2005年版中国药典无菌检查法

注射用七叶皂苷钠无菌检查方法学验证陈晓宁【摘要】目的:验证注射用七叶皂苷钠的无菌检查方法.方法:采用＜中国药典＞2005年版二部附录无菌检查法项下薄膜过滤法.结果:样品、阴性对照无菌生长,所有阳性对照及试验组菌生长良好.结论:经方法学验证,该法准确可靠,可作为注射用七叶皂苷钠的无菌检查方法.%Objective: To verify the sterility test of Sodium Aescinate for Injection. Methods: CP 2005 Volume Ⅱ ,AppendixⅪ,Membrane filtration method was used. Results: All of positive strains and test strains revealed growth of microorganism and the substance control and negative control gave no evidence of growth. Conclusion: This method is accurate. It can be used for sterility test of Sodium Aescinate for Injection.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2011(008)001【总页数】2页(P48-49)【关键词】注射用七叶皂苷钠;无菌检查;方法验证【作者】陈晓宁【作者单位】山东绿叶制药有限公司,山东,烟台,264003【正文语种】中文【中图分类】R927注射用七叶皂苷钠的主要成分为七叶皂苷钠A和七叶皂苷钠B，是从七叶树科植物天师栗的干燥成熟种子中提取的一种含酯键的三萜皂苷，适用于脑水肿、创伤或手术所致肿胀，也用于静脉回流障碍性疾病。

本实验按照《中国药典》2005年版要求对注射用七叶皂苷钠现行检查方法进行验证，以期建立注射用七叶皂苷钠的无菌检查方法。

医疗器械产品无菌检验操作规程1目的通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。

2适用范围适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。

3检验依据《中国药典》（2005年版）GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准4仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪（器）、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。

5无菌检验室的环境要求5.1无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。

5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。

无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。

无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。

5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。

每年至少检测一次。

5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。

6无菌检验前的准备6.1器具灭菌、消毒6.1.1灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。

可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。

所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。

6.1.2消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。

如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。

可采用消毒剂浸泡或擦拭。

消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。

凝胶法鲎试剂使用说明书【名称】通用名：鲎试剂英文名：（简称）汉语拼音：本品主要成份为因子、因子、凝固酶原、凝固蛋白原。

【用途】专用于细菌内毒素检查。

【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。

【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。

【用法】．材料和设备选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。

准备若干支ⅹ玻璃反应试管（若使用规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（±℃）。

．实验操作稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。

试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于试剂中，轻轻振摇至少至试剂完全溶解。

注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。

检查操作取分装有鲎试剂溶液的×试管或复溶后的支规格的鲎试剂原安瓿支，其中支作供试品管，支作阴性对照管，支作阳性对照管，支作供试品阳性对照管。

每支供试品管加入供试品；阴性对照管加入检查用水；阳性对照管加入浓度为λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入含λ内毒素的供试品。

封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入±℃的恒温器中孵育±分钟，然后取出观察结果。

试管在孵育期间应避免任何的振动。

结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。

阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。

【注意事项】.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。

. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在℃干烤至少，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。

关于颁布布和执行《中国药典》2005年版有关事宜的通知各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局)：根据《药品管理法》及《药品管理法实施条例》的有关规定，现颁布《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》2005年版，于2005年7月1日起执行。

《中国药典》是国家h保证药品质量、保护人民用药安全有效而制定的法典；是执行《药品管理法》、监督检验药品质量的技术法规；是我国药品生产、经营、使用和监督管理所必须遵循的法定依据。

《中国药典》收载品种的标准为国家对该药品品种的最基本要求。

《中国药典》2005年版在标准要求、形式内容等方面，与2000年版相比均有重大改进和提高，更加符合当前我国药品生产、经营和管理的实际情况。

作好宣传、执行新版《中国药典》，对于保证药品质量、促进我国医药工业的发展都具有十。

分重要的作用。

各级药品监督管理部门要给予高度重视。

现就执行《中国药典》2005年版的有关事宜通知如下：一、自执氘之日起，与《中国药典》2005年版同品种的原国家药品标准和试行标准停止执行。

2005年7月1目前生产的药品，仍按原标准进。

行检验。

对于检测项目多于药典规定的或检测指标高于药典要求的应当按原批准的标准执行。

二、《中国药典》2000年版及其增补本和《中国生物制品规程》2000年版及其增补本收载，但《中国药典》2005年版未收载的品种，暂仍按原标准执行。

《中国药典》2005年版品种项下未列出的规格应当按批准证明文件执行。

三、自执行之日起所生产的《中国药典》品种，其新印制的药品包装、标签及说明书必须注明《中国药典》2005年版规定的药品通用名称。

对于名称已作修订的药品，其原通用名称过渡使用至2006年12月31日。

执行之日前印制的药品包装、标签及说明书，可以继续流通使用完毕。

四、为指导临床用药，保证中成药在临床中使用安全有效，《中国药典》2005年版对中成药标准项下【功能与主治】进行了规范，各药品生产企业要关注各自的品种，按我局《药品注册管理办法》有关要求，做好说明书修改工作。

中国药典二部无菌检查法中国药典二部无菌检查法：保障药品质量与安全的关键环节药品作为关系人类健康和生命的特殊商品，其质量与安全至关重要。

为了确保药品的无菌状态，防止微生物污染，中国药典二部明确规定了无菌检查法。

本文将详细介绍中国药典二部无菌检查法的原理、应用及意义，以展现其在保障药品质量与安全领域的重要作用。

一、无菌检查法的原理无菌检查法是通过对药品进行微生物限度的检测，以确保药品在生产、储存、运输和使用过程中不受微生物污染。

这种方法主要依赖于对药品中可能存在的微生物进行培养、分离和鉴定，从而判断药品是否符合无菌要求。

中国药典二部规定的无菌检查法具有高度的敏感性和特异性，能够有效地检测出药品中的微生物，为药品质量与安全提供有力保障。

二、无菌检查法的应用1.药品生产过程监控：在药品生产过程中，无菌检查法被广泛应用于原料、半成品和成品的微生物检测。

通过对生产环境的监控，可以及时发现并消除微生物污染源，确保药品生产过程的无菌状态。

2.药品储存与运输：药品在储存和运输过程中，容易受到微生物的污染。

采用无菌检查法定期对储存和运输环境中的药品进行检测，可以确保药品在流通环节中的无菌状态，保障患者的用药安全。

3.药品质量控制：无菌检查法是药品质量控制的重要手段。

通过定期对药品进行无菌检测，可以及时发现并剔除受污染的药品，确保市场上流通的药品符合质量标准。

三、无菌检查法的意义1.保障患者安全：无菌检查法的有效实施，可以确保药品不受微生物污染，从而降低患者因使用受污染药品而引发感染的风险，保障患者的生命安全和健康。

2.提高药品质量：通过无菌检查法对药品进行严格的质量把控，有助于提高药品的整体质量水平。

这对于提升我国药品在国际市场的竞争力，推动医药产业的可持续发展具有重要意义。

3.推动行业技术进步：无菌检查法的不断发展和完善，推动了医药行业的技术进步。

企业为了满足无菌检查的要求，需要不断提升生产设备的洁净度、优化生产工艺，从而提高药品的生产效率和质量水平。

《中华人民共和国药典》2005年版一部勘误表页数品名误正11三七【含量测定】测定法“…三者的总量不得少于5.0%。

”【含量测定】测定法“…的总量不得少于5.0%。

”20山豆根【含量测定】第8行“…吸取供试品溶液2～6μl，”【含量测定】第8行“…精密吸取供试品溶液2～6μl，”27川乌【鉴别】（3）“加硫酸液（0.25mol/L）20ml，”【鉴别】（3）“加0.25mol/L 硫酸液20ml，”41云芝【含量测定】单糖精密量取总糖项下的滤液40ml，按总糖项下方法,自“加酚酞指示液l～2滴……”起，同法操作。

【含量测定】单糖精密量取总糖项下的滤液40ml，加酚酞指示液l～2滴，用氢氧化钠试液调节pH值至中性，按总糖项下方法,自“精密加入碘滴定液(0.1mol/L)25m1……”起，同法操作。

52丹参【检查】重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录ⅨB原子吸收分光光度法或附录ⅪD电感耦合等离子体质谱法）测定，【检查】重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录ⅨB原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，56水飞蓟【含量测定】第4行“理论板数按水飞蓟宾或异水飞蓟宾峰计算应不低于5000。

”【含量测定】第4行“理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于5000。

”第6行“精密称取水飞蓟宾和异水飞蓟宾混合对照品12mg,”第6行“精密称取水飞蓟宾对照品12mg,”第15行“以水飞蓟宾和异水飞蓟宾峰面积之和计算，”第15行“以水飞蓟宾两个峰面积之和计算，”57水蛭【含量测定】公式中“W”[删去]第16行“W—取样量。

”59甘草【检查】重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录ⅨB原子吸收分光光度法或附录ⅪD电感耦合等离子体质谱法）测定，【检查】重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录ⅨB原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，60甘草【含量测定】甘草苷第9行“再称重”【含量测定】甘草苷第9行“再称定重量”第14行“含甘草甘( C21H22O9) 不得少于1.0%”第14行“甘草苷( C21H22O9) 不得少于1.0%”63石膏【检查】砷盐“依法检查（附录ⅨF），”【检查】砷盐“依法检查（附录ⅨF第二法），”68白术【鉴别】（2）“…在与对照品色谱相应的位置上，”【鉴别】（2）“…在与对照药材色谱相应的位置上，”69白芍【检查】重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录ⅨB原子吸收分光光度法或附录ⅪD电感耦合等离子体质谱法）测定，【检查】重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录ⅨB原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，81地龙【检查】重金属“…依法检查（附录ⅨE），”【检查】重金属“…依法检查（附录ⅨE第二法），”86西瓜霜【检查】重金属“含量金属不得过百万分之十。

中国药典无菌检查法在当今的医药行业中，无菌检查法是确保药品安全性和有效性的重要手段。

中国药典作为我国药品质量标准的权威法规，对于无菌检查法的规定和实践具有极其重要的指导意义。

本文将详细阐述中国药典中无菌检查法的相关内容，以期为药品生产和质量控制提供有益的参考。

一、中国药典无菌检查法概述中国药典无菌检查法是针对药品中微生物污染进行检查和评估的标准方法。

该方法通过对样品进行适当的处理、培养和观察，以确定样品中是否存在微生物。

无菌检查法对于保证药品质量和安全性具有至关重要的作用，因为微生物污染可能导致药品失效、不良反应甚至危害患者健康。

二、无菌检查法的实践操作1.样品采集与处理在进行无菌检查之前，必须对样品进行适当的采集和处理。

采集的样品应当具有代表性，能够反映药品的整体质量。

处理过程中应避免交叉污染和外界微生物的引入。

2.培养基的选择与制备无菌检查中使用的培养基必须符合中国药典的规定，具有良好的选择性、灵敏度和特异性。

培养基的制备过程需严格按照配方进行，确保质量和稳定性。

3.接种与培养将处理后的样品接种于适宜的培养基中，按照规定的温度和时间进行培养。

接种过程中要保证无菌操作，防止污染。

4.观察与结果判定在规定的培养期结束后，对培养基进行仔细观察，记录任何可见的微生物生长情况。

根据观察结果进行无菌检查的判定，确定药品是否符合无菌要求。

三、无菌检查法的质量控制为确保无菌检查法的准确性和可靠性，必须加强实验室的质量控制。

这包括对实验人员的培训、实验设备的维护与校准、实验环境的监控以及实验过程的规范化和标准化。

同时，应定期进行内部审核和外部质量评估，以确保无菌检查法的执行符合中国药典的要求。

四、结论与展望无菌检查法作为药品质量保证的重要环节，在医药行业中具有举足轻重的地位。

中国药典作为我国药品质量的法规性文件，对于无菌检查法的规定和实践提供了明确的指导。

通过深入理解和严格执行中国药典的相关要求，我们能够更好地保障药品的安全性和有效性，为公众健康事业做出积极贡献。

含抑菌成分制剂的无菌检查中应关注方法学验证研究内容摘要：本文根据审评过程中发现的含抑菌成分制剂在进行无菌检查中存在的一些问题，并结合2005版中国药典二部中无菌检查方法学验证研究的内容，提请申报单位注意在后续品种的研发和申报过程中对所采用的无菌检查进行方法学验证，以保证无菌制剂的无菌性。

关键词：无菌检查方法学验证无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

因而2005版中国药典新增了无菌检查方法验证试验，旨在：1）确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。

即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。

2）保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。

审评中我们注意到，部分含抑菌成分的制剂其进行的无菌检查存在一些问题，如抗生素注射剂无菌检查方法中仅简单的提及采用薄膜过滤法应符合规定，并未详细说明冲洗液的用量、试验菌株等；同一品种不同规格的制剂均采用同一冲洗量进行薄膜过滤，其结果是无法完全排除抑菌成分的影响。

这些问题使得我们对含抑菌成分制剂的无菌检查结果是否能达到目的产生担忧。

本文对含抑菌成分制剂的无菌检查中涉及的有关问题做简要介绍，使研发者增进对无菌检查法的认识，提高药物研发水平。

关于需进行无菌检查的无菌制剂，中国药典2005年版共包含10种剂型，分别为：1）注射剂， 2）眼内注射溶液、眼内插入剂及供手术、伤口、角膜穿通用的眼用制剂， 3）用于烧伤、创伤或溃疡的气雾剂、喷雾剂，4）用于烧伤或创伤的局部用散剂，5）用于手术、耳部伤口或耳膜穿孔的滴耳剂与洗耳剂6）用于烧伤或创伤的鼻用制剂，7）用于冲洗开放性伤口或腔体的无菌溶剂，8）用于烧伤或严重创伤的软膏剂及乳膏剂，9）用于严重创伤的凝胶剂，10）植入剂。

其中水溶性含抑菌成分的无菌制剂包括1）～7），非水溶性含抑菌成分的无菌制剂包括8）和9）。

无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。

事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。

无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。

细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。

1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。

无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。

单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。

面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。

由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。

在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。

操作间内不应安装下水道。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。

缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。

无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。

中国药典三部标准(2005年版)正文101种A群脑膜炎球菌多糖疫苗拼音名：A Qun Naomoyanqiujun Duotang Yimiao英文名：Group A MeningococcaI Polysaccharide Vaccine书页号：2005年版三部-34本品系用A群脑膜炎奈瑟菌培养液，经提取获得的荚膜多糖抗原，纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成。

用于预防A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。

1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2 制造2.1 菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。

2.1.1 菌种名称及来源生产用菌种为A群脑膜炎奈瑟菌CMCC 29201(A4)菌株。

2.1.2 种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。

2.1.3 种子批的传代主种子批启开后传代次数不得超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。

2.1.4 种子批菌种的检定2.1.4.1 培养特性及染色镜检菌种接种于含10%羊血普通琼脂培养基，脑膜炎球菌在25%不生长。

于35～37% 二氧化碳的环境中培养16～20小时，长出光滑、湿润、灰白色的菌落，菌苔易取下，在生理氯化钠溶液中呈现均匀混悬液。

染色镜检应为革兰阴性双球菌、单球菌。

2.1.4.2 生化反应发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气；不发酵乳糖、甘露醇、果糖及蔗糖(附录ⅥV)。

2.1.4.3 血清凝集试验取经35～37℃培养1 6～20小时的菌苔，混悬于含0.5%甲醛的生理氯化钠溶液中，或56℃加热30分钟杀菌以后，使每1ml含菌1.o×10〈9〉～2.o×10〈9〉，与同群参考血清做定量凝集反应，置35～3℃过夜，次日再置室温2小时观察结果，以肉眼可见清晰凝集现象(+)之血清最高稀释度为凝集反应效价，必须达到血清原效价之半。

2.1.5 种子批的保存原始种子批和主种子批应冻干保存于2～8℃。