苏木精等染料的配制

常用培养基的配制1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠 10g琼脂15~20gp H 7.0~7.2水1000mL121℃灭菌20min。

2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠 0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁 0.01g琼脂20g水1000mLp H 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLp H 自然121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液）100mL琼脂15—20gp H 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gp H 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

常用染色液的配制附录二：常用固定液和染色液的配制1.番红水液番红0.1g渗入蒸馏水,的定溶至100ml。

2.番红酒液番红0.5g或1g渗入50%酒精,的定溶至100ml。

3.固绿染液固绿0.1g渗入95%酒精，的定溶至100ml。

4.碘-碘化钾染液碘化钾渗入100ml蒸馏水，再重新加入1g碘，熔化后即可采用。

5.苏丹ⅲ（或ⅳ）染液将0.1g苏丹ⅲ或ⅳ熔化在50ml丙酮中，再重新加入70%酒精50ml。

6.改良苯酚品红染液原液a：将3g碱性品红渗入100ml70%酒精，此液可以长期留存。

原液b：将10mla液重新加入至90ml5%苯酚水溶液中。

原液c：将55mlb液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。

染色液：取c液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。

7.间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。

8.中性白染液将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。

9.钌白染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。

10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。

现常用结晶紫代替。

必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。

11.铁醋酸洋红染液先将100ml45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（切记不可一次倒入）。

待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。

静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。

12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方ⅰ：苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。

配方ⅱ：代氏苏木精（delarfield’shaematoxylin）甲液：苏木精1g+浓硫酸酒精6ml乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g+蒸馏水100ml丙液：甘油25ml+甲醇25ml分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加进丙液，搅匀后静置1~2月，至颜色变成深紫色后，过滤器水泵，可以长期留存。

苏木精染色液的配制
人工氧化：是指在配制苏木精染液时加入一 定量的氧化剂如氧化汞、碘酸钠等可立即 使苏木精氧化成苏木红.但要注意加入氧化 剂的量不能太多,不要使苏木精分子全部氧 化变成苏木红,否则,苏木精染液的染色力减 弱甚至失效.
苏木精染色液的配制
苏木精氧化剂中首选碘酸钠.其优点是在室 温下易溶于水,不需煮沸就能放氧.氧化后,产 生的碘化钠是无害的,染液的稳定性好.而氧 化汞需要在苏木精染液煮沸时加入才能放 氧,当开始放氧时又要立即把染液置入冷水 中终止放氧.随后苏木精染液每天都会在液 面形成一层金属膜,需要把染液过滤后才能 用以染色,而汞盐也是一种毒性物质.
苏木精染色液的配制
苏木精的媒染： 苏木精被氧化成苏木红,为弱酸性,染色浅淡. 但当加入二价或三价的金属盐如铝、铁盐 后,染料分子就能与这些金属盐的离子结合 形成色淀.这种色淀具有阳电荷,和带负电荷 的DNA极性吸着而完成染色.这些二价或三 价的金属盐就称为媒染剂.
苏木精染色液的配制
配制苏木精使无染色力
苏木精染色液的配制
苏木精的氧化与下列因素有关： 苏木精染液PH值.染液偏碱性氧化快,中性时稍慢,酸
性时很慢,所以加酸时的苏木精染液可延缓氧化. 氧化剂的量.加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化
成熟可用.自然氧化和供氧量有关.如靠近阳光、染 液通风、经常摇动等可加速氧化. 氧化时苏木精液的温度.用碘酸钠等作氧化剂时,在常 温下加入即可,而用氧化汞作氧化剂时,需把苏木精 液煮沸时加入才能放氧.
福尔马林的配制
固定液的种类很多,分为单纯固定液和混合 固定液.
常用单纯固定液 ：1.甲醛<formaldehyde ；
2.乙醇<alcohol> ；
又名乙酸

实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。

2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。

将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。

将两者混合即成。

3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成。

4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。

5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。

7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。

8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。