术和基本方法2 细菌的生化反应检测

微生物检验技术总结微生物检验技术总结微生物检验技术总结一．名词解释1.微生物：一群肉眼看不见的微小生物，如细菌、真菌、病毒。

必须借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍，千倍，甚至数万倍才能观察到的低等生物体。

2.细菌：是一类体积微小，结构简单，以二分裂的方式繁殖，对抗生素敏感的原核细胞型单细胞微生物。

3.细菌的生化反应：利用生化试验检测细菌对各类基质的代谢作用及其代谢产物的试验方法。

4.内毒素：是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，当菌体死亡崩解后，才可释放到菌体外。

5.外毒素：是由革兰阳性菌及部分革兰阴性在生活过程中合成并可释放到菌体外的毒性蛋白质，毒性强而且有高度的选择性。

6.抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的、能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质。

7.正常菌群：在正常情况下，人体的体表及其与外界相通的腔道，（上呼吸道、口腔、泌尿生殖）都有一定种类和数量的微生物寄生，这些微生物通常对人体是无害的，甚至有益，8.条件致病菌：在正常情况下不致病，但在特定条件下能引起疾病的菌群，称为条件致病或机会致病菌。

9.菌群失调：是指宿主某些部位正常菌群中各菌群之间的比例发生了大幅度的变化，由生理性组合转变为病理性组合的状态。

10.消毒;是指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法。

11.灭菌：是指杀灭物体上所有的微生物（包括病源微生物、非病源微生物、和细菌芽孢）的方法12.无菌：是指没有活的微生物存在。

13.无菌操作：防止微生物进入机体或其他操作对象的方法，二．填空题1.微生物的类型：非细胞性微生物（病毒），原核细胞型微生物（细菌、放线菌、衣原体、支原体），真核细胞性微生物（真菌）2.寄居于人类的微生物可分为：（1）正常微生物群或正常菌群（2）条件致病微生物（3）病源微生物3.革兰阳性菌细胞壁特有组分a)磷壁酸;由核糖醇和甘油残基经磷酸二酯键交联而成的多聚物。

b)磷壁酸功能：抗原性强，是阳性菌表面重要抗原（分型），并与细菌的黏附（致病）有关。

1 目的1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2 原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。

由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。

不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。

即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。

3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。

3.4 器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。

4 流程糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验5 步骤(一) 糖类发酵试验1 目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2 原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。

是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。

是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。

3 材料3.2菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。

细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。

用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。

（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。

其代谢产物也不同。

例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。

酸的生成可通过指示剂来确定。

在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。

气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。

（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。

此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。

因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。

如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。

因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。

（4）大分子代谢的实验。

靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。

硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。

为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。

明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。

淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。

它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。

一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。

2. 掌握常见细菌生理生化反应的检测方法，如糖发酵、吲哚产生、甲基红反应等。

3. 学会通过生理生化反应对细菌进行初步鉴定。

二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长繁殖过程中，利用酶催化底物发生的一系列化学反应。

通过检测细菌对特定底物的利用能力、酶的产生以及代谢产物的生成，可以判断细菌的种类和特性。

三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂等。

3. 仪器：酒精灯、接种环、培养皿、试管、试管架、滴管等。

四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

观察菌落周围是否出现透明圈，判断细菌是否能发酵该糖。

2. 吲哚产生实验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

取培养液滴加吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀，判断细菌是否能产生吲哚。

3. 甲基红反应实验：将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

取培养液滴加甲基红试剂，观察颜色变化，判断细菌是否能产生有机酸。

五、实验结果与分析1. 糖发酵实验结果：- 大肠杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。

- 金黄色葡萄球菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。

- 枯草芽孢杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。

- 变形杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阳性。

2. 吲哚产生实验结果：- 大肠杆菌：吲哚产生阴性。

- 金黄色葡萄球菌：吲哚产生阳性。

- 枯草芽孢杆菌：吲哚产生阴性。

- 变形杆菌：吲哚产生阳性。

3. 甲基红反应实验结果：- 大肠杆菌：甲基红反应阴性。

- 金黄色葡萄球菌：甲基红反应阴性。

- 枯草芽孢杆菌：甲基红反应阳性。

- 变形杆菌：甲基红反应阳性。

根据实验结果，我们可以初步判断：- 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，发酵葡萄糖，不产生吲哚和有机酸。

细菌的一般检验方法
细菌是一类微小的生物体，它们存在于自然界的各个角落，有
些对人类健康有益，有些则可能引发疾病。

因此，对细菌进行检验
是非常重要的。

下面将介绍一般的细菌检验方法。

首先，最常见的细菌检验方法之一是培养法。

培养法是通过将
样本置于适当的培养基上，利用培养基中的营养物质和条件，促使
细菌在培养皿中生长和繁殖。

在适当的环境条件下，细菌会形成典
型的菌落，通过观察菌落的形态、大小、颜色等特征，可以初步判
断细菌的种类。

其次，鉴定细菌的生化试验也是一种常用的方法。

生化试验是
通过检测细菌在特定生化反应条件下的代谢产物，来判断细菌的特性。

比如，利用氧化酶试验来判断细菌是否具有氧化酶酶活性，利
用大肠杆菌培养基来区分大肠杆菌等。

除此之外，PCR法也是一种常用的细菌检验方法。

PCR法是一种
快速、高效的分子生物学技术，通过扩增细菌DNA片段，再通过电
泳等手段来检测细菌的存在。

PCR法的优点是操作简便、灵敏度高，可以快速准确地检测出细菌。

最后，抗生素敏感性试验也是细菌检验的重要环节。

抗生素敏感性试验是通过将不同抗生素涂布在培养皿上，观察细菌对不同抗生素的敏感性，从而选择出对患者病情最有利的治疗方案。

总的来说，细菌的一般检验方法包括培养法、生化试验、PCR 法和抗生素敏感性试验。

这些方法各有优势，可以相互补充，提高细菌检验的准确性和可靠性。

在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，以确保检验结果的准确性和可靠性。

希望本文介绍的细菌检验方法对您有所帮助。

细菌的生化试验名词解释细菌是一类微生物，广泛存在于自然界中。

它们是单细胞生物，无真正的细胞核，但却能够执行一系列生化反应。

研究细菌的生化试验是了解细菌的基本生物学特性和进行抗菌药物研发的重要手段。

以下是一些常见的细菌生化试验名词的解释。

1. 嗜热菌试验嗜热菌试验用于检测细菌是否具有耐热能力。

这个试验基于嗜热菌能够在高温环境下生长的特性。

通过将细菌接种在含有特定营养物质的培养基中，并在高温下孵育，观察细菌的生长情况，可以判断其是否为嗜热菌。

2. 酸酶试验酸酶试验用于检测细菌是否能够产生特定的酸酶。

这些酸酶可以将特定的底物分解为酸性产物，从而改变培养基的酸碱度。

通过观察培养基颜色的变化或使用酸碱指示剂，可以判断细菌的酸酶活性。

3. 氧化还原试验氧化还原试验用于检测细菌是否能够对底物进行氧化或还原反应。

这些反应可以生成或消耗氧分子，并产生可见的颜色变化。

通过添加特定的底物和指示剂，可以观察培养基的颜色变化，从而判断细菌的氧化还原能力。

4. 胶原酶试验胶原酶试验用于检测细菌是否能够分解胶原蛋白，一种存在于动物组织中的重要蛋白质。

这个试验基于胶原酶可以将胶原蛋白分解为小分子肽或氨基酸的特性。

通过观察培养基的透明圈或使用特定染料的变化，可以判断细菌是否具有胶原酶活性。

5. 大理石气试验大理石气试验是检测细菌是否具有尿素酶活性的方法。

尿素酶可以将尿素分解为氨和二氧化碳。

这个试验基于细菌产生的氨可与酚红指示剂反应，使培养基呈现鲜艳的红色。

通过观察培养基的颜色变化，可以判断细菌是否具有尿素酶活性。

这些生化试验名词只是细菌研究中的一小部分，不同的试验可以提供不同的信息，从而深入了解细菌的特性。

在细菌学的研究中，这些试验通常与其他分析方法结合使用，以全面了解细菌的生化特性、代谢途径和致病机制，为抗菌药物研发和靶向治疗提供有力的依据。

通过深入研究细菌的生化特性，我们可以更好地理解它们的生存机制，并为人类健康和环境保护提供支持。

细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。

这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。

以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。

结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。

2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。

营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。

3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。

5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。

淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。

蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。

6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。

7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。

8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。

方法2.3.5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。

用革兰氏染色进行油镜观察。

①革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液等。

试验步骤：(1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。

(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。

(3) 媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。

(4) 脱色：在上述涂片上流加95%乙醇溶液（一般20～30s），当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。

(5) 复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，用吸水纸吸去残水晾干。

(6) 镜检：用油镜观察。

②芽孢染色(1) 制片：按常规方法涂片、干燥及固定。

(2) 加热染色：向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min，加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸。

脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色。

(3) 复染：用0.5%番红水溶液复染2min。

(4) 水洗：用缓流自来水冲洗至无色。

(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。

③鞭毛染色（硝酸银染色法）(1) 载玻片准备：将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸20min，然后用清水充分洗净，再置于95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。

(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。

(3) 制片：取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片，使菌悬液流向另一边，用吸水纸吸取多余的菌悬液，自然干燥。

(4) 染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。

大肠杆菌的生化反应鉴定大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，对人类和动物的肠道具有重要的生理功能。

在实验室中，通过对大肠杆菌的生化反应进行鉴定，可以帮助我们了解其特定的生理特征和代谢途径。

下面将按照步骤逐步介绍大肠杆菌的生化反应鉴定方法。

第一步：培养大肠杆菌首先，需要从一个纯培养的大肠杆菌菌落开始。

这可以通过在含有适宜营养物质的琼脂平板上接种一小部分细菌样本，并在37°C的恒温箱中培养过夜。

第二步：氧需求测试大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，对氧的需求具有一定的特征。

将大肠杆菌接种到含有牛肉膏和葡萄糖的气体管中，观察细菌生长的情况。

如果细菌在管内生长，并形成红色沉淀物，则说明大肠杆菌是一种兼性厌氧菌；如果细菌只在管的液体上层生长，则说明大肠杆菌是一种兼性好氧菌。

第三步：产气反应测试大肠杆菌是一种发酵菌，通过产生气体来转化底物。

将大肠杆菌接种到含有果糖、葡萄糖、乳糖等碳源的培养基中，观察培养液中是否有气泡产生。

如果有气泡产生，则说明大肠杆菌具有相应的发酵酶。

第四步：酸碱反应测试大肠杆菌的代谢产物可以使培养基的pH值发生变化。

将大肠杆菌接种到含有葡萄糖、乳糖等碳源的菌落鉴定培养基上，观察培养基颜色变化。

如果培养基变为黄色，则说明大肠杆菌产生酸性代谢产物；如果培养基变为红色或粉红色，则说明大肠杆菌产生碱性代谢产物。

第五步：氧化反应测试大肠杆菌可以通过氧化代谢来利用一些特定的底物。

将大肠杆菌接种到含有柠檬酸盐、酒石酸等底物的特定培养基上，观察培养液的颜色变化。

如果培养液变为蓝色，则说明大肠杆菌产生了相应的酶。

通过以上步骤的生化反应鉴定，我们可以初步确定大肠杆菌的一些特征，如氧需求、产气能力、酸碱代谢和氧化代谢等。

这些特征对于帮助我们了解大肠杆菌的生理功能和代谢途径非常重要。

当然，这些方法只是初步的鉴定方法，还可以进一步通过分子生物学技术和其他生化试验来确认大肠杆菌的特征和身份。