狂犬病诊断标准
1．流行病学史
有被犬、猫或其他宿主动物舔、咬、抓伤史。
2．临床症状
2．1愈合的咬伤伤口或周围感觉异常、麻木发痒、剌痛或蚁走感。出现兴奋、烦躁、恐惧，对外界刺激如风、水、光、声等异常敏感。
2．2“恐水”症状，伴交感神经兴奋性亢进（流涎、多汗、心律快、血压增高），继而肌肉瘫痪或颅神经瘫痪（失音、失语、心律不齐）
3．实验室检查
3．1免疫荧光抗体法检测抗原：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液、角膜印片、皮肤切片，用荧光抗体染色，狂犬病病毒抗原阳性。
3．2存活一周以上者做血清中和试验或补体结合试验检测抗体、效价上升，曾接种过疫苗者其中和抗体效价需超过1：5000。
3．3死后脑组织标本分离病毒阳性或印片荧光抗体染色阳性或脑组织内检到内基氏小体。
4．病例分类
4．1临床诊断病例：具备3.1加3.2.1或3.2.2
4．2确诊病例:具备3.4.1加3.3的任一条.
狂犬病知识热点问答
什么是狂犬病?
狂犬病是由狂犬病毒引起的一种急性传染病，人兽都可以感染，又称恐水病、疯狗病等。狂犬病毒主要在动物间传播。该病主要是通过动物咬人时牙齿上带的唾液中的狂犬病病毒侵入人体而受到感染。狂犬病一旦发病，其进展速度很快，多数在3-5天，很少有超过10天的，病死率为100%。
被狂犬咬伤，就肯定要得狂犬病吗？
答：不一定，有学者统计发现就是被真正的狂犬或其它疯动物咬伤，且没有采取任何预防措施，结果也只有30%－70%的人发病。
被狂犬咬伤后是否发病有很多影响因素：
1.要看进入人体的狂犬病毒的数量多少，如果疯狗咬人时处于发病的早期阶段，它的唾液中所带的狂犬病毒就比处于发病后期时少；
2.咬伤是否严重也影响被咬的人是否发病。大面积深度咬伤就比伤口很小的浅表伤容易发病；
3.多部位咬伤也比单一部分咬伤容易发病，且潜伏期较短。
4.被咬伤后正确及时的处理伤口，是防治狂犬病的第一道防线，如果及时对伤口进行了正确处理，和抗狂犬病暴露后治疗，则可大大减少发病的危险。
5.通过粘膜感染发病较咬伤皮肤感染发病难，而且病例较多呈抑郁型狂犬病。
6.疯动物咬伤头、面和颈部等那些靠近中枢神经系统的部位或周围神经丰富的部位，较咬伤四肢者的发病率和病死率要高。
7.抵抗力低下的人较抵抗力强的人更易发病。
被犬咬伤后，伤口如何处理？
1.被咬后立即挤压伤口排去带毒液的污血或用火罐拨毒，但绝不能用嘴去吸伤口处的污血。
2.用20%的肥皂水或1%的新洁尔灭彻底清洗，再用清水洗净，继用2%－3%碘酒或75%酒精局部消毒。
3.局部伤口原则上不缝合、不包扎、不涂软膏、不用粉剂以利伤口排毒，如伤及头面部，或伤口大且深，伤及大血管需要缝合包扎时，应以不妨碍引流，保证充分冲洗和消毒为前提，做抗血清处理后即可缝合。
4.可同时使用破伤风抗毒素和其他抗感染处理以控制狂犬病以外的其他感染，但注射部位应与抗狂犬病毒血清和狂犬疫苗的注射部位错开。
人发生狂犬病后都有哪些症状？
人被狂犬病毒感染的动物咬伤后，潜伏期无任何症状，缓慢渐进，临床症状很少在20天内发生，多数病例在30天后甚至4-6个月后才发病。
在狂犬病的早期，病人多有低热、头痛、全身发懒、恶心、烦躁、恐惧不安等症状。接着，病人对声音、光线或风之类的刺激变得异常敏感，稍受刺激立即感觉咽喉部发紧。被病兽咬伤的伤口周围，也有麻木、痒痛的异常感觉，手脚四肢仿佛有蚂蚁在爬。
两三天以后，病情进入兴奋期。病人处于高度兴奋的状态。突出表现为极度恐怖，恐水、怕风，遇到声音、光线、风等，都会出现咽喉部的肌肉严重痉挛。病人虽然非常渴却不敢喝水，喝了水也无法下咽，甚至听到流水的声音或者别人说到水，也会出现咽喉痉挛。严重的时候，病人还有全身疼痛性抽搐，导致呼吸困难。狂犬病的病人，神志大多数清醒；但是，也有部分病人出现精神失常，说胡话。
兴奋期约有两三天后，病人变得安静下来，但是，随之出现全身瘫痪，呼吸和血液循环系统功能都会出现衰竭，迅速陷入昏迷，十几个小时以后，就会死亡。狂犬病的病程，一般不超过6天。
恐水是多数狂躁型狂犬病特有的症状之一，恐水表现未在其他疾病中见到过，所以很具有证病性。
人被狂犬咬伤是不是几十年后还会发生狂犬病？
一个人被狂犬咬伤后如果不及时采取预防措施，有些人会在十几年以后发病，但是几十年以后发病的报道尚缺乏科学依据。
狂犬病毒通过哪些途径进入人体并繁殖？
最主要的途径就是感染了狂犬病的动物在咬伤人时，通过唾液使狂犬病毒进入人体，狂犬病毒还可以通过无损伤的正常粘膜进入人体，或带有狂犬病毒的液体溅入眼睛，通过眼结膜进入人体，但以这种方式进入人体的例子要少得多，另外，通过吸入空气中带有狂犬病毒飞沫而感染的例子也很少见，只有空气中狂犬病毒的浓度达到极高程度时，才可能发生。
病毒在咬伤部位侵入，在局部组织中短时间停留，可到1-2周。病毒可从神经肌肉交界处的神经感受器或其他神经组织细胞的神经感受器，或暴露于粘膜浅表处的神经感受器侵入邻近的末梢神经。
人与人接触能传播狂犬病吗？
人与人的一般接触不会传染狂犬病，理论上只有发了病的狂犬病人咬了健康人，才有使被他咬伤的人得狂犬病的可能，发了病的狂犬病人或发病前几天的人也有可能通过性途径把狂犬病毒传染给对方，狂犬病人污染了用具，他人再通过被污染的用具受到感染的可能性很小，狂犬病人的器官、组织、如角膜移植给健康人则有极高的危险性。
狂犬疫苗必须在被狂犬或可疑狂犬咬伤24小时以内接种才有效吗？
狂犬疫苗注射原则上是接种越早效果越好。但是，超过24小时注射疫苗，只要在疫苗生效前，也就是疫苗刺激机体产生足够的免疫力之前人还没有发病，疫苗就可以发挥效用，对暴露已数日数月而因种种原因一直未接种狂犬疫苗的人，只要能得到疫苗，也应与刚遭暴露者一样尽快给予补注射，争取抢在发病之前让疫苗起作用，这时，前一针或前两针的接种剂量应当加倍。
如何才能知道自己接种的疫苗是否有效？
要想知道接种的疫苗是否生效，可在全程疫苗接种完后半个月左右检查血清抗狂犬病毒抗体水平。如果血清抗狂犬病毒抗体是阴性，可再加强2-3注射针，可使抗体阳转。再不阳转时最好测定一下细胞免疫指标，一般而言，全程(5针)接种了合格的狂犬疫苗，尤其是并用血清后半个月以上仍未发生狂犬病，则狂犬疫苗免疫失败的几率极小，也就是说一般不会再发生狂犬病。
年轻夫妇在接种狂犬病疫苗期间能否要孩子？
狂犬疫苗中没有任何一种成分会影响人类生殖细胞的染色体，在基因水平上危害人类，也不会对胚胎或胎儿的智力发育和身体发育造成影响。因此年轻夫妇在接种狂犬疫苗期间可以不必顾虑，随时都可以要小孩。
狂犬疫苗有禁忌症吗？
考虑到狂犬病是致死性疾病，对高度危险的暴露者在权衡利弊的情况下，不存在禁忌症，应立即接种疫苗。在发生狂犬病危险性较小的情况下，如果正在感冒而有发烧者，可等体温下来后立即接种。有严重变态反应病史的人，在接种疫苗时应备有肾上腺素等应急药物
用了类固醇、抗疟疾药物的病人应增加疫苗剂量并在疫苗最后一针注射完以后半月，测定中和抗体效价，然后再视情况采取进一步措施，同样为治疗其他疾病而注射过免疫抑制药物的病人也应检查中和抗体，以便证明疫苗是否疾病产生了足
够的免疫效力。正在接种预防另一种疾病的疫苗，仍可注射狂犬病疫苗，但需要把接种部位错开。
曾经注射过狂犬疫苗的人又被犬咬伤还用再打针吗？
对接受过暴露前或暴露后有效疫苗的全程接种者，如果一年内再发生较轻的可疑接触感染，可立即用肥皂水清洗伤口，同时密切观察咬人的犬在10日内是否发病而不必注射疫苗。一咬人犬发病，立即给被咬的人注射人用狂犬疫苗；如果是一年以后再被咬伤，可于当天、第3天各注射一针疫苗即可。对严重咬伤、以前接受过疫苗接种但时间较久，对疫苗的有效性有所怀疑者，则应重新进行全程即5针疫苗的暴露后预防免疫，必要时应包括使用狂犬病免疫球蛋白。
宠物已注射过兽用狂犬病疫苗后咬了人，人还用打狂犬疫苗吗？
宠物犬、猫已经按规定足量接种了符合要求的兽用狂犬疫苗后，在疫苗的免疫期内，人被这样的犬轻微咬伤，可以只进行伤口局部的清洗消毒，不用注射人用狂犬疫苗。但是若咬伤严重的，或者成年犬没有打够针数，或者疫苗接种早已过了免疫期、疫苗不合格或者失效，人就最好进行人用狂犬疫苗的接种才比较安全。
小猫、小狗要打狂犬病预防针吗？怎样打针？
三个月内的小猫、小狗不用打狂犬病预防针，待到了三个月大时，可按规定的注射程序进行免疫。
狂犬病的潜伏期是多长？
一个人从遭到某种病原体的感染开始到表现出该种疾病的症状，这段时间叫作该种疾病的潜伏期。狂犬病的潜伏期一般是半个月到三个月，多数病例的潜伏期集中在30-90天，超过1年者不足1%，个别可以达到14年、19年。短于15天，超过1年以上者均为罕见，潜伏期在一年以内的可占到总病例的99%以上。
人以及不同动物预防狂犬病时使用的狂犬病疫苗能交叉使用吗？
不能交叉使用，因为人用的是病毒已经被杀死了的疫苗，而动物用的狂犬病疫苗大多是毒力减弱的活毒疫苗，而且其毒力对某一种动物是否适宜是经过多次实验后确定的，适用于牛的狂犬疫苗不一定能用于羊和猫，我们只能根据疫苗所附的使用说明书来使用。
哪些动物会感染狂犬病？
各种家畜、家禽及小哺乳动物均对狂犬病有易感性，各种野生动物也能感染，总之，几乎所有的温血动物，包括禽类都可感染狂犬病。一种动物对同种动物传染的狂犬病更易感。
动物对狂犬病病毒的敏感性如下：
最敏感：狐狸、山狗、效狼、豺、狼、袋鼠和棉鼠。
敏感：地鼠、臭鼬、浣熊、猫鼬、蝙蝠、猫鼬、豚鼠、兔和其他啮齿类。
中度敏感：狗、牛、马、绵羊和灵长类。
低度敏感：负鼠。
狂犬病毒的抵抗力强吗？
狂犬病毒对外界环境条件的抵抗力并不强，一般的消毒药、加热和日光照射都可以使它失去活力，狂犬病毒对肥皂水等脂溶剂、酸、碱、45%-70%的酒精、福尔马林、碘制剂、新洁尔灭等敏感，但不易被来苏水灭活，磺胺药和抗生素对狂犬病毒无效，冬天野外病死的狗脑组织中的病毒在4℃下可保存几个月，对干燥、反复冻融有一定的抵抗力。
不同厂家，不同批号的狂犬疫苗能交叉使用吗？
一般来说不主张在一个疗程中用两个类型、两个厂家、甚至两个批号的狂犬疫苗。特别是生产厂家怕注射中万一出现问题，不好判断是哪一个厂家生产的产品出现的问题，以便分清责任。但是经过许多观察，证实在迫不得已时可以替用。
疯动物以及被疯动物咬伤的家畜肉、奶能食用吗？
确认为狂犬病的动物的肉不能吃，而应当焚烧或深埋，因为该动物的体内已经广泛存在有狂犬病毒，有可能在宰杀过程中通过手上的微小伤口感染人。
被患有狂犬病的疯动物咬伤的其他家畜，如在7天内把咬伤处的肉剔除之后(范围应尽量大一些)，其余的肉还是可以吃的。但手上有伤口的人不要操刀，剔下的肉要烧毁或深埋。
疯动物和被其咬伤的家畜的奶，处理原则与肉是一样的。
狂犬病的临床表现
人的狂犬病极大多数是由带狂犬病毒的动物咬伤（抓伤）后而感染发病。潜伏期短到10天，长至2年或更长，一般为31－60天，15％发生在3个月以后，视被咬部位距离中枢神经系统的远近和咬伤的程度（感染病毒的剂量）而异。
狂犬病是嗜中枢神经系统的传染病，往往有一个短的前驱期，约1－4天，表现为中度发热、不适、食欲消失、头痛、恶心等；然后进入神经系统的症状期，约2－20天，出现应激性增高，胸部压迫感、胸痛、气流恐怖症（用风吹面部时会引起咽喉部肌肉痉挛），这是一种典型的症状，有助于诊断。伤口部位有疼痛或各种异样的感觉,有的病人伴有对光、噪音和感觉刺激的应激性增高，通常表现有肌张力增高和面部肌肉肌挛。交感神经系统病损后出现多汗、流涎、狂燥行为、焦虑、痉挛性痛性肌肉收缩，在吞咽时咽喉等部位的肌肉痉挛而致怕饮水，故又称恐水症。在疾病的不同时期可以出现麻痹症状（上升性麻痹），特别是由蝙蝠传染的狂犬病更常见；在症状出现后0－14天内，病人往往在痉挛后出现继发性呼吸和心衰竭，昏迷而死亡。
狂犬病
狂犬病由狂犬病病毒引起，人类也会因被狂犬咬伤而感染，其他感染本病的温血动物如猫、狼、狐等也可传播。其特征性症状是恐水现象，即饮水时，患者会出现吞咽肌痉挛，不能将水咽下，随后患者口极渴亦不敢饮水，故又名恐水症。资料显示，狂犬病曾光顾过世界上１００多个国家，夺走过数千万人的生命。人的狂犬病绝大多数是由带狂犬病毒的动物咬伤（抓伤）而感染发病。潜伏期短到１０天，长至２年或更长，一般为３１天至６０天，１５％发生在３个月以后，视被咬部位距离中枢神经系统的远近和咬伤程度，或感染病毒的剂量而异。狂犬病病死率极高，一旦发病几乎全部死亡，全世界仅有数例存活的报告。但被狂犬咬伤后，若能及时进行预防注射，则几乎均可避免发病。因此，大力普及狂犬病知识，使被咬伤者能早期接受疫苗注射非常重要。狂犬病遍布于全世界，中国仍时有发生。因野生动物中也存在本病，故要彻底消灭非常困难，但若能管理好家犬则可大大减少发病。
中学生常规安全教育 一、交通安全 （一）.不良的交通习惯 1. 不走人行横道，不靠路右边走。 2. 不走人行横道、天桥，随意横穿马路。 3. 不注意道路和车辆信号，不服从交通管理。 4. 在车行道、桥梁、隧道上追逐、玩耍、打闹。 5. 穿越、攀登、跨越道路隔离栏。 6.在铁路道轨上行走，玩耍。 7. 横穿铁路和钻火车。 8. 不听从铁道口管理和信号管理。 （二）中学生骑自行车的问题 1.未满12岁的儿童独自骑车。 2.在人行道、机动车道骑车，逆行骑车。 3.骑车横冲直闯、争道强行，与机动车抢道。 4.转弯不减速，不打手势。 5.在路口闯信号。 6.骑车双手离把。 7.追逐打闹，三五并行。 8.手攀机动车行驶，紧跟机动车行驶。 （三）中学生交通事故发生的原因
1.缺乏交通安全意识。 2.缺乏交通安全知识。 3.缺乏交通安全责任感。 4.存在麻痹思想。 5.存在侥幸心理。 （四）正常的行路常识 1.走人行道，靠路右边走。 2.横过车行道，要走斑马线，或走天桥。 3.要注意各种信号灯的指示（红绿灯、人行横道信号灯） 4.上下汽车要避让过往车辆。 5.不在马路上逗留、玩耍、打闹。 （五）正常的骑自行车常识 1.不要骑有故障的车。 2.不在人行道上骑车，非机动车靠右行驶。 3.横穿马路最好推车行驶。 4.转弯时减速慢行，观察并打手势。 5.不要双手离把，不并肩行驶。 6.骑车不打闹，追逐。 二、校园内外活动安全（一）校内安全 1. 体育活动安全①体育老师要讲清体育活动安全。②活动课老师不得离开。③学生不做不安全的活动。④在无人保护下不做危险活动。2. 学校集会与集体活动安全可能发生的伤害：中暑、挤伤、跌伤、骨折、窒息、烧伤、脑震荡、死亡。①上下楼梯不要拥护、礼让慢行。②不互相追逐疯打。③不开无味的可造成伤害的玩笑。3. 校内劳动安全
狂犬病暴露处置技术培训试题 姓名：单位：分数： 一.填空题（每空1.5分，共30分） 1. 狂犬病是由感染人体引起的一种传染病，发病后病死率达。 2. 狂犬病病毒是一种侵犯中枢神经系统,引起____ 和 ____ 狂犬病的病原体. 3. 人被犬、猫等宿主动物咬、抓伤后，凡不能确定伤人动物为健康动物的，应立即进行受 伤部位的彻底清洗和消毒处理。用或彻底冲洗伤口至少分钟。 彻底冲洗后用涂擦伤口。 4. 狂犬疫苗接种程序为：、、、、天各注射一支狂犬疫苗，成 人、儿童用量。婴幼儿可在大腿前外侧肌肉内注射。禁止注射。对于Ⅲ类暴露及免疫功能低下者Ⅱ类以上的暴露，接种疫苗的同时要在伤口周围浸润注射或。 5. 注射动物源性抗血清前必须严格进行试验。若为阳性，可逐步加量注射，用完全量或改用注射。 二．单选题（每题3分，共30分） 1. 关于狂犬病病毒不正确的描述是（） A. 狂犬病毒为弹状病毒科 B. 狂犬病毒是非嗜神经性病毒 C.不会引起化脓性脑炎 D. 在中枢神经细胞胞浆内形成内基小体(Negri Bodies) E.病毒对外界抵抗力不强,56℃30分钟即可杀灭 2. Ⅲ类暴露及免疫功能低下者Ⅱ类以上的暴露,最正确的处理措施是（） A.注射狂犬病毒免疫血清＋抗病毒药物 B.注射大剂量丙种球蛋白＋抗病毒药物 C.清创＋抗生素 D.清创＋注射狂犬病被动免疫制剂＋接种疫苗 E.清创＋注射狂犬病毒免疫血清 3. 狂犬病标本采集叙述正确的是（） A.从事标本采集和运送的工作人员均要进行暴露前免疫 B.在狂犬病病人入院后，尽可能早期采集标本 C.用于病原学检测的标本，以脑组织阳性率最高 D. A＋B＋C E. B＋C. 4. 狂犬病病毒最不可能感染的动物是（） A.狗 B.猫 C.蝙蝠 D.家禽 5. 发展中国家的狂犬病主要传染源是（） A.狼 B.猫 C.犬 D.患者 6. 狂犬病临床表现有：（）
狂犬病处理流程 一、伤口分级： 一级：符合以下情形之一者 1、接触或喂养动物 2、完好的皮肤被舔 简单的说： 有接触、未受伤 无需处理，建议清洗皮肤 II 级：符合以下情形之一者 1、裸露的皮肤被轻咬 2、无出血的轻微抓伤或擦伤 简单的说： 没有出血的咬伤抓伤 处理伤口及按时接种疫苗 III 级：符合以下情形之一者 1、单处或多处贯穿性皮肤咬伤或抓伤：“贯穿性”表示至少已伤及真皮层和血管，临床表现为肉眼可见出血； 2、破损皮肤被舔：应注意皮肤皲裂、抓挠等各种原因导致的微小皮肤破损； 3、粘膜被动物体液污染：常见情况有与家养动物亲吻、小孩大便时
肛门被舔以及其它粘膜被动物唾液、血液及其它分泌物污染 简单的说： 出血的损伤或粘膜接触 伤口处理、应用被动免疫制剂、按时注射疫苗 伤口处理具体步骤方法（一） 1、首先检查受伤情况，并且记录 特别是严重伤口必须有详细记录 主要查看神经，血管，肌腱等受伤情况 为将来可能的纠纷提供证据 伤口处理具体步骤方法（二） 2、用无菌敷料保护伤口 3、用无菌肥皂水清洗伤口周围，范围15cm ，最好是两遍目的是降低伤口周围的细菌病毒 伤口处理具体步骤方法（三） 4、消毒：碘酒、酒精或者碘伏消毒伤口周围 5、麻醉：损伤较严重的伤口冲洗时很痛苦 注：II级暴露或者不严重的III级暴露可以不经过这个步骤伤口处理具体步骤方法（四） 1、使用合适压力的流动清水（自来水）冲伤口； 2、用（无浓度要求）肥皂水或其它弱碱性清洁剂清洗伤口 3、较深伤口冲洗时，用注射器伸入伤口深部进行灌注清洗，
4、或者扩创从而做到全面彻底—做到有效冲洗； 5、最后用生理盐水将伤口洗净，然后用无菌脱脂棉将伤口处残留液吸尽，避免在伤口处残留肥皂水； 6、时间15分钟。 伤口处理具有极大意义： 1、无论暴露者是否自行处理过伤口，均应由医务人员按照上述步骤规范处理； 2、减少伤口感染的几率； 3、患者拒绝必须签字留档。 被动免疫制剂适用人群 Ⅲ级暴露者 严重免疫功能低下者的Ⅱ级暴露者 伤口位于头面部，且致伤动物高度怀疑为疯动物时的Ⅱ级暴露者 被动免疫制剂只用于首次暴露注射疫苗患者 首次暴露—以前没有注射过（暴露前、暴露后） 人源免疫球蛋白20IU/kg 动物源性抗血清40IU/kg 不增减剂量 被动免疫制剂注射的基本方法 在伤口内滴数滴被动免疫制剂 距伤口缘约0.5-1cm沿伤口纵轴进针，做环形全层注射
一例狂躁性狂犬病患者的急救护理 徐州市传染医院急诊科吴小玲 狂犬病也称恐水症，是一种由于狂犬病毒所导致的自然疫源性的人畜共患性传染病，发病急剧，具有广泛的流行性，死亡率较高，几乎100%，严重威胁着人民的生命健康，然而人获得的狂犬病主要由病兽咬伤等方式传播到人体的【1】。临床上将狂犬病分为前驱期、兴奋期、麻痹期。兴奋期的患者进入高度兴奋状态，突出表现为狂躁、恐水怕风、发作性咽肌痉挛、呼吸困难、高热、多汗、流涎等，此期间不能进食，意识清楚，所以异常痛苦，减轻患者痛苦，提高患者生存质量，帮助患者安详度过生命的最后时间非常重要【2】。现将我科2013年06月12日09时收治一例狂躁性狂犬病患者护理总结如下: 1 病例介绍 患者，李某，男， 41岁, 患者于三月前在家中睡觉时被一流浪狗咬伤，流浪狗逃窜，未处理伤口，未注射狂犬病疫苗，出现“呕吐，恐风，怕水1天”于2013年06月12日09时至我科就诊，诊断为狂犬病。迅速将患者送至抢救室隔离治疗，保持环境安静舒适，患者无明显诱因出现呕吐，恐风，怕水，进水时喉头痉挛，流涎，胸闷恶心，恐惧不安，全身不适，阵发性肢体痉挛，极度兴奋，无呕血黑便，无呼吸困难，右手狗咬伤处留有伤口瘢痕，查体T：36.8℃ P：100次/分 R：28次/分 BP：118/85mmHg SpO2: 95% 神志清楚，精神恍惚，双侧瞳孔等大等圆，对光反射灵敏，给予心电监护严密监测患者的生命体征，保持呼吸道通畅并给予低流量氧气吸入。遵医嘱予镇静，抗感染并给与心理护理，经过积极的抢救治疗稳定后，遵医嘱与12时安全转运至ICU进一步住院治疗。 2 护理 2.1 急救措施接诊后迅速将患者推入单间抢救室进行隔离治疗，保持抢救室安静、温暖，悬挂深色窗帘，避免水声并关闭门窗，使用局部照明，减少光的刺激【3】避免因声、光、水的刺激而引起患者喉痉挛。抢救室内除必须设备，所有硬物均不放置，给予患者上心电监护，监测患者的生命体征变化，同时密切观察患者的神志、呼吸、面色，监测血氧饱和度，做好护理记录。予低流量吸氧，保持
狂犬病知识培训课件 一、概念 ●狂犬病(rabies)又名恐水症(hydrophobi-a)，是由狂犬病毒所致，以侵犯中枢神经系统为主的急性人兽共患传染病。 ●人狂犬病通常由病兽以咬伤方式传给人。临床表现为特有的恐水、怕风、恐惧不安、咽肌痉挛、进行性瘫痪等。病死率几乎100％。 二、简史 ●我国早在公元前5世纪《左传》上已有记载。 ●公元前322年，Aristotle认识到人狂犬病与动物狂犬病的关系。 ●1804年，Zink第一次证明狂犬唾液有传染性。 ●19世纪80年代，Pasteur等研制出狂犬疫苗。 ●1903年，Negri发现Negri小体，使该病的快速镜检诊断成为可能。 ●全世界均有狂犬病的报道。据WHO估计，每年全世界死于狂犬病的有5万多人。 ●亚洲为狂犬病严重流行区，其中印度为发病率最高的国家，居世界第一位。 ●我国狂犬病流行已久。死亡人数仅次于印度而居世界第二位。 三、病原学 ●狂犬病毒于1962年首次在电镜下被发现。 狂犬病毒属棒状病毒科(Rhabdoviridae)拉沙病毒属（Lyssa virus），病毒中心为单股负链RNA。 ●狂犬病毒含5种主要蛋白：糖蛋白（G）、核蛋白（N）、聚合酶（L）、磷蛋白（NS）和膜蛋白（M）。 ●狂犬病毒易被灭活。 ●病毒耐低温。 ●豚鼠接种能分离病毒，也能用地鼠肾细胞、人二倍体细胞等细胞株增殖、传代。 ●野毒株的特点为致病力强，自脑外途径接种后，易侵入脑组织和唾液腺内繁殖，潜伏期较长。 ●固定毒株的特点为毒力减弱，对人和犬失去致病力，可供制备疫苗。
四、流行病学 (一)传染源 ●带狂犬病毒的动物是本病的传染源。 ●本病主要传染源是狂犬。 ●人狂犬病由其传播者约占80％～90％，其次是猫、猪及牛、马等家畜和野兽如狼、狐、狗獾等温血动物。 ●狂犬病毒可被貌似“健康”的动物所携带。 (二) 传播途径 ●人主要通过咬伤传播，也可由带病毒唾液经各种伤口和抓伤、舔伤的粘膜和皮肤而入侵。 ●狂犬、病猫、病狼等动物的唾液中含病毒量较大，于发病前3～5天即具传染性。 (二) 传播途径 ●其他途径： ●1.剥狗皮 ●2.从粘膜入侵 ●3.呼吸道传播 ●4.移植 （三）人群易感性 ●人对狂犬病毒普遍易感。 ●患者男多于女，农民＞学生＞儿童＞工人。 ●人被病犬咬后的发病率约为15％～30％。 ●若及时伤口处理和接种疫苗后，发病率可降为0.15％左右。 咬伤后是否发病的有关因素： ●①咬伤部位：如头、面、颈和手指、会阴部粘膜等末梢神经分布丰富部位因潜伏期短易发病； ●②咬伤的严重性：创口深而大者或被同一狂犬先咬伤者较后咬伤者的发病机会多。
小外伤，莫大意 教学目标 1、重视擦伤的处理，明白及时处理擦伤的意义。 2、学习意外擦伤事故中清洗、消炎等急救方法。 3、了解擦伤的处理、防护等基本常识。 教学重难点 1、教学重点：帮学生树立起“重视擦伤，及时处理”应急救护意识。 2、教学难点：学会简单处理擦伤的急救方法。 教学方法 学习交流，课堂实践 教学过程 1、谈话导入新课 师：同学们，你们的皮肤都很嫩，稍不注意就容易被擦伤。（课件出示“轻”擦伤图片，唤醒学生生活经验。）当你们遇到擦伤时，是怎么处理的呢？ 生：……（学生及时处理擦伤的行为教师要给予肯定，对于不重视擦伤处理的行为，要试着引导学生回忆伤口发炎的经历。） 师：虽然擦伤一般属于轻伤，但是不重视“及时处理”，伤口就容易发炎，会给我们的身体带来更大的伤害。（板书课题：小外伤，莫大意） 2、看故事，强化“遇到擦伤要及时处理”的救护观念。 （一)引导学生总结提炼“遇到擦伤要及时处理”的救护思想。
(二）师：看了“小志”的故事，想想我们擦伤的经历，你觉得遇到擦伤 正确的对待方式应该怎样？ （三）自学探究“怎样正确处理和预防擦伤” 问题导学，课件出示导学问题。 A、擦伤了，怎样及时正确的处理伤口？ B、预防擦伤，课本给我们提了哪些建议？你还有哪些更好的方法？ 3、组织学生交流学习成果，教师利用微视频展示“擦伤的处理方法”，总结收获。 布置作业 1、课堂调查学生家庭急救箱的急救药品、器材的准备情况。 2、回家提醒父母完备家庭急救箱的急救药品和器材，并说明其意义。 应对扭伤我有招儿 教学目标 使学生初步了解关节的结构并初步掌握关节扭伤的治疗方法。 教学重难点 1、教学重点：扭伤初期的治疗方法。
狂犬病相关知识 【概述】 狂犬病（rabies）又称恐水症（hydrophobia），为狂犬病病毒引起的一种人畜共患的中枢神经系统急性传染病。多见于狗、狼、猫等食肉动物。人多因被病兽咬伤而感染。临床表现为特有的狂躁、恐惧不安、怕风恐水、流涎和咽肌痉挛，终至发生瘫痪而危及生命。 【诊断】 根据患者过去被病兽或可疑病兽咬伤、抓伤史及典型的临床症状，即可作出临床诊断。但在疾病早期，儿童及咬伤不明确者易误诊。确诊有赖于病原学检测或尸检发现脑组织内基小体。 【治疗措施】 （一）一般处理单间隔离病人，避免不必要的刺激。医护人员最好是经过免疫接种者，并应戴口罩和手套、以防感染。病人的分泌物和排泄物须严格消毒。 （二）加强监护患者常于出现症状后3～10日内死亡。致死原因主要为肺气体交换障碍、肺部继发感染；心肌损害及循环衰竭。因此，必须对呼吸、循环系统并发症加强监护。 （三）对症处理补充热量，注意水、电解质及酸碱平衡；对烦燥、痉挛的病人予镇静剂，有脑水肿时给脱水剂。必要时作气管切开，间歇正压输氧。有心动过速、心律失常、血压升高时，可应用β受体阻滞剂或强心剂。
（四）高价免疫血清与狂犬病疫苗联合应用高价免疫血清10～20ml肌注，也可半量肌注，另半量在伤口周围浸润注射，同时行疫苗接种。 （五）干扰素可试用。 【病原学】 狂犬病病毒属核糖核酸型弹状病毒，通过唾液传播。狂犬病毒具有两种主要抗原。一种为病毒外膜上的糖蛋白抗原，能与乙酰胆碱受体结合使病毒具有神经毒性，并使体内产生中和抗体及血凝抑制抗体。中和抗体具有保护作用。另一种为内层的核蛋白抗原，可使体内产生补体结合抗体和沉淀素，无保护作用。从患者和病兽体内所分离的病毒，称自然病毒或街毒（stree virus），其特点是毒力强，但经多次通过兔脑后成为因定毒（fixed virus），毒力降低，可制做疫苗。 狂犬病毒易被紫外线、甲醛、50～70%乙醇、升汞和季胺类化合物（新洁尔灭）等灭活。其悬液经56℃30～60分钟或100℃2分钟即失去活力，对酚有高度抵抗力。在冰冻干燥下可保存数年。 【发病机理】 狂犬病病毒对神经组织有很强的亲和力，延末梢神经和神经周围间隙的体液，向心进入与咬伤部位相当的背根节和脊髓段，然后沿脊髓上行至脑，并在脑组织中繁殖，继而延传出神经进入唾液腺，使唾液具有传染性。发病原理分为三个阶段：①局部组织内小量繁殖期。病毒自咬伤部位入侵后，在伤口附近横纹细胞内缓慢繁
狂犬病病毒实验室检测方法 摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。 关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法 狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎100%。 据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。1、狂犬病病毒形态特征 RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因1 型，单股负链RNA病毒。电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。病毒双层脂质包膜的内侧主要是膜蛋白，亦称基质蛋白(Matrix，简称M)，是狂犬病毒的最小结构
狂犬病突发疫情应急处置工作方案 狂犬病是由狂犬病病毒侵犯神经系统引起的急性传染病。对人和动物危害极为严重。它在自然界野生动物中有广泛的储存宿主，是一种自然疫源性疾病，属人兽共患病，俗称疯狗病。人类狂犬病又称恐水病，是国家规定管理的乙类传染病。 为有效防控我市狂犬病的发生，保障人民群众的健康，依据《中华人民共和国传染病防治法》、《山东省突发公共卫生事件应急办法》，制定本方案。 一、组织机构及工作职责 中心成立中心主任任组长的应急处置领导小组，负责狂犬病防控工作的统一领导和组织协调；成立由流行病学、实验室检测、消杀灭、后勤保障、健康教育等人员组成的应急处置队，负责狂犬病疫情的流行病学调查、消杀灭等现场处置工作。所有人员要根据有关要求做好个人防护工作，杜绝发生感染。 二、监测及报告 （一）宿主动物监测 通过畜牧、兽医、公安等相关部门调查我市的犬等宿主动物情况，包括犬和其它有关动物的数量、种类和免疫覆盖等情况。 （二）病例监测 病例定义：根据流行病学史、临床症状和实验室检测结果三项指标确定病例的定义。 1、流行病学史 有被犬、猫或其他宿主动物舔、咬伤史。
2、临床症状 （1）愈合的咬伤伤口或周围感觉异常、麻木发痒、刺痛或蚁走感。出现兴奋、烦躁、恐惧，对外界刺激如风、水、光、声等异常敏感。 （2）“恐水”症状，伴交感神经兴奋性亢进（流涎、多汗、心律快、血压增高），继而肌肉瘫痪或颅神经瘫痪（失音、失语、心律不齐）。 3、实验室检测 （1）免疫荧光抗体法检测抗原：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液或脑脊液涂片、角膜印片、皮肤切片，用抗狂犬病荧光抗体染色，狂犬病病毒抗原阳性。 （2）RT-PCR方法检测病毒核酸：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液、脑脊液、角膜或皮肤组织，用RT-PCR方法检测狂犬病毒核酸阳性。 （3）死后脑组织标本分离病毒阳性或印片荧光抗体染色阳性、脑组织内检到内基氏小体或RT-PCR方法检测脑组织标本中病毒核酸阳性。 （二）病例分类 1.临床诊断病例：流行病学史加上临床表现中的任意一条。 2.确诊病例：临床诊断病例加上实验室检测中的任意一条。 （三）狂犬病暴露者定义 狂犬病暴露者指被狂犬、疑似狂犬或狂犬病宿主动物抓伤、咬伤、舔舐皮肤或粘膜破损处的所有人员。 （四）疫情报告
开学安全教育 长堰中学：杨学军时间：2017 年9月 4日一、交通安全 （一）不良的交通习惯 1.不走人行横道，不靠路右边走。 2.不走人行横道、天桥，随意横穿马路。 3.不注意道路和车辆信号，不服从交通管理。 4.在车行道、桥梁、隧道上追逐、玩耍、打闹。 5.穿越、攀登、跨越道路隔离栏。 6.在铁路道轨上行走，玩耍。 7.横穿铁路和钻火车。 （二）中学生骑自行车的问题 1.未满 12 岁的儿童独自骑车。 2.在人行道、机动车道骑车，逆行骑车。 3.骑车横冲直闯、争道强行，与机动车抢道。 4.转弯不减速，不打手势。 5.在路口闯信号。 6.骑车双手离把。 7.追逐打闹，三五并行。 8.手攀机动车行驶，紧跟机动车行驶。 （三）中学生拒绝乘坐“三无”车辆 交通事故发生的原因：
1.缺乏交通安全意识。 2.缺乏交通安全知识。 3.缺乏交通安全责任感。 4.存在麻痹思想。 （四）正常的行路常识 1.走人行道，靠路右边走。 2.横过车行道，要走斑马线，或走天桥。 3.要注意各种信号灯的指示（红绿灯、人行横道信号灯） 4.上下汽车要避让过往车辆。 5.不在马路上逗留、玩耍、打闹。 二、校园内外活动安全 （一）校内安全 1.体育活动安全 ① 体育老师要讲清体育活动安全。② 活动课老师不得离开。③ 学生不做不安全的活动。④ 在无人保护下不做危险活动。 2.学校集会与集体活动安全，可能发生的伤害：中暑、挤伤、跌伤、骨折、窒息、烧伤、脑震荡、死亡。 ① 上下楼梯不要拥护、礼让慢行。② 不互相追逐疯打。③ 不开无味的可造成伤害的玩笑。 3.校内劳动安全 ① 严禁学生擦楼房外窗玻璃。② 做清洁时、防止滑倒跌伤、玻 璃划伤、钉子刺伤。③ 严禁学生用湿布擦电器旋扭开关。
狂犬病应急处置技术方案（试行） 1. 前言 狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患传染病，是迄今为止人类病死率最高的急性传染病。近年以来，我国狂犬病疫情呈上升趋势，病死率高居各类法定报告传染病首位。目前我省狂犬病疫情、疫区有所扩大，疫情形势十分严峻，我市近几年也是有疫情发生，对群众的生命安全构成严重威胁，为了加强应急控制工作，特制定本方案。 2.诊断标准 见《传染病诊断标准汇编》 3.分级标准 根据狂犬病发生的病例数、流行的范围和趋势，将狂犬病疫情划分为四级，即：一般（IV级）、较大（III级）、重大（II级）和特别重大（I级），具体分级标准如下： 3.1一般疫情(IV级)：1个月内，本市范围内出现狂犬病疫情2-3例，或发生动物间狂犬病疫情。 3.2较大疫情(Ⅲ级)：1个月内，本市范围内出现狂犬病疫情4-5例，或疫情波及3个及以上镇(乡、街道)。 3.3重大疫情(Ⅱ级)：1个月内，本市范围内出现狂犬病疫情6-10例，或发病数虽未达到10例，但扩散至毗邻县(市、区)。 3.4特别重大疫情(I级)：1个月内，本市范围发生狂犬病疫情20例以上，并有进一步扩散趋势。 4.应急措施 按照《咸阳市疾病预防控制中心突发公共卫生事件应急预案》要求，分级进行应急处置。 4.1报告 4.1.1接报：实行“首接负责制”，接报时详细填写《突发公共卫生事件报告记录卡》。 4.1.2报告：按照《咸阳市疾病预防控制中心突发公共卫生事件应急预案》“内部报告”和“对外报告”的要求进行疫情报告。 4.1.3网络报告 ⑴医疗机构收治的确诊病例、临床确诊病例、疑似病例，由医疗机构负责网络直报； ⑵现场流行病学调查过程中发现的确诊病例、临床确诊病例、疑似病例，由疾控中心负责网络直报； ⑶经现场流行病学初步调查确认为暴发疫情后，由疾控中心负责按照突发公共卫生事件进行网络报告。 4.2物资准备 4.2.1流行病学调查表：《狂犬病个案调查表》、《狂犬病宿主动物基本情况调查登记表》、《犬伤
狂犬病流行病学个案调查表 国标码口口口口口口病例编码口口口口 1. 一般情况 1.1 姓名 1.2 性别（1）男（2）女口 1.3 年龄（岁）口口 1.4 家长姓名 1.5 职业 （1）幼托儿童（2）散居儿童（3）小学生（4）中学生（5）大学生（6）农民（7）工人（8）干部（9）教师（10）家务或待业（11）饲养员或屠宰工（12）其他 （13）不详口口 1.6 文化程度（1）学龄前儿童（2）文盲（3）小学（4）初中（5）高中（6）大 学（7）不详口 1.7 住址县（区）乡（镇）村（居委会） 2. 感染途径 2.1 肇事动物种类（1）狗（2）猫（3）鼠（4）其他（5）不详口 2.2 户主姓名 2.3 肇事动物免疫（1）否（2）有＿月＿日（3）不详口 2.4 肇事动物伤人（1）主动袭击（2）被骚扰后伤人（3）同时咬伤多人口 2.5 肇事动物伤人后（1）如常，未作处理（2）被拴、尚在（3）打死（4）失踪 （5）病死（6）出卖（7）出卖时间（8）不详口 2.6 其他途径 (1)宰杀、饲养时被感染（2）其他口 3. 伤口处理情况 3.1 受伤时间＿年＿月＿日＿时 3.2 伤口情况 (1)上下肢、躯干浅表咬伤，出血省，或仅有明显牙痕（2）上下肢、躯干中度咬伤，出血多，或黏膜（眼、口腔、肛门）被动物污染，（3）头颈面、手指咬伤（不论轻重），四肢、躯干大面积深度或多处中度咬伤口 3.3 伤口处理情况 3.31 伤口是否处理（1）无（2）自行处理（3）医生处理口 3.32 伤口处理时间＿年＿月＿日＿时 3.33 清洗（1）无（2）清水（3）盐水（4）肥皂水（5）碘酒（6）新洁尔灭 (6)其它口 3.34 消毒（1）无（2）酒精（3）碘酒（4）酒精＋碘酒（5）其他口 3.35 清创（1）无（2）有口 3.36 伤口感染（1）无（2）有口 3.37 伤口缝合（1）无（2）有口 3.4 既往史年曾经被狗（猫、鼠或）（1）咬伤（2）舔伤口（3）舔伤口舔肛门（4）经常宰杀（5）吃狗肉口 3.5 人用狂犬病疫苗接种（1）无（2）有口 3.6 人用狂犬病疫苗接种时间及针次 3.61 第一针＿年＿月＿日 3.62 第二针＿年＿月＿日
《预防动物咬伤》 活动目标 【教学背景分析】 （一）教学内容分析 本课主要让学生知道如何与生活中常见的小动物（小猫、小狗）相处，使学生能够掌握识别动物发怒时的危险信号，并知道遇到动物追赶时的应对方法。通过出示图片、视频，使学生认识到被动物咬伤的严重后果，掌握初步的治疗方法，从而有效地提高儿童的自我保护意识和能力。 （二）学生情况分析 本课教学对象是小学三年级学生,他们活泼好动，与动物有着密切接触，但缺少对动物危险性的了解和预防被咬伤的知识和技能，很容易发生危险。针对这种情况，我确定了本课的主题是《动物虽可爱，小心被伤害》。 【活动准备】 演示文稿（图片、视频、文字叙述）、动物头饰，绷带和纱布、针管、卡通动物贴纸 【活动目标】 （1）使学生对动物的危险性有初步的认识，能够掌握安全与动物玩耍的方法；（2）使学生知道不靠近陌生动物，能够识别动物发怒时的危险信号，掌握遇到动物追赶时的应对方法； （3）使学生认识到被动物咬伤的严重后果，掌握初步的治疗方法； 【活动重点】 能够识别动物发怒的危险信号，掌握遇到动物攻击时的应对方法； 【活动难点】
知道如何与动物安全相处； 教学过程 1、谈话导入。同学们，今天老师想和大家一起聊一聊小动物。（板书） 2、播放视频，提出问题。 3、提出问题，引导学生联系生活实际，意识到动物的危险性。 4、引出课题。一、危险的朋友 1、你身边有没有人被动物咬伤过？哪位同学愿意说一说当时经过？ 2、出示二年级调查图表，引导学生观察表格。 3、出示北京市伤害调查结果， 4、出示新闻，播放“狗追击孩子”的视频。教师引导学生体会动物的危险性。（板书） 二、该怎样与动物相处？ 1、出示图片,提出问题。 a.播放视频 b.除了视频提到的，和动物玩耍，还有哪些不能做？ c.出示“五不要”。和动物玩耍，我们要注意安全第一，防止被动物咬伤。（板书）学生认真听,观看板书。 观看视频。 指名回答，汇报课前的调查情况（预设：放学，遛弯）学生齐答（预设：危险，伤害） 齐读课题，明确学习内容 认真听问题，指名汇报课前调查情况。（预设：自己或家人）
狂犬病毒PV-2061株的病毒滴度测定方法的研究 发表时间：2018-11-22T13:05:51.323Z 来源：《医药前沿》2018年27期作者：李爽1 姚宇1 李鹤1 田威2（通讯作者） [导读] 建立狂犬病毒PV-2061株病毒滴度的快速、准确的检测方法。方法：取12批狂犬病毒PV-2061株的病毒样品 李爽1 姚宇1 李鹤1 田威2（通讯作者） （1辽宁成大生物股份有限公司辽宁沈阳 110179） （2沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳 110015） 【摘要】目的：建立狂犬病毒PV-2061株病毒滴度的快速、准确的检测方法。方法：取12批狂犬病毒PV-2061株的病毒样品，分别采用蚀斑法、免疫荧光法检测病毒滴度，与小鼠脑内注射法进行比较，验证其检测结果的相关性。另取一批狂犬病毒PV-2061株的病毒样品，用蚀斑法和免疫荧光法重复检测6次，比较两种实验方法的精密性。结果：蚀斑法和免疫荧光法测得的结果与小鼠脑内注射法之间呈正相关性;重复测定同一病毒样品，免疫荧光法的变异系数更低，表明免疫荧光的重复性更好。结论：以细胞法替代小鼠法检测狂犬病毒的毒力是可行的。免疫荧光法检测病毒滴度，快速、准确、精密度好，为狂犬病毒PV-2061株的疫苗的研究奠定了基础。 【关键词】狂犬病病毒；免疫荧光法；蚀斑法 【中图分类号】R373.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）27-0251-02 Determination of virus titer of rabies virus PV-2061 strain Li Shuang 1,Yao Yu 1,Li He 1,Tian Wei 2 (Corresponding author) 1. Liaoning Cheng Da biological Limited by Share Ltd, Shenyang , Liaoning 110179 2. School of life sciences and Biopharmaceutics, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang, Liaoning 110015 【Abstract】Objective To establish a fast and accurate method to detect the titer of the PV-2061 strain of rabies virus. Methods The virus samples of rabies virus PV-2061 strain of 12 batches were measured by plaque assay and immunofluorescence, and compared with the intracerebral injection in mice to verify the correlation of the test results. A sample of rabies virus PV-2061 strain was also repeated for 6 times by plaque assay and immunofluorescence. The accuracy of the two methods was compared. Results The results of plaque assay and immunofluorescence were positively correlated with the intracerebral injection in mice; Repeated determination of the same virus sample showed that the coefficient of variation of immunofluorescence method was lower, indicating that immunofluorescence was more reproducible. Conclusion It is feasible to detect the virulence of rabies virus by cell method instead of mouse method. The detection of virus titer by immunofluorescence is rapid, accurate and precise, which lays the foundation for the research of vaccine against rabies virus PV-2061 strain. 【Key words】Rabies virus; Immunofluorescent assay;Plaque assay 狂犬病，俗称恐水病，是一种由狂犬病病毒感染引起的人兽共患传染病，一旦感染发病，病死率高达100%。狂犬病至今仍无特效的治疗方法，实施疫苗免疫是预防和控制狂犬病发病最有效的措施[1]。在疫苗生产的各项检测指标中，狂犬病毒毒力的测定是至关重要的，其直接关系到疫苗成品的效价和免疫效果。《中华人民共和国药典》三部（2015版）狂犬病毒滴度检测的方法推荐采用小鼠法。但是由于实验动物之间存在个体差异，实验人员操作的熟练程度等诸多因素均会影响实验结果的准确性。细胞法作为病毒滴度测定的一种替代方法，近年来广受国内外学者的青睐，其中蚀斑法、免疫荧光法等都是比较经典的实验方法。 1.材料和方法 1.1 病毒及细胞病毒株 狂犬病毒PV-2061株第18代，由辽宁成大生物股份有限公司提供，原始毒株来源于ATCC。细胞株：幼仓鼠肾细胞（BHK-21）、非洲绿猴肾细胞（Vero）来源于中科院上海细胞库。 1.2 实验动物 昆明系SPF级小鼠，雄性，体重11～13g，来源于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。 1.3 主要试剂 FITC标记的抗狂犬病病毒特异性荧光抗体购自美国Novus Biologicals公司，浓度0.93mg/ml；新生牛血清购自美国Hyclone公司；甲基纤维素购自美国Sigma公司。 1.4 蚀斑法 1.4.1制备单层细胞将BHK-21细胞浓度调整至1×105个/ml，接种6孔细胞培养板，长满单层备用。 1.4.2病毒滴度测定将狂犬病毒样品5倍稀释，然后进行10倍系列稀释，共6个稀释度（1×10-4、5×10-4、1×10-5、5×10-5、1×10-6、5×10-6），接种至已制备好的6孔细胞培养板中，0.4ml/孔，于5%CO2、37℃的培养箱内吸附90min，每隔15min轻摇板一次，然后加入甲基纤维素覆盖液，4ml/孔，于培养箱中培养7d后，弃去覆盖液，加入结晶紫染色液，2ml/孔，室温30min后弃去染色液，用自来水冲洗至流水无色，晾干，细胞培养板孔内蚀斑清晰可见。统计各孔蚀斑数，计算结果，病毒滴度以lgPFU/ml表示。 PFU/ml=（每孔平均蚀斑数×病毒稀释倍数）/每孔接种病毒量 1.5 免疫荧光法 1.5.1制备单层细胞将Vero细胞调整浓度至1×105个/ml，接种96孔细胞培养板中，长满单层后备用。 1.5.2病毒滴度测定用细胞培养液将待测的狂犬病毒样品以10倍系列稀释，共6个稀释度（1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108），接种至制备好的96孔细胞培养板中，100μL/孔，每个稀释度6孔，每块板上设正常细胞对照孔和病毒阳性对照孔，置5% CO2、37℃培养箱中培养2d后，用PBS洗板3次，室温干燥后加入80%冷丙酮，100μL/孔，4℃固定30min后弃丙酮，置室温干燥，然后用100×稀释的荧光抗体进行染色，50μL/孔，置湿盒内37℃温育30min，洗板3次，甘油封闭，荧光显微镜下观察，计数病毒感染细胞的荧光灶数，细胞浆内有绿色特异性荧光颗粒者为阳性。正常细胞对照无特异性荧光，病毒对照阳性者为有效，以Reed-Muench法计算感染性滴度[2]。 1.6 小鼠LD50测定法 将病毒样品进行10倍系列稀释，脑内接种11～13g的小鼠，每个稀释度注射6只，0.03ml/只。连续观察14d，3天后死亡或呈典型发病症状的小鼠均计入死亡数内，计算LD50。
《狂犬病诊断标准及处理原则》内容简介：补充水电解质及热量，纠正酸碱平衡失调；对烦躁不安、痉挛者轮流使用各种镇静剂，如安定、苯巴比妥、水合氯醛及冬眠药物等。有脑水肿给脱水剂。防止呼吸肌痉挛导致窒息，必要时作气管切开，间歇正压给氧。有心动过速、心律失常、血压升高时，可用β-受体阻滞剂或强心剂。 《狂犬病诊断标准及处理原则》内容预览：A2 伤口处理 立即用20%的肥皂水或清水彻底清洗所有伤口和搔伤处，反复冲洗至少20min,再用75%乙醇或2%碘酒涂擦。如创伤深广、严重或发生在头、面、手、颈等处，皮试阴性后可在创伤处做高效免疫血清浸润注射。伤口在数日内暂不缝合。也可酌情应用抗生素及破伤风抗毒素。 A3 疫苗接种 目前，我国所应用的人用狂犬病疫苗为狂犬病固定毒（aG）适应株，接种于原代地鼠肾单层细胞，培养后收获病毒液，加入甲醛溶液灭活后经浓缩3——5倍，再加氢氧化铝制成。 A3.1 接种对象 凡被狂犬病或其他疯动物咬伤、抓伤时，应及时注射本疫苗。 A3.2 用法 A3.2.1 一般咬伤者于0（第1天，注射当天）、3（第4天，以下类推）、7、14、30天各注射疫苗1安瓿（液体疫苗2mL,冻干疫苗1mL或2mL），儿童用量相同。严重咬伤者，除按上述方法注射疫苗并应于0、3天注射加倍量疫苗，并于0天注射疫苗的同时合用抗狂犬病血清（伤口处理已述）。凡联合使用抗狂犬病血清者必须在全程疫苗注射完毕后再注射2——3针加强针，即在全程注射后第15、75或10、20、90天加强。 A3.2.2 在三角肌注射。 A4 抗狂犬病免疫血清的应用
A4.1 凡已知确系狂犬或其他患狂犬病动物舔咬者必需在注射疫苗的同时注射抗狂犬病血清或特异性免疫球旦白。
狂犬病 狂犬病（rabies）又称恐水症（hydrophobia），为狂犬病病毒引起的一种人畜共患的中枢神经系统急性传染病。多见于狗、狼、猫等食肉动物。人多因被病兽咬伤而感染。临床表现为特有的狂躁、恐惧不安、怕风恐水、流涎和咽肌痉挛，终至发生瘫痪而危及生命。[病原学] 狂犬病病毒属核糖核酸型弹状病毒。狂犬病毒具有两种主要抗原。一种为病毒外膜上的糖蛋白抗原，能与乙酰胆碱受体结合使病毒具有神经毒性，并使体内产生中和抗体及血凝抑制抗体。中和抗体具有保护作用。另一种为内层的核蛋白抗原，可使体内产生补体结合抗体和沉淀素，无保护作用。从患者和病兽体内所分离的病毒，称自然病毒或街毒（stree virus），其特点是毒力强，但经多次通过兔脑后成为因定毒（fixed virus），毒力降低，可制做疫苗。 狂犬病毒易被紫外线、甲醛、50～70%乙醇、升汞和季胺类化合物（新洁尔灭）等灭活。其悬液经56℃30～60分钟或100℃2分钟即失去活力，对酚有高度抵抗力。在冰冻干燥下可保存数年。 [流行病学] 狂犬病在世界很多国家均有发生。我国解放后由于采取各种预防措施，发病率明显下降。近年因养狗逐渐增多，故发病率有上升的趋势。 （一）传染源发展中国家的狂犬病主要传染源是病犬，人狂犬病由病犬传播者约占80～90%，其次为猫和狼，发达国家由于狗狂犬病被
控制，野生动物如狐猩、食血蝙蝠、臭鼬和浣熊等逐渐成为重要传染源。患病动物唾液中含有多量的病毒，于发病前数日即具有传染性。隐性感染的犬、猫等兽类亦有传染性。 （二）传播途径主要通过被患病动物咬伤、抓伤，病毒自皮肤损伤处进入人体。粘膜也是病毒的重要侵入门户，如眼结合膜被病兽唾液沾污，肛门粘膜被狗触舔等，均可引起发病。此外，亦有经呼吸道及消化道感染的报道。 （三）传播途径人对狂犬病普遍易感，兽医、动物饲养者与猎手尤易遭感染。一般男性多于女性。冬季发病率低于其他季节。 [发病机理与病理变化] 狂犬病病毒对神经组织有很强的亲和力。发病原理分为三个阶段：①局部组织内小量繁殖期。病毒自咬伤部位入侵后，在伤口附近横纹细胞内缓慢繁殖，约4～6日内侵入周围神经，此时病人无任何自觉症状。②从周围神经侵入中枢神经期。病毒沿周围传入神经迅速上行到达背根神经节后，大量繁殖，然后侵入脊髓和中枢神经系统，主要侵犯脑干及小脑等处的神经元。但亦可在扩散过程中终止于某部位，形成特殊的临床表现。③向各器官扩散期。病毒自中枢神经系统再沿传出神经侵入各组织与器官，如眼、舌、唾液腺、皮肤、心脏、肾上腺髓质等。由于迷走神经核、舌咽神经核和舌下神经核受损，可以发生呼吸肌、吞咽肌痉挛。临床上出现恐水、呼吸困难、吞咽困难等症状。交感神经受刺激，使唾液分泌和出汗增多。迷走神经节、交感神经节和心脏神经节受损时，可发生心血管系统功能紊乱或猝死。
狂犬病预防措施 措施 狂犬病的预防主要包括控制传染源、切断传播途径和接种疫苗等几个步骤。 1．控制传染源：控制传染源主要是家养犬的免疫、消灭流浪犬以及可疑病犬和猫的捕杀。.对家犬进行登记，给予预防接种。狂犬、狂猫立即击毙，以免伤人。咬过人的家犬、家猫应设法捕获隔离10天。取击毙的狂犬、狂猫和在隔离期内死亡动物的脑组织作检查。病死动物应焚烧或深埋，不可剥皮。 2．切断传播途径和接种疫苗：即暴露后的及时防治。一但被动物咬伤或抓伤，一定要尽快正确清洗伤口和应用狂犬病免疫制剂，防止发病。 1、咬伤后的处理伤口必须用肥皂水或清洁剂全面冲洗，冲洗的目的是破坏伤口处的病毒，防止其增殖和穿入周围神经。冲洗后必须用酒精绵、碘酊或0.1%季胺盐溶液（伤口应无残留肥皂水时方可使用，因为这两种物质相互中和）消毒。条件理想时，伤口应暴露24～48小时，防止病毒穿入神经纤维。如果有免疫血清，可注入伤口底部及周围。伤口缝合或包扎应尽量避免，如果必须缝合最好在接种同时给予特异性免疫球蛋白。 2、免疫制剂应用：狂犬病免疫制剂包括被动免疫与主动免疫制剂两种。 （1）被动免疫：目前用于狂犬病的被动免疫制剂有两大类：一类为动物源抗狂犬病毒的精致血清（ARS），一类为人源狂犬病免疫球蛋白（HRIG），均具有高度抗狂犬病特异性，作为疫苗治疗的辅助治疗已证明有效。被动免疫制剂应用越早越好。在注射动物源抗狂犬病毒血清之前应先作敏感试验，阴性者方可使用。阳性者进行脱敏处理后也可应用。我国生产的ARS每支10ml，含1000U，成人剂量为20ml，注射时一半剂量作局部伤口注射，另一半剂量肌肉注射。HRIG的一次注射剂量为20U/kg，如果狂犬病免疫球蛋白在疫苗之前已 经给予，那匆呙绲氖状渭亮坑υ黾拥秸 ＜亮康?~3倍，在几个部位注射。 （2）主动免疫：即注射狂犬疫苗。狂犬病较长的潜伏期使得被接种者在发病之前有足够时间产生保护性免疫反应。狂犬疫苗有以下几种：A、人二倍体细胞疫苗（HDCV）：系采用人胚肺纤维母细胞接种Pitman-Moore病毒株后制成，为目前最理想的细胞培养疫苗。二倍体细胞疫苗的优点为接种后抗体出现快，在14天时几乎达到100%阳转，而且抗体水平高，持续时间长，5年仍有中和抗体存在。若在5年后加强免疫1针，可激发良好的抗体应答。但由于人二倍体细胞只能在小瓶中培养，培养数量有限，大规模工业化生产成本太高，困难较大，故难以推广。B、地鼠肾细胞疫苗（PHKCV）：原代地鼠肾细胞培养疫苗，加拿大，苏联于1971年开始使用。我国于1981年开始用PHKCV取代了羊脑疫苗。我国疫苗生产使用的毒株为北京株，经原代地鼠肾细胞和豚鼠脑相继传代后制备的，经过长期实验室与流行病学效果观察，已证明为一种安全、有效的疫苗。免疫程序为0、3、7、14、30天各注射1针，每针2ml。C、提纯的V ero细胞狂犬病疫苗（PVPV）：V ero细胞是一种异倍体细胞，经猕猴肾细胞培养衍化后已经适用于微载体大量培养。将狂犬病毒PM1503-3M经过在V ero细胞内增殖，将病毒从细胞上清液中收获，再加β-丙内酯灭活之前将病毒浓缩，经纯化后加入白蛋白的冻干稳定，获得终产品。每剂量0.5ml，暴露后接种方案与地鼠肾细胞疫苗相同，暴露前预防性接种3针即可。此外，还有提纯的浓缩鸭胚狂犬