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实验二特殊显微镜的使用相差显微镜实验二特殊显微镜的使用-相差显微镜实验二特殊显微镜的使用实验2.1差距显微镜一、实验目的掌控差距显微镜的原理、结构及其采用方法。
二、实验原理相差显微镜（phase-contrastmicroscope）是由p.zernike于1932年发明的，p.zernike于1953年获诺贝尔物理奖。
相差显微镜最大的特点就是可以用于观察未经染色的标本和活细胞。
人们在光学显微镜下观测被检标本时，只有在反射光的波长（颜色）和振幅（亮度）与周围介质存有变化时，方能够看见被检样品的结构。
活细胞近似于无色透明化，光波通过时，借由或反射光的波长和振幅都不出现发生改变，所以用普通光学显微镜难以分清活体的结构。
通常对于浓淡对照不大的样品，多借助紧固和染色等化学方法，并使样品和背景的散射或反射光在波长和振幅上发生变化，即为在颜色和亮度上有所差异，就可以辨识。
但有些样品一经染色就可以引发变形，染色也可以并使存有生命的样品丧生。
我们可以利用差距显微镜去展开观测。
差距显微镜利用衍射的干涉现象，将人眼不容辨别的相位差变成可以辨别的振幅高，因此它就是一种应用领域在染色困难或无法染色的新鲜标本上赢得低对照图像的新型显微镜。
相差方法应用于生物学上的主要价值，在于它能对透明的活体进行直接观察，无需采用使细胞致死的固定和染色的方法。
染色给活体以有害的影响，甚至失真。
由此，才使相差法显得异常重要。
差距就是指同一光线经过折射率相同的介质其增益发生变化并产生的差异。
增益就是所指在某一时间上，光的波动所达至的边线。
差距同意于光波所通过介质的折射率之差及其厚度，等同于折射率与厚度的乘积之差（即为光程之差），介质越薄或折射率越大，光波失速也越大。
为了达到相差效应，在相差显微镜的物镜中，装有由光学玻璃制成的相板（phaseplate）。
在圆形相扳平面上，有一圈与周围（里外）相扳厚度不同的或凸或凹的圆环。
相板分两部分：图1-10差距显微镜光路图共轭面（conjugatearea）：通常为环状，是通过直射光的部分。
实验一特殊显微镜的工作原理和使用特殊显微镜是一种能够观察微观尺度物体的仪器，它通过利用光学、电子、声波等原理来放大和显示样品的细节。
特殊显微镜在科学研究、医学诊断、材料分析等领域起着重要的作用。
本文将重点介绍光学、电子和声学显微镜的工作原理和使用。
一、光学显微镜光学显微镜是一种利用可见光作为照明源的显微镜，其主要由物镜、目镜、调焦机构和光源构成。
它的工作原理是通过物镜将样品上的光聚焦到目镜上形成放大的影像。
光学显微镜的使用步骤如下：1.确保显微镜放置在平稳的台面上，并保持垂直。
2.调节光源亮度，使其能够提供足够的照明。
3.将样品放在载物台上，并使用样品夹夹紧。
4.用粗调焦机构将物镜与样品靠近，然后用细调焦机构调节焦距，直到看到清晰的影像。
5.调节目镜，使影像更为清晰。
6.根据需要，可以使用滤光片或偏振片来改变光的属性。
7.使用目镜检查样品，并调节焦距和目镜，如有需要。
光学显微镜的优点是成本较低、易于操作，并且可以观察到样品的活体细胞。
缺点是分辨率有限，仅能观察到大约200-300纳米的细节。
二、电子显微镜电子显微镜是一种利用电子束取代可见光来照射样品的显微镜，它可以提供比光学显微镜更高的分辨率和放大倍数。
电子显微镜的工作原理是通过电子束的散射、透射和反射来获得样品的影像。
具体而言，电子束通过电子枪产生，然后经过准直系统和电子透镜聚焦。
在样品中穿透或被散射后，电子束最终落在屏幕或探测器上生成影像。
电子显微镜的使用步骤如下：1.准备样品，通常需要制备薄片并清洁表面。
2.打开电子显微镜，等待其预热。
3.将样品放置在样品台上，并将其安装在显微镜中。
4.调节电子束的对焦，使其尽可能锐利。
5.对样品进行调节，以便获得所需的放大倍数和分辨率。
6.观察和记录样品的影像，可以使用照相机或电子影像探测器。
电子显微镜的优点是具有更高的分辨率和放大倍数，可以观察到更小的细节，如原子尺度。
缺点是设备复杂、操作困难，并且样品必须处于真空环境中才能进行观察。
实验二特殊显微镜的使用相差显微镜实验二特殊显微镜的使用-相差显微镜实验二特殊显微镜的使用实验2.1相差显微镜一、实验目的掌握相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
二、实验原理相衬显微镜是P.Zernike在1932年发明的。
泽尼克于1953年获得诺贝尔物理学奖。
相衬显微镜最大的特点是可以用来观察未染色的标本和活细胞。
人们在光学显微镜下观察被检标本时，只有在反射光的波长（颜色）和振幅（亮度）与周围介质有变化时，方能看到被检样品的结构。
活细胞近于无色透明，光波通过时，透过或反射光的波长和振幅都不发生改变，所以用普通光学显微镜难以辨清活体的结构。
一般对于明暗对比很小的样品，多借助于固定和染色等理化方法，使样品和背景的反射或透射光在波长和振幅上发生变化，即在颜色和亮度上有所差异，才能识别。
但有些样品一经染色就会引起变形，染色也可使有生命的样品死亡。
我们可以利用相差显微镜来进行观察。
相差显微镜利用了光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，因此它是一种应用在染色困难或不能染色的新鲜标本上获得高对比图像的新型显微镜。
相位差法在生物学中的主要价值在于，它可以直接观察透明的活体，而不需要杀死细胞的固定和染色方法。
染色对活体有有害影响，甚至会造成变形。
因此，相位差法非常重要。
相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。
相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
相差决定于光波所通过介质的折射率之差及其厚度，等于折射率与厚度的乘积之差（即光程之差），介质越厚或折射率越大，光波减速也越大。
为了获得相位差效果，在相位差显微镜的物镜中安装了一块由光学玻璃制成的相位板。
在圆形相位板的平面上，有一圈凸面或凹面环，其厚度与周围（内、外）相位板的厚度不同。
相位板分为两部分：图1-10相差显微镜光路图共轭面积：通常为环形，即通过直射光的部分。
环是凸的或凹的。
振幅改变，从而达到不同的目的与观察效果。
利用相板把光波相位推迟，振幅改变。
倒置显微镜的使用方法：1.将亮度调节柄调至最小位置，接通电源，打开开关，再将亮度调节柄调至适中位置。
2.将样品置于载物台上，调节载物台纵横移动手轮，确定观察目标的位置。
3.将10X物镜置入光路，通过目镜观察，粗调焦使成像清晰。
将高倍物镜置入光路，右目镜观察，微调焦使成像清晰。
用左目镜观察，调整其上的视度调节圈，使成像清晰。
4.双手握左右相对转动，调整瞳距（双像重合）。
5.调节灯丝成像居中，然后观察样品。
相差显微镜的使用方法：1.将相差聚光镜转盘转至“0”标记处。
2.将亮度调节柄调至最小位置，接通电源，打开开关，再将亮度调节柄调至适中位置。
3.将样品置于载物台上，调节载物台纵横移动手轮，确定观察目标的位置。
4.把绿色滤色镜放入镜座的视场光阑转圈上。
5.将10X物镜置入光路，通过目镜观察，粗调焦使成像清晰。
将高倍物镜置入光路，右目镜观察，微调焦使成像清晰。
用左目镜观察，调整其上的视度调节圈，使成像清晰。
6.双手握左右相对转动，调整瞳距（双像重合）。
7.将相差聚光镜转盘转至“10”标记处，并将10X相差物镜置入光路。
（更换物镜倍数时，相差聚光镜转盘要转至匹配的数值）8.取下目镜，换上对中目镜（CT望远镜），旋松对中目镜上的螺钉并轴向抽动，使相板圆环和光阑圆环清晰，锁紧对中目镜上的螺钉。
9.调节相差聚光镜转盘两侧的调节扳手，左右推动，直至相板圆环和光阑圆环重合。
10.取下对中目镜（CT望远镜），换上目镜进行相差观察。
荧光显微镜的使用方法：1.将滤片转换拉杆拉至“E”位置，然后按倒置显微镜的使用方法中1－4步骤调整一起，作明场观察。
2.将汞灯电源箱上的电源接通，关闭荧光落射装置上的视场光阑拉杆，关闭显微镜右侧底座电源开关，开启汞灯电源开关，10分钟后，汞灯点燃至稳定状态，方可开始使用。
3.将25X荧光物镜置入光路，将滤片转换拉杆拉至所需位置，即蓝光（B）获绿光（G）的位置上。
4.将荧光落射装置上的视场光阑拉杆开至最大，粗调焦使成像清晰，观察荧光。
偏光显微镜用途一、引言偏光显微镜是一种特殊的显微镜，它具有许多其他类型的显微镜所不具备的特殊性能。
偏光显微镜主要用于材料科学、地质学、生物学等领域。
本文将详细介绍偏光显微镜的用途。
二、材料科学中的应用1. 晶体结构分析偏光显微镜可以通过观察晶体在不同方向上通过偏振器和分析器时的颜色变化来确定晶体结构。
这种方法被称为波尔法（Brewster法）或尼古拉斯法（Nicols法）。
这种方法可以帮助材料科学家确定晶体中原子排列方式和晶格参数。
2. 晶体缺陷研究偏光显微镜还可以用于研究晶体中的缺陷，如位错和空位。
这些缺陷会导致晶格畸变，从而影响材料性能。
使用偏光显微镜可以直接观察到位错和空位，并测量它们的密度和形态。
3. 热处理过程研究在材料制备过程中，经常需要进行热处理。
使用偏光显微镜可以观察材料在不同温度下的结构变化，并确定热处理过程中的相变温度和相变类型。
三、地质学中的应用1. 岩石组分鉴定偏光显微镜可以用于鉴定岩石中的不同矿物组分。
不同的矿物在偏光显微镜下具有不同的颜色和形态特征。
通过观察这些特征，地质学家可以确定岩石中的主要成分和含量。
2. 地质样品形态观察使用偏光显微镜可以观察地质样品中微小结构和颗粒的形态。
这对于确定样品来源、成因以及古环境等方面具有重要意义。
3. 矿物晶体结构研究与材料科学类似，偏光显微镜也可以用于地质学中对晶体结构的分析。
通过观察晶体在不同方向上通过偏振器和分析器时的颜色变化，可以确定晶体结构和晶格参数。
四、生物学中的应用1. 细胞形态观察生物学家可以使用偏光显微镜观察细胞的形态和结构。
偏光显微镜可以显示细胞中的各种结构，如细胞膜、细胞核、细胞质等。
2. 组织学研究偏光显微镜可以用于组织学研究。
通过观察组织切片在不同方向上通过偏振器和分析器时的颜色变化，可以确定组织中不同成分的分布情况。
3. 荧光物质检测许多生物荧光物质具有特殊的偏振性。
使用偏光显微镜可以检测这些荧光物质，并确定它们的分布情况和数量。
正置倒置荧光显微镜原理及操作步骤
荧光显微镜是一种特殊的显微镜，它利用荧光现象来观察样品。
它的原理和操作步骤如下：
原理：
1. 荧光显微镜使用紫外光激发样品中的荧光物质，使其发射可见光。
2. 样品中的荧光物质吸收紫外光后，其中的电子被激发到高能级，随后返回基态时会放出能量，即发射荧光。
3. 荧光显微镜通过滤光片选择性地过滤激发光和荧光，从而增强对荧光信号的观察。
操作步骤：
1. 准备样品：确保样品中含有发射荧光的物质。
如果需要观察细胞或组织样品，可以使用荧光染料或标记物来标记目标结构或生物分子。
2. 打开荧光显微镜：打开显微镜电源，并将荧光灯打开。
调节荧光灯的亮度适合观察。
3. 安装样品：将样品放置在显微镜的载物台上，并用固定装置固定样品。
确保样品与目标物镜的工作距离适当。
4. 调节目标物镜：使用低倍或中倍物镜来定位样品，然后切换到高倍或油浸物镜以获得更高的放大倍率。
调节焦距和聚焦，使样品清晰可见。
5. 选择滤光片：根据所使用的荧光染料或标记物的特性，选
择合适的滤光片来过滤激发光和荧光信号。
这可以增强观察的对比度和清晰度。
6. 观察和记录：通过目镜或连接电脑的摄像头观察样品。
可以使用不同的荧光通道来观察多个标记物质。
记录所观察到的图像或视频。
需要注意的是，操作荧光显微镜需要具备一定的实验室技巧和基础知识，以确保正确的操作和解释观察到的结果。
倒置荧光显微镜使用方法简介倒置荧光显微镜是一种特殊的显微镜，常用于生物学、细胞学和医学研究中。
与传统的直立显微镜不同，倒置荧光显微镜的物镜和光源被颠倒放置，使得观察样本更加方便。
本文将详细介绍倒置荧光显微镜的使用方法。
准备工作在开始使用倒置荧光显微镜之前，需要进行一些准备工作：1.清洁工作台：确保工作台干净整洁，避免灰尘和杂物对实验结果的影响。
2.样本制备：根据实验需求制备好待观察的样本。
可以是细胞培养物、组织切片等。
3.荧光染料：根据实验需求选择合适的荧光染料，用于标记待观察的结构或分子。
步骤1. 打开显微镜将倒置荧光显微镜放在清洁的工作台上，并轻轻打开仪器。
确保所有部件都处于正常工作状态。
2. 样本安装将样本安装到显微镜的载物台上。
使用载玻片夹固定样本，确保样本稳定且不会移动。
3. 调节荧光滤光片倒置荧光显微镜使用荧光染料来标记待观察的结构或分子。
在观察之前，需要根据使用的荧光染料调节滤光片。
1.选择正确的激发滤光片：根据荧光染料的激发波长选择对应的滤光片。
通常，显微镜附带了一组滤光片，可以根据需要更换。
2.安装激发滤光片：将激发滤光片安装到显微镜中。
确保滤光片正确对齐，并紧固固定螺丝。
3.调节透射镜筒：通过旋转透射镜筒，调节透射光的强度。
确保透射光与荧光染料激发波长相匹配。
4. 调节目镜和物镜1.调节目镜：通过调节目镜的高度和焦距，使得样本的图像清晰可见。
可以使用显微镜上的焦距调节轮来实现。
2.选择合适的物镜：根据对样本的放大需求，选择合适倍数的物镜。
倒置荧光显微镜通常配备多个物镜，可以根据需要进行更换。
5. 调节荧光滤光器在观察荧光信号之前，需要正确调节荧光滤光器。
1.选择正确的发射滤光片：根据荧光染料的发射波长选择对应的滤光片。
通常，显微镜附带了一组滤光片，可以根据需要更换。
2.安装发射滤光片：将发射滤光片安装到显微镜中。
确保滤光片正确对齐，并紧固固定螺丝。
6. 观察样本通过目镜观察样本是否清晰，如果不清晰可以通过调节目镜或物镜来改善。
特殊显微镜的原理与使用◆载物台、聚光镜、光源和支架等部件组成。
昆虫-暗视野显微镜甲虫腿-荧光显微镜长脚蜘蛛的眼睛-共聚焦显微镜甲虫-立体显微镜藻-偏振光特殊显微镜的原理与使用1.暗视野显微镜2.相差显微镜3.荧光显微镜4. 激光共聚焦显微镜实验目的◆ 1.了解和掌握暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的构造原理；◆ 2.学习相差显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的使用。
1. 暗视野显微镜⏹根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察被检物体的显微镜⏹观察到明场看不到的极其微小的物体⏹最高分辨率可达0.004微米（普通显微镜最大的分辨率为0.2微米）⏹可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
使用中央遮光板或暗视野聚光器，使光源的中央光束被阻挡。
不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，而整个视野是黑暗的。
结构特点暗视野挡板的制作(1)选择要观察的物镜。
(2)转动聚光器孔径光阑调节环，使与相应倍数的物镜相对应,对标本准焦。
(3)从显微镜上卸下聚光器，用圆规量出孔径光阑开孔的直径，以上测直径在相纸上绘一圆。
(4)再测量聚光器下方滤片支架的直径。
以上测直径在相纸上作另一同心圆。
(5)在两圆之间绘出三条连接的支架，用剪刀剪下两圆，放入滤片支架中。
(6)将聚光器安装回显微镜，即得该物镜的暗视野挡板。
昆虫-暗视野显微镜2.相差显微镜波长（频率）变化表现为颜色不同，振幅变化表现为明暗的不同，而相位不同肉眼感觉不到。
和普通光学显微镜相比，它在物镜中增加了相板，在聚光器增加了环状光阑，可以将肉眼看不到的相差，利用衍射和干涉现象，变为可辨明暗的振幅差。
利用相差显微镜，可以观察活细胞或未染色标本的细微结构。
(1)环状光阑(2)相板a共轭面和补偿面b吸收膜和相位膜C正（暗）反差和负（明）反差(3)合轴调节望远镜(4)绿色滤光片相板环状光阑倒置相差显微镜3.荧光显微镜和普通光学显微镜相比，它利用较短波长的紫外光照射标本，使样品受到激发，产生较长波长的荧光，可以用来观察和分析样品中产生荧光的成分和结构、位置。
暗视野显微镜说明安全操作及保养规程暗视野显微镜（Darkfield Microscope）是一种特殊的显微镜，它采用黑暗场（Darkfield）成像技术，将样本的反射和散射光线投射到样本底部的望远镜中，从而产生高对比度的图像。
由于暗视野显微镜具有高灵敏度、高分辨率等优点，因此被广泛应用在生物医学研究、材料科学、食品卫生等领域。
但是，如果不注意安全操作，使用暗视野显微镜会对人体造成一定的伤害，甚至可能导致设备的损坏。
因此，在使用暗视野显微镜之前，需要了解安全操作及保养规程。
安全操作规程1. 佩戴防护眼镜在操作暗视野显微镜时，可能会产生强光和高能量的激光束，会对人眼造成一定的伤害，因此在操作前要佩戴防护眼镜。
防护眼镜应选择透过紫外线、可见光和近红外线的滤光系数高的透明镜片，同时以硬质镜片为佳。
2. 禁止直视光束禁止直接用眼睛直视暗视野显微镜中的激光束，否则可能会造成瞬时光性性质中毒和眼部损伤。
3. 避免日晒暗视野显微镜的光学元件对阳光和紫外线敏感，因此要避免长时间暴露在阳光直射下。
在未使用时，应该盖好光学元件的保护罩，避免尘埃和光线的影响。
4. 防止电击在操作暗视野显微镜时，要保证插头接触良好，避免电器故障造成电击。
5. 防止水分进入暗视野显微镜的电路板和内部元器件十分敏感，如果进入水分可能会导致设备故障。
因此，在操作前，要确保工作环境干燥，并避免进水。
6. 避免振动和冲击使用暗视野显微镜时，要保持设备稳定，并避免大的振动和冲击，以免影响成像的清晰度。
7. 限制电源电压为了防止设备故障，必须使用符合规定并在说明书中标明的标准电源电压，不得随意更改。
保养规程1. 定期清洗暗视野显微镜的镜片、接口和调节钮应定期清洗，清洗时应注意使用特殊的清洁液，避免使用有机溶剂和强酸碱。
2. 避免磕碰设备在使用过程中要避免磕碰，维护时要放在平滑的水平面上进行维护。
3. 定期校准设备在使用一段时间后可能会出现偏差，此时需要进行校准，校准时需要按照说明书中的步骤进行操作。
荧光显微镜汞灯使用注意事项一、背景介绍荧光显微镜是一种利用特殊的荧光染料或标记物来观察样品的显微镜。
而荧光显微镜汞灯则是荧光显微镜中常用的光源。
在使用荧光显微镜汞灯时，需要注意一些使用事项，以确保实验的顺利进行和操作的安全性。
二、汞灯的基本原理荧光显微镜汞灯是一种高压气体放电灯，其基本原理是通过通电使汞蒸汽产生放电，产生的紫外光经过滤波器后转化为可见光，用于激发荧光样品。
三、注意事项3.1 安全使用•在使用荧光显微镜汞灯前，必须确保灯泡已经冷却。
因为灯泡在使用过程中会产生高温，需要等待一段时间使其冷却后再进行操作。
•使用荧光显微镜汞灯时，应戴上防护眼镜和手套，以防止紫外光对眼睛和皮肤的伤害。
•在更换汞灯时，应先关闭电源，并等待灯泡冷却后再进行更换。
避免因灯泡过热而导致烫伤。
3.2 操作注意•在打开荧光显微镜时，应先打开荧光显微镜的电源，然后再打开汞灯的电源。
同样，在关闭荧光显微镜时，应先关闭汞灯的电源，再关闭荧光显微镜的电源。
这样可以避免因灯泡亮度过高而对眼睛造成伤害。
•在调节荧光显微镜汞灯的亮度时，应缓慢调节，避免突然调至最亮，以免对样品造成损伤。
•在使用荧光显微镜汞灯时，要注意避免灯泡与样品的直接接触，以免因高温导致样品破裂或变形。
3.3 维护保养•汞灯使用一段时间后，灯泡会变暗，需要更换新的灯泡。
更换灯泡时，应注意选择与原灯泡相同型号的灯泡，并按照说明书的指导进行更换。
•汞灯的电极也需要定期清洁，以保证电极的正常工作。
清洁电极时，应先断电，并等待灯泡冷却后再进行操作。
3.4 废弃处理•汞灯属于特殊废弃物，不得随意丢弃。
在更换汞灯时，应将废弃的灯泡交由专门的废弃物处理机构进行处理，以免对环境造成污染。
四、结论荧光显微镜汞灯是荧光显微镜中常用的光源，使用时需要注意安全使用、操作注意、维护保养和废弃处理等方面的事项。
只有正确使用和维护荧光显微镜汞灯，才能保证实验的顺利进行和操作的安全性。
参考文献1.张三. (2018). 《荧光显微镜使用手册》. 科学出版社.2.李四. (2019). 《荧光显微镜汞灯的安全使用方法》. 实验室安全, (2),45-50.。
