玉米大斑病菌的生理小种及交配型测定

玉米大小斑病（玉米大斑病、玉米小斑病、统称为玉米叶斑病。

）宣威市植保植检站王怀选（一）病原玉米大斑病的病原为大斑凸脐蠕孢，属半知菌亚门真菌。

大斑病菌分玉米专化型表现对玉米的专化致病性和高粱专化型表现对高粱有专化致病性。

玉米大斑病菌美国报道有4个生理小种。

我国已发现1号、2号和3号小种。

玉米小斑病的病原微玉蜀黍平脐蠕孢，属半知菌亚门真菌。

在玉米上已发现O、T两个生理小种。

T小种对有T型细胞质的雄性不育系有专化型，O 小种无这种专化性。

（二）症状大小斑病同时出现或混合侵染，此病除危害叶片、苞叶和叶鞘外，对雌穗和茎秆的致病力也比较强，可造成果穗腐烂和茎秆断折。

小斑病发病稍早。

发病初期，在叶片上出现半透明水渍状褐色小斑点，病斑扩大后纺锤形或椭圆形褐色病斑，边缘赤褐色，轮廓清楚，上有二、三层同心轮纹。

病斑进一步发展时，内部略褪色，后渐变为暗褐色。

大斑病病斑长梭形，灰褐色或黄褐色，长5 -10 厘米，宽 1-2厘米左右，有的病斑更大，或几个病斑连接成不规则形枯斑，严重时叶片枯焦。

天气潮湿时，大小斑病病斑上生出暗黑色霉状物（分生孢子盘）。

叶片被害后，使叶绿组织受损，影响光合机能，导致减产。

（三）侵染循环主要以菌丝体在病残株上（病叶为主）越冬，分生孢子也可越冬，但存活率低：玉米大小斑病的初侵染菌源主要是上年收获后遗落在田间或玉米秸秆堆中的病残株，其次是带病种子。

玉米生长季节内，遇到适宜温、湿度，越冬菌源产生分生孢子，传播到玉米植株上，在叶面上有水膜条件下萌发侵入寄主，遇到适宜发病的温、湿度条件，经 5 ～ 7 天即可重新产生新的分生孢子进行再侵染，这样经过多次反复再浸染造成病害流行。

在田间，最初在植株下部叶片发病，向周围植株传播扩散（水平扩展），病株率达一定数量后，向植株上部分叶片扩展（垂直扩展）。

自然条件下，还侵染高梁。

（四）发病条件1、大面积种植感病杂交种是大小斑病流行的重要条件。

过去种植传统品种较多，由于品种多样化，遗传基础广泛，适应性较强，病害发生轻。

河北农业大学硕士学位论文玉米大斑病菌生理小种的鉴定和有性态的诱导姓名：***申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：董金皋;郑晓莲2001.6.1摘要本文以１９９９～２０００年采自河北、河南、山东、辽宁、吉林和黑龙江等省份的４７个玉米大斑病菌菌株为供试曲株，主要进行Ｆ面三部分试验：玉米大斑病菌生理小种的鉴定、玉米大斑病菌有性态的诱导和玉米大斑病菌ＤＮＡ的提取。

以１９９９年采集的４０个玉米大斑病菌菌株为供试菌株，黄早４、ｏＨ４３、ＯＨ４３Ｈｔｌ、黄早４Ｈｔ２、黄早４Ｈｔ３和黄早４ＨｔＮ为鉴别寄主，在温室内进行了生理小种鉴定。

／结果：一所测定的４０个玉米大斑病菌菌株中，１９个菌株属于０号生理小种，占测定菌株的４７．５％；７个属于１号小种，占１７５％；３个１２号小种，占７．５％ｉ１个１３号小种，占２．５％；２个３号小种，占５％：３个ｌＮ号小种，占７．５％；３个２３号小种，占７．５％：１个２Ｎ号小种，占２．５％：１个３Ｎ号小种，占２．５％。

表明这些菌株生理分化比较明显，０号生理小种为优势小种。

就地理分布而言，同一省份内存在着不同的生理小种，不同省份之间生理分化并不一致。

论文指出，监测玉米大斑病菌生理小种的组成、分布和遗传变异将具有重大意义；深入研究玉米大斑病菌生理小种的遗传变异将对玉米大斑病菌毒素的进一步研究奠定坚实的基础。

，对１９９９～２０００年采集的４２个玉米大斑病菌菌株进行了室内有性杂交试验。

ｆ结果：①对子囊壳的着生位置和排列方式以及子囊和子囊孢子进行了简单描述，并发现少量含８个子囊孢子的子囊。

指出，暴露的不具叶鞘的大麦秆、小麦秆和玉米秆上能够产生子囊壳：②选出标准交配型９９１４（Ａ）和９９６１（ａ），并测得供试菌株中２４个为交配型Ａ，占被测总菌株数的５７．１４％，１８个为交配型ａ，占被测总菌株数的４２．８６％。

没有出现“中性菌株”；③在培养条件研究中，得出结论：人工诱导玉米大斑病菌有性态产生的最佳条件为：ｐＨ值７．０的Ｓａｃｈ培养基，大麦秆作为诱导介质，２５℃光照培养。

玉米抗大斑病菌单基因系的建立及其在Exserohilumturcicum生理小种鉴定中的应用张桂珍;刘金亮;胡瑞学;Ali Khatib Bakar;张艳华;Don G. White;潘洪玉【摘要】Thirty inbred lines such as A632, B37, B73, B68, C103 and Va26 from the inbred collection at the University of Illinois were used to determine physiological races of Exserohilum turcicum in the field. Twenty-one inbred lines from the inbred collection were selected to determine physiological differentiation of E. Turcicum effectively in China. Thirty-two single conidial isolates of E. Turcicum were collected throughout 15 farming areas of Jilin Province. All the 32 isolates were race zero. There was no physiological differentiation of the pathogen.%利用美国A632,B37,B73,B68,C103,Va26等30个Ht单基因鉴别寄主,按美国伊利诺伊大学的大田接种方案与鉴定方法,建立了适合中国的监测玉米大斑病菌生理小种鉴定的21个Ht单基因系.从吉林省15个地区的不同玉米品种中采集玉米大斑病样本,采用单孢分离获得了32个玉米大斑病菌菌株,利用已建立的上述21个Ht单基因鉴别寄主,通过美国的大田鉴定方案进行生理小种鉴定.结果表明,这32个菌株均为0号小种,并未出现生理小种分化现象.【期刊名称】《吉林大学学报（理学版）》【年(卷),期】2012(050)001【总页数】5页(P134-138)【关键词】单基因系;玉米大斑病菌;生理小种;鉴定【作者】张桂珍;刘金亮;胡瑞学;Ali Khatib Bakar;张艳华;Don G. White;潘洪玉【作者单位】吉林大学植物科学学院,长春130062;吉林大学植物科学学院,长春130062;吉林大学植物科学学院,长春130062;吉林大学植物科学学院,长春130062;吉林大学植物科学学院,长春130062;美国伊利诺伊大学香槟分校作物科学系,伊利诺伊61801,美国;吉林大学植物科学学院,长春130062【正文语种】中文【中图分类】Q939.95玉米大斑病(northern corn leaf blight, NCLB)是由真菌Exserohilum turcicum 引起的一种玉米病害, 一般年份减产约20%, 严重流行年份减产可达50%以上[1], 给玉米的生产带来严重威胁.玉米大斑病的发生与目前推广的玉米品种抗病性及病原菌生理小种变异密切相关. 因此, 建立适合中国的玉米抗大斑病菌单基因系, 明确中国玉米大斑病菌生理小种组成及分布频率, 对于有针对性地寻找新的抗病基因和培育具有多抗病基因的抗病品种, 指导品种合理布局和轮换抗病品种, 从而有效延缓病原菌的生理分化, 降低病原物种群数量及实现玉米大斑病的可持续控制具有重要意义.病原菌在Ht单基因鉴别寄主上的反应型, 受鉴别寄主基因的纯度、鉴别寄主对病原物反应差异以及环境条件等因素的影响. 目前普遍认为玉米对大斑病抗性的质量性状由Ht1,Ht2,Ht3和HtN等显性单基因控制[2], 因此国际上采用含有Ht单基因品种作为鉴定大斑病病菌生理分化的鉴别寄主. 目前, 国内在玉米大斑病菌生理小种鉴定方面多利用常规鉴别寄主, 采用温室接种方法, 通过玉米苗期观察进行[3-8], 由于温室内的温度和光照不能完全模拟病原菌的自然发病环境, 从而对玉米大斑病菌发病影响较大[9-10], 因此不能及时准确掌握自然条件下玉米大斑病菌生理小种的分化与流行动态.为完善中国玉米大斑病菌生理小种的鉴定技术, 明确吉林省玉米大斑病菌生理小种的分化情况, 本文利用吉林大学有害生物综合防治实验室已有的0,1,2,123和123N等5种生理小种, 对引进的30个美国Ht单基因鉴别寄主, 从生长环境适宜和抗感表现型等方面分析, 筛选建立适合中国玉米抗大斑病菌单基因系. 同时, 利用这些筛选出的Ht单基因鉴别寄主技术进行大田接种方案, 对采自吉林省四平、公主岭、农安、长春、辽源等15个地区不同玉米品种的32个玉米大斑病菌标样进行生理分化鉴定和分析, 以明确吉林省玉米大斑病菌生理分化情况, 掌握吉林省玉米大斑病菌生理小种的组成、分布频率及变异动态.1 材料与方法1.1 供试菌株及供试鉴别寄主1) 吉林大学有害生物综合防治实验室保存的5株已知生理小种的玉米大斑病菌菌株： 0号生理小种(803-0), 1号生理小种(803-1), 2号生理小种(803-2), 123号生理小种(803-123)和123N号生理小种(803-123N). 2) 2007～2009年从吉林省四平、公主岭、农安、长春、辽源等15个玉米主产区采集到不同玉米品种的玉米大斑病叶样品60份. 通过组织分离培养, 进行单孢分离, 共得到32个玉米大斑病菌菌株纯培养.30个具有Ht单基因的鉴别寄主由美国伊利诺伊大学White教授惠赠, 分别为A619,A619Ht2,A632,A632Ht1,B37,B37Ht1,B37Ht3,B68,B68Ht1,B68HtN,B73, B73Ht1,C103,C103Ht1,C103HtN,H95,H100,H102HtM,H103HtM,H110HtM,H 111HtM,Mo17,Mo17Ht1,PaHt1,PaHt2,PaHt3,Va26,Va26Ht1,Va26Ht2,Va26H t3.1.2 鉴定标准鉴定标准参照国际CIMMIT小麦玉米改良中心群体分类标准及中华人民共和国行业标准----玉米抗病虫性鉴定标准《玉米抗大斑病鉴定技术规范(2007202201)》, 略有改动.R型病斑：病斑初为黄绿色水浸状条斑, 之后中间变褐, 边缘有明显的较宽黄色晕圈, 病斑狭长, 出现早, 枯死慢, 称为褪绿斑； S型病斑：病斑初为灰绿色水浸状斑, 之后扩大为梭形大斑, 灰褐色, 边缘无明显晕圈, 出现晚, 枯死快, 称为萎蔫斑； MR 型病斑：病斑较窄, 呈梭形, 褐色, 边缘有较宽的黄色圈； MS型病斑：病斑呈梭形大斑, 灰褐色, 边缘有较窄的黄色圈.1.3 生理小种命名生理小种的命名采用Leonard等[11]提出的新的生理小种命名系统, 并参照文献[12]的新命名法.1.4 玉米抗大斑病菌单基因系的建立分别将30个玉米抗大斑病菌单基因系鉴别寄主的种子种植在划分好的6个小区, 每个小区3行, 行距0.7 m, 每行10个单基因系, 每个单基因系0.7 m、 6粒种子, 出苗后每个单基因系留苗3～4株, 株距约0.2 m. 将在燕麦麦芽糖(OAT)固体培养基上培养20 d的玉米大斑病菌与其培养基一起用搅拌机搅碎, 制成孢子悬浮液, 稀释浓度至1.0×106～1.0×107个孢子/mL, 在配好的孢子悬浮液中加入几滴体积分数为0.1%的吐温-20. 每个玉米大斑病菌菌株对应一个小区, 随机留一个小区喷吐温水作为对照. 采用喷雾接种的方法, 在玉米6～8叶期进行第1次接种, 使叶片均匀布满, 每株喷约5 mL, 以后每隔5 d接种一次, 直至抽穗期, 共接种6次. 在玉米抽穗期至成熟期进行症状调查, 共2次.根据已知生理小种的5株玉米大斑病菌菌株在Ht单基因鉴别寄主的症状表现, 建立适合检测中国玉米大斑病病菌的单基因系.1.5 生理小种鉴定分别将21个玉米抗大斑病菌单基因系鉴别寄主的种子种植在划分好的21个小区, 小区的设计方法与鉴定方案同上.2 结果与分析2.1 玉米抗大斑病菌单基因系的建立根据5个已知生理小种的玉米大斑病菌菌株在30个Ht单基因系的反应类型, 建立适合鉴定中国玉米大斑病菌生理小种鉴定的21个单基因系, 列于表1.表1 单基因系对不同玉米大斑病菌生理小种的抗性*Table 1 Resistance of inbred lines to physiological races of E.turcicum单基因系玉米大斑病菌生理小种CK803-0803-1803-2803-123803-123N毒力公式A619RSSSSSHt1Ht2Ht3HtN/0A632RSSSSSHt1Ht2Ht3HtN/0B37RSSSSSHt1 Ht2Ht3HtN/0B68RSSSSSHt1Ht2Ht3HtN/0B73RSSSSSHt1Ht2Ht3HtN/0C103 RSSSSSHt1Ht2Ht3HtN/0H95RMSSMSMSMSHt1Ht2Ht3HtN/0H100RMSMS SMSMSHt1Ht2Ht3HtN/0Mo17RSSSSSHt1Ht2Ht3HtN/0Va26RSSSSSHt1Ht2 Ht3HtN/0A632Ht1RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/0B37Ht1RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/ 0B68Ht1RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/0B73Ht1RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/0C103Ht1 RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/0Mo17Ht1RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/0Pa91Ht1RRSMR SSHt1Ht2Ht3HtN/0Va26Ht1RRSRSSHt1Ht2Ht3HtN/0A619Ht2RRRSSSHt1H t2Ht3HtN/0Pa91Ht2RRMRSSSHt1Ht2Ht3HtN/0Va26Ht2RRRSSSHt1Ht2Ht3 HtN/0B37Ht3RRRRSSHt1Ht2Ht3HtN/0Pa91Ht3RRMRMRSSHt1Ht2Ht3HtN/ 0Va26Ht3RRRRSSHt1Ht2Ht3HtN/0B68HtNRRRRRSHt1Ht2Ht3HtN/0C103H tNRRRRRSHt1Ht2Ht3HtN/0H102HtMRRRRRRHt1Ht2Ht3HtN/0H103HtMRR RRRRHt1Ht2Ht3HtN/0H110HtMRRRRRRHt1Ht2Ht3HtN/0H111HtMRRRRR RHt1Ht2Ht3HtN/0*R: 抗病； S: 感病； MR: 中抗； MS: 中感； CK: 吐温水.由表1可见, 只接种吐温水的玉米株在这30个Ht单基因鉴别寄主上均不感病； 5个已知生理小种的玉米大斑病菌菌株在A619,A632,B37,B68,B73,C103,Mo17,Va26,A619Ht2,A632Ht1,B37Ht1,B37Ht 3,B68Ht1,B68HtN,B73Ht1,C103Ht1,C103HtN,Mo17Ht1,Va26Ht1,Va26Ht2,V a26Ht3鉴别寄主上表现出明显的抗感反应, 而在单基因系H95,H100,H102HtM,H103HtM,H110HtM,H111HtM,Pa91Ht1,Pa91Ht2,Pa91 Ht3抗感反应不明显, 即出现中度抗病或中度感病, 因此出现中抗或中感的上述单基因系不适合作为中国玉米大斑病菌生理小种鉴定的鉴别寄主. 结合以上鉴定结果, 本文建立了适合鉴定中国玉米大斑病菌生理小种鉴定的单基因系. 此单基因系为A619,A619Ht2,A632,A632Ht1,B37,B37Ht1,B37Ht3,B68,B68Ht1,B68HtN,B73, B73Ht1,C103,C103Ht1,C103HtN,Mo17,Mo17Ht1,Va26,Va26Ht1,Va26Ht2,Va 26Ht3共21种玉米自交系.2.2 玉米大斑病菌生理小种鉴定结果本文采用上述建立的21个Ht单基因鉴别寄主对32个玉米大斑病菌标样进行生理小种鉴定, 结果列于表2, 这32个菌株在建立的21个Ht单基因鉴别寄主上表型明显, 即在不含Ht基因的鉴别寄主上均表现为感病, 在含Ht基因的鉴别寄主上均表现为抗病.表2 玉米大斑病菌生理小种鉴定结果*Table 2 Identification of physiological races of E.turcicum供试菌株地理来源鉴别寄主反应型ABCDE毒力公式生理小种1白山SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/002白山SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003四平SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/005四平SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/006四平SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/007公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/008公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/009公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/0011公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00106公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00107公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00313公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00335公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00402公主岭SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00403白城SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00509白城SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00604白城SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00623白城SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00715长春SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00810长春SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00820长春SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/001104长春SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/002603吉林SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003008吉林SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003106农安SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003209辽源SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003501辽源SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003505洮南SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/003630安图SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/005005敦化SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/005018中交河SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/005104榆树台子SRRRRHt1Ht2Ht3HtN/00* R: 抗病； S: 感病.表2中, A代表A619,A632,B37,B68,B73,C103,Mo17,Va26； B代表A632Ht1,B37Ht1,B68Ht1,B73Ht1,C103Ht1,Mo17Ht1,Va26Ht1； C代表A619Ht2,Va26Ht2； D代表B37Ht3,Va26Ht3； E代表B68HtN,C103HtN. 由表2可见, 这32个玉米大斑病菌菌株全部为0号生理小种. 因此, 吉林省玉米大斑病菌并未出现生理小种分化现象.综上所述, 在玉米大斑病菌生理小种鉴定中, 病原菌在鉴别寄主上的症状表现受鉴别寄主基因的纯度、寄主对病原菌反应差异及环境等因素的影响. 目前国际上采用含有Ht单基因品种作为鉴定大斑病菌生理分化的寄主. 本文利用上述30个在美国广泛用于玉米大斑病菌生理小种鉴定的Ht单基因鉴别寄主, 结合已知生理小种的玉米大斑病菌在这些单基因系上的田间症状表现及生长情况, 建立了适合中国玉米大斑病菌生理小种田间鉴定的单基因系, 优化了中国玉米大斑病菌生理小种鉴定技术, 克服了玉米大斑病菌生理小种在常规鉴别寄主和温室条件下鉴定的局限性, 能更真实、准确地反映玉米大斑病菌生理小种的田间变化；同时结合玉米大斑病菌的生物学特性, 为今后鉴定中国玉米大斑病菌生理小种的类型提供了理论依据.参考文献【相关文献】[1] SUN Shu-qin, WEN Lei-lei, DONG Jin-gao. 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齐市地区玉米大斑病菌生理小种及鲜食玉米品种对大斑病抗性鉴定姜婉怡;刘金鑫;王瑞婷;蒋丹;潘洪玉;赵长龙;李永刚【摘要】[目的]明确齐市地区鲜食玉米品种抗大斑病的表现.[方法]在黑龙江省齐市地区玉米大斑病菌生理小种鉴定的基础上,采用自然侵染的方法测定50种鲜食玉米品种抗大斑病的表现.[结果]在该地区共鉴定出0、1、2和12共4个生理小种类型,其中以0号和l号生理小种为优势生理小种,分别占52.9％,和29.4％.50种鲜食玉米品种对大斑病的抗性表现为具有显著差异,万彩糯3号和斯达44共2个品种表现为免疫;哈糯2018、绿种糯167和小黄糯等20个品种表现为高抗;白糯1308、白糯118和阿尔银甜糯3号等18个品种表现为抗病;农种玉368、金糯262、密甜糯2号和白糯8301共4个品种表现为感病;京科糯2010、白甜糯8302和黄甜糯8401等共6个品种表现为高感.[结论]该研究为齐市地区鲜食玉米抗大斑病品种的选择和合理布局提供理论依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2019(047)006【总页数】3页(P150-152)【关键词】玉米大斑病;生理小种;抗病性;鲜食玉米【作者】姜婉怡;刘金鑫;王瑞婷;蒋丹;潘洪玉;赵长龙;李永刚【作者单位】东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨 150030;吉林大学植物科学学院,吉林长春130062;黑龙江省依安县农业技术推广中心,黑龙江依安161500;东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】S435.131近年来，随着我国农业产业化进程加速和种植业结构调整，传统的玉米生产由普通产量型向高层次专用质量型转变，鲜食玉米也进入快速发展时期，其发展空间广阔，市场前景良好。

鲜食玉米是指在乳熟期采摘果穗用于加工或直接食用的玉米，以其品质好、营养丰富深受消费者的青睐，而且种植成本低收益好，种植面积不断扩大[1-2]。

美国普通玉米自交系大斑病鉴定摘要以95份美国普通玉米自交系为试验材料，进行大斑病人工接菌鉴定。

结果表明：高抗、抗病、中抗、感病、高感、发生抗性分离的分别6、41、21、17、9、1份，分别占全部试验材料的6%、43%、22%、19%、9%、1%。

关键词玉米；自交系；大斑病；鉴定玉米大斑病是当今世界上玉米主要叶部病害之一。

据报道，在严重流行的年份和地区，常常造成大面积减产。

国外玉米产区对此病害已进行了广泛而深入的研究。

在我国，自20世纪70年代初，开展全国玉米病害攻关研究以来，在病原菌生理小种、流行、抗病育种等方面取得了巨大进展，缓解了玉米大斑病的发生和危害。

然而，随着栽培技术的不断改革，玉米品种的更换和病原菌群体的变异，玉米大斑病仍是生产上不可忽视的重要病害[1-3]。

玉米大斑病在东北普遍流行，对玉米构成严重威胁。

在抗病品种的选育与利用过程中，抗病性育种已被列为主要育种目标之一，而应用抗病杂交种是防治玉米大斑病的主要方法，杂交种的抗病性主要取决于亲本自交系的抗病性[4-5]。

玉米品种的更新与换代离不开种质的创新，外来种质是东北玉米自交选育的重要基础材料之一，外来种质对东北杂交玉米生产的贡献将近60%，其中美国外来种质的利用每提高1个百分点，东北玉米每年平均产量增加10 kg/hm2。

该试验在通化市农业科学研究院对95份美国普通玉米自交系进行了大斑病人工接菌鉴定。

1 材料与方法1.1 试验材料供鉴定美国普通玉米自交系95份。

即AMD 1～27，AMD 29～69，AMD 72～82，AMD 84～87，AMD 89～100。

1.2 试验设计试验根据鉴定材料，设95个处理，即每一个供试玉米自交系为一个处理。

设立固定抗病鉴定圃。

病圃设在具备良好的自然发病环境。

小区顺序排列，双行区，不设重复，行长4 m，每行20株。

人工接种在玉米十叶期进行，选择空气湿度较大的傍晚将菌液喷在玉米心叶内，接种量控制在5～10 mL/株，接菌2次。