蛋黄胆固醇测定
- 格式：doc
- 大小：71.50 KB
- 文档页数：3
下载文档原格式
合集下载
邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量
Ｂ Ｉ ｉ Ａ Ａ Ｌ ， ＮＧＲ ｉ ｅ ＷＡ Ｇ Ｊ ｕ， Ｉ Ｎ Ｆ ｎ Ｗ ｕｘ ， Ｎ ｈ ｉＱ Ａ ａ ｇ ｕ ｉ
（ｃ ｏ ｏ Ｂ ｏａｄ ｏ ｄＴ ｃｎ ｌ ｙ Ｄａ ａ ｏ ｔ ｈ ｉ Ｕ ｉｅ ｉ ， ｌｎ１ ６３ ， 曲 ） Ｓ ｈ ｌ ｆ ｉ ｎ Ｆ ｏ ｅｈ ｏｏ ， ｌｎＰ ｌ ｅｎ ｃ ｎｖｍ ￣ Ｄａ ａ １０ ４ Ｃ 面ａ ｎ ｇ ｉ ｙｃ ｉ
２ １ ０ ０ Ｎ０． ５
・
１ ２ Ｓ ｄｌ ｏ １ ・ ６ ｅａ Ｎ ． ８ ２
Ｃｈ ｎ ｅ ｎ ｉ ａ Ｂｒ ｗｉ ｇ
Ａ
ｎ ｌ ｓｓａ ｄ Ｅｘ ｍｉ ａ ｉ ｎ ａ ｙ ｉ ｎ ａ ｎ ｔｏ
邻 苯 二 甲醛 （ Ｐ 法快 速 测 定 蛋黄 粉 中的胆 固醇 含量 Ｏ Ａ）
ｃ ｅ ｃｅ ｔｏｆ ｈ ｅｈ ｄ ８ ％ ， ｉｈ ａ ｇ ｒ ｃｓｏ ｎｄｒ ｃ ｖ ｒ Ｔｈｅｍ ｅ ｏ ｓｓｍ ｐｌ ｄ ｓａ ｌ，ａ ｓｓ ｔｂｅ ｆｒｒ ｐ ｄｄ ｔｒ ｉａｉ ｎ ｏ ｆ ｉｎ ｔ ｅｍ ｔ ｏ ｉ ２．９ ｉ ｓ ｗｈ ｃ ｈ ｓｈｉｈ ｐ ｅ ｉｉｎ ａ ｅ ｏ ｅｙ． ｔ ｄ ｉ ｉ ｈ ｅａ ｔｂｅ ｎｄｉ ｉ ｕｉ ｌ ｏ ａ ｉ ｅ ｅｍ ｎ ｔｏ ｎ ｔ ａ ｏ ｈ ｌ ｓｅ ｏ． ｔａ ｔ ｎ ｆｃ ｏｌｓｅ ｏ ｙ ｔ ａ ｏ －ｈ ｏ ｏ ｃｉｌｉ ｃ ｕ ａｅａ ｄ ｅ ｓｂｌ． ｆｃ ｏ ｅ ｔｒ １Ｅｘｒ ｃ ｏ ｏ ｈ ｅ ｔｒ ｌ ｍｅ ｎ ｌｃ ｌ ｒ ｆ＇ ｌ ｓａ ｃ ｒ ｔ ｉ ｂ ｈ ｒ ｎ ｆａ ｉ ｅ Ｋｅ ｒ ｓ Ｏ ｐ ｈａｄｉｌｅ ｙ ； ｈ ｌ ｓｅ ｏ ； ｅｅｍ ｉ ｔ ｎ ｙｗｏ ｄ ： — ｈｔ ｌ ａｄ ｈ ｄｅ ｃ ｏ ｅ ｔｒ ｌ ｄ ｔｒ ｎａｉ ｏ
（ｃ ｏ ｏ Ｂ ｏａｄ ｏ ｄＴ ｃｎ ｌ ｙ Ｄａ ａ ｏ ｔ ｈ ｉ Ｕ ｉｅ ｉ ， ｌｎ１ ６３ ， 曲 ） Ｓ ｈ ｌ ｆ ｉ ｎ Ｆ ｏ ｅｈ ｏｏ ， ｌｎＰ ｌ ｅｎ ｃ ｎｖｍ ￣ Ｄａ ａ １０ ４ Ｃ 面ａ ｎ ｇ ｉ ｙｃ ｉ
２ １ ０ ０ Ｎ０． ５
・
１ ２ Ｓ ｄｌ ｏ １ ・ ６ ｅａ Ｎ ． ８ ２
Ｃｈ ｎ ｅ ｎ ｉ ａ Ｂｒ ｗｉ ｇ
Ａ
ｎ ｌ ｓｓａ ｄ Ｅｘ ｍｉ ａ ｉ ｎ ａ ｙ ｉ ｎ ａ ｎ ｔｏ
邻 苯 二 甲醛 （ Ｐ 法快 速 测 定 蛋黄 粉 中的胆 固醇 含量 Ｏ Ａ）
ｃ ｅ ｃｅ ｔｏｆ ｈ ｅｈ ｄ ８ ％ ， ｉｈ ａ ｇ ｒ ｃｓｏ ｎｄｒ ｃ ｖ ｒ Ｔｈｅｍ ｅ ｏ ｓｓｍ ｐｌ ｄ ｓａ ｌ，ａ ｓｓ ｔｂｅ ｆｒｒ ｐ ｄｄ ｔｒ ｉａｉ ｎ ｏ ｆ ｉｎ ｔ ｅｍ ｔ ｏ ｉ ２．９ ｉ ｓ ｗｈ ｃ ｈ ｓｈｉｈ ｐ ｅ ｉｉｎ ａ ｅ ｏ ｅｙ． ｔ ｄ ｉ ｉ ｈ ｅａ ｔｂｅ ｎｄｉ ｉ ｕｉ ｌ ｏ ａ ｉ ｅ ｅｍ ｎ ｔｏ ｎ ｔ ａ ｏ ｈ ｌ ｓｅ ｏ． ｔａ ｔ ｎ ｆｃ ｏｌｓｅ ｏ ｙ ｔ ａ ｏ －ｈ ｏ ｏ ｃｉｌｉ ｃ ｕ ａｅａ ｄ ｅ ｓｂｌ． ｆｃ ｏ ｅ ｔｒ １Ｅｘｒ ｃ ｏ ｏ ｈ ｅ ｔｒ ｌ ｍｅ ｎ ｌｃ ｌ ｒ ｆ＇ ｌ ｓａ ｃ ｒ ｔ ｉ ｂ ｈ ｒ ｎ ｆａ ｉ ｅ Ｋｅ ｒ ｓ Ｏ ｐ ｈａｄｉｌｅ ｙ ； ｈ ｌ ｓｅ ｏ ； ｅｅｍ ｉ ｔ ｎ ｙｗｏ ｄ ： — ｈｔ ｌ ａｄ ｈ ｄｅ ｃ ｏ ｅ ｔｒ ｌ ｄ ｔｒ ｎａｉ ｏ
蛋黄中胆固醇含量的快速测定方法
蛋黄中胆固醇含量的快速测定方法
郭福存;张礼华;王建国;谢家声;李新圃;刘端庄;段习文
【期刊名称】《中兽医医药杂志》
【年(卷),期】1997()1
【摘要】用该法测定胆固醇含量，其蛋样不需要处理（蒸煮和稀释），也不需要提取蛋黄样品脂肪，用直接皂化法即可。
这样不仅避免用毒性大而昂贵的试剂，而且操作时间大大缩短，当天即可完成测试。
用该法测定了１５个蛋黄样品中胆固醇的含量，其平均值为１１．７９ｍｇ／ｙｏｌｋ（１９５．２６ｍｇ／ｅｇｇ），Ｂｔｙｅｒ和Ｊｅｎｓｅｎ（１９８９）对美国乔治亚州１９个蛋鸡厂生产的鸡蛋中的胆固醇含量进行的试验结果表明，其含量平均为１９５ｍｇ／ｅｇｇ。
经Ｔ检验差异不显著，表明本法的精确度是令人满意的。
【总页数】3页(P6-8)
【关键词】蛋黄;胆固醇;测定
【作者】郭福存;张礼华;王建国;谢家声;李新圃;刘端庄;段习文
【作者单位】中国农业科学院中兽医研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TS253.7
【相关文献】
1.邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量 [J], 白利;王瑞雪;王际辉;钱方
2.反相HPLC法快速测定鸭蛋蛋黄粉中胆固醇含量 [J], 黄红霞;张声华
3.蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究 [J], 张旭;胡艳;蒋桂韬;王向荣;李昊帮;戴求仲
4.禽蛋中胆固醇含量快速测定方法研究 [J], 章双杰;陆俊贤;高玉时;施祖灏;刘学贤;陈宽维
5.反相高效液相色谱法快速测定鹌鹑蛋黄胆固醇含量 [J], 高允生;齐永秀;姜隆梅;费洪荣;曲晓兰;高艳霞
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蛋黄胆固醇测定
实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）一、实验目的1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：1、吸光系数法2、标准曲线法不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
实验六蛋黄总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法)(精)
实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）一、实验目的1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：1、吸光系数法2、标准曲线法不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量
直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量何春玫【摘要】采用正交实验优化各项技术参数,建立了直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量的分析方法.结果表明,鸡蛋蛋黄中胆固醇提取的最优工艺条件为:料液比为1:10(W:V),提取时间为1 h,提取温度为35℃,挥干温度为65℃,测得每100g鸡蛋蛋黄的胆固醇含量为1 609mg;回收率为95.41%,RSD为3.77%.此方法操作简单、快速、准确.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2011(038)009【总页数】4页(P110-113)【关键词】胆固醇;直接皂化法;比色法;蛋黄【作者】何春玫【作者单位】广西农业职业技术学院,广西南宁530007【正文语种】中文【中图分类】TS207.3鸡蛋是营养最丰富的食品之一，然而蛋黄的高胆固醇含量也引起广泛的关注。
据最新报道，每个大鸡蛋含有213 mg胆固醇[1]，蛋黄的胆固醇含量大约为9.21～22.8 mg[2]。
目前对食品胆固醇含量测定的方法主要有化学比色法、酶测定法和色普法等。
酶测定法的特点是敏感、专一、快速，并能实现自动化分析，但酶法技术要求较高，不适合作为常用的检测方法；色谱法（如薄层层析法、气象色谱法和液相色谱法）对试剂和仪器要求高，且仪器维护费用也相当昂贵，普通实验室难以承受，且操作步骤也较复杂，难以推广应用；而化学比色法简单易行、重现性好，在一般实验室就可以进行。
因此，我们借鉴硫磷铁显色剂比色法直接测定血清胆固醇的方法，对鸡蛋蛋黄中胆固醇总含量测定方法进行探讨，采用正交实验优化各项技术参数，建立了直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量的分析方法。
1 材料与方法1.1 试验材料主要仪器：VIS-7220型可见分光光度计，北京瑞利分析仪器公司；AL204电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；恒温水浴箱,上海安亭科学仪器厂。
主要试剂：胆固醇原液：称取干燥恒重结晶胆固醇100 mg，用甲醇溶解后移入100 mL容量瓶定容，贮存于密闭棕色瓶内，置于4℃冰箱保存；铁贮存液：称取三氯化铁2.5 g，溶于87%浓磷酸钠并定容至100 mL，贮存于密闭棕色瓶，常温下保存；硫磷铁显色剂：吸取贮存液8 mL，加浓硫酸至刻度100 mL；10%氢氧化钾溶液：称取10 g氢氧化钾先溶解再定容至100 mL；无水乙醇、石油醚、甲醇等；以上试剂均为分析纯。
鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋中HDL—C和LDL—C含量测定
中， 蛋黄的 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ都高于蛋清（ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） 。结论： 禽蛋 中含有 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ ， 且在蛋黄 中含量显著高于蛋清。
关键 词 ： 鸡蛋； 鸭蛋 ； 鹌鹑蛋 ； 高密度 脂蛋 白胆 固醇
禽 蛋 中 所 含 氨 基 酸组 成 非 常 适 合 人 体 需 要 ，利 用 率 可 高 达 ９ ９ ． ６ ％， 是 天 然食 物 中最 理 想 的优 质 蛋 白质 。 其 中， 鸡蛋 、 鸭 蛋和 鹌 鹑 蛋都 是 日常生 活 中 常食 用 的禽 蛋 ， 内含 多 种 营养 物 质 ， 如 蛋 白质 、 维 生 素等 【 ｌ Ｊ 。 胆 固醇 （ ｃ ｈ ｏ ｌ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ， Ｃ ｈ ） 在 人 体 中 的主要 存 在形 式 为 Ｈ Ｄ Ｌ — ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ， 其 中， Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ与冠脉粥样硬化 （ ｃ ｏ ｒ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ — ｓ ｉ ｓ ， Ａ Ｓ ） 和冠心病 （ ｃ ｏ ｒ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ｈ ｅ ａ ｒ ｔ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ， Ｃ Ｈ Ｄ） 等 的 发 生 发 展 呈 负 相关 ， 其机制包括高密度脂蛋 白逆转运 ｃ ｈ 、 抗氧化 、 抗血栓等作用。 而Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ能 将 Ｃ ｈ 从 肝 脏运 送 到 细 胞 ，属 于 有 害 的脂 蛋 白胆 固醇 ， 是 Ａ Ｓ的主要危险因素之一 。若人体食用过多富含 Ｌ Ｄ Ｌ的食物 ， 血 液Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ水 平升 高 ， 可 引起 一 系列 疾 病 ， 如Ａ Ｓ 、 脂 肪肝 等 。 目前 ， 有关禽蛋营养成分研究主要集 中在蛋 白质 、 脂类等口 １ ， 禽蛋内 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ含量 检 测 在 国 内 尚未 见 报 ，本 实 验 分 别 测 定 鸡 蛋 、 鸭 蛋、 鹌鹑蛋的蛋清、 蛋黄 和去 壳 全蛋 中的 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ含 量 ， 有 助于进一步完善禽蛋的营养价值和膳食食谱。 １材 料 与方 法 １ ． １试 剂与 仪器 鸡蛋（ 产蛋 ６ ～ ８天 ） 、 鸭蛋 （ 产蛋 １ ０ — １ ５天 ） 、 鹌鹑蛋（ 产蛋 ８ ～ １ ２ 天） 各 １ ０只 （ 购 于广 东 省东 莞 市 大岭 山 镇农 贸 市场 ） ； ９ ６ 孔板 （ Ｃ ｏ ｓ ｔ ａ ｒ 公 司） ； Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ试剂盒 、 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ试剂盒（ 南京建成生物工程研究所） ； Ｓ ｙ ｎ ｅ ｒ ｇ ｙ ２多功 能 酶标 仪 （ Ｂ ｉ ｏ Ｔ ｅ ｋ 公司 ） 。 １ ． ２ 方 法 １ ． ２ ． １样 品 处 理 。设 鸡 蛋组 、 鸭蛋 组 和鹌 鹑 蛋 组 三个 实 验 组 ， 每 组设 ｌ ０ 个样品 ， 分离蛋清和蛋黄 ， 称取三种禽蛋中蛋清 、 蛋黄 、 去壳 总 蛋 的 重量 并 记 录 。 １ ． ２ － ２实 验 测 定 。按 照 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ试 剂 盒 说 明 书进 行 操 作， 用 酶 标仪 进 行 比色 （ ｋ ＝ ５ ０ ０ ｎ ｍ） 。 １ ． ２ ． ３ 统 计分 析 实验 数 据 用 Ｅ ｘ ｃ ｅ ｌ 建 立数 据 库 ， 并用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ７ ． ０ 处理 ， 两 组 间 比 较采用 ｔ 检验。
实验12---直接皂化-比色法测定鸡蛋中胆固醇含量
实验12 直接皂化-比色法测定鸡蛋中胆固醇含量一、原理当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材1.仪器：分光光度计、水浴锅2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
（1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。
（6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤1.样品胆固醇提取g于25mLmL50%氢氧化钾溶液mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕，取出比色管，冷却。
加入10mL 石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。
取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。
另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液mg/mL）和3mL冰乙酸。
包括样品管，各管分别加入2mL磷硫铁试剂，混匀，25℃放置20min后在560nm波长下比色。
以空白管调零，测得吸光度。
胆固醇含量测定方法的研究进展_葛军营_宋从从_郑颖
［２］ 郭福存，张礼华，王建国，等．蛋黄中胆固醇含量的快速测定 方法［Ｊ］．中兽医医药杂志，１９９７，１６（１）：６－８．
［３］ 曹 劲 松 ． 两 种 测 定 鸡 蛋 胆 固 醇 方 法 的 比 较 ［Ｊ］． 食 品 科 学 ， １９９６，１７（９）：４８－５１．
［４］ 张佳程，骆承痒．直接皂化—比色法测定食品中胆固醇的研 究［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２６（３）：３５－３８．
［８］ 万 莉，赵常志，徐华筠，等．基于蛋白质直接电子转移的全 胆固醇传感器［Ｊ］．高等学校化学学报，２００９，３０ （４）：６７０－６７４．
１４５
Research progress of detemrination methods of cholesterol
ＧＥ Ｊｕｎｙｉｎｇ， ＳＯＮＧ Ｃｏｎｇｃｏｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
( College of Applied Chemistry and Bioengineering, Weifang Engineering Vocational College, Qingzhou 262500,China ) Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｔｃ．． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈ Ｒａｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｅｎｓｏｒ ｗａｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｉｔ ｉｓ ｐｏｉｎｔｅｄ ｏｕｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ； ｄｅｔｅｍｒｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ； ｆｏｏｄ； ｓｅｒｕｍ
［３］ 曹 劲 松 ． 两 种 测 定 鸡 蛋 胆 固 醇 方 法 的 比 较 ［Ｊ］． 食 品 科 学 ， １９９６，１７（９）：４８－５１．
［４］ 张佳程，骆承痒．直接皂化—比色法测定食品中胆固醇的研 究［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２６（３）：３５－３８．
［８］ 万 莉，赵常志，徐华筠，等．基于蛋白质直接电子转移的全 胆固醇传感器［Ｊ］．高等学校化学学报，２００９，３０ （４）：６７０－６７４．
１４５
Research progress of detemrination methods of cholesterol
ＧＥ Ｊｕｎｙｉｎｇ， ＳＯＮＧ Ｃｏｎｇｃｏｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
( College of Applied Chemistry and Bioengineering, Weifang Engineering Vocational College, Qingzhou 262500,China ) Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｔｃ．． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈ Ｒａｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｅｎｓｏｒ ｗａｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｉｔ ｉｓ ｐｏｉｎｔｅｄ ｏｕｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ； ｄｅｔｅｍｒｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ； ｆｏｏｄ； ｓｅｒｕｍ
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。
研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。
鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究
取 新 鲜 蛋 黄 稀 释 液 （ 度 为 ０１ ・ １ 浓 ．ｇ ｍＬ ） ．ｍＬ ０ 于 １ ０ ｍＬ离 心管 中 ，加 入 ９ ％乙 醇 １ ，用 漩 涡 ５ ．ｍＬ ０ 振 荡器 混匀 后 ，加 入 乙醚 ２５ｍ ． Ｌ，再 次 混匀 后加 入 石 油 醚 ２５ｍ ，震 荡 混 匀 ，３００ｒｍ离 心 ５ｍｉ， ． Ｌ ０ ｐ ｎ
１ 材料 与 方法 １１ 试验 材料 ．
样 品前 处 理 方 法 同 １ ．，根 据 试 剂 盒 说 明将 ．Ｉ ２
样 品与工作 液混合 ，３ ７℃保 温 ５ｒｎ ，在波 长 ｉ后 ｎ ５ ０ｎ ０ ｍ处 比色 测 定 吸 光 度值 ，并 根 据样 品 管 和 校
准 管 的吸光 度值 及校 准 品浓度 计算 胆 固醇含 量 ，计
１２３ 试 剂 盒 法 ．．
反应来分析的传统方法 ，色谱法是适用范 围较广 、 灵敏 度较 高 的分析 方 法 ，而高 效液相 色谱 不需 要 载 气 ，在使用上较气相色谱和液相色谱一 质谱联用的方 法简 便 １ 试验 对液 相色谱 法 、皂化 一 。本 比色法 和 试剂 盒法 测 定蛋 黄胆 固醇 的过 程 和结果 进行 研究 和 比较 ，为鸡 蛋胆 固醇含量测 定工作提供 方法指导 。
入 冰 乙酸 １ 溶 解 残余 物 ，再 加 入显 色 液 ３ｍＬ于 ｍＬ ６ ０℃ 水 浴 １ ｉ，在 ４０ｎ 用 ７２ 光 光 度 计 ５ｍｎ ９ ｍ下 ２分 进 行 比色分 析 ，同法 做空 白样 。将胆 固醇标准 品 用 甲醇 溶解 配 成 １ ・ Ｌ 液 ，取 不 同体 积 胆 固醇 ｍ－ ｍｇ 溶 标 准 品溶 液 与样 品做 同样处 理 ，以胆 固醇 浓度 为横 坐 标 ，吸光 度值 为纵 坐标制 作 工作 曲线 。根据 样 品 的吸光 度值 计算样 品 中胆 固醇 含量 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）
一、实验目的
1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理
胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理
根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：
1、吸光系数法
2、标准曲线法
不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
3、对照法
标准曲线的制作
（1）配置一系列浓度不同的标准溶液。
（2）在测定条件相同的情况下，分别测定其吸光度。
（3）以标准溶液浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A-C关系图。
（4）在相同条件下测出样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出浓度。
定性方法：
将一系列不同波长的单色光，照射到含待测组分的溶液，可测得相应的一系列吸光度。
如果以吸光度为纵坐标，以波长为横坐标作图，便可得到该待测物质的吸收曲线。
由于每一种物质均有其特征的吸收曲线，故可与其标准品比较而定性。
但在实际工作中常用λmax 和ε来定性，λmax可从吸收曲线中吸收峰所对应的波长直接找出；ε通常需配制待测物质三种不同浓度的溶液，于1cm
吸收池中，在λmax处分别测定其吸光度，根据A=εbc，即ε=A/bc，计算出ε，将三次结果平均，即得该物质的摩尔吸光系数。
三、试剂
1. 邻苯二甲醛试剂
2. 90%醋酸
3. 混合酸：等体积浓硫酸+等体积90%醋酸
4. 0.1mg/ml标准胆固醇应用液
5. 小牛血清
四、操作步骤
1、标准曲线的绘制：
取5只试管，分别加入0，0.1，0.2，0.3，0.4mL标准胆固醇应用液，再依次加入醋酸使各管体积均为0.4ml。
每管加入邻苯二甲醛试剂0.2ml，蒸馏水0.01ml，加入4ml混合酸，震荡混匀，10分钟后于550nm测定吸光值，以胆固醇量mg/100ml为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
3、加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测定吸光值，从标准曲线中查出相应的浓度。
样品吸光度A=0.475
因为K为如图所画直线斜率，所以样品中的胆固醇量为：A/K≈24.39(mg/100mL)
由于样品中的蛋黄含量为600mg/100mL,所以蛋黄胆固醇含量为：24.39/600*100%=4.06%
06级生物科学2班
小组成员: 宋茜40608064
刘芳40608089
魏小丽40608091
黄玮40608095。