Whiplash试验流程

Westerblot 试验操作步骤一、蛋白样品制备WIP组织细胞裂解液（塞池）取出WIP裂解液，待融化后颠倒混匀数次，适量分装冻存。

在使用前取出PMSF（100mM），按比例加入（使其最终浓度为1mM）混匀，立即使用。

取Ep管，分别称重标记，把组织剪成小块装入Ep管中，称重。

按每20毫克组织家100—100微升的比例加入WIP（如裂解不完全，可以适当增加WIP的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少WIP的用量）。

用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。

10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果组织样品本本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入WIP裂解液，通过震荡（vortex）以使样品裂解完全。

注意事项：(1)为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复动融。

(2)PMSF应现用现加(3)裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

(4)蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。

二、蛋白浓度测定：采用BCA法。

（WIP裂解液中含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法进行蛋白定量。

）三、SDS-PAGE的配制：分离胶12%，浓缩胶5%1 试剂及配制：（1）30%丙烯酰胺：丙烯酰胺29g；N,N-亚甲基双丙烯酰胺1g；去离子水至100ml；过滤，避光，4℃贮存1个月。

（有毒）（2）1. 5mmol/L Tris溶液（PH8.8）：Tris碱18.15g→80ml去离子水→浓盐酸调节PH至8.8→去离子水至100ml；4℃贮存。

（3）1.0mmol/LTris溶液（pH6.8）Tris碱12.1g→80ml去离子水→浓盐酸调节PH至8.8→去离子水至100ml；4℃贮存。

（4）10%SDS:10g SDS→100ml去离子水；室温贮存。

细胞总蛋白的提取（1）离心后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mL PBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。

洗涤两次后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使其分散重悬（若不分散，则无法与裂解液充分混匀）。

（2）每管加入细胞团等体积的含蛋白酶抑制剂cocktail的RIPA细胞裂解液；如需检测磷酸化蛋白，则需另加入磷酸酶抑制剂。

使细胞裂解液与细胞充分混匀，冰上裂解30min。

如暂不提取蛋白，也可在洗涤细胞2次后加入含蛋白酶抑制剂cocktail和磷酸酶抑制剂的1×PBS约100μL，1000r/min，4℃离心5min后，完全弃上层液体，置于-80℃冰箱保存备用。

（3）冰上超声处理细胞，每次超声2s，间隔3s，约10-20次。

（4）13000r/min，4℃离心15min，收集上清溶液至另一干净并预冷的1.5mL离心管中，于-80℃冰箱保存备用。

2. BCA法测定蛋白质浓度（1）配制工作液根据标准品及待测样品的个数，按BCA试剂A和试剂B体积比为50:1配制足量BCA 工作液，充分混匀，置于常温备用。

（2）配制标准品取原标准品BSA（2mg/mL）约100μL，取出50μL，用ddH2O按对数法稀释成如下浓度：1mg/mL、0.5mg/mL、0.25 mg/mL、0.125 mg/mL、0.0625 mg/mL；设置96孔板第一横排第一孔为空白孔，第二横排第一、二孔加入20μL 1×PBS，从第三横排起，按浓度梯度由低到高依次取20μL标准品至96孔板中，每一浓度做2个平行孔。

（3）稀释待测样品取5μl待测蛋白样品，用ddH2O稀释到50μL，分别取20μL至96孔板中，每一浓度做2个平行孔；（4）分别加入200μL BCA工作液到蛋白标准品及待测样品中，轻轻混匀，并去掉每孔中的气泡，置于温箱37℃孵育30min。

简述免疫组化实验流程及注意事项English Answer:Immunohistochemistry (IHC) is a powerful technique used to visualize the expression and localization of specific proteins within tissue sections. It involves the use of antibodies to bind to the target protein, followed by enzymatic detection to produce a colored precipitate.IHC Experiment Workflow:1. Tissue preparation: Tissue samples are fixed, dehydrated, and embedded in paraffin wax or frozen for optimal preservation.2. Sectioning: Thin tissue sections (typically 5-10 μm thick) are cut using a microtome and mounted on slides.3. Deparaffinization and rehydration: Paraffin-embedded sections are deparaffinized with xylene or other solventsand rehydrated through a graded series of ethanol solutions.4. Antigen retrieval: Certain antigens may requireheat-induced or enzyme-induced antigen retrieval to expose their epitopes.5. Blocking: Non-specific binding is blocked using a blocking solution, such as bovine serum albumin or goat serum.6. Primary antibody incubation: The specific primary antibody is applied to the tissue section and incubated to allow binding to the target protein.7. Washing: Excess unbound antibody is removed by washing with a buffer solution.8. Secondary antibody incubation: A secondary antibody conjugated to an enzyme (such as horseradish peroxidase or alkaline phosphatase) is added to bind to the primary antibody.9. Washing: Excess secondary antibody is removed by washing with a buffer solution.10. Chromogenic substrate application: A chromogenic substrate is added to the section, which reacts with the enzyme bound to the secondary antibody to produce a colored precipitate.11. Counterstaining: The tissue section is counterstained with a dye, such as hematoxylin, to provide contrast and cellular visualization.12. Mounting: The stained section is mounted with a coverslip for preservation and examination.注意事项：Use high-quality antibodies specific for the target protein.Optimize antibody concentrations and incubation times to achieve optimal staining results.Control for non-specific staining by using appropriate negative controls.Interpret results with caution, considering factors such as tissue preparation, antibody specificity, and staining intensity.中文回答：免疫组化实验流程：1. 组织制备，对组织样本进行固定、脱水、包埋于石蜡中或冷冻，以获得最佳保存效果。

外斐氏反应标准操作过程2012-02-01 14:38:17 作者：佚名来源：网络转载[原理]：WFR也称作变形杆菌集试验，用来诊断流行性斑疹伤寒、恙虫病等急性传染病。

这些疾病的病原体是立克次体。

[操作步骤]：1. 以生理盐水将菌液稀释成每ml含7亿个菌的悬液。

2. 将血清标本做[原理]：WFR也称作变形杆菌集试验，用来诊断流行性斑疹伤寒、恙虫病等急性传染病。

这些疾病的病原体是立克次体。

[操作步骤]：1. 以生理盐水将菌液稀释成每ml含7亿个菌的悬液。

2. 将血清标本做2倍系列稀释，使成1：10、1：20，……1：1280（每管0.5ml）。

3. 然后逐管分别加入稀释菌液各0.5ml，血清稀释度即增为1：20，1：40……1：2560，充分振荡混匀，于37℃放置16—20小时。

[结果判断]根据凝集反应的强弱或有无，分别以++++、+++、++、+、+/-、-记录，以呈现（+）的血清最高稀释度作为终点效价。

[临床意义]: 正常人的滴度（血清稀释倍数）不超过1：20（1）增高：流行性斑疹伤寒（OX19阳性率可100%）；地方性斑疹伤寒（OX19部分可达1：200－1：800）；恙虫病忠者，患病后第一周OXK有14%在1：80以上。

第四周可达80%。

（2）布氏杆菌病、回归热病人血清中滴度也有所增高。

孕妇可稍有增高。

[参考值]: 凝集法：OX2〈1：160 OX19〈1：160 OXK〈1：160[注意事项]1.应在光亮处先观察管底凝集状态，然后轻轻摇动判定结果，不能激烈振荡。

2.菌液稀释后应及时使用。

3.菌液有摇不散的凝块时，不能使用。

4.应在有效期内使用。

护理学青霉素过敏试验操作流程英文回答:The penicillin skin test is a diagnostic tool used to determine if a patient is allergic to penicillin or related antibiotics. It involves applying a small amount of penicillin to the skin and observing for any signs of an allergic reaction. Here is the step-by-step procedure for conducting a penicillin skin test:1. Patient Assessment: Before performing the test, the nurse should obtain a thorough medical history from the patient, including any previous allergic reactions to penicillin or related antibiotics. It is important to ensure that the patient is in good health and not currently taking any medications that may interfere with the test results.2. Informed Consent: The nurse should explain the purpose of the test to the patient and obtain informedconsent before proceeding. This is essential for ensuring patient understanding and cooperation throughout the procedure.3. Preparation: The nurse should gather the necessary supplies, including penicillin solution, sterile skin-testing lancets, alcohol swabs, and a marking pen. The test site is typically the forearm, and the nurse should use a grid to mark the test areas.4. Skin Prick Testing: Using a sterile lancet, the nurse pricks the skin and applies a small amount of penicillin solution to the test site. Multiple skin pricks may be performed to test for different types of penicillin allergies.5. Observation: The nurse carefully monitors the test sites for any signs of an allergic reaction, such as redness, swelling, or itching. The reaction is typically observed within 15-20 minutes after the application of the penicillin solution.6. Interpretation: After the observation period, the nurse evaluates the test sites for any allergic reactions.A positive reaction is indicated by the presence of a wheal (a raised, red area) and flare (a surrounding area of redness) at the test site.7. Documentation: The nurse documents the test results, including the presence or absence of allergic reactions, the type of penicillin tested, and any additional observations. This information is important for thepatient's medical record and for informing future treatment decisions.8. Follow-up: Depending on the test results, the nurse may provide appropriate counseling to the patient,including information on avoiding penicillin andalternative antibiotic options if an allergy is confirmed.中文回答：青霉素皮肤试验是一种用于确定患者对青霉素或相关抗生素过敏的诊断工具。

Western-Blot 操作流程及个人心得体会（二）作者：未知时间：2010-5-25 10:26:33Western操作步骤（一）蛋白样品制备（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：1. 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。

2. 每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2~7.3）。

平放轻轻摇动1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。

重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。

将PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。

3. 按1ml 裂解液加10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。

（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合）4. 每瓶细胞加400 μl 含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。

5. 裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml 离心管中。

（整个操作尽量在冰上进行）6. 于4℃下12000rpm 离心5min。

（提前开离心机预冷）7. 将离心后的上清分装转移倒0.5min 的离心管中放于-20℃保存。

（个人感觉上述方法可操作性有待加强，细胞中蛋白本来就很少，一瓶50ml的细胞有时按照实验要求只能加100~200μl 的裂解液，按照上述操作，直接用200μl 裂解液进行裂解，根本就不够瓶壁上沾的。

本人是先用预冷的PBS（一般数毫升）加入后，用细胞刮刮下细胞，转移至试管中，如果数瓶细胞是收集同一蛋白的，可以放在同一试管，离心后再将蛋白转移到EP管中，这样可操作性就比较强）（2）组织中总蛋白的提取：1. 将少量组织块置于1~2ml 匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎。

2. 加400 μl 单去污剂裂解液裂（含PMSF）于匀浆器中进行匀浆。

然后置于冰上。

3. 几分钟后再碾一会儿再置于冰上，要重复碾几次使组织尽量碾碎。

W estern实验步骤1．制胶及上样：（1）配制12%SDS-PAGE分离胶，混匀后注入边条厚度为2mm的两块洁净玻璃板间，其上加一薄层异丙醇，室温下静置至凝固。

（2）待分离胶完全聚合后，倾去其上的水层，以吸水纸吸净残余液体，插入加样梳，缓缓加入浓缩胶，使其充满加样梳间的空隙，室温下静置。

待胶完全聚合。

（3）将凝胶固定于电泳装置上，上、下槽加入电泳缓冲液。

（4）小心拔去加样梳，使加样孔竖直，以电泳缓冲液冲洗加样孔数次。

（5）分别取50µg蛋白量的细胞总蛋白样品及蛋白质分子量Marker，按4：1体积比加入5⨯样品缓冲液，以1⨯样品缓冲液？配平上样体积（总体积20µ1）后，于沸水浴中煮3min使蛋白变性。

（6）将处理好的样品按照预定的顺序加入分离胶的上样孔中。

2．电泳（1）接通凝胶电泳仪的电源，初始电压70V。

（约30分钟）（2）溴酚蓝染料的前缘进入分离胶上缘后提高电压至160V，继续电泳直至溴酚蓝泳出分离胶的下缘。

（约60分钟）3．转膜（1）从玻璃板中取出凝胶，将其浸泡于转移缓冲液中。

（2）取与胶同样大小的硝酸纤维素膜，以95%乙醇浸泡5秒钟后浸泡于转移缓冲液5分钟以上待用。

（3）按顺序在转移夹内放置预先经转移缓冲液浸泡的海绵、三层滤纸、硝酸纤维素膜、凝胶、三层滤纸、海绵，保证每层之间没有气泡。

（4）将转移夹放入转移槽，膜在正极、胶在负极，接冷却循环水，90V稳压转移2小时。

4．染色（1）将硝酸纤维素浸入丽春红使用液中，振摇染色5-10min。

（2）蛋白质条带出现后，用去离子水洗去硝酸纤维膜上的丽春红底色。

（3）按照蛋白质分子量Marker指示的位置剪下目的条带所在的硝酸纤维素膜。

5．封闭把硝酸纤维素膜浸入5%脱脂奶粉，室温摇动2小时。

6．洗膜与杂交（1）以T-TBS洗膜，10分钟⨯ 3次。

（2）第一抗体封闭：SPARC单抗以T-TBS 1：200稀释，按0.1ml/cm2加入封有硝酸纤维素膜的杂交袋中，去除所有气泡，4℃振摇过夜。

尿沉渣分析仪实验流程英文回答：Urinalysis is an important diagnostic tool used to assess the health of the urinary system and detect various diseases or conditions. One of the key components of urinalysis is the examination of the urine sediment, which involves analyzing the solid particles present in the urine.The experiment begins by collecting a fresh urine sample from the individual. This can be done by asking the person to urinate into a sterile container. It is important to collect a midstream urine sample to avoid contamination.Once the urine sample is obtained, it is allowed to settle for a few minutes to allow the sediment to separate from the liquid. After this, a small amount of the sediment is transferred onto a glass slide using a pipette or a dropper. The slide is then examined under a microscope.The first step in analyzing the urine sediment is to observe the overall appearance. This includes noting the color, clarity, and odor of the urine. Abnormalities in these aspects can provide important clues about potential health issues.Next, the microscope is used to examine the sediment at low and high magnifications. Various components of the sediment are identified and quantified. These components include red blood cells, white blood cells, epithelial cells, bacteria, crystals, and casts.For example, the presence of red blood cells in theurine sediment may indicate urinary tract infection, kidney stones, or bladder cancer. White blood cells may suggest inflammation or infection in the urinary system. Epithelial cells can provide information about the health of theurinary tract lining. Bacteria may indicate a urinary tract infection.Crystals, such as calcium oxalate or uric acid crystals, can be present in certain medical conditions. Casts, whichare cylindrical structures formed in the kidney tubules, can indicate kidney damage or disease.In addition to visual examination, various chemical tests can be performed on the urine sample to further analyze its composition. These tests can detect the presence of substances such as glucose, protein, ketones, and bilirubin.Once the analysis is complete, the results are interpreted to make a diagnosis or assess the individual's health status. The findings from the urine sediment analysis, along with other clinical information, can help guide further diagnostic investigations or treatment plans.中文回答：尿沉渣分析是一种重要的诊断工具，用于评估泌尿系统的健康状况，检测各种疾病或病情。

Western Blot试验流程1、蛋白质抽提实验材料为组织样品，取适量（250～500mg）保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（裂解液），然后按照总蛋白抽提试剂盒抽提总蛋白。

蛋白位置推荐裂解液全细胞NP-40或RIPA胞浆（可溶性蛋白）Tris-HCl胞浆（骨架结合蛋白）Tris-Triton膜蛋白NP-40或RIPA核蛋白RIPA或核蛋白提取试剂盒线粒体蛋白RIPA或线粒体分离试剂盒在裂解液中加入合适的蛋白酶抑制剂，避免蛋白降解，从而保证检测的准确性。

2、蛋白质定量按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。

3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)根据待测蛋白分子量大小确定凝胶（分离胶）浓度蛋白分子量（KDa）凝胶浓度（%）4-40 20%12-45 15%10-70 12.5%15-100 10%25-200 8%3.1 清洗玻璃板，准备电泳槽一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。

两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。

3.2 灌胶玻璃板对齐后放入夹中卡紧。

然后垂直卡在架子上准备灌胶。

（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。

）3.2.1 配10％分离胶，加入TEMED后立即摇匀灌胶。

灌胶时，待胶面升到绿带中间线高度时即可。

然后胶上加一层去离子水，加快凝胶（灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。

操作时胶一定要沿玻璃板流下，防止气泡。

加水液封时要很慢，否则胶会被冲变型)。

3.2.2当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。

待胶充分凝固就可倒去胶上层水并用滤纸将水吸干。

3.2.3配4％的浓缩胶，加入TEMED后立即摇匀灌胶。

将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。

灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。

插梳子时要使梳子保持水平。

待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。

3.2.4用水冲洗一下浓缩胶，将其放入电泳槽中。

胸腹水蛋白试验操作规程胸腹水蛋白是一种重要的临床检测指标，用于评估胸腹水中蛋白质的含量，从而帮助医生进行疾病诊断和治疗方案制定。

以下是胸腹水蛋白试验的操作规程，以供参考。

试验原理：胸腹水蛋白试验是基于比色法原理进行的。

在碱性条件下，蛋白质与双酮缩合剂（如本试剂为硝基硫酸钠溶液）反应生成紫色化合物，通过测定紫色化合物的吸光度来计算蛋白质的含量。

试验操作步骤：1.试剂准备：（1）准备试剂：硝基硫酸钠溶液。

（2）标准蛋白溶液：用已知浓度的蛋白制备标准蛋白溶液。

2.样品处理：（1）收集胸腹水标本，并记录标本的来源和相关临床信息。

（2）将标本离心，将上清液转移至离心管中。

（3）离心管中的上清液称取适量，加入离心管中。

3.比色反应：（1）取一组试管，设置空白对照组和待测组。

（2）空白对照组：向试管中加入相应体积的去离子水。

（3）待测组：向试管中加入相应体积的标本上清液。

（4）添加试剂：向每个试管中滴加硝基硫酸钠溶液，然后轻轻摇匀。

（5）置于室温下放置一定时间，一般为15-30分钟，待颜色稳定。

4.测定吸光度：（1）将试管放入比色计，设定测量波长为520 nm。

（2）将空白对照组试管吸光度值设定为零基线。

（3）按照说明书操作，测定每个试管的吸光度值，并记录。

5.计算蛋白含量：（1）根据标准蛋白溶液浓度和对应吸光度值，通过标准曲线计算待测组蛋白质含量。

（2）按照相应的单位（如g/L）计算蛋白质含量。

（3）将计算结果记录下来，用于临床诊断或疾病监测。

注意事项：1.操作过程中要注意无菌操作，避免污染样品。

2.操作过程中应按照试剂的使用说明操作，避免误操作。

3.比色测定时，要注意操作仪器的准确性和稳定性。

4.标本处理过程中，可以根据需要进行离心、过滤等处理，以去除杂质。

5.试剂和标本的保存要按照说明书的要求进行。

胸腹水蛋白试验操作规程可以作为一个参考，但具体操作细节可能会因为试剂和仪器的不同而有所差异，所以在进行实验前，需要仔细阅读试剂的说明书，并按照实验室的操作规程进行操作。

旋颈试验名词解释1.引言1.1 概述概述旋颈试验是一种常见的医疗检查方法，用于评估人体颈椎功能和脊柱稳定性。

该试验通过检测颈椎在旋转过程中的运动范围和稳定性来判断颈椎的健康状况。

旋颈试验是一项非侵入性的检查方法，通常由专业医生或物理治疗师进行操作。

该试验主要应用于下列情况的评估和诊断：1. 颈椎疾病：旋颈试验能够帮助医生了解颈椎相关疾病（如颈椎间盘突出、颈椎骨质增生等）对颈椎功能造成的影响，为个体化的治疗方案提供依据。

2. 颈椎损伤：在颈椎损伤的临床评估中，旋颈试验可以评估患者颈椎的稳定性和活动范围，进而指导医生制定适宜的治疗方案。

3. 康复训练：旋颈试验常被用于颈椎康复训练中，通过监测颈椎的运动情况，指导患者进行适当的锻炼和伸展，促进颈椎功能的恢复和稳定性的提高。

在进行旋颈试验时，医生或物理治疗师需要按照一定的操作步骤进行操作，以确保结果的准确性和安全性。

在接受旋颈试验前，患者需要配合医生的指导，在保证身体舒适和安全的前提下完成试验运动。

通过旋颈试验，医生能够获取关于颈椎功能和稳定性的重要信息，从而科学地制定个性化的治疗计划。

本文将详细介绍旋颈试验的定义、操作步骤以及应用领域，并探讨旋颈试验的意义和价值。

通过阅读本文，读者将对旋颈试验有更深入的了解，并了解其在临床实践中的重要性和应用前景。

1.2 文章结构文章结构是指文章整体的组织方式和框架，是文章表达思想和内容的蓝图。

一个清晰合理的文章结构可以使读者更好地理解文章的主题和论点。

本文的结构主要包括引言、正文和结论三个部分。

引言部分主要介绍了旋颈试验这一主题的背景和意义，引起读者对该试验的兴趣，同时提出本文研究旋颈试验的目的和目标。

正文部分是本文的核心内容，主要包括旋颈试验的定义和操作步骤两个部分。

2.1 旋颈试验的定义部分将详细解释旋颈试验是什么，描述其基本原理和目的。

通过对旋颈试验的定义，读者可以理解该试验的背景和主要作用。

2.2 旋颈试验的操作步骤部分将逐步介绍旋颈试验的具体操作步骤和流程。

脑脊液检测流程脑脊液检测流程标本采集：脑脊液标本主要由临床医师采集，一般行腰椎穿刺，必要时丛小脑延髓池或侧脑室穿刺采集。

采集后无特殊处理要求，应立即送检，不超过1小时。

操作步骤：1）认真观察并记录脑脊液颜色、透明度及是否有凝块。

颜色：正常为无色，病理情况下可有红色、黄色、米汤样、棕色、绿色、褐色或黑色透明度：正常为清澈透明；病理情况下可有不同程度的浑浊，脑脊液中细胞数大于300X106/L或含大量细菌、真菌时呈不同程度浑浊。

结核性脑膜炎时呈毛玻璃样浑浊；化脓性脑膜炎时呈脓性浑浊；正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而成轻度浑浊。

2）潘式试验：取潘氏试剂2-3ml。

置于小试管内，用毛细滴管滴入经5分钟2000转离心的脑脊液上清液1-2滴，衬以黑背景，立即观察结果。

阴性：清晰透明，不显雾状极弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。

阳性：（+）为白色云雾状；（2+）为白色浑浊；（3+）为白色浓絮状沉淀；（4+）为白色凝块。

3）细胞计数非血性标本：小试管内加入冰醋酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰醋酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按血液白细胞计数法计数。

血性标本：将混匀脑脊液用1%冰醋酸溶液按血液白细胞计数法稀释后进行计数。

4）细胞分类直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。

若白细胞少于100个，应直接写出单个核、多个核细胞的具体数字。

染色分类法：将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常上清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，行瑞士染色后用高倍镜或油镜分类。

Western Blot基来源根基理、过程及注意事项之马矢奏春创作原理是将卵白质转移到膜上, 然后利用抗体进行检测.对已知表达卵白, 可用相应抗体作为一抗进行检测, 对新基因的表达产物, 可通过融合部份的抗体检测.主要有三个过程：卵白质电泳、转膜、检测.样品的准备样品种类主要有培养的细胞、组织（需磨碎）、特殊细胞（切割下来的肿瘤细胞）等.1、裂解液主要有RIPA和三去污两种, RIPA适用于细胞质中卵白检测, 而三去污适用于总卵白.三去污又分为离子型和非离子型.离子型的裂解能力较强如SDS等, 非离子型的包括NP-40、Tritonx-100.2、裂解液的成份,3、样品缓冲液 sample buffer备注：1、样品应坚持高温, 且实验过程应高温把持, 此举为了抑制酶的活性.裂解完后样品液会显得粘稠是长结构DNA所致, 故需要匀浆, 打断DNA.一般不用超声, 因为容易引起卵白不成逆的变性.2、用2X样品缓冲液与样品1：1混匀.4度保管.3、样品混合液加样前需要100℃或沸水浴加热3-5分钟并迅速拔出冰中, 以充沛变性卵白.配胶：胶的主要成份为丙烯酰胺和N, N’-亚甲双丙烯酰胺, 应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N, N’-亚甲双丙烯酰胺贮存液丙稀酰胺29g, N, N-亚甲叉双丙稀酰胺1g, 加H2O至100ml.)储于棕色瓶, 4℃避光保管.4、分离胶的配方：以20ml的8﹪分离胶为例：5、浓缩胶配方：6ml为例备注：1、制胶是防止发生气泡, 空气会影响胶的聚合, 在卵白质表观分子量分析时影响年夜.2、因为有SDS, 每次混匀时不应剧烈以免发生过多气泡.3、卵白容易与SDS脱离而失去负电荷,因此胶中加入SDS为了给卵白继续的负电荷.4、垫条清洗干净, 与制胶板压紧, 防止漏胶.5、制胶时, 加水应缓慢不要破坏胶面, 其作用：可以平衡胶面, 赶气泡等.胶固定后用滤纸吸除干净, 有水跑胶时条带会歪.6、先插梳子再灌浓缩胶.溴酚蓝快跑出胶时停止.转膜根据杂交方案、被转移卵白的特性以及分子年夜小等因素, 选择合适材质、孔径和规格的杂交膜.用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜.NC膜是卵白印迹实验的标准固相支持物, 在低离子转移缓冲液的环境下, 年夜大都带负电荷的卵白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起, 但在非离子型的去污剂作用下, 结合的卵白还可以被洗脱下来.根据被转移的卵白分子量年夜小, 选择分歧孔径的NC膜.因为随着膜孔径的不竭减小, 膜对低分子量卵白的结合就越牢固.通经常使用0.45μm和0.2μm两种规格的NC膜.年夜于20kD的卵白可用0.45μm的膜, 小于20kD的卵白就要用0.2μm的膜了, 如用0.45μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象.PVDF膜灵敏度、分辨率和卵白亲和力比惯例的膜要高, 非常适合于低分子量卵白的检测.但PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡湿透.装配转移根据三明治原则：海绵→层滤纸→胶→膜→层滤纸→海绵.膜应先浸入纯甲醇湿透.每层放好后, 加紧夹板.切记：将转移槽置于冰浴中, 放入“三明治”（黑色面对黑色面）, 加转移缓冲液, 插上电极, 250mA, 2h.注意：应再次检查三明治和电极是否装配正确, 电源是否接通.转膜结束后, 切断电源, 取出卵白膜.备注：1、整个过程坚持膜的湿润不能干失落.干会发生气泡.转膜时气泡处卵白会跑向旁边.2、膜入甲醇时斜而慢, 防止发生气泡.3、转膜缓冲液一般不加SDS, 但年夜槽时因导电性差需加少量,加甲醇用于维持膜与水的相亲性.4、由于甲醇易挥发, 加入15﹪-20﹪甲醇时应带盖混匀.5、三明治插到槽中时, 槽中需要有液体.6、电流不能过高, 高电流易产热, 过热会使条带扩散.封闭1．用25 ml TBS 洗膜5min, 室温, 摇动.2．置膜于25 ml 封闭缓冲液中1h, 室温, 摇动.备注：1、封闭缓冲液可用0.5%牛血清白卵白, 但价贵.经常使用5%脱脂奶粉.2、封闭的作用是结合膜上其他的活性位点, 防止抗体与之结合.3、一般室温轻摇1-2h, 也可以4渡过夜, 或者37度0.5h （一般布景会高）.免疫杂交与显色1．15ml TBS/T洗3次（5 min/T）.2．加入合适稀释度的一抗, 室温孵育1-2h或4°C过夜, 缓慢摇动.3．15 ml TBS/T洗3次（5 min/T）.4．加入合适稀释度的碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化酶（HRP）标识表记标帜的二抗, 室温孵育1h, 缓慢摇动.5．15 ml TBS/T洗3次（5 min/T）.6．15 ml TBS洗1次.7．卵白检测(显色法或发光法).备注：1、稀释的抗体可用5%的牛奶增加卵白浓度.。

血清酸化溶血试验(Ham试验)
1原理
阵发性睡眠性血红蛋白尿症的患者，因其红细胞本身有缺陷，故对补体敏感性增高，在酸化的自身血清中，经37℃孵育，易破坏产生溶血。

此法比较敏感，特异性也高。

2.标本采集
2.1 早晨空腹采血，静脉采血。

2.2
3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。

2.3 另抽取患者静脉血3-5ml，注入促凝管中.
3试剂
3.1 0.2mol/L盐酸(盐酸1.4m1，蒸馏水加至100m1即成，应新鲜配制)。

3.2 8.5g/L氯化钠溶液。

3.3 50％红细胞悬液制备，用10ml离心管1支，加入8.5g／L氯化钠溶液4-5ml，再直接加入患者抗凝血3-4滴，混匀(用吸管轻轻吹打,防止用力过度导致溶血)后离心，弃去上清液。

如此反复洗涤红细胞2次，最后一次加入等量生理盐水,配成50％红细胞悬液。

3.4促凝管中静脉血离心,分离出血清。

4操作
4.1取2支清洁干燥小试管，编号,按表2步骤进行操作。

表2 酸化血清溶血试验操作
4.2轻轻混匀，加塞，置于37℃水浴中1小时。

5结果观察
第1管溶血，第2管不溶血者为阳性。

6临床意义
阳性见于阵发性睡眠性血红蛋白尿症和某些严重发作的自身免疫性溶血性贫血。

7 注意事项
7.1所用器皿必须清洁干燥，操作过程要避免发生溶血，否则可导致假阳性。

7.2血清酸化后，试管必须塞紧，否则二氧化碳逸出，可使血清酸度下降。