液相色谱基础知识培训教材

LabAlliace高效液相色谱系统培训教材一、液相色谱系统的基本原理1、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。

气相色谱法适用于分离挥发性化合物。

GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。

液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。

LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。

此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。

按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。

(此外还有电泳)。

按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。

2、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

L600系列液相色谱仪培训内容一、基本原理色谱技术是利用待测组分与流动相、固定相之间的作用（分配系数）不同，从而实现分离的过程。

先解释2个名词：1、流动相：顾名思义是在整个系统中处于流动状态的流体。

流动相是液体的叫液相（就是我们今天要学习的这一款仪器），起到运输样品和参与组分分离的作用。

流动相是气体的叫气相，只起运输样品的作用。

2、固定相：是静止不动的一相，装填或涂布于色谱柱内，参与组分分离。

“分离”是色谱区别于光谱仪器最大的特点和作用，一般的光谱仪器只能通过波长等特性从混合物中去选择待测物，一般一次只能检测一种物质；而色谱能够将复杂的混合物逐一分离成单一组分，逐个检测，可以实现多种组分的同时分析，比如我们熟悉的色素，苏丹红1、2、3、4，就可以一针进样同时检测。

二、仪器结构及各部分的使用要点液相色谱一般由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统构成。

下面我们按照这个组成的顺序逐一讲解每一部分的使用要点。

1、输液系统输液系统顾名思义就是用来输送流动相的部分，它包含了“输”和“液”两部分，“输”的部分就是指高压输液泵，它就像我们人体的心脏一样，是一切动力的源头，没有它液体不可能流动。

“液”就是指流动相了，它就像我们人体的血液一样，在泵给与的动力下，运送到整个系统。

下面分别讲解这两部分的使用方法和注意事项。

（1）流动相a、流动相类型：我们一般使用的流动相有三种类型，第一种是纯的有机溶剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等，其中甲醇是最常用的，通常用它来冲洗平衡系统，C18柱在工作完后需要保存在纯甲醇中。

第二种是检测样品用的流动相，根据标准或方法来配置，通常含有缓冲盐。

第三种是10%-20%的甲醇水溶液（比例并不需要非常的准确），它是用于纯有机溶剂与含有缓冲盐的流动相之间的过渡冲洗液，因为缓冲盐溶于水但不溶于有机溶剂，如果不过渡直接更换，就会使缓冲盐在有机溶剂中析出成结晶盐，造成系统的堵塞，尤其是色谱柱，这是不可逆的损坏。

LabAlliace高效液相色谱系统培训教材一、液相色谱系统的基本原理1、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。

气相色谱法适用于分离挥发性化合物。

GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。

液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。

LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。

此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。

按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。

(此外还有电泳)。

按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。

2、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

·论著·用液相色谱-串联质谱法测定血浆总同型半胱氨酸刘罡一1余琛1杜向阳1汪国权2李健3蔡永葆11.上海市徐汇区中心医院中心实验室上海2000312.上海市疾病预防控制中心理化测试中心上海2003363.青岛国风集团黄海制药有限责任公司计划供应科青岛266101摘要目的:建立血浆中总同型半胱氨酸tHcy的液相色谱-串联质谱LC-MS/MS测定法。

方法:血浆tHcy及内标氘代高胱氨酸经巯基乙醇还原后用10三氯乙酸沉淀血浆蛋白经液相色谱分离后采用电喷雾离子化-串联质谱进行多反应监测MRM检测离子选择通道分别为m/z:136.2/46.9Hcy140.2/48.9Hcy-d4氘化Hcy。

Hcy、Hcy-d4的保留时间均为6.3min。

结果:Hcy在2.5～640??mol/L范围内线性关系良好。

本法的最低检测浓度为0.3??mol/LS/N≥5。

批内、批间精密度分别为1.97～8.79、2.55～4.14。

方法回收率为100.3～109.1。

结论:该方法的预处理快速、简便检测专一灵敏试剂成本低廉可适应开展大规模临床Hcy研究的需要。

关键词同型半胱氨酸液相色谱-串联质谱法中图分类号R977.4文献标识码A文章编号1671-2838200304-0224-03Determinationoftotalhomocysteineinhumanplasmabyliquidchr omatography-mass/massspectrometrymethodLIUGang-Yi1YUChen1DUXiang-Yang1W ANGGuo-Quan2LIJian3CAIYong-Bao11.CenterLabShanghaiXuihuiCenterHospitalShan ghai200031China2.PhysichemicalCenterShanghaiMunicipalCenterforDiseaseControlPre ventionShanghai200336China3.DepartmentofSupplyQingdaoGrowfulGroupHuanghaiPh armaceuticalsQingdao266101ChinaABSTRACTObjective:Toestablishamethodfordetermi ningtotalhomocysteinetHcyinplasmawithliquidchromatography-mass/massspectrometryL C-MS/MSmethod.Methods:AfterthetHcyinplasmaandtheD-homocystineinternalstandard werereducedwithmercaptoethanoltheproteinsweredepositedwith10trichloroaceticacid.The analysiswasperformedusingthemultiplereactionmonitoringinwhichtHcyandHcy-d4werede tectedthroughthetransitionfromtheprecursortotheproductionm/z136.2-46.9andm/z140.1-4 8.9.TheretentiontimeoftHcyandHcy-d4was6.3min.Results:CalibrationsofHcybetween2.5a nd640??mol/Lexhibitedconsistentlinearityandreproducibility.Ataplasmaconcentrationof0. 3??mol/Lthesignal-to-noiseratiofortHcywas5:1.Intra-andinterassayRSDwere1.97-8.79and 2.55-4.14respectively.MethodrecoveryoftHcywas100.3-109.1.Conclusion:Thepretreatme ntofthismethodissimpleandquick.Analysishasahighspecificityandthereagentcostisalsolow. Sothismethodisverysuitablefortheneedofwideclinicalhomocysteineresearch.KEYWORDS homocysteineLC-MS/MSPharmCareRes200334:224-226同型半胱氨酸homocysteineHcy又称高半胱氨酸为蛋氨酸代谢的中间产物。

LabAlliace高效液相色谱系统培训教材一、液相色谱系统的基本原理1、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。

气相色谱法适用于分离挥发性化合物。

GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。

液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。

LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。

此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。

按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。

(此外还有电泳)。

按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。

2、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。