来源的蛋白样本或抗体几乎没有交叉反应，因此其在免疫荧光分析的双标以及多标实验中有更出众的表现。

在免疫荧光（Immunofluorescence，IF）实验中，通常会在同一组织细胞标本上同时检测两种抗原，因而进行双重荧光染色（直接法和间接法）。

一般来说，直接法简便可靠，但灵敏度较低，而且抗体来源较少；因此，大部分人会选择间接免疫荧光法：先用两种不同种属来源的特异性一抗孵育，再用对应的不同荧光素标记的二抗孵育，从而在荧光显微镜下观测。

在免疫荧光实验中，有时候也需要同时对两个或多个目标蛋白进行共定位。

此时，可以选择两个带有不同荧光颜色标记的一抗；然而，在更多的情况下，需要通过两到三种不同种属来源的未标记一抗，再配合两到三种带不同荧光标记的二抗以实现IF 双标或三标。

那么该如何选择合适的免疫双标/多标实验的二抗？首先需要考虑荧光颜色的选择红色和绿色是最常见的两种荧光选择，绿色如FITC、Cy2或新一代Dylight 488等荧光染料；橙色如TRITC、Cy3 等荧光染料，而Texas Red则显示红色，Cy5、Cy7、APC或新一代荧光染料Dylight 649等则提供了深红色显示方案。

免疫荧光步骤（双标）1.冰冻切片制备将脱水后的脊髓标本放于冰冻托盘上，加OCT使组织被完全包埋，置于冰冻切片机中，调节箱体温度为-22℃，冷冻头温度为-23℃。

观察OCT冻成白色固态状时，将其放置于冷冻头，准备切片。

设置切片厚度为8µm，必要时用刷子辅助将切好的OCT薄片贴附于载玻片上。

室温下晾干载玻片后保存于-20℃冰箱。

2.免疫荧光染色（1）室温下晾干切片15min，待完全晾干后放置于湿盒内，PBS冲洗浸泡5min/次，3次（以除去OGT）。

（2）抗原修复液(1X)（双蒸水稀释），95-100℃加热约20分钟(加热时间可以控制在10-30分钟内)。

20-30分钟内冷却至室温。

PBS冲洗5min/次，3次。

（3）用滤纸吸干玻片上残余PBS，用免疫组化笔在标本周围画一适当大小圆圈，避免接触标本，将配置好的封闭液（5%驴血清=920ulPBS+50ul驴血清+30ul 10%trition）加入圆圈内，室温下封闭1h。

（4）用滤纸吸去封闭液，向标本加入相应一抗：（1%BSA）兔源一标：兔抗IL-33（1：50）小鼠源二标：小鼠抗NeuN（1：500，神经元）小鼠抗GFAP（1：300，星形胶质细胞）小鼠抗OX42（1：100，小胶质细胞）小鼠抗OLIG2（1: 25，少突胶质细胞）一抗于4℃静置过夜孵育。

（5）次日，PBS洗去一抗，10min/次，3次，用滤纸吸干PBS，之后操作均需避光，向标本加入相应二抗：Dylight 488标记驴抗兔IgG（1：300），Dylight 594标记驴抗小鼠IgG（1：300），二抗室温静置避光孵育2h。

（6）PBS清洗二抗，10min/次，3次，清洗后晾干后滴加DAPI封片，加盖玻片后于荧光显微镜下拍摄图片并保存。

计划：1.IL-33组：1）IL-33/NeuN X2个配比浓度2）IL-33/GFAP X23）IL-33/Iba-1 X24）只孵二抗X22.Sham组：1）IL-33/NeuN X12）IL-33/GFAP X13）IL-33/Iba-1 X14）只孵二抗需要购买：Triton-100，驴血清，一抗：小鼠抗RBFOX3/ NeuN、小鼠抗GFAP、小鼠抗OX42，二抗：Dylight 488标记驴抗兔IgG，BSA(牛血清白蛋白)注意：1、细胞固定和通透为达到最佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。

DyLight荧光二抗——高性价比的全新荧光体验美国Abbkine的DyLight™系列荧光标记是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料，由于具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度，更高的光学耐受性（抗淬灭性）、对pH不敏感、分子较小而渗透性更好的优势，越来越受到科研客户的喜爱。

DyLight™种类齐全，如Dylight 405是蓝色荧光，替代Alexa 405；DyLight 549是绿色荧光，可完全替代FITC/Cy2/Alexa 488；完全替代Cy3/Rhodamin/Alexa 546/Alexa 555的Dylight 549；替代Texas Red/Alexa 594的Dylight 594；Dylight 633和Dylight 649（可替代Cy5/Alexa 647）则是更强的红色荧光；另外，Dylight还有适配Odyssey系统的近红外和远红外二抗Dylight 680和DyLight 800。

下面我们来看看美国Abbkine品牌DyLight系列荧光的优异表现吧：一、DyLight荧光二抗比传统荧光标记二抗具有更高的荧光发光强度DyLight 488标记的抗体比Cy2 和FITC标记的更亮，与Alexa Fluor 488 标记的亮度相当。

DyLight 549标记的抗体比传统的罗丹明、TRITC等荧光亮，与Cy3 和Alexa Fluor 555亮度相当；而DyLight 594标记的抗体荧光亮度明显强于Alexa 594标记抗体。

相比较Texas Red 而言，不仅更亮，而且具有更好的水溶性。

二、DyLight荧光二抗比传统荧光及Alexa标记二抗具有更低的背景！三、DyLight荧光二抗比传统荧光标记二抗具有更好的光学稳定性、发光更持久、更适合拍照488594最常用的荧光颜色，激发光和发射光光谱分布合理，适用于各种荧光分析。

其中蓝色荧光的DyLight 405实验。

另外，1. 大包装二抗具有更高的性价比。

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu）Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon）Antibody等。

【二抗的种属来源】一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

二抗的偶联标记一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE）和生物素。

选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。

对于western blot 和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。

如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用biotin/avidin检测系统。

下面简单介绍几种二抗探针的优缺点及其适用的实验：酶：主要有两种不同的酶耦联物，HRP和AP。

比较而言，前者更经济、快速、稳定，而后者较前者更为灵敏，通常情况下，HRP广泛应用于免疫组化，western blot 和ELISA 中，而碱性磷酸酶（AP）更适合于固相的免疫检测实验，如ELISA和western blot.1. FITC：FITC是广泛使用的荧光基团，但其最大的缺点是淬灭快，使用抗淬灭剂可以减轻。

检测其所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。

3. 花青染料（Cy2,Cy3,Cy5）：Cy2比FITC 更稳定，且在表面荧光显微镜下，Cy2的荧光FITC 更强。

Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮，更稳定，背景更弱。

二者常在共聚焦显微实验中作多标记。

但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察，因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。

高的背景。

在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时，RRX 尤其有用，可以和Cy2（或FITC）及Cy5一起使用，因为RRX 的发射波长在Cy2和Cy5中间，且和这两者的重叠很少。

5. PE ：常和FITC 一起用于流式细胞术双标记实验。

生物素标记的二抗，在加入耦联有酶或荧光集团的avidin 、ExtrAvidin 或streptavidin ，后者能够结合于二抗表面的多个位点上，从而极大的放大检测信号。