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cryIAc基因在转基因玉米中的遗传规律及对抗虫性影响王建军;杨慧珍;刘佼【摘要】In order to analyse the genetic regularity of target genecryIAc in transgenic and their descendant plants(lines), and to study the effect of target gene on insect-resistant activity of transgenic plants at the same time, this research work was conducted. Firstly,cryIAc gene was transformed into maize inbred ‘Zheng 58’ and ‘Chang7-2’ separately by pollen-mediated transformation method. PCR, Southern, ELISA analysis and bioassay in the field of each generation transgenic plants were then conducted according to experimental requirements. Results showed that ⑴ A total of 24 and 41 transgenic plants were obtained through transformedcryIAc gene into maize inbred ‘Zheng 58’ and ‘Chang7-2’, respectively. ⑵ The molecular detection results of transgenic T2, hybridization F2 and backcross B1plants suggested that the segregation of target gene in these lines followed 3∶1, 3∶1 and 1∶1 segregation ratio of the Mendel laws of heredity, respectively. ⑶ The molecular detection results of T1 to T4 transgenic plants(lines)showed that the target gene could stably inherited and expressed effectively, the expression amount of the target gene was from 9.8 to 14.3 ng/gleaf fresh weight. ⑷ Moreover, the results of bioassay in the field indicated that in the case of high insect-susceptibility of negative control line, the transgenic lines still showed highly insect-resistant activity. ⑸ In addition, the target gene integrated into genomics of transgenic plants could inherit to the next generationplants by hybridization. ⑹ At last, 5 high insect-resistant transgenic lines, SZ003, SZ005, SC001, SC004 and SC007, was gained by screening. The pollen-mediated transformation method was a effective and shortcut tool used in plant transformation,cryIAcgene could confer and enhance insect-resistant activity of transgenic plants(lines) tansfomated with it.%旨在研究目的基因在转基因植株和后代植株（株系）中的遗传规律及其对转化植株抗虫性的影响。
转基因生产应用安全证书1、中国官方究竟有没有对转基因问题的真正明确答复？12月19日、20日，“求证”栏目报道了美国大规模种植转基因作物、大量消费转基因食品的情况，以及中外专家对转基因作物的看法。
我国政府如何对待和管理转基因作物、转基因食品？记者采访了有关部门负责人和专家学者。
如何监管转基因作物安全【回应】按照危险程度及试验流程分级分阶段评价管理农业部科技发展中心主任段武德说，根据2001年颁布的《农业转基因生物安全管理条例》（以下简称《条例》），国务院建立了由农业、科技、卫生、商务、环境保护、检验检疫等部门组成的部际联席会议，负责研究、协调农业转基因生物安全管理工作中的重大问题。
依照《条例》及配套规章，我国对农业转基因生物实行分级分阶段评价管理。
分级管理，即按照对人类、动植物、微生物和生态环境的危险程度，将农业转基因生物分为四个等级：安全等级I，尚不存在危险；安全等级，具有低度危险；安全等级，具有中度危险；安全等级，具有高度危险。
分阶段管理，即转基因生物研究与试验按照试验研究、中间试验、环境释放、生产性试验和申请安全证书5个阶段依序进行，实行报告制或审批制管理。
对已发放生产应用安全证书的转基因作物，加强品种审定、种子生产经营、商业化生产管理、标识等监督管理，杜绝非法生产经营转基因农作物种子和产品的行为。
即便是产业化多年的产品如抗虫棉，对新品种安全证书发放也严格进行质量把关，生产应用环节也须持续监测田间棉铃虫抗性发生发展状况和次要害虫的发生发展状况，推动采取综合治理措施以延缓害虫产生抗性和控制次要害虫的上升。
对于进口的转基因生物，按照用于研究和试验的、用于生产的、用作加工原料的三种用途实行审批管理。
我国种植转基因大豆吗【回应】未批准种植转基因大豆；转基因大豆油要标注段武德介绍，美国孟山都公司于2002年向我国提出大豆GTS40—3—2进口用作加工原料的安全证书申请，农业部即依据《条例》及配套规章，组织研究并确定了检测方案，分别由中国农科院植物保护研究所、南京农业大学对基因漂流、生存竞争能力和对生物多样性的影响等三项环境安全指标进行检测；由中国疾病预防控制中心食品与营养安全研究所对慢性毒性和抗营养因子等食用安全指标进行检测。
《转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法研究》一、引言随着现代农业科技的进步，转基因作物因其抗虫、抗病等特性，在农业生产中得到了广泛应用。
其中，转Cry1Ab基因抗虫水稻因其显著的抗虫效果，成为了研究的热点。
然而，对于这种转基因水稻的检测方法仍需深入研究，以确保其安全性和有效性。
本文旨在研究转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法，为农业生产提供科学依据。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料为转Cry1Ab基因抗虫水稻及其对照组非转基因水稻。
2. 方法（1）DNA提取：采用CTAB法提取转基因水稻和对照组水稻的基因组DNA。
（2）PCR扩增：利用特异性引物，对提取的DNA进行PCR 扩增，扩增Cry1Ab基因片段。
（3）电泳检测：将PCR产物进行电泳，观察条带，初步判断Cry1Ab基因是否成功转入水稻中。
（4）荧光定量PCR：利用荧光定量PCR技术，对转基因水稻中Cry1Ab基因的拷贝数进行精确检测。
（5）免疫学检测：采用Western Blot技术，对转基因水稻中Cry1Ab蛋白进行检测。
三、实验结果1. PCR扩增结果电泳结果显示，转基因水稻组在Cry1Ab基因特异位置出现条带，而非转基因水稻组则无此条带，初步判断Cry1Ab基因已成功转入水稻中。
2. 荧光定量PCR结果荧光定量PCR结果显示，转基因水稻中Cry1Ab基因的拷贝数显著高于非转基因水稻，证明了转Cry1Ab基因的成功导入。
3. Western Blot结果Western Blot结果显示，转基因水稻中成功表达了Cry1Ab蛋白，而非转基因水稻组则无此表达。
四、讨论本研究采用多种方法对转Cry1Ab基因抗虫水稻进行检测，包括PCR扩增、电泳检测、荧光定量PCR和Western Blot等。
实验结果表明，这些方法可以有效地检测出转基因水稻中Cry1Ab 基因的成功导入及其表达情况。
其中，PCR扩增和电泳检测为初步判断方法，可快速筛选出转基因水稻；荧光定量PCR和Western Blot则为精确检测方法，可对转基因水稻中Cry1Ab基因的拷贝数和表达情况进行精确测定。
mCry1Ac基因在抗虫转基因玉米Bt799中的表达特征杨丽丽;董姗姗;刘燕;王长永;袁艺【摘要】采用双抗夹心酶联免疫法(ELISA)定量检测转mCry1 Ac基因抗虫玉米Bt799在不同生育期不同植株部位的mCry1Ac蛋白含量.结果显示:mCu1 Ac基因在整个生育期玉米叶、茎、根和种子中均能表达,mC ry1 Ac蛋白含量为(0.82±0.10)～(15.83±1.77)μg·g-1;随着生育期和植株部位的不同,mCry1Ac蛋白含量呈现明显的时空动态变化,其中,叶、茎和根中mC ry1 Ac蛋白含量随转基因玉米生育期的推移均呈增加趋势,并均在完熟期达最高;在除苗期外的其他各生育期叶中mCry1 Ac蛋白含量均显著高于其他植株部位,而在完熟期种子中mCry1Ac蛋白含量在各植株部位中最低,为(2.86±1.71) μg·g-1.【期刊名称】《生态与农村环境学报》【年(卷),期】2014(030)005【总页数】4页(P670-673)【关键词】mCry1Ac基因;转基因玉米;双抗夹心酶联免疫法(ELISA);Bt蛋白【作者】杨丽丽;董姗姗;刘燕;王长永;袁艺【作者单位】安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230000;环境保护部南京环境科学研究所,江苏南京210042;环境保护部南京环境科学研究所,江苏南京210042;环境保护部南京环境科学研究所,江苏南京210042;环境保护部南京环境科学研究所,江苏南京210042;安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230000【正文语种】中文【中图分类】X176;Q71玉米是世界主要粮食作物之一。
由于玉米虫害严重，造成玉米每年减产约10%，严重时可达20%以上［1］。
利用生物基因工程技术将外源抗虫Bt基因导入玉米培育抗虫转基因玉米已成为防治玉米虫害的有效途径。
自1996年美国率先将抗虫转Bt基因玉米进行商业化种植以来，截至2012年底，全球转基因玉米的种植面积已达到5 520万hm2，占玉米种植总面积的35%，而且转基因玉米是获得监管机构批准进口并用于食物和饲料以及释放到环境中最多的转基因作物，在23个国家中共有121个事件［2］。
CrylAb基因转化甘蔗及转基因抗虫植株的获得冯翠莲;沈林波;赵婷婷;王俊刚;熊国如;张树珍【摘要】The plant expression vector pUBTB harboring CrylAb gene drivered by UBI promoter was constructed and introduced into sugarcane by Agrobatorium-mediated transformation, and 67 transformed plantlets were survived after three times successive PPT selection. These plantlets were detected by PCR and 22 plantlets showed positive. Furthermore, seven PCR positive plantlets were also detected by RT-PCR. The results showed that the foreign gene had been integrated into sugarcane genome and expressed.%构建玉米UBI启动子驱动Bt CrylAb基因的高效植物表达载体pUBTB．通过农杆菌介导法导人甘蔗愈伤组织，经过除草剂PPT三次连续筛选，共获得67株抗性植株，经PCR扩增检测，得到22株阳性植株，并对其进行RT—PCR检测，证明外源基因已经成功整合到其中的15株甘蔗基因组中，且得到了有效的表达。
【期刊名称】《热带农业科学》【年(卷),期】2011(031)009【总页数】6页(P21-26)【关键词】甘蔗;CrylAb基因;植物表达载体;遗传转化【作者】冯翠莲;沈林波;赵婷婷;王俊刚;熊国如;张树珍【作者单位】中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101【正文语种】中文【中图分类】S566.1甘蔗(Saccharum officinarum L.)是重要的糖料和能源作物，也是生产能源乙醇和一些天然化合物的原料。
山东农业大学硕士学位论文转基因植物中杀虫蛋白CryⅠAb/Ac快速免疫检测方法的研究姓名：孙昌雷申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：杨正友2010-06-01山东农业大学硕士学位论文中文摘要苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因特别是CryⅠAb/Ac基因是目前应用最广的抗虫转基因植物的抗虫基因。
抗虫转基因植物研究及其产业化的飞速发展对其检测方法提出了更高的要求。
基于特异抗体的蛋白水平的检测方法是目前抗虫转基因植物的主要检测方法之一。
本研究在制备苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白CryⅠAb/Ac特异抗体的基础上，建立了快速、简便、准确的抗虫转基因植物蛋白水平的检测方法。
研究结果如下：1、本研究构建了苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白CryⅠAb/Ac的表达载体pET30-Ac、pET30-Ab，经过表达、纯化，制备了抗虫转基因植物蛋白检测的标准物质。
2、为制备CryⅠAb/Ac的特异性抗体，本研究利用等电点法结合胶回收纯化法，制备了高纯度的苏云金芽孢杆菌晶体杀虫蛋白CryⅠAb/Ac的免疫原，经SDS-PAGE 电泳分析显示只有一条带，说明获得的分子量约为130KD的杀虫晶体蛋白达到了电泳纯，为制备特异性抗体提供了条件保障。
3、用制备的免疫原免疫新西兰大白兔，获得了识别苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白CryⅠAb/Ac的高质量兔抗体，并且该抗体也能识别重组的CryⅠAb/Ac。
抗体用硫酸铵沉淀、protein G亲和层析法进行了纯化，纯化后的抗体的效价达到1:25600。
4、用制备的免疫原免疫产蛋鸡，获得了识别杀虫蛋白CryⅠAb/Ac的卵黄抗体，并且该抗体也能识别重组的CryⅠAb/Ac。
经水稀释-硫酸铵沉淀法提取，嗜硫亲和层析纯化后，抗体的效价达到1：3200。
5、利用兔抗体作为包被抗体，卵黄抗体作为检测抗体，成功建立起了检测CryⅠAb/Ac杀虫蛋白的 Sandwich ELISA，可以在4h内完成检测，检测灵敏度达到了6.25ng/mL。
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101580843A [43]公开日2009年11月18日[21]申请号200910082840.6[22]申请日2009.04.23[21]申请号200910082840.6[71]申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号[72]发明人赖锦盛 董永彬 宋伟彬 赵海铭 [51]Int.CI.C12N 15/32 (2006.01)C12N 15/63 (2006.01)C12N 15/74 (2006.01)C12N 15/82 (2006.01)C12R 1/07 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 16 页 附图 3 页[54]发明名称人工合成用于转基因抗虫植物的Bt杀虫基因[57]摘要本发明公开了一种“人工合成用于转基因抗虫植物的Bt杀虫基因”，进一步，本发明涉及对Cry1Ac抗虫基因的编码框及密码子进行了系统的优化和改造，根据Bt蛋白不同区域的活性分析，按照单子叶植物编码特征获得了密码子和编码框优化的可以在单子叶植物中高效表达的抗虫基因Cry1Ac－M。
改造后的Cry1Ac－M基因被连在CaMV35S－Adh1为启动子的表达载体上。
然后用基因枪共转化的方法把Bt基因Cry1Ac－M转到具有高效转化效率的玉米自交系中，转基因后代经Bt蛋白检测为阳性，田间抗虫试验检测为高抗。
200910082840.6权 利 要 求 书第1/1页 1、一种对鳞翅目昆虫具有毒性的Bt Cry1Ac-M基因，其特征是该基因具有SEQ ID NO3所示的核苷酸序列。
2、权利要求1的基因序列，其中所说的基因序列包括该基因序列的部分序列及同源性高于80％的同源序列。
3、含有权利要求1中所述B t C r y1A c-M基因的表达载体。
4、权利要求1所述的Bt Cry1Ac-M基因在转化微生物或植物中的用途。
