脂质体

小肠粘膜细胞
小肠
特点：
胰岛素是大分子药物，小肠无法直接吸收。而脂质体 是一种类似于生物膜的磷脂双分子层的载体，它可以 和小肠粘膜细胞膜通过胞饮和胞吞作用而融合，使得 包裹在脂质体内部的大分子药物胰岛素被小肠粘膜细 胞吸收，再通过胞吐作用释放到血液中，发挥降血糖 的作用。
脂质体包裹胰岛素后，能防止酶
2 诱导细胞凋亡作用 凋亡 凋亡是正常细胞在有关基因控制下的程
序性死亡方式 ,肿瘤细胞正是失去了这种正常控制 而呈现无限制的增殖现象。紫杉醇能下调胞浆 IkB - a水平 ,激活 NF - kB 并促进其转移至细胞核参 与调控下游基因 。研究发现 ,紫杉醇可激活或调 节多种与凋亡相关基因或蛋白 ,如Bcl 家族、P53、 P21、Fas/ Fas配体及半胱天冬酶(Caspase)家族等 , 可诱导细胞出现典型的凋亡形态学改变。目前尚 不清楚紫杉醇诱导细胞凋亡的信号传导途径以及 有丝分裂阻滞和凋亡之间的关系。但研究凋亡的 重点已转移到凋亡过程中一系列细胞内具有关键 作用的蛋白质如何被特异性酶降解。凋亡发生机 制中关键环节之一是Caspase激活 ,已有研究表明 在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的过程中 Caspase - 3 和 Caspase - 8 起着重要作用。
（四）、制备方法
薄膜分散法 将磷脂、胆固醇等脂质及紫杉醇
溶于氯仿中，然后将氯仿溶液在烧 瓶中旋转蒸发，使其在内壁上形成 一薄膜；将磷酸盐缓冲液加入烧瓶 中不断搅拌，即得脂质体。
三、肠溶胰岛素脂质体
目前，美国Enˉdorex公司研制的口服 胰岛素脂质体（Orasome），已进入 临床试验阶段
（二 ）脂质体通过胞吞作用进入小肠 粘膜细胞
NH2
壳聚糖
脂质体的制备
用逆相蒸发法制备胰岛素脂质体混悬液。将适量磷脂和 胆固醇溶于乙醚10 mL中。称取胰岛素4 mg 溶于0.05 mol·L - 1 HCl 0.5mL ,再加入pH 7.4 PBS 2.5 mL ,然后 与乙醚液混合,振摇,浴式超声仪超声5 min ,所得乳剂在 旋转蒸发仪上减压蒸去有机溶剂,探针式超声0.5 min ,加 壳聚糖或海藻酸钠溶液在10 ℃水浴旋转孵化60 min即得 包覆的胰岛素脂质体混悬液。
电镜观察脂质体包裹药物
（Transmission electron photomicrograms of coated insulin liposomes）
A: Uncoated liposomes ( ×50 000) ; B : Chitosan2coated liposomes ( ×75 000) ; C: Sodium alginate2coated liposomes ( ×100 000)
脂质体制备技术概述
1、组成与结构理化性质及其特点 2、口服肠溶胰岛素脂质体 3、紫杉醇长循环脂质体 4、脂质体的现状与未来
一、概述
脂质体 （liposomes,或称类脂小球）是一种类似 生物膜结构的双分子层微小囊泡。
分类： 1、单室脂质体：有一层类脂质双分子 层构成 2、多室脂质体：由基层脂质双分子层 将被包含的水溶性药物的水膜隔开形成 不均匀的聚合体
药物经脂质体包裹后,再用海藻酸盐包封, 可使脂质体粘合在肠道或增加制剂的转 运时间,从而有助于药物吸收,提高生物 利用度。脂质体的内水相能保护胰岛素 的结构和构象,而外部亲脂层有助于改善 跨生物屏障吸收。
脂质体药物模型
制备
壳聚糖纯化 取食品级壳聚糖5 g 溶解于 1 %醋酸400 mL 中,过滤,用 NH4OH 将滤液调至中性,过 滤,用水反复洗涤,然后冷冻 干燥。
脂质体的发展前景
一、脂质体作为药物载体 ➢ 抗癌药物脂质体 ➢ 抗寄生虫和真菌药物脂质体 ➢ 多肽及酶类药物脂质体
二、脂质体作为疫苗载体 三、脂质体用于免疫诊断 四、脂质体用作基因治疗和核酸免疫中的DNA载体
脂质体存在的问题
传统的脂质体(磷脂双层载体)制剂能通 过减少药物清除,减小分布容积(Vd)和定 向转移分布来改变药物的生物学分布,从 而有利于药物向毛细管穿透性已增加的 疾病组织分布但脂质体的释放仍存在不 少缺陷.如脂质体颗粒能够快速地被汇集 进入肝脾肾脏和网状内皮系统,在循环中 易于渗漏药物
3 抗血管生成作用
紫杉醇在体外可以抑制人血管内皮细胞的增殖 ,在体内可以抑制鸡 胚尿囊膜血管的新生 ,其抑制作用在 3.5～14 nmol/L 的浓度下获得并 呈剂量依赖性 ,当紫杉醇的浓度低于 1 nmol/L 时 ,对血管和内皮细胞无 明显影响。同时 ,在试验所选定的浓度下 ,紫杉醇在体外未能抑制肿瘤 细胞的增殖;而在CAM体内试验中 ,以CAM胚胎10g计算 ,即使在最高浓 度14 nmol/L 下 ,只等效于0.24μg/ kg,相当于 70 kg成人 16.8μg紫杉醇的 剂量 ,远远低于常规化疗剂量 ,提示紫杉醇对新生肿瘤血管的抑制机制 与其细胞毒作用无关 ,是在非细胞毒浓度下表现出的特点。
脂质体的修饰
长循坏脂质体 免疫脂质体 糖基脂质体 温度敏感脂质体 PH敏感脂质体
二、紫杉醇长循环脂质体
（一）修饰
以聚乙二醇（PEG）作为修饰材料。 PEG的表面被柔顺而亲水的PEG链部 分覆盖，极性PEG基增强了脂质体 的亲水性，减少血浆蛋白与脂质体 的相互作用，降低被巨噬细胞吞噬 的可能，延长在循环系统的滞留时 间，因而有利于肝脾以外的组织或 器官的靶向作用。
动物药动学实验表明：
力扑素能明显提高患者对紫杉醇的耐受 性，小鼠静脉给药的LD50比紫杉醇注射 液大一倍.（紫杉醇注射液为33mg/kg， 紫杉醇脂质体为69.8mg/kg .)表明其耐受 性明显提高，为临床用药加大剂量、提 高疗效提供了空间。
（三）、制备紫杉醇长循环脂质体的 材料
紫杉醇（主药） 磷脂（脂质体的基础物质） 胆固醇（脂质体“流动性缓冲剂”） PEG
N－三甲基壳聚糖盐酸盐
( N－trimethyl chitosanchloride ,
TMC) 具有壳聚糖相同的生物学性 质,即使在中性pH 值也能溶解和有 效地降低跨上皮细胞电阻,打开肠 上皮细胞间的紧密结,通过细胞旁 路增加亲水性大分子的转运。
海藻酸盐是一种无毒、可生物降解的带 负电荷共聚物,具有生物粘附性,能延长 肠道转运时间,增加药物吸收,同时也能 有效地保护胃肠道粘膜。在低pH 环境, 海藻酸盐能缩聚,其包裹成分不释放,但 包封率低。
（二）作用机制
紫杉醇长循环脂质体到达作用部位后，发挥一系列的抗 肿瘤作用。其作用机制主要有以下三种： 1 细胞毒性作用： 紫杉醇属于有丝分裂抑制剂 ,它可以诱导和促进微管蛋白聚 合 ,抑制微管解聚。正常微管在 4 ℃低温或 Ca 存在下可发 生解聚。由于微管过于稳定 ,从而抑制纺锤体的形成 ,使染 色体不能向两极移动 ,使肿瘤细胞阻滞于 G2/ M 期 ,最终阻 止有丝分裂的完成 ,因而对多种肿瘤具有较强的细胞毒作 用。
紫杉醇长循环脂质体的体内作用特点
(1)由于含有亲水基团（PEG）而能阻止血液中许多 不同组分特别是调理素与其结合，从而降低与单 核吞噬细胞系统的亲和力，可在循环系统中稳定 存在并使半衰期延长，增加肿瘤组织对它的摄取。
(2)由于癌增长部位及感染、炎症部位病变引起毛细 血管的通透性增加，含有紫杉醇的长循环脂质体 能增加药物在这些部位的聚集量.
结构与组成
结构：双分子层（与胶束区别） 组成：磷脂及附加剂
磷脂分子形成脂质体时，两 条疏水链指向内部，亲水基在 膜的内外表面上。构成的囊泡
将水相介质与外界隔离。
特点
载药脂质体特点： 1、靶向性 2、缓释性 3、降低药物毒性 4、提高药物稳定性
制备脂质体的材料
磷脂类：卵磷脂、脑磷脂、大豆磷 脂 胆固醇：调节脂质体的膜流动性
的降解作用! 此外，脂质体通过与 肠道细胞膜融合或者表面吸附，
增加了胰岛素进入细胞的途径，
有助于胰岛素的稳定与吸收
（三）口服肠溶胰岛素脂质体 材料和制备方法
材料
壳聚糖(chitosan) 是甲壳素经脱乙酰作 用后得到的一种天然的带正电荷的多糖, 在自然界为仅次于纤维的最丰富的多聚 物,具有亲水性、生物适应性、生物降解 性和低毒等特点,可以作为脂质体的稳定 组分,同时还可作为吸收促进剂。 但是,壳聚糖作为一种弱碱,需一定量的 酸才能使葡糖胺结构单元展开并转变为 带正电荷的溶液状态。在pH 中性时,壳 聚糖分子将失去电荷并从溶液中沉淀出 来,因而壳聚糖作为吸收促进剂的潜在用 途在大肠、结肠和直肠等碱性环境中受 到限制。
(3)由于紫杉醇长循环脂质体的缓释直接作用于病变 部位，增强了治疗效果。此种增加药物的治疗指 数的机制称为“被动靶向”。

力扑素是国际首次上市的脂质体剂型的紫杉醇.
与其它紫杉醇产品相比，力扑素具有以下优势： 1、避免了紫杉醇制剂因溶媒引发的超过敏反应； 2、显著降低外周循环毒性反应； 3、明显提高机体对紫杉醇的耐受性； 4、显示储库效应和被动靶向效应；
除此之外,脂质体还能诱导补体激活,导 致清除增加以及发生心血管和血液不良 事件的风险