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狂犬病病毒实验室检测方法摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。
一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。
现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。
关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。
RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。
脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎100%。
据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。
尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。
中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。
检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。
下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。
1、狂犬病病毒形态特征RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因1 型，单股负链RNA病毒。
电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。
病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。
中华人民共和国卫生行业标准法定传染病诊断标准二O一0年四月目录鼠疫（WS279-2008） (4)霍乱（WS289-2008） (5)传染性非典型性肺炎（WS286-2008） (6)脊髓灰质炎（WS294-2008） (9)人感染高致病性禽流感（WS284-2008） (10)甲型H1N1流感（2009年第三版） (12)炭疽（WS283-2008） (12)艾滋病和艾滋病病毒感染（WS293-2008） (14)甲型病毒性肝炎（WS298-2008） (19)乙型病毒性肝炎（WS299-2008） (20)丙型病毒性肝炎（WS213-2008） (22)丁型病毒性肝炎（WS300-2008） (24)戊型病毒性肝炎（WS301-2008） (25)麻疹（WS296-2008） (26)流行性出血热（WS278-2008） (27)狂犬病（WS281-2008） (28)流行性乙型脑炎（WS214-2008） (29)登革热（WS216-2008） (30)细菌性和阿米巴性痢疾（WS287-2008） (31)肺结核（WS288-2008） (33)伤寒和副伤寒（WS280-2008） (36)流行性脑脊髓膜炎（WS295-2008） (37)百日咳（WS274-2008） (39)白喉(WS275-2008) (39)新生儿破伤风（WS272-2008） (40)猩红热（WS282-2008） (41)布鲁氏菌病（WS269-2007） (42)淋病（WS268-2007） (43)梅毒（WS273-2007） (45)钩端螺旋体病（WS290-2008） (47)血吸虫病（WS261-2006） (48)疟疾（WS259-2006） (49)流行性感冒 (WS285-2008) (50)流行性腮腺炎 (WS270-2007) (51)风疹 (WS297-2008) (52)急性出血性结膜炎 (WS217-2008) (53)麻风病 (WS291-2008) (54)流行性和地方性斑疹伤寒 (WS215-2008) (56)黑热病 (WS258-2006) (58)包虫病（WS257-2006） (58)丝虫病（WS260－2006） (59)感染性腹泻（WS271-2007） (60)手足口病（2009版） (61)鼠疫（WS 279-2008）1 诊断依据1.1 临床表现1.1.1突然发病，高热，白细胞剧增，在未用抗菌药物或仅使用青霉素族抗菌药物情况下，病情迅速恶化，在48h内进入休克或更严重状态。
狂犬病病毒实验室检测方法摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。
一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。
现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量 RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。
关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。
RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。
脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎 100%。
据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。
尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过 5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。
中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。
检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。
下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。
1、狂犬病病毒形态特征RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因 1 型，单股负链RNA病毒。
电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。
病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。
狂犬病的实验室检测与诊断技术武汉生物制品研究所基因工程室严家新研究员一、狂犬病实验室检测与诊断技术的用途1. 狂犬病人存活期内的实验室诊断：目前尚无实验室方法可确认处于潜伏期的狂犬病人。
对可能感染狂犬病毒而尚未发病（即处于潜伏期）的人应尽快接种狂犬病疫苗，必要时还要同时接种抗血清。
国外文献上比较可靠的研究结果已证明，狂犬病的潜伏期可能超过6年。
狂犬病疫苗在暴露后接种越快越好，但只要是在发病前，接种疫苗都会有保护作用，补种疫苗可以说没有时间限制。
狂犬病人一旦发病，其死亡率为100%。
病人在发病后最初几天，检测狂犬病毒的抗原一般是敏感的，常可在其唾液、角膜印片、尿液或皮肤中检出病毒抗原。
检测抗原可用荧光抗体（FA）法检查。
但是，FA阳性标本在发病的后期更常见。
皮肤活组织检查最好从颈背部取含有末稍神经的带有毛囊的标本。
出现早期症状时检测抗原，仅有25-50%的患者为阳性；随着病情的进展阳性率也增加。
而脑脊液及血清中的病毒中和抗体常常趋向于在病后7—10天才出现。
但在国内护理条件下，狂犬病人发病后，很少能维持生命7天以上。
2. 动物和人狂犬病的死后诊断：可用抗原检测、病毒分离、病毒鉴定等方法进行死因确诊和病毒来源、演化分析。
3. 测定狂犬病毒的抗体:主要用于确定人或动物接种狂犬病疫苗是否成功。
W H O狂犬病专家委员会认为大于或等于0.5 IU/ml的抗体水平表示免疫接种成功，能得到有效的保护。
前段时间国内因狂犬病疫苗假冒伪劣产品猖獗，而狂犬病疫苗的质量又是性命攸关的事，疫苗接种者主动要求在疫苗接种后测抗体的越来越多，这是可以理解的。
但只要疫苗的质量和供货渠道（包括保存条件）可靠，通常并不要求每个接种者都检测抗体。
因为除非接种者本身可能有免疫功能方面的异常，合格疫苗的抗体阳转率应为100%。
二、狂犬病的实验室检测与诊断的必要性典型的狂犬病的临床表现十分典型，但也有约40%的狂犬病例属瘫痪型，其表现并不典型，很容易与其他疾病混淆，所以实验室检测手段对狂犬病的确诊非常必要。
狂犬病诊断标准1．流行病学史有被犬、猫或其他宿主动物舔、咬、抓伤史。
2．临床症状2．1愈合的咬伤伤口或周围感觉异常、麻木发痒、剌痛或蚁走感。
出现兴奋、烦躁、恐惧，对外界刺激如风、水、光、声等异常敏感。
2．2“恐水”症状，伴交感神经兴奋性亢进（流涎、多汗、心律快、血压增高），继而肌肉瘫痪或颅神经瘫痪（失音、失语、心律不齐）3．实验室检查3．1免疫荧光抗体法检测抗原：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液、角膜印片、皮肤切片，用荧光抗体染色，狂犬病病毒抗原阳性。
3．2存活一周以上者做血清中和试验或补体结合试验检测抗体、效价上升，曾接种过疫苗者其中和抗体效价需超过1：5000。
3．3死后脑组织标本分离病毒阳性或印片荧光抗体染色阳性或脑组织内检到内基氏小体。
4．病例分类4．2确诊病例:具备加3.3的任一条.狂犬病知识热点问答什么是狂犬病?狂犬病是由狂犬病毒引起的一种急性传染病，人兽都可以感染，又称恐水病、疯狗病等。
狂犬病毒主要在动物间传播。
该病主要是通过动物咬人时牙齿上带的唾液中的狂犬病病毒侵入人体而受到感染。
狂犬病一旦发病，其进展速度很快，多数在3-5天，很少有超过10天的，病死率为100%。
被狂犬咬伤，就肯定要得狂犬病吗？答：不一定，有学者统计发现就是被真正的狂犬或其它疯动物咬伤，且没有采取任何预防措施，结果也只有30%－70%的人发病。
被狂犬咬伤后是否发病有很多影响因素：1.要看进入人体的狂犬病毒的数量多少，如果疯狗咬人时处于发病的早期阶段，它的唾液中所带的狂犬病毒就比处于发病后期时少；2.咬伤是否严重也影响被咬的人是否发病。
大面积深度咬伤就比伤口很小的浅表伤容易发病；3.多部位咬伤也比单一部分咬伤容易发病，且潜伏期较短。
4.被咬伤后正确及时的处理伤口，是防治狂犬病的第一道防线，如果及时对伤口进行了正确处理，和抗狂犬病暴露后治疗，则可大大减少发病的危险。
5.通过粘膜感染发病较咬伤皮肤感染发病难，而且病例较多呈抑郁型狂犬病。
狂犬病的诊断与治疗⏹2007年，在国际狂犬病控制联盟的倡议下，世界卫生组织、世界动物卫生组织及美国疾病预防控制中心等共同发起了“世界狂犬病日”，各国纷纷开展相应宣传活动，“共同努力，使狂犬病成为历史”。
概述⏹狂犬病是由狂犬病毒引发的急性、进行性、几乎不可逆转的脑脊髓炎，是人畜共患的急性传染病。
因其有恐水特征，故又名恐水症，它是目前病死率最高的疾病。
⏹1881年法国巴斯德认为本病的病原体是极小的生物，1903年Negri在狂犬病人尸脑部发现了包涵体，并命名为Negri小体，直至现在仍然是诊断狂犬病的标准之一。
病原学⏹狂犬病毒于1962年首次在电镜下被发现，一年后，对其形态结构进行了描述。
随后在鸡胚组织、神经组织中增殖成功。
⏹狂犬病毒属弹状病毒科拉沙病毒属，大小约75×180nm，病毒中心为单股负链RNA，狂犬病毒是拉沙病毒属的典型种。
从感染动物或病人中发现的狂犬病毒称野毒株或街毒，街毒经过系列传代称固定毒。
⏹根据对不同毒株的血清学反应和单克隆抗体分析，将狂犬病毒分为5个血清型：⏹1血清Ⅰ型：为典型的狂犬病毒标准攻击毒株；⏹2血清Ⅱ型：拉哥斯蝙蝠病毒，从非洲分离到，包括6个亚型；⏹3血清Ⅲ型：马可拉原型株，在非洲分离出，包括5个亚型；⏹4血清Ⅳ型：杜文海格原型株，首先从南非分离到，以后从南非和中欧的蝙蝠中分离到，含有8个亚型；⏹5血清Ⅴ型：欧洲蝙蝠狂犬病毒。
流行病学(一)传染源⏹病犬仍是狂犬病的主要传染源，其它传染源还有猫、狼、狐、獾、熊、臭鼬、蝙蝠等动物。
近年来对世界上54个国家和地区狂犬病报告的综合分析表明，因犬所致的狂犬病占57％，野生动物所致占33％，因蝙蝠所致占10％。
⏹国内由狂犬传播者约占80％一90％，其次是猫、猪及牛、马等家畜和野兽如狼、狐、狗獾等温血动物。
狂犬病的主要传染源⏹区域主要宿主⏹亚洲狗，猫，猫鼬，⏹非洲狗，豺，猫鼬，狐狸⏹拉丁美洲狗，蝙蝠⏹北美洲臭鼬，浣熊，狐狸，蝙蝠⏹加勒比海地区猫鼬⏹西欧狐狸，蝙蝠⏹东欧狐狸，狗几乎所有的温血动物都可以感染狂犬病。
狂犬病实验室诊断一、狂犬病实验室诊断病人发病后（死亡前）可采集其唾液（间隔3-6小时，至少采集3份）、脑脊液、血清及颈后带毛囊的小块皮肤；病人死后最好采集其脑组织标本（小脑和脑干）进行实验室检测。
直接免疫荧光法是狂犬病诊断的金标准，可以快速、敏感、特异地检测人和动物脑组织中的病毒抗原。
临床病例活体组织标本（如颈后部皮肤毛囊）亦可进行DFA检测。
直接快速免疫组化法及酶联免疫吸附测定法亦可特异检测狂犬病病毒抗原。
病毒核酸检测可用于早期诊断，以逆转录PCR法检测体液（唾液、血清等）和脑组织等标本，但需要严格的质量控制以保证结果的准确性。
脑组织及唾液等病毒含量高的样本还可进行病毒分离。
细胞培养分离所需时间（1-2天）远少于小鼠颅内接种分离法所需时间（10-21天），且前者的生物安全风险远小于后者。
未接种过疫苗的患者，发病早期几乎没有中和抗体产生，到发病晚期（通常在临床症状出现后7-8天），病毒在脑内大量增殖后突破血脑屏障进入血液，刺激机体产生低水平的中和抗体。
通过病毒中和试验检测病人血清或脑脊液中的中和抗体，可作为狂犬病诊断的依据之一。
世界卫生组织（WHO）推荐的抗狂犬病病毒中和抗体标准检测方法包括快速荧光灶抑制试验（RFFIT）和小鼠脑内中和试验（MNT）。
由于RFFIT法无需使用小鼠，所用时间短（24小时），目前已被广泛采用。
RFFIT方法也是我国现行药典规定的检测狂犬病病毒中和抗体的标准方法之一。
此外，常用的狂犬病病毒中和抗体检测方法还有荧光抗体病毒中和试验（FAVNT）。
用ELISA法测定的抗狂犬病病毒糖蛋白抗体滴度与用病毒中和试验测定的结果有一定的相关性（约80%符合率），但相应试剂盒尚未普及。
此外，还可以通过检测中和抗体，监测暴露前抗体背景及暴露后疫苗注射的免疫效果。
WHO狂犬病专家咨询委员会认为：中和抗体水平等于或高于0．5IU/ml时，接种者才具备了有效的保护能力；如果发现中和抗体水平低于0．5IU/ml，应进行加强免疫，至达到有效保护水平为止。
狂犬病诊断标准一、狂犬病诊断标准（一）原国家卫生部2008年颁布的狂犬病诊断标准根据患者的流行病学、临床表现和实验室检查结果进行综合判断，病例确诊需要实验室证据。
1、临床诊断病例，符合下列任一项即可诊断典型的狂躁型狂犬病临床表现，明确的动物致伤史+典型的麻痹型狂犬病临床表现。
2、确诊病例，临床诊断病例加下列任一项，即可确诊:（1）直接荧光抗体法（或ELISA法）：检测患者唾液、脑脊液或颈后带毛囊的皮肤组织标本中狂犬病病毒抗原阳性，或用RT-PCR检测狂犬病病毒核酸阳性。
（2）细胞培养方法：从患者唾液或脑脊液等标本中分离出狂犬病病毒。
（3）脑组织检测：尸检脑组织标本，用直接荧光抗体法或ELISA法检测狂犬病病毒抗原阳性、RT-PCR检测狂犬病病毒核酸阳性、细胞培养方法分离出狂犬病病毒。
（二）WHO的狂犬病定义临床病例：病例具有急性神经性综合征（如脑炎），主要表现为机能亢奋（如狂躁型狂犬病）或者麻痹综合征（如麻痹型狂犬病），如果没有重症监护支持，病人通常会在首发症状出现后7-11天内进行性发展为昏迷和死亡，常见死因为呼吸循环衰竭。
符合下列实验室标准中的1种或几种即可确诊。
（1）存在病毒抗原。
（2）细胞培养方法或实验动物接种中分离到病毒。
（3）未接种疫苗者的脑脊液或血清中存在病毒特异性抗体。
（4）通过分子生物学方法在活体或尸检样本（如脑活检样本、皮肤、唾液、浓缩尿）中检测到病毒核酸。
（三）WHO的狂犬病病例分类疑似病例：符合临床病例定义的病例。
可能病例：疑似病例，同时具有与疑似狂犬病动物接触的可靠病史。
确诊病例：实验室确认的疑似病例或可能病例。
在缺少动物暴露史或临床疑似脑炎症状的情况下，如果实验室诊断检测明确，仍可进行确定性诊断。
对可能感染狂犬病的患者在采取适当预防措施情况下进行核磁共振成像检查可能有助于诊断。
无论临床类型如何，当脑干、海马、下丘脑、深层和皮层下白质以及深层和皮质灰质的核磁共振T2成像出现模糊、微弱的异常高信号时，均提示可能为狂犬病。
狂犬病的诊断标准一、诊断标准1.狂犬病病毒抗原检测阳性。
通过荧光免疫或ELISA技术对唾液、脑脊液、血液等样本进行检测，若结果呈阳性，则提示存在狂犬病病毒抗原。
2.患者病史中有明确接触或暴露于患病动物或病例史。
患者需详细回忆近期接触的动物情况，包括宠物、野生动物、鸟类等，若接触过患病动物或与患病动物有过接触史，则有可能感染狂犬病。
3.出现典型的狂犬病临床症状和体征。
狂犬病患者通常表现为恐水、怕风、畏光、咽肌痉挛等症状，以及焦虑、抑郁、失眠等精神症状。
此外，患者还可能出现发热、出汗、乏力等全身症状。
若患者出现以上症状和体征，则应高度怀疑为狂犬病。
4.狂犬病病毒分离培养阳性或动物接种试验阳性。
通过将患者样本进行分离培养或动物接种试验，若结果呈阳性，则可以确诊为狂犬病。
二、诊断依据1.狂犬病病毒抗原检测阳性。
通过检测唾液、脑脊液、血液等样本中的狂犬病病毒抗原，若结果呈阳性，则可以诊断为狂犬病。
2.患者病史中有明确接触或暴露于患病动物或病例史。
详细询问患者近期接触的动物情况，包括宠物、野生动物、鸟类等，若接触过患病动物或与患病动物有过接触史，则有可能感染狂犬病。
3.出现典型的狂犬病临床症状和体征。
患者出现恐水、怕风、畏光、咽肌痉挛等症状，以及焦虑、抑郁、失眠等精神症状。
此外，患者还可能出现发热、出汗、乏力等全身症状。
若患者出现以上症状和体征，则应高度怀疑为狂犬病。
以上即为狂犬病的诊断标准及诊断依据，医生可根据以上标准对患者进行诊断，并制定相应的治疗方案。
同时，对于狂犬病的预防和控制，公众也需要提高警惕，注意与动物的接触方式和自身防护措施。
诊断狂犬六个标准
不满1个月的幼犬患狂犬病可能性不高;10天左右依然健康的狗狗患狂犬病可能性不高；突然发病的狗狗患狂犬病的可能性不高；临床症状持续缓解的狗狗患狂犬病可能性不高；不符合狂犬病症状的狗狗患狂犬病可能性不高；行为没有异常的狗狗患狂犬病可能性不高。
1、年龄
狂犬病毒在狗狗身上的潜伏期比较短，并且这种病毒并不会垂直传播，即不具有遗传性，因此，刚生下来的小狗或出生不足1个月的幼年狗狗几乎不可能携带狂犬病毒，就算被咬伤也无需惊慌。
2、健康状态
感染狂犬病毒的狗狗通常会在10天以内发病，因此，如果想判断该狗狗是否患有狂犬病最方便的方式就是使用〃十日观察法’即观察该狗狗是否有在10天内表现出狂犬病症状，没有即很大概率未患狂犬病。
3、病情状况
狂犬病发作具有阶段性，而发作也是一个循序渐进的过程，因此，即使狗狗在10天内出现了不良反应，但该反应为突然发作，或明显不符合狂犬病发作症状，就不能说明狗狗患有狂犬病。
4、临床症状
患有狂犬病的狗狗一旦发病，死亡率近乎100虬因此，如果狗狗在出现类似狂犬病
症状后的2~3天内，病情没有继续恶化甚至明显好转，就基本可以确定
该狗没有患上狂犬病，这时主人应该及时采取其他治疗方案。
5、符合症状
狂犬病发作症状与犬瘟、犬细小等可能引起狗狗死亡的急性传染病皆不相同。
因此，如果狗狗没有出现2种或以上符合狂犬病发作症状的症状如叫声异常、舌头干燥、舔舐尿液、干呕、异食癖、狂躁不安等，就不是患有狂犬病。
6、行为改变
患有狂犬病的狗狗如果没有出现上述五种情况中的任意一种，或者出现了类似上述五种情况中的一种情况，但症状较为轻微，并且没有出现明显的行为改变如原本温顺的狗狗突然变得狂躁不安，就不是患有狂犬病。
狂⽝病诊断标准（WS281-2008）狂⽝病诊断标准（WS281-2008）1范围本标准规定了狂⽝病的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。
本标准适⽤于全国各级医疗卫⽣机构及其⼯作⼈员对狂⽝病的诊断、报告。
2术语和定义下列术语和定义适⽤于本标准。
2.1狂⽝病街毒street virus⾃然状态下从感染动物或患者中发现的狂⽝病病毒。
2.2 狂⽝病实验室固定毒 fixed virus狂⽝病街毒株经过动物或细胞系列传代适应特定宿主后，其致病性减弱。
3诊断依据3.1流⾏病学史有被⽝、猫、野⽣⾷⾁动物以及⾷⾍和吸⾎蝙蝠等宿主动物咬伤、抓伤、舔舐黏膜或未愈合伤⼝的感染史。
3.2临床表现3.2.1狂躁型狂躁型是我国最常见的类型。
主要表现有：在愈合的伤⼝及其神经⽀配区有痒、痛、⿇及蚁⾛等异常感觉，以后出现⾼度兴奋、恐⽔、怕风、阵发性咽肌痉挛和交感神经兴奋症状如流涎、吐沫、多汗、⼼率加快、⾎压增⾼等。
逐渐发⽣全⾝弛缓性瘫痪，最终因呼吸、循环衰竭⽽死亡。
3.2.2⿇痹型⿇痹型在我国较为少见。
临床表现为：前驱期多为⾼热、头痛、呕吐及咬伤处疼痛等，⽆兴奋期和恐⽔症状，亦⽆咽喉痉挛和吞咽困难等表现。
前驱期后即出现四肢⽆⼒、⿇痹症状，⿇痹多开始于肢体被咬处，然后⾥放射状向四周蔓延。
部分或全部肌⾁瘫痪，咽喉肌、声带⿇痹⽽失⾳，故称“哑狂⽝病”。
3.3实验室检查3.3.1 直接荧光抗体法(dFA)（见A．1）或ELISA（见A．2）检测患者唾液、脑脊液或颈后带⽑囊的⽪肤组织标本中狂⽝病毒抗原阳性，或⽤RT-PCR(见A．3)检测狂⽝病病毒核酸阳性。
3.3.2细胞培养⽅法（见A．4）从患者唾液、脑脊液等标本中分离到狂⽝病病毒。
3.3.3脑组织检测⼫检脑组织标本，⽤直接荧光抗体法(dFA)（见A．1）或ELISA（见A．2）检测狂⽝病病毒抗原阳性、RT-PCR(见A．3)检测狂⽝病病毒核酸阳性、细胞培养⽅法（见A．4）分离到狂⽝病病毒。
狂⽝病预防控制技术指南（2016版）近期，由中国疾病预防控制中⼼办公室指定的《狂⽝病预防控制技术指南（2016）》⼀⽂，发布在中国疾病预防控制中⼼官⽹，现整理如下，供⼴⼤医⽣参考学习。
摘要狂⽝病是由狂⽝病病毒感染引起的⼀种动物源性传染临床⼤多表现为特异性恐风、恐⽔、咽肌痉挛、进⾏性瘫痪等。
近年来，狂⽝病报告死亡数⼀直位居我国法定报告传染病前列，给⼈民群众⽣命健康带来严重威胁。
为指导基层疾控机构做好狂⽝病的预防控制⼯作，尤其是暴露后的预防处置，降低狂⽝病所致死亡，中国疾病预防控制中⼼组织专家，参考世界卫⽣组织和美国疾控中⼼的技术指南，以及国内外最新研究进展，制定了《狂⽝病预防控制技术指南（201 6 版）》。
本指南系统回顾了狂⽝病的病原学、临床学、实验室诊断、流⾏病学、疫苗和被动免疫制剂的种类、机理、效果、安全性和不良反应监测与处置，以及暴露预防处置⽅法等内容的科学证据，在此基础上对狂⽝病暴露前和暴露后预防处置的伤⼝处置、疫苗接种和被动免疫制剂使⽤等技术给出了推荐建议。
本指南适⽤于从事狂⽝病防控⼯作的各级各类疾病预防控制机构、狂⽝病暴露预防处置门诊、医疗机构感染科和急诊科等专业⼈员。
根据狂⽝病的国内外研究进展，本指南今后将不断更新、完善。
病原学和实验室诊断1. 病原学狂⽝病病毒（Rabies virus，RABV）属于单负病毒⽬（Mononegavirales）弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂⽝病毒属（Lyssavirus）。
狂⽝病病毒颗粒呈⼦弹状，长 100～300nm，直径约 75nm。
病毒基因组长约 12kb，为不分节段的单股负链 RNA，从 3' 到 5' 端依次编码 5种结构蛋⽩，分别为核蛋⽩（Nucleoprotein，N）、磷蛋⽩（Phosphoprotein，P）、基质蛋⽩（Matrixprotein，M）、糖蛋⽩（Glycoprotein，G）和依赖 RNA 的 RNA 多聚酶（RNA dependent RNA polymerase or Large protein，L）。
《狂犬病暴露预防处置专家共识》（2019）要点狂犬病是由狂犬病病毒属病毒感染引起的一种动物源性传染病。
病毒主要通过破损的皮肤或黏膜侵入人体，临床多以特异性恐风、恐水、咽肌痉挛、进行性瘫痪等为表现，一旦发病，病死率几乎100%，给人类生命健康造成严重威胁。
人的狂犬病99%由犬咬伤传播，加强犬的管理、给犬接种狂犬病疫苗，是防控狂犬病的基础性和根本性策略。
及时、规范的暴露后预防（PEP）处置是预防狂犬病的最有效策略。
2018年4月，WHO发布了2018年狂犬病疫苗立场文件，基于狂犬病相关研究的最新证据，更新了狂犬病暴露预防处置程序。
一、狂犬病病原学狂犬病病毒属于单股负链病毒目弹状病毒科狂犬病病毒属。
二、发病机理狂犬病病毒具有高度嗜神经性。
病毒最初进入伤口时，在被咬伤的肌肉组织中复制，然后通过运动神经元的终板和轴突侵入外周神经系统。
病毒沿轴突上行到背根神经节后，在其内大量增殖，然后侵入脊髓和整个中枢神经系统。
人狂犬病潜伏期通常1～3个月，可短至数天，极少超过1年。
潜伏期长短与病毒的数量、毒力和侵入部位的神经分布等因素相关。
病毒数量越多、毒力越强、侵入部位神经越丰富、越靠近中枢神经系统，潜伏期就越短。
三、狂犬病临床表现与诊断（一）临床表现1.潜伏期：从感染到发病前无任何症状的时期，多数为1～3个月， 1周以内或1年以上极少。
2.前驱期：一般为2～10d，通常有不适、厌食、疲劳、头痛和发热等不典型症状，无端的恐惧、焦虑、激动、易怒、神经过敏、失眠或抑郁等症状。
3.急性神经症状期：一般持续1～3d，分为狂躁型与麻痹型。
狂躁型病例突出表现为极度恐惧、恐水、怕风、咽肌痉挛、呼吸困难、排尿排便困难及多汗流涎等。
麻痹型病例无典型的兴奋期及恐水现象，而以高热、头痛、呕吐、咬伤处疼痛，继而出现肢体软弱、腹胀、共济失调、大小便失禁等。
4.麻痹期：一般持续6～18h。
5.死亡：病例麻痹期后很快呼吸心跳停止死亡。
（二）诊断标准有流行病学史，并符合狂躁型或麻痹型狂犬病临床症状者，即可诊断为临床病例。
狂犬病诊断标准1．流行病学史有被犬、猫或其他宿主动物舔、咬、抓伤史。
2．临床症状2．1愈合的咬伤伤口或周围感觉异常、麻木发痒、剌痛或蚁走感。
出现兴奋、烦躁、恐惧，对外界刺激如风、水、光、声等异常敏感。
2．2“恐水”症状，伴交感神经兴奋性亢进（流涎、多汗、心律快、血压增高），继而肌肉瘫痪或颅神经瘫痪（失音、失语、心律不齐）3．实验室检查3．1免疫荧光抗体法检测抗原：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液、角膜印片、皮肤切片，用荧光抗体染色，狂犬病病毒抗原阳性。
3．2存活一周以上者做血清中和试验或补体结合试验检测抗体、效价上升，曾接种过疫苗者其中和抗体效价需超过1：5000。
3．3死后脑组织标本分离病毒阳性或印片荧光抗体染色阳性或脑组织内检到内基氏小体。
4．病例分类4．1临床诊断病例：具备3.1加3.2.1或3.2.24．2确诊病例:具备3.4.1加3.3的任一条.狂犬病知识热点问答什么是狂犬病?狂犬病是由狂犬病毒引起的一种急性传染病，人兽都可以感染，又称恐水病、疯狗病等。
狂犬病毒主要在动物间传播。
该病主要是通过动物咬人时牙齿上带的唾液中的狂犬病病毒侵入人体而受到感染。
狂犬病一旦发病，其进展速度很快，多数在3-5天，很少有超过10天的，病死率为100%。
被狂犬咬伤，就肯定要得狂犬病吗？答：不一定，有学者统计发现就是被真正的狂犬或其它疯动物咬伤，且没有采取任何预防措施，结果也只有30%－70%的人发病。
被狂犬咬伤后是否发病有很多影响因素：1.要看进入人体的狂犬病毒的数量多少，如果疯狗咬人时处于发病的早期阶段，它的唾液中所带的狂犬病毒就比处于发病后期时少；2.咬伤是否严重也影响被咬的人是否发病。
大面积深度咬伤就比伤口很小的浅表伤容易发病；3.多部位咬伤也比单一部分咬伤容易发病，且潜伏期较短。
4.被咬伤后正确及时的处理伤口，是防治狂犬病的第一道防线，如果及时对伤口进行了正确处理，和抗狂犬病暴露后治疗，则可大大减少发病的危险。
5.通过粘膜感染发病较咬伤皮肤感染发病难，而且病例较多呈抑郁型狂犬病。
6.疯动物咬伤头、面和颈部等那些靠近中枢神经系统的部位或周围神经丰富的部位，较咬伤四肢者的发病率和病死率要高。
7.抵抗力低下的人较抵抗力强的人更易发病。
被犬咬伤后，伤口如何处理？1.被咬后立即挤压伤口排去带毒液的污血或用火罐拨毒，但绝不能用嘴去吸伤口处的污血。
2.用20%的肥皂水或1%的新洁尔灭彻底清洗，再用清水洗净，继用2%－3%碘酒或75%酒精局部消毒。
3.局部伤口原则上不缝合、不包扎、不涂软膏、不用粉剂以利伤口排毒，如伤及头面部，或伤口大且深，伤及大血管需要缝合包扎时，应以不妨碍引流，保证充分冲洗和消毒为前提，做抗血清处理后即可缝合。
4.可同时使用破伤风抗毒素和其他抗感染处理以控制狂犬病以外的其他感染，但注射部位应与抗狂犬病毒血清和狂犬疫苗的注射部位错开。
人发生狂犬病后都有哪些症状？人被狂犬病毒感染的动物咬伤后，潜伏期无任何症状，缓慢渐进，临床症状很少在20天内发生，多数病例在30天后甚至4-6个月后才发病。
在狂犬病的早期，病人多有低热、头痛、全身发懒、恶心、烦躁、恐惧不安等症状。
接着，病人对声音、光线或风之类的刺激变得异常敏感，稍受刺激立即感觉咽喉部发紧。
被病兽咬伤的伤口周围，也有麻木、痒痛的异常感觉，手脚四肢仿佛有蚂蚁在爬。
两三天以后，病情进入兴奋期。
病人处于高度兴奋的状态。
突出表现为极度恐怖，恐水、怕风，遇到声音、光线、风等，都会出现咽喉部的肌肉严重痉挛。
病人虽然非常渴却不敢喝水，喝了水也无法下咽，甚至听到流水的声音或者别人说到水，也会出现咽喉痉挛。
严重的时候，病人还有全身疼痛性抽搐，导致呼吸困难。
狂犬病的病人，神志大多数清醒；但是，也有部分病人出现精神失常，说胡话。
兴奋期约有两三天后，病人变得安静下来，但是，随之出现全身瘫痪，呼吸和血液循环系统功能都会出现衰竭，迅速陷入昏迷，十几个小时以后，就会死亡。
狂犬病的病程，一般不超过6天。
恐水是多数狂躁型狂犬病特有的症状之一，恐水表现未在其他疾病中见到过，所以很具有证病性。
人被狂犬咬伤是不是几十年后还会发生狂犬病？一个人被狂犬咬伤后如果不及时采取预防措施，有些人会在十几年以后发病，但是几十年以后发病的报道尚缺乏科学依据。
狂犬病毒通过哪些途径进入人体并繁殖？最主要的途径就是感染了狂犬病的动物在咬伤人时，通过唾液使狂犬病毒进入人体，狂犬病毒还可以通过无损伤的正常粘膜进入人体，或带有狂犬病毒的液体溅入眼睛，通过眼结膜进入人体，但以这种方式进入人体的例子要少得多，另外，通过吸入空气中带有狂犬病毒飞沫而感染的例子也很少见，只有空气中狂犬病毒的浓度达到极高程度时，才可能发生。
病毒在咬伤部位侵入，在局部组织中短时间停留，可到1-2周。
病毒可从神经肌肉交界处的神经感受器或其他神经组织细胞的神经感受器，或暴露于粘膜浅表处的神经感受器侵入邻近的末梢神经。
人与人接触能传播狂犬病吗？人与人的一般接触不会传染狂犬病，理论上只有发了病的狂犬病人咬了健康人，才有使被他咬伤的人得狂犬病的可能，发了病的狂犬病人或发病前几天的人也有可能通过性途径把狂犬病毒传染给对方，狂犬病人污染了用具，他人再通过被污染的用具受到感染的可能性很小，狂犬病人的器官、组织、如角膜移植给健康人则有极高的危险性。
狂犬疫苗必须在被狂犬或可疑狂犬咬伤24小时以内接种才有效吗？狂犬疫苗注射原则上是接种越早效果越好。
但是，超过24小时注射疫苗，只要在疫苗生效前，也就是疫苗刺激机体产生足够的免疫力之前人还没有发病，疫苗就可以发挥效用，对暴露已数日数月而因种种原因一直未接种狂犬疫苗的人，只要能得到疫苗，也应与刚遭暴露者一样尽快给予补注射，争取抢在发病之前让疫苗起作用，这时，前一针或前两针的接种剂量应当加倍。
如何才能知道自己接种的疫苗是否有效？要想知道接种的疫苗是否生效，可在全程疫苗接种完后半个月左右检查血清抗狂犬病毒抗体水平。
如果血清抗狂犬病毒抗体是阴性，可再加强2-3注射针，可使抗体阳转。
再不阳转时最好测定一下细胞免疫指标，一般而言，全程(5针)接种了合格的狂犬疫苗，尤其是并用血清后半个月以上仍未发生狂犬病，则狂犬疫苗免疫失败的几率极小，也就是说一般不会再发生狂犬病。
年轻夫妇在接种狂犬病疫苗期间能否要孩子？狂犬疫苗中没有任何一种成分会影响人类生殖细胞的染色体，在基因水平上危害人类，也不会对胚胎或胎儿的智力发育和身体发育造成影响。
因此年轻夫妇在接种狂犬疫苗期间可以不必顾虑，随时都可以要小孩。
狂犬疫苗有禁忌症吗？考虑到狂犬病是致死性疾病，对高度危险的暴露者在权衡利弊的情况下，不存在禁忌症，应立即接种疫苗。
在发生狂犬病危险性较小的情况下，如果正在感冒而有发烧者，可等体温下来后立即接种。
有严重变态反应病史的人，在接种疫苗时应备有肾上腺素等应急药物用了类固醇、抗疟疾药物的病人应增加疫苗剂量并在疫苗最后一针注射完以后半月，测定中和抗体效价，然后再视情况采取进一步措施，同样为治疗其他疾病而注射过免疫抑制药物的病人也应检查中和抗体，以便证明疫苗是否疾病产生了足够的免疫效力。
正在接种预防另一种疾病的疫苗，仍可注射狂犬病疫苗，但需要把接种部位错开。
曾经注射过狂犬疫苗的人又被犬咬伤还用再打针吗？对接受过暴露前或暴露后有效疫苗的全程接种者，如果一年内再发生较轻的可疑接触感染，可立即用肥皂水清洗伤口，同时密切观察咬人的犬在10日内是否发病而不必注射疫苗。
一咬人犬发病，立即给被咬的人注射人用狂犬疫苗；如果是一年以后再被咬伤，可于当天、第3天各注射一针疫苗即可。
对严重咬伤、以前接受过疫苗接种但时间较久，对疫苗的有效性有所怀疑者，则应重新进行全程即5针疫苗的暴露后预防免疫，必要时应包括使用狂犬病免疫球蛋白。
宠物已注射过兽用狂犬病疫苗后咬了人，人还用打狂犬疫苗吗？宠物犬、猫已经按规定足量接种了符合要求的兽用狂犬疫苗后，在疫苗的免疫期内，人被这样的犬轻微咬伤，可以只进行伤口局部的清洗消毒，不用注射人用狂犬疫苗。
但是若咬伤严重的，或者成年犬没有打够针数，或者疫苗接种早已过了免疫期、疫苗不合格或者失效，人就最好进行人用狂犬疫苗的接种才比较安全。
小猫、小狗要打狂犬病预防针吗？怎样打针？三个月内的小猫、小狗不用打狂犬病预防针，待到了三个月大时，可按规定的注射程序进行免疫。
狂犬病的潜伏期是多长？一个人从遭到某种病原体的感染开始到表现出该种疾病的症状，这段时间叫作该种疾病的潜伏期。
狂犬病的潜伏期一般是半个月到三个月，多数病例的潜伏期集中在30-90天，超过1年者不足1%，个别可以达到14年、19年。
短于15天，超过1年以上者均为罕见，潜伏期在一年以内的可占到总病例的99%以上。
人以及不同动物预防狂犬病时使用的狂犬病疫苗能交叉使用吗？不能交叉使用，因为人用的是病毒已经被杀死了的疫苗，而动物用的狂犬病疫苗大多是毒力减弱的活毒疫苗，而且其毒力对某一种动物是否适宜是经过多次实验后确定的，适用于牛的狂犬疫苗不一定能用于羊和猫，我们只能根据疫苗所附的使用说明书来使用。
哪些动物会感染狂犬病？各种家畜、家禽及小哺乳动物均对狂犬病有易感性，各种野生动物也能感染，总之，几乎所有的温血动物，包括禽类都可感染狂犬病。
一种动物对同种动物传染的狂犬病更易感。
动物对狂犬病病毒的敏感性如下：最敏感：狐狸、山狗、效狼、豺、狼、袋鼠和棉鼠。
敏感：地鼠、臭鼬、浣熊、猫鼬、蝙蝠、猫鼬、豚鼠、兔和其他啮齿类。
中度敏感：狗、牛、马、绵羊和灵长类。
低度敏感：负鼠。
狂犬病毒的抵抗力强吗？狂犬病毒对外界环境条件的抵抗力并不强，一般的消毒药、加热和日光照射都可以使它失去活力，狂犬病毒对肥皂水等脂溶剂、酸、碱、45%-70%的酒精、福尔马林、碘制剂、新洁尔灭等敏感，但不易被来苏水灭活，磺胺药和抗生素对狂犬病毒无效，冬天野外病死的狗脑组织中的病毒在4℃下可保存几个月，对干燥、反复冻融有一定的抵抗力。
不同厂家，不同批号的狂犬疫苗能交叉使用吗？一般来说不主张在一个疗程中用两个类型、两个厂家、甚至两个批号的狂犬疫苗。
特别是生产厂家怕注射中万一出现问题，不好判断是哪一个厂家生产的产品出现的问题，以便分清责任。
但是经过许多观察，证实在迫不得已时可以替用。
疯动物以及被疯动物咬伤的家畜肉、奶能食用吗？确认为狂犬病的动物的肉不能吃，而应当焚烧或深埋，因为该动物的体内已经广泛存在有狂犬病毒，有可能在宰杀过程中通过手上的微小伤口感染人。
被患有狂犬病的疯动物咬伤的其他家畜，如在7天内把咬伤处的肉剔除之后(范围应尽量大一些)，其余的肉还是可以吃的。
但手上有伤口的人不要操刀，剔下的肉要烧毁或深埋。
疯动物和被其咬伤的家畜的奶，处理原则与肉是一样的。
狂犬病的临床表现人的狂犬病极大多数是由带狂犬病毒的动物咬伤（抓伤）后而感染发病。
