【精品课件】细菌生理生化反应

糖发酵试验
一．在肠道细菌的鉴定上尤为重要 二．细菌可发酵的基质
糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖） 醇（甘露醇） 糖苷（甘油） 发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等 发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等
葡萄糖发酵试验 乳糖发酵试验
乳酸、醋酸、丙酸
葡萄糖/乳糖
pH<5.2, 溶液由清亮紫色变为浑浊黄色
甲烷、氢、二氧化碳
细菌生理生化反应
一．目的要求
学习并掌握细菌分类鉴定中常用的 生理生化反应。
实验原理
细菌的代谢与呼吸，主要取决于酶的催化作 用，各种细菌具有不同的酶系统。
一．不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白 质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和 终产物也不一样。
二．细菌代谢类型的多样性，具体表现在生化 反应多样性，因此在细菌分类鉴定中，常 利用其生理生化反应作为重要依据。
1）蛋白胨培养基：
一．蛋白胨
4.0 g
二．NaCl
2.0 g
三．H2O
400 mL
调pH 7.6，分出2管，然后加0.5ml 1.6
% 溴甲酚紫乙醇溶液,溶液呈浅紫色；
分装到装有倒立的德汉氏小管的试
管中（6管）
2）10%葡萄糖溶液，10%乳糖溶液各 20ml 112度，30分钟灭菌
3支德汉氏管中加葡萄糖溶液各1ml 3支德汉氏管中加乳糖溶液各1ml
徳汉氏小管内有气泡，产气漂浮
指示剂：溴甲酚紫（变色范围pH5.2-6.8, pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）
安装倒立的徳汉氏氏小管（内充满液体）
乙酰甲基甲醇试验（V.P.试验） 甲基红试验（M.R.试验）
一．细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖， 所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。
二．细菌体内丙酮酸代谢途径的不同， 可通过V.P. 和M.R. 这一对实验进行 鉴别。
3）葡萄糖蛋白胨培养基：
一．葡萄糖
0.5 g二．蛋白胨 Nhomakorabea0.5 g
三．K2HPO4
0.2 g
四．H2O
100 mL
分装2管
试验名称
（二）接种培养
被接菌种1（管数） 被接菌种2（管数）
1．葡萄糖发酵 2．乳糖发酵 3． VP试验
大肠杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌
普通变形杆菌 普通变形杆菌 产气肠杆菌
4．吲哚试验
V.P.反应阳性途径：
吲哚产生试验
判断细菌是否（含色氨酸酶）能利用 色氨酸。
实验材料
1. 大肠杆菌 （Escherichia coli）
2. 产气肠杆菌
（Enterobacter aerogenes ) 3. 普通变形杆菌(Proteus vulgaris)
实验方法与步骤
（一）液体培养基的制备与灭菌
大肠杆菌
产气肠杆菌
对照 （管数）
不接种
不接种
（三）反应结果鉴定
葡萄糖/乳糖发酵试验
直接观察。
VP试验：去塞，加40％KOH 10滴，再加
等量5%α－奈酚，用力振荡，37℃培养 30min，观察。
吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲
哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢 慢加入吲哚试剂10滴，观察。