酚-氯仿抽提DNA

作者: 渭水凡夫(站内联系TA)发布: 2013-04-06最近在博客上看到的一篇可以作为入门级《分子生物学十万个为什么》和大家分享一下用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。

2. 不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。

（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。

将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。

加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。

加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。

最后用95%乙醇沉淀DNA。

溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。

加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。

酚-氯仿法提取DNA时，需要注意以下几点：
1. 在吸取基因组DNA时，需要使用专用的粗口吸头，避免使用普通的吸头，因为这可能会切断或损坏DNA。

2. 在准备实验的过程中，应将DNA样品放在碎冰上，以保持其低温状态。

3. 加缓冲液后，可以轻轻晃动或轻弹试管，以加速DNA的溶解。

4. 加入缓冲液后，可以置于4度过夜，这样也有助于溶解DNA。

5. 将DNA溶液在65度下温育10分钟，可以灭活DNase，防止其降解DNA。

6. 在抽提过程中，如果水相和有机层的界面不太清楚，说明其中蛋白质含量较高，这时可以增加酚/氯仿抽提的次数或适当延长离心的时间。

7. 在酚抽提过程中，如果上清液太粘稠而无法进行水相转移，可以加入适量TES稀释后再抽提。

8. 氯仿的作用是克服酚的缺陷，加快有机相与液相的分层，最后用氯仿抽提出DNA。

由于酚易溶于氯仿中，可以快速去掉核酸溶液中的微量酚。

9. 加入异戊醇能减小分子表面张力，减少抽提流程中的泡沫发生。

通常选用氯仿与异戊醇为24:1的比例，异戊醇可
以帮助分相，使离心后的上层水相、下层有机溶剂相、中层变性蛋白相保持稳定的层次。

以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取准确信息。

酚氯仿法提取DNA原理及方法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用酚氯仿溶液对细胞和细胞碎片进行破碎，然后通过离心分离DNA。

以下是详细的步骤：1.细胞裂解：将待提取DNA的样本（细胞、组织等）加入含有酚氯仿的裂解缓冲液中，将溶液均匀混合。

酚氯仿是一种有机溶剂，能够破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出DNA。

2.蛋白质沉淀：加入混合溶液中的蛋白质会和酚氯仿相互分离，形成一个物理屏障。

离心沉淀后，由于DNA密度比蛋白质低，DNA会上浮到上层，而蛋白质则沉淀在下层。

3.DNA沉淀：将上层液体转移到新的离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，然后轻轻振荡以促使DNA沉淀。

酒精能够与DNA相互作用，使DNA分子变得更加疏水，从而沉淀下来。

4.清洗：离心沉淀后，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀。

乙醇通过去除残留的酚氯仿和其他杂质，使沉淀的DNA纯化。

5. 溶解：将洗涤后的DNA沉淀干燥或用适量的缓冲液溶解，最常用的是TE缓冲液（含有10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA），以便后续的DNA浓度测定和实验操作。

总结来说，酚氯仿法利用酚氯仿溶液破坏细胞膜和核膜，将DNA从细胞中释放出来。

离心分离蛋白质和DNA，然后通过酒精沉淀和乙醇洗涤纯化提取的DNA。

这种方法简单快速，并且能够获得较纯的DNA样品。

不过，酚氯仿法在提取DNA时会同时提取到RNA和蛋白质，因此在一些需要高纯度DNA的实验中可能不适用。

在使用酚氯仿法提取DNA时，还需要注意避免DNA的降解，避免污染和交叉污染，以及正确保存提取的DNA样品。

酚氯仿抽提一、DNA抽提试剂：1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；2.3M NaAc（pH 5.2）；3.80%乙醇。

步骤：1. 样品加去离子水至总体积100 μL；2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc（pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA；4. 4 ˚C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。

二、RNA抽提试剂：1.水饱和酚；2.氯仿；3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；4.75%乙醇（DEPC水配制）。

步骤：1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；4. 加入等体积的氯仿，4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%的乙醇，-80 ︒C沉淀过夜；6. 4 ︒C离心，12, 000 rpm, 30 min；7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ︒C保存。

酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。

其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。

具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。

2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。

酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。

3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。

脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。

4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。

5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。

6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。

洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。

7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。

通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。

基因组DNA的提取方法—酚-氯仿抽提法1. 将95% 酒精浸泡过的标本取出，用吸水纸吸去标本表面的乙醇，用1×TE Buffer浸泡两次，每次20min。

2. 解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g，将组织转入1.5mL离心管加入1mL液氮使其迅速冻结, 用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末。

3. 加入500uL消化液（消化液成分为NaCl 0.1mol/L, Tris-HCl 0.3mol/L, EDTA 0.01mol/L, SDS 1%, Proteimase K 200ug/mL），于56℃恒稳水浴中消化8-10小时, 每隔两小时摇晃一次。

4. 消化结束后，加入等体积的饱和酚（pH7.6），用封口胶封好，置于混匀器上约12小时，离心10分钟（10000r/m）。

5. 取上清液于另一新的EP管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），缓慢抽提20分钟，离心10分钟（10000r/m）。

6. 取上清液于另一新的EP管中，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），缓慢抽提20分钟，离心10分钟（10000r/m）。

7. 取上清液于另一新的EP管中，加入2倍体积的预冷的无水乙醇，-20℃放置2小时。

8. 离心后，DNA沉积于管底，用70%的预冷的乙醇洗涤2次，37℃烘干。

烘干的DNA溶于TE中，4℃保存。

9. 于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase（每次使用前90℃灭活10min），于37℃消化1.0-1.5hr。

10. 用0.8%的琼脂糖凝胶检测，取3μL DNA样品及2μL Load-buffer (含溴酚蓝和缓冲液)，加入点样孔。

实验所用Marker是 DNA（EcoR/HindIII），100V电压电泳90分钟。

凝胶成象分析仪进行检测。

11. 用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值，判定DNA纯度和浓度。

酚氯仿法提‎取DNA主‎要步骤：1.将动物组织‎放在1.5ml的离‎心管中，分别用75‎%、50%酒精和纯水‎梯度脱酒精‎。

每个梯度脱‎水时间为5‎-10min‎2.将组织放入‎研钵中，加入适量D‎N A裂解液‎（300μl‎），研磨后再加‎入300μ‎l DNA裂‎解液冲洗研‎磨棒。

3.将研磨好的‎组织液用移‎液枪加到1‎.5ml离心‎管，在管中加1‎0μl蛋白‎酶K，用封口带将‎离心管封口‎，放入摇床（56℃,5h）。

4.加入等体积‎的Tris‎饱和酚（500μl‎），摇匀（10min‎）。

5.离心：12000‎R，7min，4℃。

离心后分成‎上中下三层‎，上层为DN‎A，中层为蛋白‎质，下层为有机‎质。

6.吸取上层液‎体加入新的‎离心管。

7.配制Tri‎s饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。

8.在含有上清‎液的离心管‎中加入Tr‎i s饱和酚‎、氯仿和异戊‎醇混合液4‎50μl，摇匀10m‎i n。

9.离心：12000‎R，7min，4℃。

10.吸取上清液‎加到新的离‎心管，加入等体积‎的氯仿和异‎戊醇混合液‎400μl‎（氯仿：异戊醇=24:1）。

11.离心：12000‎R，7min，4℃。

12.吸取上清液‎加入新的离‎心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的10‎0%的酒精。

-20℃过夜。

13.将样品取出‎，12000‎R，7min，4℃离心。

14.弃上清，留白色沉淀‎（DNA），加400μ‎l的75%的经过-20℃冷冻的酒精‎，反复吹打溶‎解。

15.重复第14‎步骤2次（用75%酒精洗三次‎）。

16.提取DNA‎完成。

溴氯仿法提‎取DNA的‎原理：用酚抽提细‎胞DNA时‎，有什么作用‎？使蛋白质变‎性，同时抑制了‎D Nase‎的降解作用‎。

用苯酚处理‎匀浆液时，由于蛋白与‎D NA联结键已断‎，蛋白分子表‎面又含有很‎多极性基团‎与苯酚相似‎相溶。

蛋白分子溶‎于酚相，而DNA 溶‎于水相。

dna分离纯化方法及原理
1. 酚-氯仿抽提法：这是一种传统的 DNA 提取方法。

原理是利用酚和氯仿的混合物来溶解细胞膜和蛋白质，使 DNA 与其他细胞成分分离开来。

然后通过离心和有机溶剂的萃取，将 DNA 从混合物中提取出来。

2. 硅胶柱层析法：该方法基于 DNA 与硅胶柱子之间的吸附和解吸作用。

将待提取的样本加载到硅胶柱上，通过柱子的吸附作用，使 DNA 与其他杂质分离开来。

然后用适当的洗脱缓冲液将 DNA 从柱子上洗脱下来。

3. 磁珠法：这是一种利用磁性颗粒结合 DNA 的方法。

将磁珠与样本混合，使 DNA 与磁珠结合。

通过外部磁场的作用，可以将磁珠与结合的 DNA 分离开来，从而实现 DNA 的纯化。

4. 质粒抽提法：这种方法适用于提取质粒 DNA。

通过碱处理破坏细菌细胞壁和细胞膜，使质粒 DNA 从细菌细胞中释放出来。

然后通过离心和沉淀等步骤，将质粒 DNA 与其他杂质分离开来。

5. 超声波法：利用超声波的能量，将细胞破碎，使 DNA 释放到溶液中。

然后通过离心和沉淀等步骤，将 DNA 与其他杂质分离开来。

这些方法的原理基于不同的物理、化学或生物学原理，旨在从复杂的生物样本中选择性地分离和纯化 DNA。

选择合适的方法取决于样本类型、纯度要求和实验目的等因素。

在 DNA 分离纯化过程中，还需要注意操作规范、防止污染，并进行质量控制和检测，以确保获得高质量的 DNA 用于后续的分析和实验。

酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。

每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。

3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。

4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。

5.离心：12000R，7min，4℃。

离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。

6.吸取上层液体加入新的离心管。

7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。

8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。

9.离心：12000R，7min，4℃。

10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。

11.离心：12000R，7min，4℃。

12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。

-20℃过夜。

13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。

14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。

15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。

16.提取DNA完成。

溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。

2. 不能完全抑制RNase 的活性。

苯酚-氯仿法小提DNA试剂配制：1：细胞裂解液：0.32 M 的蔗糖；5 mM 的MgCl22：DNA稀释缓冲液：0.375 M的NaCl；12 mM的Tris-HCl [PH 7.5]3：10%的SDS [PH 7.2]4：5 M的NaCl5：苯酚-氯仿混合液V/V = 1:16：无水乙醇和70%的乙醇DNA 抽提：1、收集白细胞:500 μl新鲜/冻存全血(EDTA-2Na抗凝),加入1 ml的细胞裂解液充分混匀后孵育10分钟，,13000 rpm离心15 sec/3min；2、洗涤白细胞:离心后弃去上清液,加入1ml双蒸水重悬沉淀,将沉淀充分吹打使起完全溶解后, 13000 rpm离心1 /5min；3、稀释DNA，去除蛋白:弃离心后上清液，加入80 μl DNA 稀释缓冲液,重悬沉淀，完全溶解后，加入10 μl 10% SDS 和5 M NaCl 100μl，用手摇匀,再加双蒸水240 μl稀释DNA；4、加入300 μl苯酚-氯仿-异戊醇溶液(V/V=25:24:1,PH=7.5).盖紧试管,彻底混合均匀后, 13000 rpm离心12 min;5、取上清相转至另一1.5 ml EP管中，加入上清液体积比的1.5-2倍体积的预冷无水乙醇。

反复颠倒数次后,可见有絮状DNA沉淀析出；6、13000 rpm离心5 min,去上清水相。

加入和无水乙醇等量的70%预冷乙醇洗去DNA中的盐后,离心5 min。

用100 μl ddH2O或50 μl TE保存DNA备用。

为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。

加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。

一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。

也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。

DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。

本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。

二、材料以方法1、材料：培养菌体2、仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪3、试剂：细胞裂解液100 mM Tris-HCl 5 mM EDTA 500 mM NaCl 1.25% SDS(PH 7.5) 饱和酚氯仿/异戊醇酚/氯仿/异戊醇无水乙醇70％乙醇异丙醇 3 M NaAc(pH5.2) RNase 50×TE缓冲液电泳载样缓冲液三、操作步骤（1）培养菌体（2）加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇（3）12000－15000rpm离心15 min（4）取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min（5）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（6）加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min（7）12000－15000rpm离心10 min（8）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（9）加入2倍体积无水乙醇（10）12000－15000rpm离心10 min（11）倒弃液体留下沉淀，真空干燥（12）复溶于2 ml TE（13）加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min（14）加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min（15）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（16）加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min（17）12000－15000rpm离心10 min（18）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（19）真空干燥沉淀（20）复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。

试验原理：苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。

DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。

蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。

当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。

离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。

酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。

氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。

抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。

试验步骤：1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。

重复一次。

用0.7mlDNA 提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。

2、将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。

50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。

保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。

3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。

5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。

重复酚抽提一次。

加等体积的氯仿﹕异戊醇（24﹕1），上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。

重复一次。

4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。

酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提DNA原理是一种常用的DNA提取方法，通过该
方法可以从复杂的生物样品中高效地提取纯度较高的DNA样本。

其原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞破碎：首先将待提取的生物样品经过离心等操作，去除无关细胞和组织，然后使用细胞裂解缓冲液将目标细胞破碎，使细胞内部的DNA释放出来。

2. 蛋白酶处理：在细胞裂解的过程中，蛋白酶会释放出来，为了去除其对DNA的影响，可以加入蛋白酶抑制剂来保护DNA。

此步骤的目的是降解蛋白质，同时保持DNA的完整性。

3. 混合酚氯仿：将细胞裂解液与等体积的氯仿混合，产生两相体系。

氯仿主要用来分离DNA和其他细胞成分，如脂质、蛋
白质等。

在混合过程中，DNA溶于水相，而其他成分溶于有
机相。

这样，通过离心使两相分离。

DNA会聚集在水相中。

4. DNA沉淀：将水相转移到新的离心管中，加入冷酒精或异
丙醇，使DNA沉淀出来。

酒精或异丙醇中的离子会中和
DNA上的电荷，从而使DNA不溶于水，形成可见的白色沉淀。

5. 洗涤与溶解：将DNA沉淀用无菌蒸馏水洗涤去除酒精或异
丙醇的残余，并用TE缓冲液溶解DNA，使其得以储存和进
一步应用。

通过酚氯仿抽提DNA，可以将DNA从细胞中高效地提取出
来，纯度较高，适用于许多分子生物学实验和技术的应用，如PCR、酶切、测序等。

法医实验室几种常用DNA提取方法及比较DNA提取是法医学中常用的一项技术，用于获得从犯罪现场或是嫌疑人身上采集的样本中的DNA，从而用于分析和鉴定。

在法医实验室中，有几种常用的DNA提取方法，下面将对其进行介绍和比较。

1. 酚/氯仿提取法（Phenol/Chloroform Extraction Method）：酚/氯仿提取法是DNA提取的经典方法之一、它通过将DNA样品与酚和氯仿等有机溶剂混合后，形成两相体系，利用酚的高密度和氯仿的高挥发性质，将DNA转移到有机相中。

通过离心分离DNA和有机溶剂，最终得到纯净的DNA。

该方法能够获得高纯度的DNA，适用于各种样本（血液、组织、唾液等），但操作复杂且耗时较长。

2. 快速提取法（Rapid Extraction Method）：快速提取法是一种高效的DNA提取方法，适用于大规模样品的处理。

它利用一种化学试剂，如蛋白酶K，能够迅速裂解细胞并释放DNA。

然后通过简化的步骤，如磁珠吸附或粘附柱，将DNA从溶液中分离。

该方法操作简单、快速，适用于高通量的样本分析，如犯罪现场的大规模检材筛查。

3. 盐析法（Salting out Method）：盐析法是一种常用的DNA提取方法，利用高盐浓度可以沉淀DNA。

首先，细胞样本经过溶解后，加入高盐浓度缓冲液，使DNA与其他细胞成分分离。

然后通过离心沉淀DNA，去除上清液。

最后，通过洗涤去除溶剂和杂质，获得纯净的DNA样品。

盐析法操作简单，适用于各类样本，但提取的DNA质量可能稍差。

4. 硅胶柱法（Silica Column Method）：硅胶柱法是一种基于硅胶膜或胶珠的DNA提取方法。

这种方法通过将DNA样品与硅胶柱一起离心，使DNA吸附在硅胶上。

随后，通过洗涤去除杂质，最后用低盐缓冲液洗脱DNA，得到纯净的DNA。

硅胶柱法提取的DNA纯度和质量较高，适用于各种样品。

不过，硅胶柱价格较高，操作相对繁琐。

总体而言，这些DNA提取方法各有优劣，选择合适的方法需要考虑实验室的需求和条件。

酚氯仿法提取DNA原理2014年06月06日用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。

2. 不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。

（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

相关产品：酚：氯仿：异戊醇＝25：24：1 pH<5.0酚：氯仿：异戊醇＝25：24：1 pH<5.0酚：氯仿：异戊醇＝25：24：1 PH≥7.8酚：氯仿：异戊醇＝25：24：1 PH≥7.8酚：氯仿＝25：24(PH>7.8)酚：氯仿＝25：24(PH>7.8)氯仿：异戊醇＝24：1氯仿：异戊醇＝24：1酚：氯仿＝25：24(PH<5.0)酚：氯仿＝25：24(PH<5.0)酚：氯仿：异戊醇125：24：1(PH＜5.0)酚：氯仿：异戊醇125：24：1(PH＜5.0)。

酚氯仿法提取dna注意事项-回复酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，适用于从多种生物样本中提取高质量的DNA，具有操作简便、成本低廉、提取效果好的优点。

然而，在进行酚氯仿法提取DNA时，有一些注意事项需要遵守，以确保提取到的DNA质量和纯度满足实验要求。

本文将一步一步回答有关这一主题的问题。

第一步：准备实验材料在进行酚氯仿法提取DNA之前，需要准备好以下实验材料:- 酚氯仿：用于沉淀DNA，可以购买现成的酚氯仿溶液。

- 氯仿：用于去除蛋白质等杂质。

- 去离子水：用于配制实验缓冲液和洗涤试剂。

- 各种缓冲液：例如Tris-HCl缓冲液、TE缓冲液等，用于维持溶液的pH 值、维持DNA的稳定性等。

- 乙醇、异丙醇：用于洗涤、沉淀DNA等步骤。

- 高速离心管、离心机：用于离心沉淀DNA。

- 热板：用于DNA溶解步骤中的加热。

- 显微镜：用于观察DNA的溶解情况。

第二步：取样从待提取DNA的生物样本中取样时，需要注意以下几点:- 样本应选择新鲜的、含有丰富DNA的组织或细胞。

- 取样时应尽量避免污染，使用无菌工具，避免有外源DNA的干扰。

第三步：细胞破碎将取得的样本放入离心管中，加入破碎液并充分混匀。

常用的细胞破碎液包括含有洗涤剂（例如SDS或Triton X-100）和蛋白酶K的缓冲液。

注意事项如下：- 破碎液应加入足够量，以确保细胞完全破裂。

- 破碎液的温度和pH值应适宜，通常为室温和中性pH值。

第四步：离心将混合后的细胞溶液进行离心，去除细胞碎片和细胞核。

注意事项如下：- 离心条件应根据细胞大小和沉淀速度进行调整，通常为1,200-2,000 rpm，5-10分钟。

- 应尽量避免将上清液中的沉淀物和底物混合。

第五步：提取DNA将上清液转移到新的离心管中，加入酚氯仿并混合。

注意事项如下：- 酚氯仿的添加量应为样本体积的1/5-1/10，用于沉淀DNA。

- 混合时应充分摇匀，以便酚氯仿与上清液充分接触。

酚氯仿法提取DNA的原理酚氯仿法是一种用于提取DNA的常见方法，它基于DNA与酚氯仿在两相溶液中由于密度差异而发生分离的原理。

下面将详细介绍酚氯仿法提取DNA的原理及步骤。

DNA是一个带有负电荷的双链分子，其溶解度与其环境的离子力有关。

酚氯仿可以形成无水酚、蛋白质和DNA、RNA在其中既不溶于水又不溶于酚氯仿的界面。

当DNA溶液与酚氯仿混合时，DNA会从水相转移到有机相（酚氯仿相）中，实现分离。

1.细胞裂解：将待提取DNA的细胞加入缓冲液中，并通过机械、热力或化学方法使细胞裂解，释放DNA。

2.去除蛋白质：加入蛋白酶K等蛋白酶使蛋白质降解，形成胶冻样物质。

3.DNA溶解：加入盐酸溶解胶冻样物质，使DNA溶于溶液中。

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5.沉淀DNA：加入冰冷的异丙醇或乙醇，在DNA溶液中形成DNA沉淀。

6.制备DNA：将DNA沉淀转移到新的管中，并用乙醇洗涤去除杂质。

7.定量和存储：使用分光光度计测量DNA的浓度，然后将其保存在适当的条件下，以便后续实验中使用。

1.方法成本较低，步骤简单易行。

2.可以提取高纯度的DNA。

3.可以在较短时间内提取大量DNA。

1.操作要注意安全，避免酚氯仿的接触和吸入。

2.使用无菌技术和无菌材料，以避免外源性DNA的污染。

3.避免DNA溶液的过热和过长的暴露于空气中，以避免降解DNA。

总结：酚氯仿法提取DNA是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过DNA与酚氯仿在两相溶液中的密度差异实现DNA的分离。

该方法简单易行，可以提取高纯度的DNA，适用于很多生物学实验和研究领域。

在进行实验时，需注意操作安全和避免DNA污染，以保证提取到高质量的DNA。