荧光染料
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流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术(Flow Cytometry)是一种用于分析和计数细胞的技术。
在流式细胞术中,荧光染料起着至关重要的作用,可以标记细胞的不同成分,使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。
荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号,这些信号被流式细胞仪采集和分析,从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。
以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。
1. FITC(Fluorescein Isothiocyanate):FITC是最常用的荧光染料之一,通过与免疫球蛋白G(IgG)结合,可用于免疫细胞表面分子的检测。
FITC在波长为488 nm的激光下激发,发射的荧光信号在525 nm 左右。
它可以与其他荧光染料(如PE或APC)结合使用,以实现多参数流式细胞分析。
2. PE(Phycoerythrin):PE是一种从红藻中提取的荧光染料,其发射的荧光信号在575 nm左右。
PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质,如细胞因子。
PE也可以与其他染料结合使用,以实现多参数分析。
3. APC(Allophycocyanin):APC是一种类似于PE的荧光染料,通过独特的发射波长(约于660 nm附近)和长的荧光寿命来区分。
APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质,在深色的区域提供了可靠的信号。
5. PE-Cy7:PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7(Cy7)结合形成的荧光染料。
它适用于多参数流式细胞术,利用其较长的荧光寿命和波长(激发于488 nm,发射于780 nm左右),可以与其他染料一起使用,以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。
除了上述染料外,还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。
例如,Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。
这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度,可以根据实验需要选择合适的染料。
需要注意的是,在选择荧光染料时,需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。
荧光染料波长查询
荧光染料是一种能够吸收光能并发射出更长波长的荧光的染料。
每种荧光染料都有其特定的吸收和发射波长。
以下是一些常见的荧光染料及其对应的吸收和发射波长:
1. 荧光素(Fluorescein):
- 吸收波长:494-495 nm
- 发射波长:518-520 nm
2. 罗丹明B(Rhodamine B):
- 吸收波长:540-550 nm
- 发射波长:565-580 nm
3. 二甲基琼脂绿(Ethidium Bromide):
- 吸收波长:518-530 nm
- 发射波长:605-625 nm
4. 亚甲基蓝(Methylene Blue):
- 吸收波长:600-660 nm
- 发射波长:660-740 nm
需要注意的是,荧光染料的波长可能因厂商和实验条件而略有差异。
因此,在具
体实验中,最好参考相关荧光染料的技术说明书或与供应商联系以获取准确的波长信息。
荧光染料在生物标记中的应用方法荧光染料是一种广泛应用于生物标记领域的工具,它们可以通过各种方法标记和追踪生物分子、细胞和组织。
本文将介绍荧光染料在生物标记中的应用方法。
一、荧光染料的选择荧光染料的选择是生物标记中的关键一步。
在选择荧光染料时,需要考虑其吸收和发射光谱的重叠程度,以及荧光强度、稳定性和耐光性等因素。
一些常用的荧光染料包括荧光素、荧光素同位素、硫苏磺酮类染料和量子点等。
这些染料具有不同的特性和应用范围,可以根据实验需要选择合适的染料。
二、直接染色法直接染色法是将荧光染料直接与目标分子或细胞结构结合来实现标记的方法。
例如,可以利用共价键或亲和性结合将荧光染料与抗体结合,在细胞或组织中特异性地标记目标蛋白。
这种方法具有简单、直观的优点,可以快速得到标记结果。
然而,直接染色法通常需要较高的染料浓度,可能对生物样本产生毒性或干扰效应。
三、间接染色法间接染色法是将荧光标记的二级抗体与一级抗体结合,间接地将荧光染料引入目标分子或细胞结构中。
这种方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于检测低表达量的目标分子。
间接染色法还可以利用荧光标记的亲和素(如蛋白A和蛋白G)结合至目标分子上,实现高效的标记效果。
四、荧光染料的共淬灭共淬灭是利用两种或多种荧光染料之间的相互作用来实现生物标记的方法。
常见的共淬灭方法包括荧光共淬灭显微镜和荧光共淬灭光谱学。
通过选择适当的荧光染料组合和参数设置,可以实现超分辨率成像和多重标记的效果。
这种方法具有高分辨率和灵敏度的优点,可用于研究生物分子和细胞的微观结构和功能。
五、荧光蛋白标记除了荧光染料,荧光蛋白也是常用的生物标记工具。
荧光蛋白是由生物体产生的蛋白质,具有自发光的特性。
例如,绿色荧光蛋白(GFP)可以利用其自身的荧光来标记特定的蛋白质或细胞。
荧光蛋白标记具有非侵入性和实时观察的优势,已广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究领域。
六、应用案例荧光染料在生物标记领域已经取得了许多重要应用。
荧光染料:猝不及防的五大种类荧光染料是一类可以在紫外光或蓝光激发下发出明亮的颜色或光的化学染料,被广泛地应用于生命科学、材料科学、医学与环境监测等领域。
相较于传统染料,荧光染料有更亮、更稳定的发光效果,使得研究者们可以在实验中获得更精准的结果。
然而,由于类型繁多,新手常常会被五花八门的荧光染料种类搞得晕头转向。
今天,让我们来剖析一下荧光染料的五大种类,帮助大家猝不及防地选出最适合自己实验的染料吧!一、荧光普通染料荧光普通染料是最常见的一种荧光染料,通常在化学与生命科学领域广泛使用。
其发射的荧光主要由它们的分子中的芳香环基团产生,因此常常被用于荧光免疫分析、免疫印迹和荧光染色等。
二、pH指示荧光染料pH指示荧光染料可以根据生物体液中的pH值发出不同颜色的荧光信号,因此在生物医学研究和医学诊断中得到广泛应用。
它们的收集窗口位于甲酰胺或亚胺键附近,pH的变化会导致该结构的变化,进而使荧光性质发生改变。
三、光动力学荧光染料光动力学荧光染料可以用于癌症治疗,这些染料在光照下能够被物质所激发,并且会发出特定的荧光信号。
在照射后,它们可以通过生物体的普通代谢途径排出体外。
四、DNA标记荧光染料DNA标记荧光染料可以和目标DNA结合,形成稳定的复合物,并且以稳定的荧光信号显示出来。
因此,用于 DNA 的荧光标记,是基因克隆、PCR体外扩增和原位杂交等领域的常用手段。
五、光谱比对荧光染料光谱比对荧光染料可以根据染料的反应性和化学性质发出多个波长的荧光信号,并且可以与其他荧光染料进行配对,以增加其特异性。
因此,在分析和鉴定复杂混合物的时候,经常会使用光谱比对荧光染料。
总之,在选择荧光染料的时候,需要根据实验需求、染色失真、照射条件、荧光信号等方面进行考虑。
希望以上五大种荧光染料的分类,能够帮助大家在实验中更好地选择染料,并取得更精准的实验结果。
sybr荧光染料名词解释
SYBR荧光染料是一类广泛应用于生物学和分子生物学领域的
荧光染料。
SYBR是"Synergetic Binding Reagent"的缩写,意为协同结合试剂。
SYBR染料可与DNA结合并发出荧光,用于DNA凝胶电泳、实时定量PCR等实验技术中。
SYBR染料的特点包括灵敏度高、检测范围广、使用方便等。
它可以在凝胶电泳中将DNA带的彩色带和染料的荧光信号进
行关联,从而能够可视化分析DNA样本。
在实时定量PCR中,SYBR染料可与PCR扩增产物特异结合,测量PCR反应的荧
光信号强度,从而实现对DNA扩增的实时监测和定量分析。
SYBR染料适用于各种类型的DNA样本和PCR反应体系,包
括单一基因的扩增、多基因拷贝数的测定、突变分析等应用。
此外,SYBR染料的荧光信号相对稳定,可进行多次检测。
总的来说,SYBR荧光染料是一种常用的DNA染料,具有灵敏、广泛适用性和简便易用等优点,被广泛应用于生物学和分子生物学研究中的DNA分析技术。
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光,并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛,涵盖了许多领域,例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR):墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料,常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号,从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB):罗丹明B是一种红色荧光染料,广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合,以显示细胞和组织的结构,帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG):草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料,主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用,可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110):罗丹明110是一种黄绿色荧光染料,常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合,罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况,特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC):荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料,常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合,在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种,它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步,新型的荧光染料不断问世,为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用,科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境,进一步推动科学的发展。
荧光染料分类荧光染料是一类广泛应用于生物医学、化学分析、材料科学等领域的化合物,其独特的发光性质使其在荧光显微镜、免疫分析、细胞示踪等方面发挥着重要作用。
根据其化学结构和荧光性质的不同,荧光染料可以分为有机荧光染料、无机荧光染料和量子点荧光染料三大类。
有机荧光染料是指那些分子结构中含有芳香环或异维生环的有机化合物,具有良好的溶解性和生物相容性。
有机荧光染料的发光机理主要是通过吸收光子激发到激发态,然后再退激发到基态时放出光子。
由于有机荧光染料的结构多样性,可以通过合成设计来调控其荧光性质,如荧光发射波长、量子产率等。
常见的有机荧光染料有罗丹明、荧光素、偶氮染料等,它们在生物成像、荧光标记、光敏材料等方面有着广泛的应用。
无机荧光染料是指那些以无机物质为基础的具有荧光性质的化合物,如金属配合物、硫化物、氧化物等。
无机荧光染料的发光机理多样,有些是通过金属离子的电子跃迁产生荧光,有些是通过晶格缺陷或杂质能级产生荧光。
无机荧光染料具有较高的光稳定性和化学稳定性,适用于长时间稳定的荧光标记和荧光探针。
常见的无机荧光染料有铬酞菁、镧系元素荧光粉等,它们在LED发光、光学显示、生物探针等领域有着重要的应用。
量子点荧光染料是指那些由纳米尺寸的半导体材料组成的荧光染料,其发光性质主要来源于量子尺寸效应。
量子点荧光染料具有窄的发射光谱、高的量子产率和较长的寿命,被广泛应用于生物成像、多光子激发、荧光标记等领域。
量子点荧光染料的发光波长可以通过控制其粒径和材料成分来实现调节,具有较好的光谱可调性。
常见的量子点材料有CdSe、CdTe、ZnS等,它们在纳米生物技术、光电器件、传感器等方面有着广泛的应用。
总的来说,荧光染料作为一类重要的功能性材料,在生命科学、材料科学、光电技术等领域都发挥着重要作用。
随着科学技术的不断发展,荧光染料的合成、表征和应用也在不断创新和完善,为人类带来了更多的科研成果和应用价值。
希望未来能有更多的研究人员投入到荧光染料的研究中,共同推动这一领域的发展,为人类社会的进步做出更大的贡献。
荧光染料用途
荧光染料是一种特殊的染料,可以发出明亮的荧光光线,因此广泛用于各种领域。
以下是荧光染料的几种主要用途:
1. 生物医学:荧光染料可以用于生物医学研究中的细胞成像、分子生物学、药物筛选等方面。
比如,在细胞成像中,荧光染料可以标记细胞内的蛋白质、核酸等分子,便于观察它们的运动、交互、分布等。
2. 材料科学:荧光染料可以用于制备荧光材料,如荧光纳米材料、荧光聚合物等。
这些材料可以应用于光电子学、荧光传感等领域。
3. 环境监测:荧光染料可以作为环境监测中的标记物,用于追踪水、空气、土壤等中的污染物。
比如,在水污染监测中,荧光染料可以标记水中的重金属、有机污染物等,便于跟踪它们的扩散和排放。
4. 安防领域:荧光染料在安防领域有广泛应用,如防伪标记、水印、指纹检测等。
荧光染料可以做成无法直接肉眼观察到的标记物,只能通过特定的荧光检测器或显微镜观察到。
总之,荧光染料是一种具有特殊荧光性质的染料,有着广泛的应用前景。
随着科技的不断发展,它在各个领域的应用也将越来越广泛。
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荧光染料有哪些
荧光染料是一种特殊的染料,它具有一种发光的性质,当它受到一定的光照时,能够发出特定的色彩,具有特殊的美感。
在电子行业,荧光染料用于制备各种液晶屏,以实现屏幕
的彩色显示;在医学保健行业,荧光染料用于生物标记物质,检测病原体,分析各种物质
以及进行药物检测;在生物行业,荧光染料应用于进一步研究生物应激反应,如分子医学、植物病害诊断等。
常见的荧光染料有:荧光绿B(EGFP)、荧光红(DsRed)、荧光黄(YFP)、荧光紫(CFP)、荧光橙(CFTR)等,它们的类型和颜色不完全一样。
前三类荧光染料具有荧光现象,可以被相应的可视光照耀,大致可以得到红、绿或蓝色荧光;后三类荧光染料在不可见的紫外线的照射下,也能发出不同的荧光色,其中荧光紫和荧光橙是比较常用的。
荧光染料作为一种特殊的染料,它的主要特性是高灵敏度和亮度,能够有效的反映一个物质的定性和定量的结果,因此应用在检测、分析、生物医学治疗等领域是十分成功的,使用荧光染料的益处在于能够加快以及改善医疗检测、药物检测及疾病检测的过程,其中荧
光检测技术是一项迅速发展的现代诊断技术。
通过生物标记,荧光染料和抗原物质结合在
一起,在特定的激发光照射下发出某种色彩的荧光,从而及早发现病毒、细菌、血液病等
微生物,以便即将的治疗及控制。
总之,荧光染料作为一种新型的染料,在电子行业、医疗卫生行业以及生物行业都有极其重要的应用,同时它还具有较高的精度和准确性,所以在检测、分析、生物学研究等领域
中起到了重要作用。
荧光染料简介荧光定义荧光染料会发出荧光,所谓荧光是指物质分子吸收紫外光后发出的可见光荧光以及吸收波长较短的可见光后发出的波长较长的可见光荧光。
荧光发生机理每个分子具有一系列严格的分立能级,室温下物质分子大部分处于"基态",当这些物质在光的照射下吸收光能后,进入新的状态,称为"激发态"。
处于"激发态"的分子是不稳定的,它可以通过以10-9-10-7秒的极短时间内发射光量子回到基态。
这一过程称为荧光发射,也就是发光。
激发光谱和发射光谱任何发荧光的物质分子都具有两个特征光谱--激发光谱和荧光发射光谱。
在测定时,用以激发荧光的吸收光谱,一般称为荧光物质的激发光谱,它是指相对于不同激发波长的辐射所引起物质发射某一波长荧光的光谱。
荧光发射光谱简称为发射光谱,是指某一波长激发光引起物质发射不同波长荧光的光谱。
荧光效率和荧光强度分子能产生荧光必须具备两个重要的条件,一是物质的分子必须具有吸收一定频率光能的基团--生色团,二是必须具有能产生一定光量子的荧光团。
而物质发射荧光的能力用荧光效率表示。
荧光效率为荧光团发射荧光的光量子数与生色团吸收的光量子数的比值称。
荧光效率往往小于1。
如罗丹明B的乙醇溶液的荧光效率为0.97;荧光素的水溶液的荧光强度为0.65,荧光效率与物质结构有关,还与所处的环境紧密相关。
而对于某种荧光物质在特定的环境下它的荧光效率是固定的。
在一定范围内,激发光越强,荧光也越强。
即荧光强度(发射荧光的光量子数)等于吸收光强度乘以荧光效率。
提高荧光强度的根本方法选择适当强度的光源作为荧光物质的激发光源,和选择适合于被检荧光物质选择性吸收的光谱滤光片作为激发滤光片,是提高荧光强度的根本方法。
许多染料的最大吸收峰并不是紫外光,而是在400nm-500nm的蓝绿光,所以紫外光不是这些染料的最佳激发光源,可见光才是这些染料的最佳光源。
常用荧光色素波长名称最大吸收波长(nm)最大发射波长(nm)适用性吖啶橙(Acridine orange)405585中吖啶黄(Acridine yellow)455620好碘化丙啶(Propidium iodide)488620中溴化乙啶(Ethidium bromide)488610中光神霉素(Mithramycin)457570好派若宁Y(Pyronin Y)488580好罗丹明123(Rhodamine 123)560540-660中赫斯特33258(Hoechst 33258)338505差荧光素(Fluorescein)495525好荧光黄(Lucifer yellow)428544好伊红(Eosin)525546中四甲基罗丹明(Tetramethyl rhodamine)555580中SYBR GreenⅠ498522好SYBR Gold495540好SYPRO Orange475580好SYPRO Red545635中NBD467538好GelStar495530好黄色荧光蛋白EYFP515530好绿色荧光蛋白EGFP490510好蓝色荧光蛋白EBFP380440差常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC(异硫氰酸荧光素)绿色:激发波长488nm,最大发射波长525nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)可用于荧光显微镜技术4)荧光强度易受PH值影响,PH值降低时其荧光强度减弱。
2、Alexa Fluor 488:激发波长488nm,最大发射波长519nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)具有超乎寻常的光稳定性,非常适用于荧光显微镜技术;4)在较宽的PH值范围内保持稳定(PH4~10)。
3、Cy3:激发波长488nm,最大发射波长570nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测;3)适用于荧光显微镜技术;4)为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于PE。
4、Cy5:激发波长633/635nm,最大发射波长670nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL4通道检测;3)适用于荧光显微镜技术;4)同样为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于APC。
5)与单核和粒细胞非特异性结合多,易出现假阳性结果。
PI(碘化丙啶):橙红色620nm5、PE(藻红蛋白)橙黄色:激发波长488nm,最大发射波长575nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测;3)其荧光泯灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术,但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR:激发波长488nm,最大发射波长615nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)可适用于小功率激光器的流式细胞仪,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor 610:激发波长488nm,最大发射波长628nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)荧光强度高;3)可适用于小功率激光器的流式细胞仪,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
8、PE-Alexa Fluor 647:激发波长488nm,最大发射波长668nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测,BD细胞仪FL3通道检测;2)不易湮灭;3)可适用于小功率激光器的流式细胞仪,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
9、PE-Cy5:激发波长488nm,最大发射波长670nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测,BD细胞仪FL3通道检测;2)可适用于大、小功率的流式细胞仪;3)淬灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术;4)可与FITC、PE搭配,荧光干扰小、补偿小,但不宜与APC搭配。
5)与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。
10、PE-Cy5.5:激发波长488nm,最大发射波长694nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测,BD细胞仪FL3通道检测;2)可适用于大、小功率的流式细胞仪;3)淬灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术;4)可与FITC、PE、APC搭配,荧光干扰小、补偿小,是APC比较理想的搭配。
11、PE-Alexa Fluor 700:激发波长488nm,最大发射波长723nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测,BD细胞仪FL3通道检测;2)光淬灭性很强,要绝对避光。
12、PE-Cy7:激发波长488nm,最大发射波长767nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测,BD细胞仪FL3通道检测;2)可适用于大、小功率的流式细胞仪;3)光淬灭性很强,要绝对避光;4)可与FITC、PE搭配,与FITC无光谱重叠,与APC搭配荧光干扰小,补偿小,是比较理想的搭配。
13、TR:激发波长595nm,最大发射波长615nm。
1)其标记的抗体适用于配备Texas Red激光器的流式细胞仪;2)荧光不易淬灭,可用于荧光显微镜。
14、APC(别藻青蛋白)红色:激发波长633/635nm,最大发射波长660nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪;2)在BD细胞仪的FL4通道检测,在Beckman Coulter细胞仪只有配备双激光器的FC500才能检测到。
630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发15、APC-Cy5.5:激发波长633/635nm,最大发射波长668nm。
1)其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪;2)主要用于四色以上的流式细胞术。
16:PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白)深红色:激发波长488nm,最大发射波长677nm。
1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测,BD细胞仪FL3通道检测;2)可于FITC、PE搭配,荧光光谱重叠少,对随细胞的特异性结合少,但量子产量较低,适用于较高表达物的检测。
GelStar的特点和使用方法GelStarGelStar与SYBR Green I灵敏度相当,使用简单。
可以电泳前染色和电泳后染色,电泳前染色不会影响样品的相对迁移率。
GelStar使用方法1.按常规操作,制备琼脂糖凝胶,凝胶冷却到50℃-60℃,加入10000×GelStar染料。
电泳双链DNA,使染料在凝胶中的终浓度为1×;电泳单链DNA或RNA,使染料在凝胶中的终浓度为2×。
混匀。
2.按常规方法倒胶,电泳,观察。
SYBR染料简介SYBRSYBR染料为一种非对称菁化物,它作为一种DNA和RNA染料,与菲啶类染料如溴化乙锭相比具有一定优越性。
有三种SYBR染料被用于分子生物学试验中:分别是SYBR GreenⅠ、SYBR GreenⅡ和SYBR Glod。
所有三种染料在溶液状态基本不产生荧光,然而,当其结合到核酸上时,将产生很强的荧光以及很高量子产额(quantum yield)。
比如,SYBR GreenⅠ在结合到双链NDA上时量子产额为0.8,而SYBR Glod具有0.7的量子产额以及1000倍的增强荧光。
由于SYBR染料能产生很强的信号和极低的背景以及对核酸的高度亲和力,它们能在低浓度条件下使用,并比传统的染料如溴化乙锭具有更高的灵敏度。
SYBR Glod是最好的SYBR染料。
灵敏度很高,且其信号检测动态范围极佳。
由于SYBR Glod通常主要结合在主链的带电磷酸残基上,结合了染料的DNA的电泳迁移会明显减缓,并且有时会造成DNA条带的弯曲。
因此,用SYBR Glod进行凝胶染色通常在电泳完成后进行。
由于背景染色非常低所以不需要进行脱色。
以上摘自"分子克隆实验指南"第三版1732-1733页SYPRO Orange使用方法SYPRO Orange简介用SYPRO Orange进行凝胶中蛋白质染色,具有操作简单、快速、灵敏等特点。
SYPRO Orange使用方法1. 电泳:按照常规方法进行SDS-PAGE电泳。
为了提高检测的灵敏度,电泳缓冲液中的SDS的浓度最好为0.05%(常规浓度为0.1%)。
2. 配制染色液:用7.5%(V/V)的乙酸溶液,按照5000:1的比例稀释SYPRO Orange浓缩液,混匀,制成染色溶液,。
3. 染色:将染色溶液倒入合适的塑料容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。