血红蛋白的测定方法

血红蛋白含量测定发表时间：2011-04-27T15:02:00.683Z 来源：《中外健康文摘》2011年第2期供稿作者：马骅1 刘海虹2[导读] 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。

马骅1 刘海虹2(1黑龙江省临床检验中心 150008)(2中国造血干细胞捐献者资料库黑龙江省管理中心 150008)【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)2-0049-02【关键词】血红蛋白生理检测血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。

每个血红蛋白分子有4条多肽链，每条折叠的多肽链中，包裹1个亚铁血红素。

亚铁血红素由原卟啉和1个铁原子组成。

血红蛋白分子量为64 458D。

(一)血红蛋白生理每分子血红蛋白中的4个亚铁血红素含有4个Fe2+原子，可结合4个氧分子。

因此，64 458 g血红蛋白，含铁4×55.84，可结合4×22.14 L氧，即每克血红蛋白含铁3.47 mg(即铁占0.347％)，可结合氧1.38 ml。

血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。

它们具有特定的色泽和吸收光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症或做血红蛋白的定量测定。

(二)氰化高铁血红蛋白测定法血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。

现就氰化高铁血红蛋白(HiCN)法介绍如下：1.原理血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，新生或的高铁血红蛋白再与氰结合成稳定的棕红色的氰化高铁血红蛋白(HiCN)，在规定的波长和液层厚度条件下，具有一定的吸光系数，根据吸光度，可求得血红蛋白浓度。

2.方法取HiCN转化液5ml，加末梢血20μl，混匀后静置5分钟，用光径1.0 cm，波长540 nm的分光光度计测定吸光度OD(以水或稀释液调“0”)，求得每升血液中血红蛋白含量。

6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。

１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。

１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。

10微升量吸管。

１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。

贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。

１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。

１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。

计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。

D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。

HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。

１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。

1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。

参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。

血红蛋白测定实验报告血红蛋白是人体内一种重要的血液蛋白，它能够携带氧气到达身体各个器官和组织。

血红蛋白测定是临床常用的一种检验方法，能够提供有关患者体内氧合情况的重要信息。

本次实验旨在通过测定参与实验的人员的血液样本中的血红蛋白含量，来了解其体内氧合情况及贫血情况。

实验步骤：1. 收集血液样本：准备工作台和所需器材，包括带有一次性安全针头的注射器、耗材等。

选择一个适当的部位，通常是患者的指尖。

在清洁皮肤后，用注射器抽取一定量的血液样本。

2. 采用血红蛋白计测定仪测定血红蛋白含量：将血液样本倒入已经预装了染剂的检测管中，混合均匀。

将检测管放入血红蛋白计测定仪中。

根据血红蛋白计测定仪的说明书，操作仪器进行测定。

实验结果：本次实验中测得参与者A的血红蛋白含量为X克/升，参与者B的血红蛋白含量为Y克/升，参与者C的血红蛋白含量为Z克/升。

讨论与分析：通过本次实验，我们发现不同参与者的血红蛋白含量存在一定的差异。

血红蛋白含量的正常范围可能因个人的年龄、性别、健康状况和生活习惯等因素而有所不同。

血红蛋白在人体中起着至关重要的作用，它能够与氧气结合形成氧合血红蛋白，并将氧输送到身体各个组织和器官中。

因此，血红蛋白含量的变化往往与身体的氧合情况有关。

根据世界卫生组织的建议，成年男性的正常血红蛋白范围为130-170克/升，成年女性的正常血红蛋白范围为120-150克/升。

如果血红蛋白低于这个范围，就可能存在贫血的情况。

贫血是一种常见的疾病，其主要特征是机体内的红细胞数量或质量的减少，导致无法满足身体对氧气的需求。

贫血可以由多种原因引起，例如缺铁、缺维生素B12或叶酸、慢性疾病等。

血红蛋白测定不仅在临床中广泛应用，而且在科研领域也扮演着重要角色。

通过测定血红蛋白的含量，可以了解机体的氧合情况，为临床诊断和治疗提供重要依据。

总结：通过本次血红蛋白测定实验，我们了解到血红蛋白是人体中不可或缺的重要物质。

血红蛋白含量的测定可以为医生提供诊断和治疗贫血等疾病的依据，也为科研人员提供了重要的实验数据。

游离血红蛋白检测方法游离血红蛋白（free hemoglobin）指的是血浆中存在的不与红细胞结合的血红蛋白。

正常情况下，游离血红蛋白的浓度很低，但在一些疾病状态下，如贫血、溶血等，会导致血浆中游离血红蛋白的浓度增加。

因此，对游离血红蛋白进行检测对于评估一些疾病的严重程度和治疗方案的制定具有重要意义。

以下是一些常用的游离血红蛋白检测方法：1.光学法检测：光学法是一种简单但有效的游离血红蛋白检测方法。

该方法根据游离血红蛋白具有的特殊吸收光谱特性来测定其浓度。

通过测量在550至600纳米范围内的吸光度，可以推断游离血红蛋白的浓度。

2.分光光度法：分光光度法是一种利用分光光度计来测量游离血红蛋白浓度的方法。

它利用游离血红蛋白在450至700纳米波长范围内的吸收特性，通过测量吸光度来确定其浓度。

3.糖基化血红蛋白方法：糖基化血红蛋白是由于高血糖状态导致血红蛋白分子上发生糖化反应而形成的一种血红蛋白变异物。

检测糖基化血红蛋白可以间接评估血浆中游离血红蛋白的浓度。

目前，一些商业化的糖基化血红蛋白检测试剂盒已经上市，可以通过测量糖基化血红蛋白的浓度来推测游离血红蛋白的水平。

4.凝胶电泳法：凝胶电泳法可以通过将血浆样品电泳分离来检测游离血红蛋白。

在凝胶电泳过程中，血浆样品中的游离血红蛋白会沿电泳槽向阳极迁移，然后通过染色剂染色后可观察到游离血红蛋白的带状图案。

5.高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种高灵敏度的游离血红蛋白检测方法。

该方法利用高效液相色谱仪的柱分离功能，根据游离血红蛋白与固定相之间的亲和作用，将游离血红蛋白从血浆样品中分离出来，并通过检测峰面积或峰高来测定其浓度。

除了上述方法，还有一些新兴的游离血红蛋白检测技术正在研究中。

例如，传感器技术结合了生物传感器和游离血红蛋白的特异性反应，可用于快速和准确地检测游离血红蛋白。

此外，质谱分析技术也被用于游离血红蛋白的检测，通过比较样品与标准的质谱图谱来确定游离血红蛋白的浓度。

实验一血红蛋白的测定（氰化法）1．实验特点实验类型：验证实验类别：专业基础计划学时：3 每组人数：22．实验目的要求：了解氰化法测定血红蛋白的原理，掌握人体血液样本的采集方法，分光光度法测定原理和技术。

3．实验原理：血红蛋白在铁氰化钾和氰化钾的作用下，生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白（红色），其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比。

氰化高铁血红蛋白在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。

其化学反应式如下：- 1 -- 2 -氰化高铁血红蛋白高铁血红蛋白血红蛋白氰化钾铁氰化钾⎯⎯→⎯⎯⎯⎯→⎯4．实验仪器设备：10μL 血色素吸管（或定量毛细管）5mL 或10mL 带盖试管721分光光度计称取碳酸氢钠140mg 、铁氰化钾200mg 、氰化钾50mg ，用蒸馏水溶解并稀释到1000mL 。

贮存于棕色试剂瓶内，在4°C 冰箱保存，至少可稳定数月到一年。

5．材料消耗费：10元6．实验内容步骤：吸取2.5mL试剂于5mL带盖试管中，加入10μL血液，混匀后放置15min。

选用0.5cm光径比色杯，与540nm波长下，以试剂调节仪器零点，测定各样品管的光密度。

7．注意事项：本法为国际血液学标准化委员会（ICSH）所推荐，具有操作简便、不需要标准、结果准确可靠等优点。

应用本法进行血红蛋白的测定，所用分光光度计的波长必需事先经过校正。

实验条件改变，如更换了光电池或灯泡、电压不稳、试剂换了批号等等均会引起光密度的改变。

为了获得正确结果，可用标准液校正或采用色泽近似的无机盐人工永久标准液来核对，这也是一种行之有效的方法。

如以上两点难以实现，宜采用标准曲线法或直接比较法进行。

血样放入试剂后形成的氰化高铁血红蛋白极为稳定，经试验，在4°C冰箱存放70天之久前后结果仍能保持一致。

为此，可将各地采集的样品在加入试剂后，在2-10°C环境中，集中到中心实验室进行比色测定。