实验愈伤组织的继代与分化培养

草莓茎尖愈伤组织的诱导与增殖培养实验报告册1、培养程序和培养基5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖，大小为0.3--0.4mm，作为组织培养的外植体。

用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS，附加6-BA 0.5mg/L，NAA 0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH 值调至5.8--6.0。

在草莓茎尖的扩大繁殖阶段，采用MS 培养基附加6-BA 0.5mg/L 、NAA0.01mg/L。

扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块，转入继代培养基。

在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长。

诱导生根培养基用1/2MS 附加。

经查文献得知0.1mg/L浓度的IBA处理的生根率最高，为100%，平均根条数为2.4条。

不加TBA及IBA浓度超过0.2mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根，致使成活率大大降低。

2、操作技术要点及培养条件⑴)灭菌与接种预处理―为了灭菌彻底，常把接种材料先进行湿润处理，采用的是75%的酒精，湿润的时间为半分钟至1分钟。

灭菌处理在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。

我们曾用过次氯酸钠10%水溶液(含有效氯0.4--0.5%)，浸泡接种材料10--15分钟;次氯酸钙(漂白粉)，用其饱和上清液，浸泡接种材料15--30分钟;过氧化氢10--12%水溶液浸泡10--20 分钟;新洁尔灭5--10%水溶液，浸泡10--15分钟;升汞0. 1%水溶液，浸泡8--10分钟。

其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，以致影响培养效果。

升汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。

因此，在草莓组织培养中，如把握好时间，升汞是应用较多的灭菌剂。

灭菌后的接种材料，要用无菌水充分清洗，通常要换水 3--5次。

接种以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养，所接种的茎尖材料很小，在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点，并使用固体培养基比较适宜，接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。

实验
实验七七愈伤组织的继代培养
【目的要求】：1、掌握愈伤组织的继代培养方法
2、学习接种操作技术规范。

【实验内容】：1、70%乙醇喷洒净化工作台并擦洗干净，将接种所用的工具等放入工作台。

打开紫外灯，15分钟后关闭紫外灯开始方可操作。

打开风机吹风15分钟，
备用。

2、挑选生长旺盛的苜蓿愈伤组织（此类愈伤组织多呈白色或淡黄色，有光泽），
将其分割成直径约为0.5cm的小块。

3、将分割好的愈伤组织小块接种到新鲜的原培养基上，摆放均匀
4、培养：将培养瓶用封口纸包好，用记号笔写上姓名和接种日期,放在培养
室内25±2℃条件下暗培养。

【实验结果】：观察愈伤组织在继代培养基上的生长情况。

思考题：1．为什么要进行继代培养？
2．在进行愈伤组织继代培养中应注意的问题是什么？。

本科学生综合性实验报告
学号姓名
学院生命科学学院专业、班级
实验小组及成员
实验课程名称植物组织培养实验
教师及职称龙维彪（讲师）
开课学期2011 至2012 学年下学期填报时间2012 年 6 月 1 日
云南师范大学教务处编印
一．实验设计方案
二．实验报告
1．实验现象与结果
A实验结果记录表：
愈伤组织诱导结果：
总接种瓶数5瓶总接种块数15块
污染瓶数4瓶污染块数11块
未污染瓶数1瓶未污染块数4块
未污染块中愈伤组织发生块数3块
愈伤组织发生率75%
愈伤组织发生情况记录愈伤组织的色泽较新鲜，但比较少
污染情况及原因分析污染瓶中，有1 瓶是霉菌污染，3瓶细菌污染。

可能是接种过程中接种器械消毒不够，掀开封口
膜时碰到了封口膜里面，也可能是封口膜没绑好。

愈伤组织继代培养结果：
继代培养没有受到污染，愈伤组织增殖情况较好，呈现不规则状。

颜色浅黄，注意看会有一些小黑点，愈伤组织开始老化，部分开始分化。

B实验结果图片。

本科学生综合性实验报告
学号：094120275 姓名：陈小华
学院：生命科学学院专业、班级：09应用生物教育B班实验课程名称：胡萝卜的愈伤组织诱导培养及继代培养
教师：杨世忠
开课学期：2011 至2012 学年第二学期填报时间：2012 年 5 月18 日
云南师范大学教务处编印
）无菌操作流程：
二．实验报告
图1胡萝卜愈伤组织诱导培养结果
2号瓶内的胡萝卜愈伤组织长势良好，1、3和4号瓶内胡萝卜均被
图2 胡萝卜愈伤组织继代培养结果
具体说明如表2：
表2 胡萝卜愈伤组织继代结果统计
2 存活瓶数 2
1号瓶内愈伤组织为Ⅱ型愈伤组织，其结构松脆，生长旺盛，
鲜艳，增值很快，称为亢进分裂型。

2号瓶内愈伤组织为Ⅰ型愈伤
组织，其结构致密，生长较慢，容易分化成苗，称为保守分裂型。

植物细胞工程-胡萝卜的组织培养姓名：物理数学狂班级：生物技术综合班学号：2019004284【实验计划】1.MS培养基母液的配置与保存、MS固体培养基的配置（准备实验）2.外植体胡萝卜愈伤组织的诱导培养（2018.10.18）3.胡萝卜愈伤组织的继代培养（2018.11.8）4.胡萝卜愈伤组织悬浮培养（2018.11.22）5.胡萝卜愈伤组织诱导生根（2018.12.1）6.观察实验结果（2018.12.13）【实验时间】2018年10月18日-2018年12月13日实验（一）MS 培养基母液的配制与保存一、实验目的1.通过MS 培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2.掌握培养基各种母液的保存方法。

二、实验原理1.MS 培养基的特点：①无机盐浓度高；②高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐；③含有一定的铵盐，营养丰富；④不需要添加更多的有机附加物。

MS 按照营养水平划分为基本培养基。

2.培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养物质，配置培养基时，为了减少试剂称取时的工作量出现的误差，以及多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，需要预先将各种营养成分配置为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到适合的浓度。

母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。

3.需要时将配置好的母液按一定比例稀释到培养基指定浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调解物质等，制成符合要求的培养基。

三、器材与试剂1.器材：各类天平、磁力搅拌器、冰箱、烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；2.试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH ，0.1-1N HCl ，配制MS 培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。

四、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。

优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。

1.MS 大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。